独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的?观察独活寄生汤（DHJSD）对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠中Wnt/β-连环蛋白（β- catenin）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨DHJSD治疗骨关节炎（OA）的机制。方法?选取32只SD大鼠，按随机数字表法分为DHJS组、模型（M）组、硫酸氨基葡萄糖（GS）组和正常（NC）组。除NC组外，其余3组予双膝关节腔内注射0.2 mL 4%木瓜蛋白酶法建立KOA模型。造模后DHJS组予DHJSD灌胃，GS组予GS灌胃，NC、M组给予等体积纯净水灌胃。连续给药8周后进行双膝关节X线扫描，观察大鼠膝关节影像学变化并评分，ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白介素-1β（IL-1β）含量，HE染色、番红O固绿染色法观察膝关节软骨病理改变并进行Mankin评分，采用实时聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）及免疫组化法检测软骨组织中Wnt/β- catenin通路相关蛋白的mRNA及蛋白表达水平。结果?与NC组比较，M组大鼠膝关节间隙狭窄，软骨层损耗，X线评分、Mankin评分升高（P<0.05），DHJS组和GC组上述改变减轻，X线评分及Mankin评分下降（P<0.05）；DHJS组血清及软骨MMP-13含量减少（P<0.05）；下调软骨β-catenin、Wnt3a mRNA水平以及β-catenin、IL-1β蛋白表达水平（P<0.05），上调骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）mRNA 和蛋白表达水平（P<0.05）。结论?DHJSD能通过下调Wnt3a/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平，抑制MMP-13表达、促进BMP-2表达，从而改善大鼠KOA的影像学及病理学改变，发挥软骨保护作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨脊蛇祛湿胶囊治疗膝骨关节炎的作用机制

目的：探究脊蛇祛湿胶囊通过调控Wnt/β-catenin信号通路治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。方法：70只大白兔随机分成7组：空白组,模型组,脊蛇祛湿胶囊低、中、高剂量组,盐酸氨基葡萄糖对照组及美洛昔康对照组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测血清Wnt3a、Wnt5a、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin、基质金属蛋白酶（MMP）13含量,HE染色观察膝关节软骨病理改变、AB-PAS染色进行Mankin’s评分,免疫组化检测软骨组织Wnt5a、Axin、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组Mankin’s评分显著升高（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13含量显著升高（P<0.05）,软骨组织中Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达显著升高（P<0.05）,Axin蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,各药物组Mankin’s评分显著降低（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GS...     

电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

毛蕊花糖苷通过Wnt/β-catenin信号通路对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的改善作用

目的：探究毛蕊花糖苷通过调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对缺血缺氧性脑损伤（HIE）新生大鼠的作用。方法：将72只新生SD雄性大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药物组、毛蕊花糖苷高剂量组、毛蕊花糖苷低剂量组、毛蕊花糖苷+通路抑制组,每组12只,按组分别给予相应的干预。神经学评分评估大鼠神经行为学功能;TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测大鼠海马组织细胞凋亡率;干湿重法检测脑组织含水量;采用ELISA检测海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;荧光定量PCR法检测海马组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin mRNA表达水平;Western Blot法检测海马组织中Bcl-2相关x蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白的表达水平。结果：与模型组比较,毛蕊花糖苷高剂量组、毛蕊花糖苷低剂量组大鼠神经学评分,脑组织含水量,细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及炎症因子TNF-α、IL-1β含量均显著降低（P<0.05）,Wnt1、Wnt3a、...     

“易层”贴敷抑制NLRP3炎症小体激活改善膝骨关节炎的实验研究

目的基于NLRP3/Capase-1轴研究易层贴敷膏药改善KOA滑膜炎症的治疗机制。方法将SD大鼠分为正常组,KOA组,"易层"组,抑制剂组,各组大鼠、滑膜HE染色,Western Blot检测大鼠滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白和软骨MMP-1、MMP-13蛋白表达水平,PCR检测滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达。结果 "易层"贴敷显著改善KOA大鼠滑膜炎症Krenn评分,IL-1β、TNF-α蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05);在应用"易层"贴敷膏药后,KOA大鼠滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平均较KOA组下调,差异具有统计学意义(P0.05);而应用Caspase-1抑制剂后,具有同样的下调作用,两组间无统计学意义(P0.05);应用"易层"贴敷膏药干预后,KOA大鼠软骨中MMP-1及MMP-13水平下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 "易层"贴敷膏药可能通过下调NLRP3及Caspase-1的表达抑制KOA滑膜炎症,减少软骨组织MMPs水平,发挥保护软骨的作用。     

续断醇提物对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制的研究

目的:探讨续断醇提物(RD)对骨关节炎(OA)的治疗作用及相关信号通路的影响。方法:将SD雄性大鼠(220～250 g)48只随机分为假手术组、模型组、RD-L,RD-M,RD-H及阳性对照组,采用右膝关节前交叉韧带切断术复制大鼠骨关节炎模型,评估OA大鼠的关节炎指数和机械性痛阈值;采用苏木精-伊红和TUNEL染色检测OA大鼠滑膜组织的病理变化;采用ELISA和RT-PCR法分别检测OA大鼠血清和滑膜组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量和表达水平;采用Western Blot法检测OA大鼠滑膜组织中Wnt/β-catenin信号分子蛋白的表达水平。结果:续断醇提物能够减小关节炎指数和增加机械性痛阈值,差异有统计学意义(P0.05),同时缓解滑膜炎性细胞浸润和滑膜细胞凋亡,除此之外,还能够降低OA大鼠血清中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量和下调滑膜组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的表达水平,也能够下调滑膜组织中Wnt和β-catenin的蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论:续断醇提物对骨关节炎具有潜在的保护作用,同时抑制滑膜组织Wnt/β-catenin信号通路活化。     

艾灸对膝骨关节炎兔软骨Wnt信号通路及血清炎性因子的影响

目的：基于Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路探讨艾灸干预膝骨关节炎（KOA）模型兔的可能作用机制。方法：将24只新西兰兔随机分为正常组、模型组及艾灸组，每组8只。除正常组外，其余2组兔采用右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶水溶液的方法制作KOA模型。造模成功后，艾灸组兔每日予艾条悬灸右膝犊鼻穴20 min，连续治疗21 d ；正常组和模型组正常饲养，不给予任何干预措施。干预结束后次日，各组兔麻醉后心脏采血，采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取各组兔右膝关节股骨端软骨，采用苏木精-伊红（HE）染色法观察各组兔膝关节软骨的组织形态，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法分别测定各组兔膝关节软骨组织中Wnt信号蛋白-3α（Wnt3α）、β-连环蛋白（β-catenin）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）蛋白及mRNA的表达水平，采用免疫组化法检测各组兔膝关节软骨组织中IL-1β、TNF-α的表达，并分析其积分光密度（IOD）。结果：模型组兔血清IL-1β、TNF-α明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组上述指标明显低于模型组（P＜0.05）。与正常组比较，模型组兔膝关节软骨细胞明显变性，软骨组织损伤严重；艾灸组兔膝关节软骨结构较为完整，软骨细胞数目较多且分布较均匀，细胞形态较为正常。模型组兔膝关节软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白和mRNA相对表达量均明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织中上述指标蛋白和mRNA相对表达量均明显低于模型组（P＜0.05）。模型组兔膝关节软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达显著高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织上述蛋白表达明显低于模型组（P＜0.05）。结论：艾灸犊鼻穴可下调KOA模型兔血清及软骨组织中炎性因子的表达，有效缓解膝关节软骨组织损伤，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

买朱尼对骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用研究

目的观察维药买朱尼对骨性关节炎模型大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨买朱尼对软骨细胞的保护作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和买朱尼组,每组10只。模型组和买朱尼组采用改良Hulth造模法建立膝骨关节炎模型,建模第2周开始买朱尼组灌胃买朱尼10.31 mg/(kg·d),模型组和假手术组灌胃等量生理盐水,均连续4周。末次灌胃后24 h取3组大鼠膝关节软骨标本进行大体评分和组织学评分,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、GSK-3β和Wnt-3a的表达水平。结果模型组大鼠膝关节软骨标本大体评分、软骨组织学Mankin评分及软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Wnt-3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于假手术组(P均0.05),而买朱尼组均明显低于模型组(P均0.05)。结论维药买朱尼可以减轻大鼠膝关节软骨退变的程度,其可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路来发挥保护关节软骨细胞的作用。     

电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响

目的:观察电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨内Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:32只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、DKK1组和电针组,用4%木瓜蛋白酶诱导大鼠膝关节骨性关节炎模型,分别于造模成功后5周和7周取材,观察大鼠膝关节软骨形态变化以及Western Blot法检测大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin含量的变化。结果:正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内Wnt3a蛋白呈低表达,分别为0.233±0.04和0.193±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内Wnt3a蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P0.05),而此两组间比较无差异(P0.05)。正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内β-catenin蛋白呈低表达,分别为0.163±0.04和0.143±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内β-catenin蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P0.05),而此两组间比较无差异(P0.05)。结论:电针可能是通过下调Wnt3a、β-catenin蛋白表达、抑制Wnt信号通路,进而保护受损的关节软骨,改善膝关节骨性关节炎大鼠的关节结构和功能状态。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠软骨组织ROCK/LIMK1/Cofilin通路的影响

目的:观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞骨架蛋白Rho相关蛋白激酶(ROCK)/单丝氨酸蛋白激酶1(LIMK1)/丝切蛋白(Cofilin)的影响,探讨针灸防治KOA的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、艾灸组和温针灸组,每组24只。采用右膝关节腔注射4%木瓜蛋白酶制备KOA大鼠模型。针刺组、艾灸组和温针灸组于造模第1天开始,取右侧"内膝眼""外膝眼"和"足三里"穴,分别采用针刺、艾灸和温针灸治疗,20 min/次,1次/d,共治疗21 d。采用游标卡尺测量右膝关节宽度,排水法检测大鼠右侧足部体积,采用蛋白免疫印迹法检测右侧膝关节软骨组织ROCK、LIMK1和磷酸化LIMK1(p-LIMK1)、Cofilin、磷酸化Cofilin(p-Cofilin)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠右膝关节宽度增加(P0.05),第6天起右侧足部体积增大(P0.01),Markin评分升高(P0.05),右侧膝关节软骨组织ROCK、p-LIMK1和p-Cofilin蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,针刺组、艾灸组和温针灸组大鼠右膝关节宽度降低(P0.05),第12天起右侧足部体积减小(P0.05),Markin评分降低(P0.05),右侧膝关节软骨组织ROCK、p-LIMK1和p-Cofilin蛋白表达水平降低(P0.05)。与针刺组和艾灸组比较,温针灸组大鼠右膝关节宽度降低(P0.05),第15天起右侧足部体积减小(P0.05),Markin评分降低(P0.05),右侧膝关节软骨组织ROCK、p-LIMK1和p-Cofilin蛋白表达水平降低更明显(P0.05)。结论:相对于针刺和艾灸,温针灸更能有效调节KOA大鼠关节炎性损伤状况,其机制可能与降低软骨组织骨架蛋白ROCK、p-LIMK1和p-Cofilin蛋白表达有关。     

低频超声促透威灵仙对早期兔膝骨关节炎的干预作用及机制研究

目的观察低频超声促透威灵仙治疗新西兰白兔膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法将新西兰白兔30只随机分为正常组、假手术组、模型组、威灵仙外敷组、超声透水组、超声促透威灵仙组,每组5只。采用切断膝关节前交叉韧带方法造成典型的KOA模型,各组不同干预后,采用KOA程度指数(Lequesne指数)评价兔KOA严重程度,大体观察,甲苯胺蓝染色、HE染色及软骨病理(Mankin′s)评分观察组织病理变化,ELISA法检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α水平;Western Blot法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Wnt3、β-连环蛋白(β-catenin)及Ⅱ型胶原的表达。结果以威灵仙有效成分常春藤皂苷元浓度为参考标准,超声输出功率为30 W时促透效果最好。与模型组比较,威灵仙外敷组和超声促透威灵仙组Lequesne指数有明显下降,软骨组织Mankin′s评分亦显著降低(P0.05);血清IL-1β和TNF-α含量均明显减少,且超声促透威灵仙组更低(P0.05);超声促透威灵仙干预后,膝关节软骨中MMP-13、β-catenin表达显著减少,Ⅱ型胶原的表达有一定的上升,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论超声电导仪在输出功率为30 W时促透治疗KOA的效果最佳,超声促透威灵仙干预的机制可能与其抑制Wnt 3/β-catenin信号通路及其靶基因MMP-13的表达有关。     

温针灸对膝骨性关节炎兔行为学及关节软骨肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-3含量的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔行为学及关节软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法 :将雄性日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,每组10只。采用关节机械制动法造成KOA模型,造模后对各组兔进行Lequesne MG行为学评估。治疗组选用"内膝眼""犊鼻""血海""阳陵泉"进行温针灸干预,每次干预20min,每日1次,共干预4周。4周后再次进行行为学评估,HE染色后观察膝关节软骨病理形态变化,并采用放射免疫分析法测定各组兔膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平。结果:造模后模型组与治疗组行为学评分明显高于正常组,治疗前后行为学评分差值治疗组明显高于模型组(均P0.05);HE染色结果显示,模型组与正常组相比有明显炎性反应细胞聚集现象,治疗组炎性反应现象较模型组有显著改善;模型组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平均明显高于正常组(均P0.05),治疗组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平明显低于模型组(均P0.05)。结论:温针灸可有效治疗兔KOA并降低关节软骨中TNF-α、MMP-3水平,发挥抗炎作用可能是其起效的一个重要机制。     

黄芪桂枝五物汤对膝骨关节炎大鼠软骨损伤及 NLRP3/Caspase1通路的影响

目的:探讨黄芪桂枝五物汤对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 (NLRP3)/天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)通路的影响。方法:将120只SD大鼠随机分成对照组、模型组、美洛昔康组、黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组建立KOA软骨损伤模型。模型制备成功后对照组、模型组给予等体积的生理盐水;美洛昔康组给予40.0 mg/kg的美洛昔康溶液;黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组分别按20.0、40.0、80.0 mg/kg的剂量给予黄芪桂枝五物汤。实验结束后,进行大鼠关节炎症积分、KOA软骨Mankin's评分,测定机械痛阈(PWPT)及热刺激潜伏期(PWTL);测定膝关节软骨组织中NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果:与对照组比较,模型组PWPT、PWTL降低(P0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平升高(P0.05)。与模型组比较,美洛昔康组和黄芪桂枝五物汤各剂量组PWPT、PWTL升高(P0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P0.05),且黄芪桂枝五物汤各剂量组存在明显的剂量-效应关系(P0.05)。与美洛昔康组比较,黄芪桂枝五物汤低、中剂量组PWPT、PWTL较低(P0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase 1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平较高(P0.05);而黄芪桂枝五物汤高剂量组以上各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:黄芪桂枝五物汤能减轻KOA软骨损伤程度,其高剂量效果尤为明显;其机制与黄芪桂枝五物汤能降低炎症信号通路NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白的表达,进而抑制炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎模型的作用机制。方法将4～6月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、西乐葆组和阳和汤组,每组6只。除空白组外,其余各组膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造模。造模成功后,阳和汤组予阳和汤灌胃,西乐葆组予西乐葆灌胃,空白组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续给药2周。灌胃前后分别测量4组兔膝关节皮温、周径,进行膝关节Lequesne MG评分。停药1周后采集标本,ELISA法检测关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量;光镜下观察关节软骨病理改变并进行Mankin's评分;免疫组化检测软骨组织Wnt4、β-catenin表达情况。结果与空白组比较,模型组膝关节皮温、周径和Lequesne MG评分,关节软骨病理切片Mankin's评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显升高(P0.05);与模型组比较,阳和汤组膝关节周径、Lequesne MG评分,软骨病理切片Mankin's评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显降低(P0.05)。结论阳和汤能抑制骨关节炎炎症反应,修复软骨损伤,其机制可能与降低炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善MMP-13有关。     

艾灸不同腧穴对KOA大鼠不同组织TNF-α、MMP-13表达的影响

目的 观察艾灸不同腧穴对膝骨性关节炎（KOA）大鼠血清及关节软骨与滑膜TNF-α、MMP-13表达的影响,探讨艾灸不同腧穴对KOA大鼠的特异性调节作用。方法 将大鼠随机分为空白组（Con）、模型组（KOA）、模型+足三里艾灸组（ST36）、模型+阳陵泉艾灸组（GB34）、模型+犊鼻艾灸组（ST35）,每组8只。选择关节腔注射MIA溶液的方法制备KOA模型。ST36、GB34、ST35组每日艾灸30 min,7天为1个疗程,共3个疗程。分析各组大鼠的机械刺激痛阈值（MWT）,番红固绿染色及OARSI评分,血清、关节软骨与滑膜的TNF-α、MMP-13的表达情况。结果 与Con组比,KOA组足底机械痛阈值下降,OARSI评分、血清与关节软骨和滑膜TNF-α以及血清、关节滑膜MMP-13的表达均明显升高（P<0.001,P<0.05）。与KOA组比,3个治疗组足底机械痛阈值上升,OARSI评分、血清TNF-α和MMP-13、软骨TNF-α均降低（P<0.001,P<0.05）,软骨MMP-13无明显变化（P>0.05）;ST36组滑膜TNF-α和MMP-13低表...     

白花丹素对类风湿关节炎大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响＊

目的 探究白花丹素（PLB）对类风湿关节炎（RA）大鼠Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 将60只SD大鼠（每组12只）随机分为对照组、模型组、地塞米松组（模型+30 mg·kg^-1地塞米松）、PLB-L组（2 mg·kg^-1 PLB）、PLB-M组（4 mg·kg^-1 PLB）和PLB-H组（6 mg·kg^-1 PLB）；除对照组外均构建胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠模型，药物组给予相应剂量的药物，对照组与模型组以生理盐水代替；观察大鼠一般情况；记录大鼠热刺激缩足反射潜伏期（PWTL）、机械性痛阈（PWT）及关节炎症积分；HE染色观察大鼠足关节滑膜组织病理学变化；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平；免疫应迹法检测各组关节滑膜组织中Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比，模型组大鼠皮毛无光泽、关节肿胀、跛行、活动量与进食量减少、精神倦怠；地塞米松组、PLB-L组、PLB-M组和PLB-H组大鼠皮毛光泽度、脱毛情况、饮食、精神及行动得到改善；与对照组相比，模型组大鼠PWT、PWTL显著降低，而关节炎症积分、足关节滑膜组织病理学程度、TNF-α、IL-6、Wnt3a、β-catenin、糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）和基质金属蛋白酶13（MMP-13）水平显著增加（P<0.05）；与模型组相比，地塞米松组、PLB-L组、PLB-M组和PLB-H组PWT、PWTL显著增加，而关节炎症积分、足关节滑膜组织病理学程度、TNF-α、IL-6、Wnt3a、β-catenin、GSK-3β和MMP-13表达水平显著降低，存在PLB剂量依赖性（P<0.05）；与地塞米松组相比，PLB-H组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 PLB对CIA大鼠关节滑膜增生及炎症反应的抑制作用，可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

豨莶醇对佐剂性关节炎大鼠血清细胞因子及滑膜细胞凋亡蛋白的影响

目的探讨豨醇(奇任醇)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及滑膜细胞Bcl-2、Fas-L蛋白表达的影响。方法采用弗氏完全佐剂建立SD大鼠AA模型,分别给予奇任醇、氢化可的松、阿司匹林 环磷酰胺治疗;ILISA法测定实验大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平;踝关节滑膜细胞进行Bcl-2、Fas-L免疫组化染色,运用计算机图像分析系统对染色结果进行分析。结果与正常组相比,模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),Fas-L表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,奇任醇组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.01、0.05);滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05),Fas-L蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论奇任醇可降低AA大鼠血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平,下调滑膜细胞Bcl-2蛋白表达、促进Fas-L蛋白表达。     

刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎大鼠滑膜组织MMP-9表达的影响

目的观察刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎(RA)大鼠血清TNF-α、IL-1β、VEGF水平以及滑膜组织MMP-9蛋白表达的影响,探讨其对RA软骨保护的作用机制。方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和刺山柑组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠足跖底部注射完全弗氏佐剂复制RA模型。阳性药组和刺山柑组分别以伤湿止痛膏和刺山柑果风湿止痛贴外敷,模型组以同样方式予以空白凝胶膏剂外敷,正常组不干预;各组均连续干预21 d(3个疗程),观察大鼠AI指数评分、足爪容积和热痛阈,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β和VEGF水平,Western blot法检测滑膜组织中MMP-9蛋白表达。结果与正常组比较,造模后大鼠均出现炎症表现和热痛阈降低,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β和VEGF水平明显升高(P0.05,P0.01),MMP-9蛋白表达显著增高(P0.01)。与模型组比较,阳性药组和刺山柑组的关节炎症和热痛阈敏感均明显改善,且刺山柑果风湿止痛贴的消肿作用起效更快(7 d),并能显著降低大鼠血清VEGF水平和滑膜组织中MMP-9蛋白的表达(P0.05),而阳性药组均无明显变化(P0.05)。结论刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎大鼠的消炎止痛作用可能与降低血清TNF-α、IL-1β、VEGF水平,抑制滑膜组织MMP-9蛋白表达有关。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

吴门芪藤汤对佐剂性关节炎大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡的影响

目的观察吴门芪藤汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡的影响及其可能机制。方法从40只雄性健康SD大鼠中选30只建立AA模型,并随机分为模型组、阳性药组、中药组,每组10只;其余10只为空白组。造模成功后第2 d开始给药,模型组、空白组均予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃;阳性药组予美洛昔康片10 mL/kg(3.4 mg/kg)灌胃;中药组予吴门芪藤汤10 mL/kg(24 g生药/kg)灌胃。每日灌胃1次,灌胃周期21 d。观察实验过程中各组大鼠一般状态变化;测定大鼠血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及基质金属蛋白酶3(MMP-3)含量;观察各组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织病理学变化;比较各组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数变化;观察各组大鼠膝骨关节滑膜组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达水平。结果与空白组比较,其他各组大鼠10～14 d后开始出现多发性的关节炎症,病变累及到未注射弗氏完全佐剂的大鼠膝骨关节及足爪,表现为关节局部程度不同的红、肿、热及功能障碍。随着病程延长,多发性关节炎可反复出现,部分大鼠可在病程不同时期于耳、尾部出现数量不等、程度不一的红斑、炎性小结,并有脱毛、鼻黏膜充血、渗血、精神萎靡等关节外症状。与模型组比较,阳性药组、中药组大鼠关节炎症状明显减轻。模型组大鼠IL-1β、TNF-α及MMP-3水平均较空白组升高(P0.05),说明造模成功。阳性药组、中药组IL-1β、TNF-α及MMP-3水平均低于模型组(P0.05)。中药组IL-1β高于阳性药组(P0.05)。模型组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数均高于空白组(P0.05)。阳性药组、中药组膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数均低于模型组(P0.05)。阳性药组与中药组膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组膝骨关节滑膜组织中JNK蛋白表达水平上调(P0.05)。中药组膝骨关节滑膜组织中JNK蛋白表达水平低于模型组和阳性药组(P0.05)。结论吴门芪藤汤可能通过抑制JNK信号通路,减少炎症介质释放,降低炎性刺激,从而抑制膝骨关节滑膜、软骨细胞过度凋亡,减轻膝骨关节炎症状。