p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中作用的研究

目的：研究p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中的作用。方法：采用Western blotting观察LPS对牙龈成纤维细胞内p38 MAPK活性的影响；蛋白激酶活性实验SB203580地p38 MAPK活性的抑制作用；Northern blotting观察SB203580对LPS诱导uPA表达的影响。结果：LPS能够迅速地激活牙龈成纤维细胞内p38 MAPK的活性；SB203580能够有效地抑制牙龈成纤维细胞内的p38 MAPK的活性；经SB203580处理后，LPS对uPA的诱导作用受到显著的抑制。结论：LPS通过p38 MAPK信号转导途径诱导牙龈成纤维细胞表达uPA。     

p38MAPK在大鼠实验性根尖病变中的作用研究

目的：观察大鼠根尖周病变过程中P-p38,RANKL和破骨细胞的表达及变化,探讨p38MAPK信号通路在根尖周炎症性骨吸收中的作用。方法：将24只SD大鼠开髓,分别于术后7,14,21,28d取下颌骨,制备组织切片,用免疫组织化学的方法测定P-p38和RANKL在大鼠根尖周炎中的表达,酶组织化学方法检测抗酒石酸酸性磷酸酶,观察破骨细胞。结果：在正常根尖周组织中偶见P-p38、RANKL阳性细胞和破骨细胞;术后7d根尖周有炎症细胞浸润,可见P-p38、RANKL阳性细胞和破骨细胞数量增多;术后14d,P-p38、RANKL阳性细胞和破骨细胞数量上升至最高值;术后21~28d,P-p38、RANKL阳性细胞和破骨细胞数量下降。从7d组到28d组,破骨细胞数量的变化与P-p38和RANKL阳性细胞数的变化呈现一致的趋势。结论：p38MAPK信号通路可能通过参与RANKL介导的信号转导途径,介导破骨细胞分化,参与根尖炎骨吸收的病理过程。     

脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对人牙周膜干细胞（HPDLSCs）增殖及炎性因子表达的影响。方法 培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10 μg•mL-1 LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng•mL-1 LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLSCs白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显（P<0.05）;A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。     

p38信号通路在牙周膜细胞成骨分化中的调控作用

目的 研究p38信号通路在人牙周膜细胞成骨分化中的调控作用。 方法 体外培养人牙周膜细胞,取第三代细胞进行成骨诱导培养,实验组加入p38信号通路抑制剂(SB203580),诱导培养4周后通过定量PCR和茜素红染色检测其成骨能力。 结果 成骨诱导可促进牙周膜细胞中p38的磷酸化（p-p38）。抑制p38的磷酸化可降低成骨标记物Runx相关基因（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达,减少钙结节形成。 结论 p38信号通路在体外培养的牙周膜细胞成骨分化中具有重要的调控作用。     

索拉菲尼通过活化p38MAPK抑制人口腔癌TCA8113细胞增殖

目的:观察索拉菲尼对人口腔癌TCA8113细胞增殖的影响并探讨其作用机制.方法:以浓度(2.5、5、10、20 μg/ml)索拉菲尼干预人口腔癌TCA8113细胞48 h后,以MTT法及集落形成实验检测细胞增殖,蛋白质免疫印迹检测不同浓度拉菲尼对p38MAPK活化的影响;为检测p38MAPK在索拉菲尼抗TCA8113细胞增殖中的作用,先以10 μmol/L SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)预处理TCA8113细胞30 min,随后加入不同浓度索拉菲尼继续培养48 h,以MTT法检测细胞增殖情况.结果:索拉菲尼能显著抑制TCA8113细胞的增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;索拉菲尼还可明显增强p38MAPK的活化,而SB203580可显著缓解索拉菲尼诱导的TCA8113细胞活力下降.结论:索拉菲尼可抑制人口腔癌TCA8113细胞的增殖,其机制可能与其增强p38MAPK活化有关.     

牵张刺激对滑膜细胞炎性因子表达的影响

目的：观察体外牵张刺激对滑膜细胞NF-κB、COX-2和iNOS表达的影响,探讨牵张刺激在颞下颌关节紊乱病（TMD）发病机制中的作用。方法：采用美国Flexercell公司生产的细胞柔性基底加载装置FX4000T对体外培养的HIG-82细胞进行周期性牵张,使用Western Blot及荧光显微镜技术检测不同牵张刺激下滑膜细胞NF-κB、COX-2和i-NOS的表达变化。结果：机械牵张刺激诱导激活了HIG-82细胞中NF-κB、COX-2和iNOS的表达;NF-κB抑制剂可抑制机械牵张诱导的COX-2表达。结论：体外牵张刺激可诱导激活HIG-82细胞中NF-κB、COX-2和iNOS的表达;COX-2的表达增加依赖于NF-κB的激活。     

P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对高糖状态下成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的:探讨P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对高糖状态下成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响。方法:将培养的MC3T3-E1细胞按培养基内含葡萄糖浓度分为5.5 mmol/L正常对照组,25.5 mmol/L高糖组和25.5 mmol/L+SB203580组,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节(AR-S)、成骨相关基因Runx2和OCN mRNA的表达。结果:高糖培养后,MC3T3-E1细胞增殖明显受到抑制(P<0.05)。高糖组的ALP活性光密度值在各个时间点均低于对照组(P<0.05),OCN mRNA,Runx2 mRNA表达随着葡萄糖浓度升高而明显下降,给予SB203580处理后,细胞增殖仍呈下降趋势,OCN、Runx2 mRNA、ALP活性较未加入抑制剂组升高。结论:SB203580可抑制P38MAPK在高糖状态对MC3T3-E1的作用。     

Toll样受体9依赖的p38MAPK信号通路在原发性舍格伦综合征中的作用机制

目的 :在动物模型NOD鼠中,研究Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)依赖的p38MAPK信号通路在原发性舍格伦综合征发病机制中的作用,从而寻找疾病药物治疗的新靶点。方法:选取4、5、8、10、15周龄的NOD雌性小鼠,利用流式细胞学技术检测小鼠外周血单个核细胞中TLR9、p-p38 MAPK双阳性细胞的比率。利用免疫组化检测小鼠下颌下腺TLR9及p-p38 MAPK的表达情况。同时,观察小鼠刺激性唾液流率的改变以及下颌下腺的病理学改变。结果:TLR9、p-p38MAPK双阳性细胞在4、15周龄NOD鼠外周血单个核细胞中的表达,相对于正常对照组Balb/c小鼠无显著性差异。而自第5周开始,NOD鼠中双阳性细胞的比率逐渐升高,到第8周达到最高,第10周后逐渐下降。TLR9在NOD鼠下颌下腺的浸润淋巴细胞和部分腺上皮细胞中呈阳性表达,p-p38在NOD鼠下颌下腺的浸润淋巴细胞和周围少量腺上皮细胞中呈阳性表达。NOD鼠刺激性唾液流率自第5周起逐渐减少,相较于正常小鼠降低50%~60%。结论 :从第5周到第10周,TLR9、p-p38MAPK双阳性细胞在NOD鼠中显著升高,同时伴随着刺激唾液流率的降低以及下颌下腺TLR9、p-p38MAPK阳性的淋巴细胞浸润。结果提示,外周血单个核细胞中TLR9依赖的p38MAPK信号通路的激活,可能在原发性舍格伦综合征发病早期起到重要作用,NOD鼠可用于p38 MAPK或TLR9抑制实验的动物模型。     

莪术醇通过激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径诱导人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探讨莪术醇对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度莪术醇处理Tca-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3和p38 MAPK...     

靶向p38丝裂素活化蛋白激酶对兔唇裂术后瘢痕增生的影响

目的研究运用p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）基因重组腺病毒靶向敲低目的基因的表达,通过检测p38MAPK信号通路受到抑制后不同时间段兔上唇瘢痕增生受到的影响,来探讨疗效最佳的基因治疗时间。 方法对90只2.0~2.5 kg的上唇裂新西兰白兔进行唇裂修复术,选取术后第0、1、2周对其瘢痕正中注射重组病毒,将第3周的瘢痕组织制成标本。通过使用蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学染色等方法分别定性、定量检测p38MAPK及瘢痕形成相关因子与Smad蛋白和mRNA的相对表达水平。使用SPSS 24.0软件对实验结果进行统计学分析。 结果相较于术后第0、2周,术后第1周瘢痕组织中ColⅢ（1.373 ± 0.073,F = 8.027,P = 0.002）、MMP1（1.715 ± 0.028,F = 9.262,P = 0.001）表达明显升高,ColⅠ（0.424 ± 0.015,F = 7.794,P = 0.003）和TIMP1（0.464 ± 0.025,F = 6.196,P = 0.007）表达明显降低,差异均有统计学意义。术后第1周的Smad2蛋白表达水平与mRNA表达水平降低（F = 14.123,P = 0.029）,Smad3蛋白表达水平与mRNA表达水平降低（F = 3.796,P = 0.037）,与其他组相比差异均有统计学意义。 结论抑制p38MAPK表达可能通过Smad依赖型信号通路发挥抑制瘢痕增生的作用,兔上唇唇裂术后第1周瘢痕形成过程中靶向敲低p38MAPK对瘢痕增生影响最大。     

抑制p38 MAPK对小鼠釉质发育相关基因表达的影响

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)对成釉上皮中釉质发育相关基因表达的影响,为釉质发育分子机制的研究提供基础.方法 在体外小鼠下颌磨牙牙胚的培养基中加入以DMSO溶解的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580为实验组,以培养...     

p38丝裂原激活蛋白阻断剂对机械压力诱导人牙周膜成纤维细胞表达白介素-6的影响

目的分析p38丝裂原激活蛋白(MAPK)在压力诱导人牙周膜成纤维细胞(HPLF)合成炎症因子白介素(IL)-6过程中所起的作用。方法以p38MAPK阻断剂SB203580对HPLF预处理60min,然后用酶联免疫吸附法检测HPLF受200kPa压力刺激后培养上清内IL-6蛋白水平,比较预处理组与对照组2之间IL-6含量的差异。结果加压后16和24h两时间点加力组均较对照组1IL-6表达量显著增高;而预处理组较对照组2IL-6表达量下降。结论p38MAPK是机械压力诱导HPLF产生IL-6的重要环节。     

持续静压力对大鼠成纤维样滑膜细胞PRG4表达的影响

目的:探讨大鼠滑膜细胞在持续静压力作用下PRG4蛋白和mRNA的表达变化。方法:原代培养大鼠颞颌关节滑膜细胞,对传代细胞施加持续静水压力12h,压力值为:0kPa,50kPa,100kPa,150kPa和200kPa,应用Westernblot和实时荧光定量RT-PCR检测压力状态下PRG4蛋白和mRNA表达的改变。结果:经单因素方差分析,压力施加后细胞合成PRG4蛋白和mRNA水平均有差异。PRG4蛋白在50kPa和100kPa组表达虽有增高,但与对照组无统计学差异(P>0.05),150kPa和200kPa组表达比对照组显著升高,有统计学差异(P<0.05)。PRG4mRNA的表达与蛋白表达同步。结论:适当的压力负荷可刺激滑膜细胞转录、合成PRG4,压力传递机制与关节润滑机制有密切关联。