戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒的研制及初步应用

目的 应用大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒(HEV)重组抗原建立HEV IgG抗体诊断(ELISA)试剂盒.方法 应用大肠杆菌表达的具有戊型肝炎主要抗原表位的表达蛋白HEV ORF23作为包被抗原,建立检测血清中抗HEV IgG的间接ELISA试剂盒.通过HEV IgG试剂盒对100份戊型肝炎患者血清和150份正常人阴性血清测定结果进行比较,评价本试剂盒的特异性、敏感性及稳定性.另选临床500份肝炎患者血清进行检测,评价本试剂盒的临床应用价值.结果 建立的抗HEV IgG间接ELISA试剂盒特异性、敏感性均为100%,重复性较好,在4℃至少可稳定存放6个月,与同类试剂的符合率为95%以上.500份血清样本中,戊型肝炎患者150例,检出HEV145份,阳性符合率为96.67%.结论 应用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立的检测试剂盒对血清抗HEV IgG的检测具有良好的特异性和敏感性,在戊型肝炎的临床诊断和流行病学调查中具有潜在的应用价值.     

套式逆转录PCR检测戊型肝炎病毒RNA的临床应用

目的 评价套式逆转录PCR检测血清戊肝病毒(HEV) RNA的临床意义.方法 对GenBank数据库中的戊型肝炎病毒全基因组序列进行分析比对,并针对国内流行的HEV株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物,建立套式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)方法,并检测126例急性戊型肝炎患者,并与检测抗-HEV IgM的方法进行比较.结果 126例急性戊型肝炎患者血清中有67例HEV-RNA阳性,对照组血清HEV-RNA检测均为阴性;与血清抗HEV IgM检测结果比较,HEV RNA检测的总符合率为80.91％,两种方法的检测结果具有良好的一致性;nRT-PCR方法检测HEV-RNA与血清抗-HEV IgM检测方法存在明显的差异,不能相互替代,而有一定的互补性;3例患者的首份血清检测为HEV-RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,均相继出现抗HEV IgM,急性戊型肝炎患者血清HEV-RNA的检出多在发病的1～12 d.结论 应用nRT-PCR方法能对急性散发戊型肝炎患者血清中的HEV RNA进行定性检测,且有较高的特异性和敏感性,临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平,具有一定的临床应用价值.     

马鞍山地区不同人群戊型肝炎病毒基因型初步分析

目的了解马鞍山地区不同人群中戊型肝炎病毒（HEV）流行株基因型的分布状况。方法对来自一般人群、有偿献血人群、吸毒人群的血清标本进行HEV IgG、IgM抗体检测并将HEV IgM阳性的血清标本进行RT-PCR扩增,PCR阳性标本进行基因测序及序列分析。结果 HEV PCR扩增成功16份,其中HEV IgM抗体阳性病人和正常人群中10份标本阳性,吸毒人群和有偿献血人群中各3份标本PCR阳性,测序结果显示均为HEVⅣ型毒株感染。结论马鞍山地区不同人群中HEV流行株均为基因Ⅳ型,但不同人群内部的流行株存在较大变异。     

福建省戊型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

目的了解福建省动物种群及人群中戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况。方法收集猪、犬、乳牛、山羊和啮齿动物(黄胸鼠及褐家鼠)等5种与人类关系密切的哺乳动物血清标本共1151份,收集普通人群血清标本2209份,暴露人群血清标本1722份,应用ELISA检测抗-HEV IgG抗体。结果不同动物HEV感染率有差异(x2=406.25,P<0.01),其中猪的感染率为71.31%,散养家猪(70.00%-94.12%)HEV感染率高于大型专业养猪场(39.77%),不同生长期(≥4月龄)的猪其HEV感染率未见不同。普通人群HEV的阳性率为23.3%,暴露人群HEV阳性率为33.3%;暴露人群阳性率显著高于普通人群。在暴露人群中与鸡密切接触者,HEV的阳性率显著高于与猪密切接触者。HEV阳性率有随年龄的增长而上升的趋势,在普通人群中,男、女性HEV阳性率差异无统计学意义(P>0.05);但在暴露人群中男性HEV阳性率显著高于女性。结论猪和暴露人群HEV的感染率较高;与猪、鸡密切接触者HEV阳性率高于普通人群,证明了HEV可能是一种人兽共患病。     

微量元素与戊型病毒性肝炎的研究(4)

目的：探讨微量元素与戊型病毒性肝炎的关系。方法：用原子吸收分光光度计对HEV感染者血清中的微量元素Cu、Fe、Zn、Se进行测定，以SPSS for win9.0进行相应的统计分析。结果：抗－HEV阳性组血清Zn、Se低于对照组（P＜0．001），血清Fe高于对照组（P＜0．001）。戊型病毒性肝炎患者组血清Zn、Se低于对照组（P＜0．001），血清Fe低于对照组（P＜0．05）。抗－HEV阳性组Cu/Zn、Fe/Zn比值均高于对照组，有显著性差异（P＜0．001）。戊型病毒性肝炎患者组Cu/Zn、Fe/Zn比值高于对照组（P＜0．05）。Logistic回归分析，抗－HEV阳性组微量元素Se及Cu/Zn、Zn/Se比值进入回归方程。结论：微量元素Zn、Se对HEV感染者的影响最为显著。     

南通市2000～2006年人群戊型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

[目的]了解2000～2006年南通市人群戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染状况.[方法]对来自南通市的12 537例受检者血清样本采用ELISA法检测抗HEV IgG和抗HEV IgM,分析该人群中血清HEV抗体阳性率的变化趋势.[结果]2000～2003年南通市人群HEV感染率从20.03%逐步下降到4.85%,2003～2006年HEV感染率维持在4.40%左右的较低水平;不同年龄组人群中,15岁以下未成年人HEV感染率仅为1.39%,显著低于25～64岁成年人(平均为8.17%,P≤0.005);男女两性感染率差异无统计学意义.[结论]2000～2006年南通市HEV感染率逐渐下降并维持于较低水平,HEV感染率存在年龄差异,男女感染率基本相同.     

武汉地区小牛和羊戊型肝炎病毒感染调查

目的 调查湖北省武汉市小牛和羊戊型肝炎病毒(HEV)感染情况.方法 从武汉地区分别采集小牛和羊血清样本397份和503份,用酶联免疫诊断试剂盒检测HEV抗原和抗体.对抗原或抗体阳性者用荧光RT-PCR检测HEV核酸,对阳性者采用套式RT-PCR进行扩增,并进行克隆和序列分析.选取核酸阳性样品接种猴子.结果 羊血清中HEV抗体阳性率为21.87%(110份),抗原阳性率为12.33%(62份);抗原和抗体同时阳性者占2.78%(14份)小牛血清中HEV抗体阳性率为2.02%(8份),抗原阳性率为0%.仅1份羊血清为HEV核酸阳性,序列分析显示为HEV 4型.结论 武汉地区小牛HEV感染率较低,但羊的感染率相对较高.     

兰州市猪戊型肝炎血清学及病毒基因型分析

目的 调查甘肃省兰州市猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况以及基因型.方法 收集兰州市部分地区猪血清,用ELISA诊断试剂盒分别检测HEV抗原和抗体;其中抗原阳性的血清,采用HEV ORF2引物进行套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)扩增,对阳性扩增产物进行克隆和测序,并对序列进行分析,确定其基因型.结果 3月以下猪戊型肝炎病毒抗原、抗体阳性率分别为1.56%和90.27%,3个月以上分别为2.35%和86.99%,抗原、抗体水平在3月龄以上和以下二者中差异无统计学意义,抗原阳性血清共有22份,其中7份为HEV核酸阳性,其核苷酸序列与HEV 4型的同源性为82.2%～99.3%,分别为4a,4d和4f亚型.结论 兰州市猪群存在HEV感染,且为基因4型.     

深圳地区HEV流行基因型及动物宿主带毒状况分析

目的了解深圳地区戊型肝炎病毒(HEV)流行基因型及动物宿主带毒状况。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。对深圳市采集的80份猪粪便标本和6份戊型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果80份猪粪便标本5份HEV—RNA阳性,6份病人血清样本中4份阳性。序列分析显示全部为HEV基因IV型,5份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%～94%。结论深圳地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,证实猪是HEV的宿主,戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

埃及儿童感染HEV后的病毒血症

以前曾有在实验感染成型肝炎病毒(HEV)猴子的血清中用聚合酶连反应(PCR)检出HEV RNA的报道,本文作者通过PCR RNA扩增技术检测埃及儿童的连续血清样本,并对人类感染HEV后的病毒血症作了研究。 血清样本获自4例诊断为急性戊型肝炎     

3种戊型肝炎病毒抗原检测血清抗—HEV IgG的比例研究

目的：用3种抗原检测国家戊型肝炎参比血清和急性戊型肝炎病人血清抗－HEV IgG。方法：人工合成戊型肝炎病毒（HEV）ORF2和ORF3多肽抗原（BMU抗原）检测参比血清的灵敏度（90．0％），特异度（100．0％）和符合率（97．5％）均高于杆状病毒表达的HEV重组蛋白空粒子抗原（JP抗原）（分别为70．0％，93．3％和87．5％）及大肠杆菌表达的重组蛋白抗原（HKU抗原）（分别为70．0％，90．0％和85．0％），检测84例急性戊型肝炎病人血清抗－HEV IgG，用BMU抗在检测抗－HEV IgG的阳性率为1000％（84／84），高于JP抗原（83／84，98．8％）和HKU抗原（71．84，84．5％）。结果：不同HEV抗原检测国家参比血清和急性戊型肝炎病人血清抗－HEV IgG的灵敏度和特异性不同，其差异主要与编码该3种抗原的HEV基因片段不同有关，ORF3抗原在检测急性HE病人中具有重要意义。联合应用ORF2和ORF3抗原可提高抗－HEVIgG检出率，结论：抗－HEV IgG ELISA诊断试剂至少应包括ORF2和ORF3 2种抗原。     

武汉地区戊型肝炎流行病学特点调查

目的调查武汉地区普通人群戊型肝炎病毒（HEV）感染的流行病学特点。方法2006年1—12月来武汉科技大学附属汉阳医院常规体检人员进行整群抽样并抽血,应用ELISA方法检测血清中戊型肝炎病毒（HEV）IgG水平,同时检测体检人员血清ALT水平,用统计学方法分析本地区普通人群HEV感染情况及特点。结果常规体检的3561人员中HEV总感染率为30．50％,HEV-IgG阳性率男性为37．92％,女性为23．31％;20岁以下人群阳性率〈1％,男性比女性感染率高,感染率随年龄上升而上升。HEV—IgG阳性人群ALT水平与HEV-IgG阴性人群无显著性差异。结论武汉地区男性和年长人群具有较高的HEV感染风险,20岁以下人群中HEV—IgG阳性率极低,学校等地方戊肝暴发的预防应引起高度重视。     

4a亚型猪戊型肝炎病毒对猕猴致病性

目的 研究4a亚型猪戊型肝炎病毒(HEV)对猕猴的致病性.方法 用1株从广西壮族自治区农村地区幼猪粪便中分离并已经基因测序确定为4a亚型的猪HEV静脉注射感染猕猴,通过检测粪便HEV RNA、血中HEVRNA、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平、HEV抗体及肝组织分别进行病理学和电镜检查确定HEV致病性.结果 猪HEV株实验感染猕猴后,出现粪便排毒、病毒血症、ALT升高及HEV抗体阳转,活检肝组织切片呈现典型的急性病毒性肝炎的病理变化,电镜下观察到肝细胞中散在有大量病毒样颗粒.结论 广西4a亚型猪HEV能够跨物种感染猕猴并引起戊型肝炎.     

戊型肝炎亚临床感染者血清中HEV抗体和粪便HEV RNA的动态变化

目的调查北京铁路局天津铁路辖区内铁路系统从业人员戊型肝炎(戊肝)感染情况,探讨戊肝亚临床感染者血清中戊肝病毒(HEV)抗体和丙氨酸氨基转移酶(ALT)及粪便中HEV RNA的动态变化。方法选取2011—2013年在北京铁路局天津铁路疾病预防控制所进行预防性健康检查的从业人员抗HEV-Ig M阳性者共54人,并选取54名抗HEV-Ig M阴性者做对照,检测其血清中ALT和抗HEV-Ig G,计算其异常率和阳性率。对抗HEV-Ig M阳性者进行随访,观察其血清中ALT、抗HEV-Ig M、抗HEV-Ig G及粪便中HEV RNA不同时间的变化情况。结果抗HEV-Ig M阳性组血清中ALT水平、ALT异常率和抗HEV-Ig G阳性率与抗HEV-Ig M阴性组相比,差异无统计学意义(P0.05)。抗HEV-Ig M阳性人群血清中抗HEV-Ig M和Ig G阳性率在初次检查后90 d内有显著性差异,此时粪便中可以检测到HEV RNA。结论辖区内HEV感染呈亚临床感染状态存在,初次检查后90 d内抗HEV-Ig M和Ig G及粪便中HEV RNA阳性率变化最明显。     

正常体检人群戊型肝炎病毒感染情况分析

目的了解正常体检人群戊型肝炎病毒感染情况。方法采用酶联免疫吸附法检测499例正常体检受试者血清HEV IgG和HEV IgM抗体水平。结果在499例受试者中,HEV IgG总阳性率为13.63%(68/499),HEV IgM总阳性率为3.21%(16/499),共同阳性率为1.40%(9/499),共检出9例HEV IgM单阳性样本。男性人群中的抗体阳性率高于女性。体检人群中40岁～59岁HEV IgG阳性率显著高于20岁～39岁。结论正常体检人群中存在HEV感染者,需要加强对正常体检人群的HEV抗体筛查,尤其是联合检测HEV IgG和HEV IgM可以提高检出率,避免漏检。     

广东省韶关地区戊型肝炎病毒基因型分析

目的了解韶关地区流行的戊型肝炎病毒基因型,并探讨戊型肝炎是否属于人兽共患病。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。在广东省韶关地区采集猪粪便标本和非甲非乙型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果RT-nPCR检测结果显示99份猪粪便标本中有6份HEVRNA阳性,7份病人血清样本中1份阳性,序列分析显示全部为HEV基因IV型,4份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%~94%,且其中1份猪标本中的HEV与1份病人标本中HEV的序列同源性高达91.5%。结论广东韶关地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,结果证实戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

抗HEV-IgA在急性戊型肝炎诊断中的意义

目的建立酶联免疫吸附法检测血清抗HEV-IgA的方法,了解戊型肝炎患者血清中抗HEV-IgA的动态变化规律及探讨其诊断中的意义。方法应用北京万泰公司基因重组HEV ORF-2/ORF-3抗原预包被的酶标板,HRP标记羊抗人IgA建立检测血清抗HEV-IgA的方法。酶联免疫试验检测60例HEV RNA阳性戊型肝炎患者不同时间段血清抗HEV-IgA、抗HEV-IgM(捕获法)、抗HEV-IgG水平。结果60例戊型肝炎患者血清抗HEV-IgA、抗HFV-IgM均为阳性,而对照组410例非戊型肝炎病人中,5例抗HEV-IgA阳性,6例抗HEV-IgM,且抗HEV-IgG和HEV RNA均阴性,其中仅有一例出现抗HEV-IgA和HEV-IgM双阳性(隐性感染)。动态检测戊型肝炎患者血清HEV RNA、抗HEV-IgA、抗HEV-IgM和抗HEV-IgG,发现急性戊型肝炎血清HEV RNA持续至发病后(20±11)d,抗HEV-IgA阳性持续至(120±23)d、抗HEV-IgM阳性持续至(90±15)d,自发病后第2个月开始,抗HEV-IgA、抗HEV-IgM阳性率百分比差异有统计学意义(P<0.05)。结论戊型肝炎患者抗HEV-IgA阳性较抗HEV-IgM阳性持续时间长,抗HEV-IgA检测弥补了抗HEV-IgM阴性急性戊型肝炎的诊断,同时检测抗HEV-IgM和抗HEV-IgA,可提高急性型肝炎诊断的特异性。     

广西地区猪、鼠、狗戊型肝炎病毒感染血清学分析

目的了解广西地区猪、鼠和狗血清中抗．戊型肝炎病毒（HEV）IgG抗体流行情况。方法应用HEV基因1型开放读码框（ORF）2和ORF3多肽包被酶标板，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗猪、羊抗鼠和羊抗狗建立的酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测猪、鼠和狗血清中抗．HEV IgG。结果总抗．HEV IgG阳性率为31．84％（170／534），其中猪血清抗．HEV IgG阳性率为26．40％（66／250），鼠血清抗．HEV IgG阳性率为43．02％（77／179），狗血清抗．HEV IgG阳性率为25．71％（27／105）。结论猪、鼠和狗血清中存在HEV感染，鼠抗．HEV IgG阳性率最高。     

中国南方某农村地区人与猪戊型肝炎病毒的检测和部分序列分析

目的调查中国南方某农村地区戊型肝炎病毒（HEV）人株与猪株的相关性。方法应用逆转录-巢式聚合酶链法（RT—nPCR）对一般人群中HEV-IgM阳性者、急性戊型肝炎患者和当地某养猪场的猪进行HEV RNA检测，并对HEV RNA阳性标本进行克隆测序和序列分析。结果132份猪粪便标本中13份为HEV RNA阳性；26份IgM阳性一般人群血清标本中有4份HEV RNA阳性；4例急性戊型肝炎患者中有1例的血清和粪便标本为阳性。序列分析发现该地区HEV人株与猪株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为89．3％～100．0％，这10株HEV序列与HEVⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型在同一区域的核苷酸序列的同源性分别为78．7％～84．7％、83．3％～85．3％、76．0％～80．0％和84．7％～95．3％。结论该地区人群及猪群中流行的HEV同属基因Ⅳ型。     

戊型病毒性肝炎研究进展

戊型病毒性肝炎（戊肝）是由戊肝病毒（HepatitisE Virus,HEV）引起的急性病毒性肝炎。HEV是一种单链、非包膜的RNA病毒,分为4个基因型,主要通过粪口途径传播,也可以通过输血传播和母婴传播。戊肝主要在发展中国家流行,但欧美等发达国家亦有散发病例。戊肝是一种人畜共患病。酶联免疫吸附实验（ELISA）是目前用于检测血清HEV抗体最常用的方法。HEV RNA检测可证实HEV感染。目前,HEV疫苗的研究主要集中在HEV基因工程疫苗的研制。2012年10月HEV疫苗上市。采用切断传播途径为主的综合性预防措施可控制该病的流行,接种疫苗也是预防戊型肝炎的重要措施。