WWOX抑癌基因与消化道肿瘤研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23．3—24．1。位于染色体普通脆性位点FDR16D。其DNA序列、mRNA、蛋白结构已基本清楚,其具体作用机制虽存在争议,但作为抑癌基因的观点已确立。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOXmRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。     

WWOX和p73基因在急性髓细胞白血病中的表达

目的研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制。方法收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况。结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化。对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象。WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义。     

The expression of WWOX and p73 in acute myeloid leukemia

目的 研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制.方法 收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况.结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化.对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象.WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义.     

WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状

许多研究表明WWOX(WW domain containing ox-idoreductase)基因,与p53基因的点突变、缺失与下调及蛋白表达异常在多种肿瘤,如乳腺癌、多发骨髓瘤、前列腺癌、卵巢癌、肺癌及食管癌中频发出现,对这些肿瘤的发生和进展过程中起着关键性的作用.因此探讨WWOX、p53基因的结构及功能对阐明肿瘤的发病机制具有重要的意义.本文就WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状做一综述.     

WWOX基因杂合性丢失在恶性肿瘤发生中的作用

目的：探讨WWOX基因的改变对肿瘤发生的影响。方法：采用RT—PCR方法检测Hct116／4coildtype（野生型）、Hct116 p53 null（p53^-）、Hct116 Bax null（Bax^-）细胞株的WWOX基因表达。从琼脂糖凝胶中分离和提取DNA，进行DNA纯化，测序，测序结果与GeneBank上公布序列AF211943进行比较。结果：测序结果显示，第一对引物9F1与9R1，在T1497G有杂合性丢失，证实细胞株有二种类型的WWOX表达，全长的WWOX mRNA的转录，和外显子6～8丢失的WWOXmRNA的异常转录。第二对引物8F1与9R2，仅表达全长的WWOX mRNA的染色体才有PCR扩增，其产物在T1497G为G。第三对引物5F1与9R3，扩增产物为929bp和389bp。在389bp的T1497G，只有T，来自于WWOX mRNA的异常转录的染色体。结论：HCT116细胞株有二种类型的WWOX表达，全长的WWOX mRNA的转录，外显子6～8丢失的WWOX mRNA的异常转录，这二种转录来自两个不同的等位基因。     

乳腺癌组织WWOX基因表达及其与ER、绝经状态的相关性

目的：探讨WWOX基因在乳腺癌组织中的表达及其与雌激素受体(estrogen receptor, ER)、绝经状态等临床病理学特征的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测56例正常乳腺组织、12例乳腺导管原位癌和87例侵袭性乳腺癌组织WWOX蛋白的表达,结合临床病理学资料进行分析。结果：62.1%(54/87)的乳腺癌组织和28.6%（16/56）正常乳腺组织中出现WWOX蛋白表达降低或丢失,两组间差异有统计学意义（P＜0.01 ）。50%的乳腺导管原位癌组织中WWOX 蛋白表达降低。82.1% 的ER（-）组和 52.5% ER（+）组病例表现为WWOX蛋白表达降低或缺失,差异有统计学意义(P＜0.05)。51.8%的绝经后患者和22.4%的绝经前患者出现WWOX表达完全缺失,两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。此外,晚期乳腺癌患者WWOX表达降低或缺失的比例增高,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中WWOX表达完全缺失的比例分别为23.1%、28.6%和46.2%,各期间的差异有统计学意义（P＜0.01）。结论:乳腺癌中存在着WWOX基因的表达缺失,其异常表达与ER状态、绝经状态和肿瘤临床分期关系密切,提示WWOX基因可能是通过激素受体信号途径在乳腺癌的发生和发展中发挥作用。     

人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞过表达WWOX基因的基因表达谱分析及WWOX基因的抑癌作用机制

目的：分析人口腔鳞状细胞癌（OSCC） Tca8113细胞过表达包含WW域的氧化还原酶（WWOX）基因的基因表达谱变化,探讨WWOX基因的抑癌作用机制。方法：Tca8113细胞分为WWOX基因过表达组和对照组。采用携带WWOX基因的pGV287-LV-WWOX慢病毒颗粒和携带空载体的pGV287-LV慢病毒颗粒分别感染2组Tca8113细胞。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法检测2组Tca8113细胞中WWOXmRNA和蛋白表达情况。采用基因芯片技术筛选差异表达基因并进行生物学分析。采用定量PCR法检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的差异表达基因的mRNA相对表达水平。结果：慢病毒感染后,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOXmRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX蛋白表达水平升高。基因芯片筛选出差异倍数（FC）1.5倍以上的基因共347个,其中表达上调171个,表达下调176个。生物信息学分析显示这些基因分布于癌症、p53信号、MAPK信号和白细胞介素2（IL-2）等多条信号传导通路。WWOX基因过表达组MAPK信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶2（MAP2K）、孤核受体4A1（NR4A1）、双特异性磷酸酶5（DUSP5）和双特异性磷酸酶6（DUSP6） mRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,而成纤维生长因子受体2（FGFR2） mRNA相对表达水平较对照组明显降低（P<0.05）。结论：WWOX基因过表达导致Tca8113细胞的基因表达谱发生变化,WWOX基因的抑癌作用机制与调节MAPK信号途径的多个基因表达有关联。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因WWOX与特发性肺间质纤维化的关系

目的研究肺间质纤维化模型大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因WWOX表达的改变。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及川芎嗪预防用药组,每组6只,分别于给药7、14、28 d后提取肺泡Ⅱ型上皮细胞体外培养,免疫组织化学法检测WWOX蛋白表达。结果与假手术组比较,注射博莱霉素7 d后模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因WWOX蛋白表达无显著变化。用药14、28 d后,WWOX蛋白表达则明显下降。而川芎嗪预防用药组WWOX蛋白表达比模型组有显著上调。结论肺间质纤维化过程中可能存在染色体脆性位点基因WWOX的改变,川芎嗪可以在一定程度上抑制这种改变而发挥防治作用。     

WWOX基因在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨抑癌基因WWOX在胶质瘤发生发展中的作用以及与胶质瘤病理分级的关系.方法 采用半定量RT-PCR方法检测31例胶质瘤手术切除标本和3例正常脑组织WWOX mRNA的表达情况,用琼脂糖凝胶电泳PCR产物,凝胶图像分析系统检测基因的相对量.最后实验数据采用SAS软件行x2检验,分析WWOX mRNA的表达与胶质瘤病理分级的关系.结果 31例胶质瘤组织中共有17例(54.8%)发生WWOX基因表达缺失,3例正常脑组织均无基因表达缺失.胶质瘤组织和正常脑组织中WWOX mRNA失表达水平存在明显差别(P＜0.05).各病理分级组间WWOX mRNA失表达水平无明显差别(P＞0.05).结论 WWOX mRNA在胶质瘤中表达缺失率较高,且胶质瘤组织和正常脑组织中WWOX mRNA失表达水平存在明显差别(P＜0.05).但恶性程度高的胶质瘤组织与恶性程度低的胶质瘤组织WWOX mRNA失表达水平无明显差异,这表明WWOX基因缺失或低表达在胶质瘤发生过程中起重要作用,但可能对胶质瘤的进一步发展作用不明显.     

人脑胶质瘤中p16基因的表达

目的 探讨胶质瘤中p16基因的缺失及免疫组化情况.方法 利用、PCR技术和免疫组化检测43例胶质瘤p16基因的缺失.结果 PCR组:12例脑星形细胞瘤p16E1和p16E2均缺失,占28名(12/43),2例仅缺失p16E1,占5%(2/43);p16E基因缺失多发生在Ⅲ-Ⅳ级脑星形细胞瘤中(Ⅲ级6/16,Ⅳ级8/14),Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级比较有显著性差异(P<0.05).免疫组化组:p16表达缺失率为60.5%.P16表达缺失在Ⅲ级(43.6%)、Ⅳ级(85.7%)脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级(22.2%)(P<0.05).结论 p16基因失活可能与脑星形细胞瘤的分化程度有关,p16基因缺失是p16基因失活的主要机制.     

抑癌基因WWOX在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨WWOX基因在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测50例甲状腺癌，31例甲状腺腺瘤及20例正常组织中WWOX蛋白的表达，并分析其与病理指标及临床特征之间的相关性。结果WWOX在甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中的平均积分光密度分别为：50．86±6．05、70．95±4．23、87．77±8．46。WWOX在甲状腺癌中的表达与后两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。未发现WWOX蛋白表达在不同临床病理指标间存在显著性差异。结论WWOX蛋白在甲状腺癌组织中呈低表达，该蛋白表达的缺失可能在甲状腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

抑癌基因FHIT和WWOX在胃腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测FHIT蛋白和WWOX蛋白在胃腺癌组织中表达情况和FHITmRNA和WWOXmRNA在胃腺癌和癌旁正常组织的表达情况,分析两者与临床病理特征之间的关系及两者之间是否具有相关性。方法随机抽取佳木斯大学附属第一医院普外科2000年到2011年期间的70例胃腺癌切除组织标本,采用免疫组化和RT-PCR方法检测胃腺癌组织中临床病理关系及胃腺癌与癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5CM)的关系。结果 (1)FHIT和WWOX均阳性表达28例。FHIT和WWOX均阴性表达24例。FHIT阳性而WWOX阴性8例。FHIT阴性而WWOX阳性10例。FHIT和WWOX在胃腺癌中的表达成正相关性。(2)FHITmRNA与WWOXmRNA在70例胃腺癌组织中表达较癌旁组织低者分别有22例和28例;较癌旁胃正常组织高者均有6例。FHITmRNA和WWOXmRNA在胃腺癌的表达低于癌旁胃组织。结论 (1)FHIT和WWOX在胃腺癌组织中阳性表达率较低,在组织学分级,病理分期中呈正相关,而与年龄和病理分型无相关性。(2)FHIT和WWOX的在胃腺癌组织中与癌旁胃正常组织中差异有显著性。(3)FHITmRNA和WWOXmRNA在胃腺癌组织中的低表达呈低度正相关性。(4)FHIT和WWOX是重要的抑癌基因。     

脆性基因FHIT与WWOX在白血病中的表达

普通染色体脆性位点是在弱小的DNA复制压力下表现出来的,用缺口或溢痕来形容的特定的细胞遗传学条带,它们在癌症中有频繁的改变。其中FRA3B位点中的脆性组氨酸三联体基因与FRA16D位点中的WW域的氧化还原酶基因是目前研究最多的脆性基因,它们在多种上皮性肿瘤中改变并呈现出肿瘤抑制作用。这两个基因的改变由启动子区域异常甲基化及组蛋白修饰、等位基因缺失以及mRNA异常拼接造成。原发性白血病中也存在这两个基因表达的改变。因此,普通脆性位点基因的改变可能参与了白血病的临床病理过程。     

恶性肿瘤组织肿瘤转移相关基因的表达与肿瘤细胞生物学特性的关系研究

目的:探讨各种肿瘤转移促进基因和肿瘤转移抑制基因编码蛋白在恶性肿瘤转移中的表达。方法:采用流式细胞术对56例肿瘤转移和61例肿瘤未转移患者瘤组织的CD44V5~+、CD44V6~+、cerbB-2~+、nm23~+、DCC~+和p16~+细胞检出率和DNA含量进行检测和分析。结果:恶性肿瘤患者瘤组织细胞的CD44V5~+、CD44V6~+和cerbB-2~+细胞表达率均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);而nm23~+,DCC~+,p16~+细胞表达率则显著低于正常对照组(P<0.01或P<0.05)。肿瘤转移者、多器官转移者、DNA异倍体者、SPF增高者、Apo降低者的CD44V5~+、CD44V6~+、cerbB-2~+细胞表达率均显著高于未转移者、单器官转移者、DNA二倍体者、SPF降低者、APO增高者(P<0.01或P<0.05);而nm23~+、DCC~+、p16~+细胞的表达率与此相反。结论:肿瘤转移相关基因编码蛋白在各种恶性肿瘤转移中均出现异常表达,但有一定的倾向性,且与瘤细胞的生物学特性(DNA倍性、细胞增殖活性、细胞凋亡水平)的关系均十分密切。     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

WWOX在结直肠癌中的表达及其与Bax的相关性

目的:探讨WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因的表达与结直肠癌生物学行为及Bax表达的相关性。方法:应用免疫组化EnVision二步法检测58例结直肠癌中WWOX和Bax的表达,并以20例结直肠炎症为对照。结果:WWOX、Bax在结直肠癌组织中的阳性率分别为25.86%、58.62%,显著低于结直肠炎症的65%、85%,差异有显著性;WWOX、Bax在结直肠癌中的表达与患者的预后相关,差异有显著性,且WWOX的表达在癌组织的浸润深度间差异有显著性;WWOX与Bax的表达呈正相关。结论:WWOX与Bax参与调控结直肠癌的发生、发展,而且两者协同作用,在结直肠癌的预后中扮演了重要角色。     

骨巨细胞瘤的p16蛋白表达特点

目的 :探讨p16蛋白表达与骨巨细胞瘤发生的关系。方法 :采用免疫组织化学S P法检测 4 2例骨巨细胞瘤的p16蛋白表达。结果 :骨巨细胞瘤的p16蛋白表达缺失率为 6 6 .7% ,p16蛋白表达随骨巨细胞瘤恶性程度的上升而降低。骨巨细胞瘤的多核巨细胞有 3种染色状态。结论 :p16蛋白表达降低与骨巨细胞瘤的发生有关 ,骨巨细胞瘤的多核巨细胞可能存在不同种类。