冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,瑞氏染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果冬凌草甲素可显著的抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48～60h后在瑞氏染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论冬凌草甲素能抑制HL-60细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对SW1900细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测冬凌草甲素作用于SW1900细胞后的凋亡情况;Western blot观察Bcl2-2和Bax表达变化.结果 冬凌草甲素明显抑制SW1900细胞的增殖,诱导SW1900细胞凋亡,具有明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48 h后.凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调.结论 冬凌草甲素对人胰腺癌Sw1900细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl2-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调是冬凌草甲素体外诱导胰腺癌SW1900细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对人白血病HL-60细胞抑制作用的研究

为研究冬凌草甲素对人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞的生长抑制作用,以不同浓度的冬凌草甲素处理体外培养ＨＬ－６０细胞２４ｈ,以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞生长曲线,以光学显微镜和流式细胞仪分析细胞凋亡,结果冬凌草甲素６～２４μｍｏｌ／Ｌ明显显著抑制ＨＬ－６０细胞生长,４～１２μｍｏｌ／Ｌ可诱导细胞凋亡,为冬凌草甲素治疗白血病提供了依据。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞生长抑制作用的研究

目的探讨冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用及机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的T24细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,并应用Hoechst33258荧光染色法以流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制T24细胞的生长,诱导细胞凋亡,并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对膀胱癌具有明显的体外抗肿瘤作用,诱导细胞凋亡可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

冬凌草甲素作用PI3K/AKT通路诱导HeLa细胞凋亡

 【目的】研究冬凌草甲素诱导HeLa细胞凋亡的作用及其机制。【方法】MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制实验,Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核形态学变化;LDH法研究细胞死亡的途径。流式细胞仪检测细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。【结果】25μmol/L以上的冬凌草甲素对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,冬凌草甲素抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞端粒酶Akt、FKHRL、GSK3表达水平及活性显著降低。【结论】冬凌草甲素能够通过诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡而发挥抑制HeLa细胞生长作用,抑制Akt和GSK3的活性是冬凌草甲素体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

冬凌草甲素作用PI3K/AKT通路诱导HeLa细胞凋亡

【目的】研究冬凌草甲素诱导HeLa细胞凋亡的作用及其机制。【方法】MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制实验,Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核形态学变化;LDH法研究细胞死亡的途径。流式细胞仪检测细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。【结果】25μmol/L以上的冬凌草甲素对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,冬凌草甲素抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞端粒酶Akt、FKHRL、GSK3表达水平及活性显著降低。【结论】冬凌草甲素能够通过诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡而发挥抑制HeLa细胞生长作用,抑制Akt和GSK3的活性是冬凌草甲素体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。     

ANTI-PROLIFERATION EFFECT OF ORIDONIN ON HL-60 CELLS AND ITS MECHANISM

Objcetive To investigate the anti-proliferation effect of oridonin on leukemic HL-60 cells and its mechanism. Methods HL-60 cells in vitro in culture medium were given different concentrations of oridonin. The inhibitory rate of cells were measured by microculture tetrazolium (MTT) assay, cell apoptotic rate was detected by flow cytometry (FCM), morphology of cell apoptosis was observed by hoechst 33258 fluorescence staining, and the activity of telomerase was detected using telomere repeat amplification protocol (TRAP) PCR-ELISA before and after apoptosis occurred. Results Oridonin could decrease telomerase activity, inhibit growth of HL-60 cells, and cause apoptosis significantly. The suppression was both in time- and dose-dependent manner. Marked morphological changes of cell apoptosis including condensation of chromatin and nuclear fragmentation were observed clearly by hoechst 33258 fluorescence staining especially after cells were treated 48-60 hours by oridonin. Conclusions Oridonin has apparent anti-proliferation and apoptotic effects on HL-60 cells in vitro, decreasing telomerase activity of HL-60 cells may be one of its most important mechanisms. These results will provide strong laboratory evidence of oridonin for clinical treatment of acute leukemia.     

p63与UNC5D在冬凌草甲素诱导的膀胱癌细胞凋亡中的表达

 目的探讨p63与UNC5D在冬凌草甲素（oridonin）诱导的p53突变型膀胱癌细胞系5637 凋亡过程中的表达。方法应用MTT 比色法检测oridonin 对5637 细胞存活的影响,TUNEL 法检测细胞凋亡,RT-PCR 检测凋亡相关基因mRNA 表达,Western blot 法检测p63、UNC5D蛋白表达。结果浓度为5,10,20 μmol/L 的oridonin 以剂量依赖方式有效抑制5637细胞的存活并诱导凋亡（P < 0.05）。oridonin 处理可明显诱导p63 和UNC5D的共同表达,而p53与UNC5D及家族其他成员的表达无明显变化。结论oridonin 能以剂量依赖的方式有效诱导突变型膀胱癌细胞5637 的凋亡,其作用机制可能与上调促凋亡基因p63与UNC5D的表达有关。     

冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究

目的 探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制。方法 以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72 h的半数抑制浓度（IC50）;显微镜下观察5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素处理24 h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5 μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 ①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72 h的IC50值为（7.37±1.99）μmol/L ;② 5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;③ 0、5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后,细胞凋亡百分率分别为（4.8±2.11）%、（19.03±2.54）%、（40.27±3.31）%;（57.23±6.69）%;④冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论 冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞的凋亡诱导效应的研究

目的：考察冬凌草甲素是否能诱导MG-63细胞凋亡。方法：用不同浓度的冬凌草甲素作用于MG-63细胞,用Hochest33258染色鉴定MG-63细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞仪分析MG-63早期凋亡细胞的百分率;用Caspase-8蛋白印迹分析证明MG-63细胞凋亡发生的分子特征。结果：凋亡细胞形态学鉴定、流式细胞仪检测均有力证明冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡;冬凌草甲素诱导MG-63细胞凋亡伴有Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活。结论：冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡。     

Altered gene expression reveals molecular mechanisms underlying oridonin-induced apoptosis of multiple myeloma LP-1 cells

Objective: To investigate the effect of oridonin on proliferation and invasion of human multiple myeloma LP-1 cells and the underlying mechanism. Methods: LP-1 cells in culture medium in vitro were treated with oridonin at the different concentration. Cell proliferation was measured by Microwave Theory and Techniques (MTT) assay and cell apoptotic rate was detected by flow cytometry. Morphology of cell apoptosis was observed by transmission electron microscope. Expressions of Bax, Bcl-2, Caspase-3, NF-κB as well as I-κB mRNA were detected by real-time PCR. Results: The MTT assays and flow cytometry revealed that oridonin could inhibit the growth of LP-1 cells and cause apoptosis significantly; the suppression was both in time- and dose-dependent manner. Marked morphological changes of cell apoptosis were found under a transmission electron microscope after the cells were treated with oridonin at 25 μmol/L for 24 h. Along with the apoptotic process, Bcl-2, Caspase-3,NF-κB gene expressions were down-regulated (P<0.05). On the contrast, the Bax and I-κB gene expressions were up-regulated (P<0.05). Conclusion: Oridonin could inhibit the proliferation of LP-1 cells via inducing apoptosis. We concluded that oridonin induces apoptosis in LP-1 cells via activation of caspase-3 as well as down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax expression. The results suggested that oridonin could induce apoptosis of LP-1 cells through mitochondria- and caspase3-dependent pathways. Meanwhile, the inhibition of NF-κB and the activation of I-κB indicate pro-apoptotic stimuli. In one word, oridonin might be an important potential anti-myeloma reagent.     

冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究

目的:研究冬凌草甲素对大鼠C6脑胶质瘤细胞的抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:不同浓度的冬凌草甲素在不同的时间间隔内作用于C6脑胶质瘤细胞,用冬凌草甲素浓度时间生存曲线来测试冬凌草甲素对C6脑胶质瘤细胞的作用。用流式细胞技术来分析细胞周期的分布情况及凋亡细胞的百分数。结果:生存曲线结果证实冬凌草甲素诱导增殖抑制呈浓度依赖和时间依赖。Hochest 33258斑点染色及流式细胞技术揭示冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡及抑制其进入细胞周期的G2/M相。结论:冬凌草甲素能够抑制C6脑胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡及其机制

目的:探讨冬凌草甲素抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞的增殖、诱导其凋亡的作用.方法:用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞,通过MTT实验和细胞的药物浓度-时间生长曲线分析观察其对PC-3细胞活力的影响;用流式细胞仪分析PC-3早期凋亡细胞的百分率;Western印迹检测Bax Bcl-2和caspase...     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞