三七皂苷Rg1对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制探讨

目的探讨三七皂苷R g1对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠大脑皮质中脑源性神经营养因子(BDNF)阳性蛋白的水平和阳性神经元数目是否具有上调作用。方法选取成年雄性SD大鼠60只,随机分为脑缺血-再灌注模型组、三七皂苷R g1高、中、低剂量(200、100、50 m g/kg)组和阳性对照(尼莫地平,1 m g/kg)组,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,各组ig给药并分别于给药后1、3、7 d随机取4只大鼠,以灌注法取脑组织,冰冻法切片,免疫组织化学ABC法染色,用高清晰度彩色病理图文报告分析系统测量、分析各组大鼠大脑皮质中BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数目的变化,并观察大鼠脑缺血-再灌注后的神经功能缺失症状。结果与模型组相比,三七皂苷R g1高、中、低剂量均能明显改善脑缺血-再灌注的神经功能缺失症状,并能上调大鼠脑缺血-再灌注损伤的大脑皮质中BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数量(P<0.05);各剂量的作用强于或相当于阳性对照。结论三七皂苷R g1能上调BDNF阳性蛋白的表达,通过BDNF对脑缺血-再灌注神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用。     

三七皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马BDNF mRNA表达的影响

现代药理研究证实,三七总皂苷对多种动物脑缺血及再灌注损伤有良好的保护作用。本实验旨在从分子水平上探讨三七皂苷Rg1对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机理。1材料与方法1.1药品来源三七皂苷Rg1单体由昆明制药厂提供,纯度>95,为白色粉末状。配制成2的浓度备用。尼莫地平注射液为德国拜耳公司生产,批号:BXNZAG1,规格:50mL∶10mg。1.2实验动物及分组♂SD大鼠36只,体重280~320g,由昆明医学院动物科提供,合格证号:SCXK(滇)2005-0004。随机将大鼠分为脑缺血再灌注(middle cerebral artery occlu-sion/reperfusion,MCAO/R)模型组(…     

三七皂苷中R1、Rg1在正常和脑缺血再灌注大鼠的动力学变化

目的研究三七皂苷中R1、Rg1在正常和脑缺血再灌状态下大鼠体内的药代动力学变化.方法正常组大鼠股静脉注射三七皂苷(50mg/kg),缺血再灌组大鼠阻断双侧颈总动脉造成不完全脑缺血30min、复灌同时股静脉注射等量药物.采用反相HPLC法测定iv后不同时间点大鼠血浆中R1、Rg1浓度,计算其动力学参数.结果在正常和脑缺血再灌状态下,R1、Rg1动力学呈一室开放模型.正常状态下,R1和Rg1的t1/2、AUC0～∞、CL(s)、Vd分别为21.6±7.9和20.8±3.7min、418.7±85.9和1.20±0.18mg/kg;脑缺血再灌状态下,R1和Rg1的t1/2、AUC0～∞、CL(s)、Vd分别为19.2±5.0和20.0±5.2min、416.7±58.9和1368.0±186.3μg/ml·min、0.1390±0.0413和0.0380±0.0060mg/kg·min、3.31±0.54和1.04±0.15mg/kg.结论在正常和脑缺血再灌状态下,R1、Rg1各自的动力学参数没有明显差异.R1、Rg1的动力学过程相似.     

三七皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤中BDNF mRNA含量的影响

目的:探讨三七皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤大脑组织中脑源性神经营养因子(brain-de-rived neurotroph ic factor,BDNF)mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为脑缺血再灌注模型组、药物治疗组(100 mg/kg)和阳性药物对照组(尼莫地平,1 mg/kg),采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,各组分别于术后1、3、5天随机取4只大鼠处死后取出脑组织。提取脑组织的总RNA,进行RT-PCR扩增BDNFmRNA特异性片段,构建重组质粒并测序。以倍比稀释后的重组质粒作为阳性标准模板,使用Taqm an探针法对BDNF mRNA进行实时定量PCR检测,分析各组大鼠脑组织中BDNF mRNA的变化。结果:与模型组及阳性对照组相比,三七皂苷Rg1组能明显改善脑缺血的神经缺失症状,并在各时间段均能上调脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织中BDNF mRNA的含量(P<0.05)。结论:三七皂苷Rg1通过上调大鼠脑缺血再灌注损伤时脑组织中BDNF mR-NA的含量,促进脑组织内BDNF蛋白的合成,BDNF与其特异性受体TrkB相结合,产生相应的效应分子而对缺血神经元起保护作用,从而发挥其对脑缺血损伤的治疗作用。     

人参皂苷Rg1对染铅幼年大鼠脑GDNF阳性细胞的保护作用

目的:探讨人参皂苷Rg1对染铅大鼠学习记忆保护作用与大脑皮层胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)阳性细胞的变化关系。方法:将36只健康3周龄Wistar大鼠随机分为3组:对照组,模型组,Rg1组。采用腹腔注射方式给幼鼠染毒和药物干预。分别采用Y-迷宫实验、原子吸收、免疫组化技术检测各组动物学习记忆能力、血和脑铅含量、大脑皮层GDNF阳性细胞数目。结果:与对照组和Rg1组相比,染铅组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05),血铅和脑铅含量明显升高(P<0.01)。免疫组化结果显示,染铅大鼠大脑皮层GDNF阳性细胞数目明显增多(P<0.05)。但Rg1组与对照组之间无明显差别。结论:染铅对学习记忆功能影响可能与大脑皮层GDNF阳性细胞的变化有关。Rg1对铅引起大脑皮层GDNF阳性细胞的变化有明显保护作用。     

RP-HPLC测定血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量

目的应用反相高效液相色谱法测定血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量.方法色谱柱Shim-Pack VP-ODS(5μm,250mm×4.6mmI.D),柱温27℃,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(2179),检测波长203nm,流速1.0mL/min.结果人参皂苷Rg1和三七皂苷R1分别在0.167～9.994 μg(r=0.9999)和0.485～9.704 μg(r=0.9999)范围内线性关系良好.平均回收率分别为98.68%和98.68%.RSD分别为0.58%和0.79%.结论本法操作简便、结果准确,重现性好,可用于血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量测定.     

三七片中人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的含量测定

三七片是三七制成的片剂 ,具散瘀止血 ,消肿定痛之功 ,用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛、原发性血小板减小性紫癜 ,临床疗效好。该品种收载于部颁标准中药成方制剂第八册 ,原标准只有鉴别项及醇浸出物检查项 ,为了更好地控制三七片的质量 ,笔者对三七片中人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的含量测定方法进行了研究。1　仪器与试药岛津薄层扫描仪 ;三七片 (广东环球制药有限公司研究发展部提供 ) ;阴性样品 (广东环球制药有限公司研究发展部提供 ) ;人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;氯仿、…     

HPLC法测定三七及复方丹参片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量

目的测定三七及复方丹参片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量,为更好地控制两者的质量提供依据.方法采用高效液相色谱法,色谱条件:Zirchrom C18柱(4.6×200 mm,5 μm);流速:1 mL·min-1;检测波长:203 nm;柱温:20℃;流动相:水-乙腈(梯度洗脱).结果三七皂苷R1线性范围为0.25～10.05 μg(r=1.000),平均回收率为99.25%,RSD=2.57%(n=5);人参皂苷Rg1线性范围为0.60～23.89μg(r=0.999),平均回收率为100.19%,RSD=2.98%(n=5).结论该方法准确可靠,重现性好,可用于三七及复方丹参片的质控标准.     

三七皂苷Rb_1对局部脑缺血后大鼠海马CA_1区脑血流及GLT-1的影响

目的探讨三七皂苷Rb1对局部脑缺血后大鼠海马CA1区脑血流(rCBF)及神经胶质谷氨酸转运体(GLT-1)的影响。方法雄性SD大鼠48只,随机分为脑缺血假手术组、模型组、三七皂苷Rb1、尼莫地平治疗组,每组6只,制成局灶性脑缺血模型,各组于缺血后4 h腹腔给药,假手术组、模型组给予生理盐水;缺血后24 h测海马CA1区rCBF水平;测定GLT-1的表达,观测对比上述指标变化。结果与模型组相比,三七皂苷Rb1、尼莫地平治疗组均能增加局部rCBF(P<0.05),并能上调大鼠海马CA1区GLT-1的表达(P<0.05)。结论三七皂苷Rb1能增加rCBF,还能上调GLT-1的表达,发挥对神经元损伤所起的保护作用,为进一步研发三七皂苷Rb1在治疗缺血性脑疾患上提供实验依据。     

HPLC测定三七粉及三七片中人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量

三七,又名田七、参七,属五加科人参属植物[1],被历代医学家誉为“止血之神药,补血之妙品”,是名贵的中药材。有散瘀止血,消肿定痛的功能。主要用于治疗冠心病、心绞痛等心脑血管系统疾病[2]。三七含有皂苷、黄酮、多糖等多种有效成分,其中皂苷含量最高。经药理证明,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1为其活性成分。作为一种天然产物,受其产地、采收季节、炮制方法和实验条件等方面的差异的影响,再加上其本身成分复杂,提取制备方法和实验条件的不同,三七产品质量往往不稳定。而质量稳定是用药安全有效的关键。所以找出一种有效测定三七及其制剂中有效…     

高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1,Rb1的含量

目的测定三七药材中三七皂苷的含量.方法采用高效液相色谱法C18色谱柱,乙腈∶水(15∶85-12 min30∶70-45 min15∶85 v/v)梯度洗脱,检测波长203 nm.结果三七R1在72.8～109 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 1),人参Rg1在68.8～860 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 2),Rb1在62.8～785 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 8),线性关系良好.平均回收率大于98%,方法的变异系数小于3.0%.结论方法简便,快速,准确,重现性好,可用于三七药材中三七皂苷的含量测定.     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达的影响

目的：观察养血清脑颗粒对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组、VD模型组（模型组） 和养血清脑颗粒治疗组（治疗组）,采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作VD大鼠模型,应用Morris水迷宫实验检测VD大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠出现明显的学习记忆障碍,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达增多（P<0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠学习记忆障碍明显改善,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达明显增多（P<0.01）,以4周时表达最明显。结论：养血清脑颗粒能改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与养血清脑颗粒上调BDNF和bFGF蛋白表达有关。     

三七不同药用部位中人参皂苷Rg3的含量测定

目的 建立三七中20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3的含量测定方法,评价不同药用部位及加工方式的三七提取物中,两个型的人参皂苷Rg3的含量情况.方法 采用高效液相色谱法测定,色谱条件:ECOSIL 120-5-C18-SH色谱柱(4.6×250mm,5μm);流动相为乙腈-异丙醇-水(47:3:50)...     

三七超微粉与细粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量比较研究

目的测定三七超微粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量,为三七超微粉质量评价提供依据。方法采用高效液相法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱;流速:1 mL.min-1;检测波长:203 nm;柱温:25℃。结果三七超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均含量均高于三七细粉,两者间的含量有显著性差异。结论超微粉质量优于细粉。本实验的含量测定方法简便、准确,可为三七超微粉的质量控制提供一定的参考依据。     

电针对局灶性脑缺血模型大鼠皮层BDNF、TrkB的影响

目的:观察电针对不同时间点局灶性脑缺血模型大鼠缺血区皮层BDNF、TrkB的影响。方法:采用线栓改良法复制大脑中动脉缺血模型(MCAO),采用免疫组化SABC法观察缺血皮层BDNF、TrkB表达情况。结果:BDNF、TrkB阳性神经元主要分布在梗死灶周围皮质区。假手术组大鼠相应区域可见少量阳性神经元表达,且强度较弱;模型组各时间点梗死周围皮质BDNF、TrkB阳性神经元比假手术组明显增多,差异有统计学意义(P0.05);电针组各时间点梗死周围皮质BDNF、TrkB比相同时间点模型组显著增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论:电针风府穴可以增加急性脑缺血后缺血周围皮质BDNF、TrkB阳性神经元,对缺血性脑损伤起修复和保护作用。     

三七皂苷Rg1对学习记忆功能障碍的影响

目的：研究三七皂苷Rg1灌胃对多种化学物质所致动物记忆障碍模型的影响。方法：采用避暗和水迷宫方法分别研究三七皂苷Rg1对东莨菪碱所致动物大、小鼠记忆获得障碍、亚硝酸钠所致小鼠记忆巩固障碍及40%乙醇所致大、小鼠记忆再现障碍的影响;用生化法测定东莨菪碱所致记忆获得障碍大鼠大脑皮层中的乙酰胆碱酯酶（AChE）活性、丙二醛（MDA）含量,用荧光分光光度法测定其大脑皮层脂褐质含量。结果：小鼠避暗试验结果显示,与东莨菪碱所致记忆获得障碍、亚硝酸钠所致记忆巩固障碍及40%乙醇所致记忆再现障碍模型组比较,中、高剂量（200和400mg/kg）的三七皂苷Rg1均明显减少5min内的错误次数,并显著延长潜伏期。水迷宫试验显示,与模型组相比,中、高剂量（200和400mg/kg）的三七皂苷Rg1均明显减少3min内动物进入盲端的错误次数,显著缩短小鼠游完全程达岸的时间。经分阶段训练后,与模型组相比,中、高剂量的三七皂苷Rg1均显著增加动物达岸的正确反应百分率。大鼠避暗试验结果表明,与东莨菪碱所致记忆获得障碍及40%乙醇所致记忆再现障碍模型组比较,中、高剂量（100和200 mg/kg）的三七皂苷Rg1均明显减少5min内的错误次数,显著延长潜伏期。与东莨菪碱所致记忆获得障碍模型组相比,中、高剂量（100和200mg/kg）的三七皂苷Rg1均显著降低AChE活性、MDA及脂褐质的含量。结论：三七皂苷Rg1能改善记忆损伤模型动物的学习记忆功能,其机制可能与降低脑组织AChE活性,降低脑组织中脂质过氧化物、脂褐质等的含量有关。     

中药三七对急性局灶性脑缺血大鼠Nestin和BDNF表达的影响

目的:观察中药三七对急性局灶性脑缺血大鼠巢蛋白(Nestin)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用电热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,术后随机分为模型组、中药组,另设假手术组。观察中药三七对大鼠侧脑室室管膜下层(SVZ区)Nestin和大脑皮层BDNF表达的影响。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠SVZ区Nestin和大脑上层(BDNF)免疫阳性细胞数增多(P<0.01);与模型组相比,中药组大鼠SVZ区Nestin和大鼠皮层(BDNF)免疫阳性细胞数增多(P<0.01)。结论:脑缺血后BDNF、Nestin的表达出现增高,说明BDNF、Nestin参与神经元内源性保护;中药三七能明显提高Nestin和BDNF在缺血脑内的表达,从而保护神经元、修复损伤。     

RP-HPLC测定脑得生软胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1含量

目的:用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定脑得生软胶囊(三七、川芎、葛根、红花、山楂)中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg13种皂苷的含量,为制定该制剂质量标准中含量测定方法及限度提供依据.方法:用美国热电公司Hypersil GOLD C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-水梯度洗脱,0～25 min(18:82～40:60),平衡10 min,流速:1.0mL/min,检测波长:203 nm.结果:该方法回收率R1:98.8%(RSD=0.67%),Rb1:103.9%(RSD=1.66%),Rg1:102.5%(RSD=1.17%).结论:HPLC梯度洗脱法能将多种皂苷很好地分离检测,提高了时效,减少了误差,结果表明该方法准确可靠,重现性好,结果稳定.     

HPLC-ELSD法测定三七止血胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的:采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定三七止血胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量.方法:以乙腈-水为流动相梯度洗脱(0～12 min,乙腈19%→36%),Hypersil ODS柱(4.0 mm × 200mm,5 μm)为固定相,流速为1.0 mL·min-1,ELSD参数:漂移管温度45℃,载气流量1.5 L·min-1.结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的回收率分别为97.86%,96.24%和97.58%,RSD分别为1.36%,1.58%和1.13%(n=6).结论:该方法简便、快速、重现性好,可用于三七止血胶囊的质量控制.