SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立

目的：建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。方法：设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验。 结果：结果表明该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应。构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为：95.588%,检测灵敏度为101copies/反应体系,结果重现性好。成功地验证性检验了32份盲样标本。结论：本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测。     

甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒血凝素基因比较分析

目的分析泰安市2008～2009年度季节性流感与2009年度甲型H1N1流感病原学检测结果 ,比较季节性H1N1与甲型H1N1血凝素基因变异情况。方法选择国家级流感监测哨点医院以及暴发疫情的疫点,采集流感样病例的鼻咽拭子标本,通过RealtimePCR进行病毒检测,用MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增血凝素HA1片段的基因并测序,利用生物信息学进行序列分析。结果 2008～2009年共检测鼻咽拭子标本283份,分离出流感病毒33株,分离阳性率为11.67%,其中季节性H1N1亚型31株。2009年5月1日～12月31日,检测鼻咽拭子标本996份,流感核酸检测阳性417份,阳性率为41.86%,其中甲型H1N1337份,季节性H1N1亚型1份。6株季节性H1N1病毒均在多个氨基酸位点上发生变异,与疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)比较,有11个位点发生了突变,其中5个位点位于抗原决定簇上;测序成功的6株甲型H1N1病毒在多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)比较,有6个位点发生突变,其中1个位点位于抗原决定簇的B区。结论 2008～2009年度季节性H1N1为优势株,甲流暴发后,甲型H1N1成为绝对优势毒株。季节性H1N1分离株有多处氨基酸替换,抗原决定簇B区变异频繁;甲型H1N1病毒分离株的基因有变异,但关键位点第222位仍为D(天冬氨酸),与疫苗株相比抗原决定簇的关键位点变化不大。     

四川省2009甲型H1N1流感的流行病学特征

目的分析四川地区甲型H1N1流感流行病学特点,为今后新发传染病的防控提供参考。方法回顾性分析我院2009年收治的271例甲型H1N1流感病例的来源、年龄及时间分布。结果 1.271例甲型H1N1流感病例,男∶女为1.09∶1,随着病情加重发病年龄逐渐增加,病程亦逐渐延长;2.轻症患者均无基础疾病,危重症患者基础疾病较重症患者多且重;3.绝大多数患者年龄在10~30岁（211例,77.87%）,轻症及重症中无≤2岁及≥65岁的患者,危重症中≥65岁者2例;4.疫情早期（5~9月）患者均为轻症,以输入病例为主（52例,19.19%）,疫情后期以本土暴发病例为主（9月以后）有危重症出现。结论新发传染病疫情早期以轻症、输入病例为主,后期随着社区聚集性疫情,有重危症患者出现;患者年龄、基础疾病是该疾病严重程度的重要影响因素。     

甲型H1N1流感研究进展

2009年6月11日世界卫生组织（WHO）宣布将甲型H1N1流感大流行警告级别提高为最高级6级,这意味着甲型H1N1流感已在全球大流行。甲型H1N1流感是一种新发疾病,其特点仍待进一步观察总结。本文就近期关于甲型H1N1流感的研究进展做一总结。     

新甲型H1N1流感病毒与流感大流行防治研究进展

由于甲型流感病毒基因高度变异的特点,导致其对不同种属宿主亲和力、毒力、免疫原性、抗药性不断发生变化,全球新型流感大流行的风险时刻存在.因此,应加强流感特别是重症流感发病机制和有效干预措施研究,从疫苗研制、开发新型抗病毒药、加强综合治疗,特别是调节宿主免疫反应等多个方面着手,为应对可能爆发的流感大流行提供对策.     

甲型H1N1流感病毒基因特征及耐药性研究

目的研究甲型H1N1流感病毒的基因特征和变化规律,为流感疫苗评价提供依据。方法选取2009年6月-2013年4月本院分离出的15株甲型H1N1病毒分离株,提取病毒RNA进行反转录。采用PCR方法扩增15株甲型H1N1流感病毒HA和NA全基因并进行测序分析。利用软件Bioedit和MEGA软件对序列进行拼接,绘制种系发生树,采用邻位相临法构建进化树。结果 15株甲型H1N1流感病毒均为低致病性病毒,对神经氨酸酶抑制剂敏感,对金刚烷胺类呈耐药性。实验毒株HA基因序列与国内和国外毒株同源性为99.1%~99.7%。该地区流感毒株抗原变异程度较大,其中毒株HA发生14个氨基酸点位改变,分别为:A215E,D127E,E235K,E374K,G170E,H138R,L161I,I321V,L191I,P83S,R45K,S185T,S203T和V234I。其中第83位和第321位与国内代表株相同,但是与国外代表株不同。NA发生15个氨基酸点位改变,分别为A20V,N44S,V83M,V106I,E128G,H144Y,I188T,V241I,S247N,N248D,S334N,N369K,N449K,D451G和G454S。其中所有毒株均发生V106I和S247N的变化。结论通过对HA和NA基因序列对比分析,该地区流感疫苗对当地居民有保护作用,但是毒株与疫苗株间发生相对抗原漂移,需要进一步观察毒株变异情况。     

不同引物检测甲型H1N1流感病毒的比较研究

目的筛选灵敏、特异的甲型H1N1流感病毒核酸检测方法。方法采用国家流感中心推荐的甲型流感病毒(H1N1)核酸引物和1对自行设计的引物,同时选择市售荧光定量PCR试剂盒,分别对不同浓度的流感病毒进行RT-PCR或荧光定量PCR扩增,比较其检测的灵敏度和特异性。结果荧光定量PCR检测H1N1病毒核酸的灵敏度为10-5(病毒稀释度),高于普通RT-PCR的灵敏度10-3~10-4;RT-PCR扩增甲型流感病毒(H1N1)核酸时,自行设计引物的灵敏度为10-4,高于中国CDC推荐引物的灵敏度10-3。2种引物的特异性一致。结论对于甲型(H1N1)流感病毒疑似样品的检测,荧光定量PCR是较灵敏的方法,但从成本和灵敏度两方面考虑,自行设计的引物更适合基层疾控机构采用。     

用甲型H1N1抗体血浆协助治疗甲型H1N1流感11例

输血是治疗疾病的重要手段之一,以往临床输血大多是以扩充血容量和止血为目的。本文阐述的是用甲型H1N1抗体血浆协助治疗甲型H1N1流感,就是用主动或被动免疫的献血者血浆协助治疗某种疾病。用这种输血方式治疗疾病,目前在国内的报道罕见。     

河南省登封市首例甲型H1N1流感病例的警示

目的探讨首例甲型H1N1流感被确诊的警示。方法对首例甲型H1N1流感疑似病例进行科学的流行病学调查、分析。结果疑似病例被确诊。结论对甲型H1N1流感疑似病例诊断过程中,综合分析流行病学资料、临床症状、实验室检验结果,做出正确诊断,避免出现错误。     

甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点分析

目的通过对甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点的分析。方法分析2009年月10月-2010年3月在我院入住的29例甲型H1N1流感合并肺炎患者的临床表现、实验室检查及胸部CT等资料。结果本组病例男性16例,女性13例。3例妊娠,13例合并有基础疾病。所有病例均有流感样前驱症状,呼吸道主要症状为发热、干咳少痰,严重者气短、呼吸困难、咯血。合并细菌感染时咯脓痰。肺部听诊无啰音或少啰音,合并哮喘时有哮鸣音,合并细菌感染时可有湿啰音。实验室检查65%白细胞不高或降低,41%心肌酶升高,58.6%存在低氧血症,35%呼吸衰竭。影像学表现多种多样：65.5%主要为单侧或双侧棉团样、团片样边界模糊高密度渗出影伴肺实变,其内见充气支气管征,病变沿支气管血管束分布。轻症及早期较局限,重症者及晚期病变融合呈双肺多发弥漫性改变。少数呈大叶及小叶性肺炎表现。预后大多良好,病死率6.9%。主要死亡原因为呼吸衰竭及大咯血。结论甲型H1N1流感合并肺炎是以甲型H1N1流感病毒肺炎为主要疾病的多种肺炎构成。甲型H1N1流感病毒肺炎临床表现具有流感病毒肺炎共性特点,其影像学表现有一定特征性。     

Influenza A H1N1 in HIV-infected adults

Objectives

HIV‐infected adults are considered to be at higher risk for influenza A H1N1 complications but data supporting this belief are lacking. We aimed to compare epidemiological data, clinical characteristics, and outcomes of influenza A H1N1 infection between HIV‐infected and ‐uninfected adults.

Methods

From 26 April to 6 December 2009, each adult presenting with acute respiratory illness at the emergency department of our institution was considered for an influenza A H1N1 diagnosis by specific multiplex real‐time polymerase chain reaction. For every HIV‐infected adult diagnosed, three consecutive adults not known to be HIV‐infected diagnosed in the same calendar week were randomly chosen as controls.

Results

Among 2106 adults tested, 623 (30%) had influenza A H1N1 infection confirmed. Fifty‐six (9%) were HIV‐positive and were compared with 168 HIV‐negative controls. Relative to HIV‐negative controls, HIV‐positive patients were older, more frequently male, and more frequently smokers (P≤0.02). In the HIV‐positive group, prior or current AIDS‐defining events were reported for 30% of patients, 9% and 30% had CD4 counts of <200 and 200–500 cells/μL, respectively, and 95% had HIV‐1 RNA <50 copies/mL. Pneumonia (9%vs. 25%, respectively, in the HIV‐positive and HIV‐negative groups; P=0.01) and respiratory failure (9%vs. 21%, respectively; P=0.04) were less common in the HIV‐positive group. Oseltamivir (95%vs. 71% in the HIV‐positive and HIV‐negative groups, respectively; P=0.003) was administered more often in HIV‐positive patients. Three patients (all HIV‐negative) died. In the HIV‐positive group, CD4 cell count and plasma HIV‐1 RNA did not differ before and 4–6 weeks after influenza A H1N1 diagnosis (P>0.05).

Conclusions

HIV infection did not increase the severity of influenza A H1N1 infection, and influenza A H1N1 infection did not have a major effect on HIV infection.     

C反应蛋白在新型A/H1N1流感中的意义

目的探讨C反应蛋白(CRP)在新型A/H1N1流感(简称甲流)的临床应用价值。方法检测45例甲流患者CRP、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数百分比(N),痰培养及X线胸片,同时给予奥司他韦抗病毒及抗感染治疗,并比较这些指标治疗前后的的变化。结果甲流患者治疗前血清CRP显著高于治疗后(P0.01),而WBC及N在治疗前后变化不大(P0.05)。结论CRP升高不仅可以提示重症甲流及预后。是甲流一个良好的观察指标,比WBC更敏感。     

危重型新型A/H1N1流感6例临床分析

目的提高危重型新型A/H1N1流感（简称甲流）的诊疗效果。方法对2009年11月~2010年1月我院发热隔离病区6例危重型甲流的临床资料进行回顾性分析。结果危重型甲流临床表现以发热、咳嗽、咯血、呼吸困难为主要症状,均出现呼吸衰竭,肺部病灶进展快,均有3个以上肺叶受累,其中2例（33%）发展为ARDS,且合并症及并发症较多。经奥司他韦、利巴韦林抗病毒,亚胺培南西司他丁、伊曲康唑等抗感染及加强支持、保护重要脏器功能,患者均康复出院。结论早发现、早诊断、早期合理使用抗病毒治疗,积极处理合并症及并发症、维护心、肝、肾等多脏器功能,防治多器官功能衰竭可挽救患者的生命。     

Rapid Detection and Differentiation of Swine-Origin Influenza A Virus (H1N1/2009) from Other Seasonal Influenza A Viruses

We previously developed a rapid and simple gold nanoparticle(NP)-based genomic microarray assay for identification of the avian H5N1 virus and its discrimination from other influenza A virus strains (H1N1, H3N2). In this study, we expanded the platform to detect the 2009 swine-origin influenza A virus (H1N1/2009). Multiple specific capture and intermediate oligonucleotides were designed for the matrix (M), hemagglutinin (HA), and neuraminidase (NA) genes of the H1N1/2009 virus. The H1N1/2009 microarrays were printed in the same format as those of the seasonal influenza H1N1 and H3N2 for the HA, NA, and M genes. Viral RNA was tested using capture-target-intermediate oligonucleotide hybridization and gold NP-mediated silver staining. The signal from the 4 capture-target-intermediates of the HA and NA genes was specific for H1N1/2009 virus and showed no cross hybridization with viral RNA from other influenza strains H1N1, H3N2, and H5N1. All of the 3 M gene captures showed strong affinity with H1N1/2009 viral RNA, with 2 out of the 3 M gene captures showing cross hybridization with the H1N1, H3N2, and H5N1 samples tested. The current assay was able to detect H1N1/2009 and distinguish it from other influenza A viruses. This new method may be useful for simultaneous detection and subtyping of influenza A viruses and can be rapidly modified to detect other emerging influenza strains in public health settings.     

关于流感病毒毒性评估

病毒在人群中的流行速度或病毒在人群传播过程中所显示的毒力主要反应出人群的遗传异质性.当一个病毒性疾病在不同亚群之间的发病率和死亡率不表现出明显差异时,该病毒的毒力可能十分强大.相反,当这些差异存在时,则其毒力较低;差异种类越多,差异程度越大,则毒力越小.     

某中学甲型H1N1流感暴发疫情调查

目的 描述洪雅县某中学甲型H1N1流感暴发疫情的流行病学特征,为学校甲型H1N1流感暴发防控提供参考.方法 应用现场流行病学方法开展调查,用RT - PCR检测病例标本,用Epidata录入数据,用Excel、Epiinfo软件进行结果分析.结果 该校共发现流感病例151例,罹患率6.31％,学生病例149例,首发病例为高一学生,高一年级罹患率最高(11.19％),住校生罹患率9.1％,走读生为2.83％.病原学检测,采集25例病例的咽拭子标本,甲型H1N1流感病毒阳性率20％.结论 此次疫情是为甲型H1N1流感暴发疫情,住校学生罹患率较高,住宿条件较差和学生接触密切是此次疫情的危险因素.     

15例甲型H1N1流感重症病例临床分析

目的总结我院收治甲型H1N1流感重症病例15例的治疗经验。方法 15例甲型H1N1流感重症病例都使用奥司他韦进行治疗,起病4 d以上使用仍然有效。2例使用激素,抗生素使用都是早期、联合、广谱。每天有两名市级专家组成员进行查房,专家值班。结果所有病人经过治疗,病情好转,治愈出院。结论一旦出现流感症状要及时去医院治疗,以免发展成重症病例。重症病例不主张使用激素,抗生素使用要求早期、联合、广谱。每天有专家进行查房。