针药联合对卵巢储备功能不足大鼠卵巢细胞凋亡因子和生殖激素的影响

目的:观察针药结合对卵巢储备功能不足(decreased ovarian reserve,DOR)大鼠卵巢细胞凋亡因子和生殖激素的影响,探讨其作用机理。方法:将72只SD大鼠随机分为对照组、中药组、针刺组、模型组、西药组和针药组,每组12只。除对照组采用等量生理盐水灌胃外,其余五组均采用雷公藤多苷药液灌胃,建立符合实验要求的DOR大鼠模型。针药组、中药组予护卵汤灌胃,针刺组和模型组采用等量生理盐水灌胃,西药组采用克龄蒙药液灌胃,同时对针药组、针刺组进行针刺,以上操作持续16 d。采用ElISA法检测血清雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及抗缪勒氏管激素(Anti-Mullerian Hormone,AMH)水平,PCR检测卵巢组织中细胞凋亡因子Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达。结果:与对照组比较,模型组FSH、LH、Bax、Caspase-3表达明显升高,E2、AMH、Bcl-2明显降低(P 0. 05);与模型组比较,针刺组、中药组、针药组及西药组FSH、Bax、Caspase-3明显降低,E2、AMH、Bcl-2明显升高(P 0. 05)。结论:针刺联合护卵汤可调节性激素和凋亡因子,促进卵泡生长,抑制卵泡闭锁,从而改善卵巢功能。     

育肾助孕方对雷公藤多苷致卵巢储备下降大鼠卵巢形态和性激素的影响

目的观察育肾助孕方对雷公藤多苷致卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织形态和性激素的影响,探讨其作用机制。方法采用雷公藤多苷药液灌胃制作卵巢储备功能下降大鼠模型。48只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及育肾助孕方低、中、高剂量组,育肾助孕方各剂组分别给予低、中、高浓度育肾助孕方药液灌胃,阳性药组给予戊酸雌二醇药液灌胃,模型组和空白组给予等量生理盐水灌胃,2次/d,连续14 d。观察大鼠一般情况,取卵巢称重并计算脏器指数,HE染色观察卵巢组织形态,放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)水平,酶联免疫吸附法检测抑制素B(INHB)、抗苗勒管激素(AMH)水平。结果与空白组比较,模型组卵巢组织萎缩,各级卵泡数目减少,卵巢指数和E2、INHB、AMH水平降低,FSH、LH水平升高(P0.01);与模型组比较,育肾助孕方高剂量组卵巢组织形态明显改善,各级卵泡和黄体增加,闭锁卵泡减少;卵巢指数和E2、INHB、AMH水平升高,FSH、LH水平降低(P0.01),且INHB与AMH具有显著相关性(P0.01)。结论育肾助孕方可调节性激素水平,促进卵泡生长和分泌,抑制卵泡闭锁,从而改善卵巢储备功能。     

七子益肾理冲汤对DOR大鼠卵巢储备的影响

[目的]探讨七子益肾理冲汤对脱氧乙烯基环己烯(VCD)致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠卵巢储备功能的影响。[方法]60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药低、中、高剂量组及脱氢表雄酮(DHEA)组。模型组采用VCD注射制作DOR大鼠模型。观察卵巢指数,HE染色观察卵巢组织形态,放射免疫法检测促卵泡刺激素(FSH)、血清雌二醇(E2)及抗穆勒管激素(AMH)水平。[结果]与空白组比较,模型组卵巢组织萎缩,各级卵泡数目减少,卵巢指数和E2、AMH水平降低,FSH水平升高(P0.05);与模型组比较,中药高剂量组卵巢指数上升,卵巢组织形态明显改善,原始卵泡和黄体增加,闭锁卵泡减少;E2、AMH水平升高,FSH水平降低(P0.05)。[结论]七子益肾理冲汤可修复卵巢储备的损失,促进卵泡生长,抑制卵泡闭锁。     

补肾健脾疏肝法治疗高龄卵巢储备功能低下临床观察

目的:观察补肾健脾疏肝法对高龄卵巢储备功能低下(DOR)患者卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)及抗苗勒氏管激素(AMH)水平的影响。方法:将70例高龄DOR患者按随机数字表法分成中药组和西药组各35例。中药组予补肾健脾疏肝法治疗,西药组予激素替代疗法治疗,2组均治疗6月。观察2组治疗前后FSH、LH、E_2及AMH水平的变化。结果:治疗后,2组FSH、LH及西药组的AMH水平均较治疗前降低(P0.05,P0.01),2组E_2水平均较治疗前升高(P0.05,P0.01);中药组的E_2水平高于西药组(P0.05)。结论:补肾健脾疏肝法能有效降低高龄DOR患者的FSH、LH水平,提高E_2水平及延缓AMH的下降速度。在延缓AMH下降速度方面,效果优于西药组,且无明显不良反应,值得在临床推广。     

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢储备力及其相关因子INHB、AMH表达的影响

目的 研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢储备力及其相关因子INHB、AMH蛋白表达的影响,为临床防治卵巢储备力降低提供理论依据.方法 建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只;另设正常对照组.于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周.实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Western blot法检测各组大鼠卵巢内INHB及AMH蛋白表达水平.结果 ①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P＜0.05),提高E2水平(P＜0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学结果显示治疗组大鼠始基卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少.②与正常组比较,POF大鼠卵巢INHB及AMH蛋白表达水平均明显降低(P＜0.01),而治疗组大鼠卵巢INHB及AMH表达水平较模型组明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 补肾调冲方可明显改善POF大鼠血清高促性素低雌激素状态,促进卵泡发育,抑制卵泡过度闭锁,从而调节卵巢功能,提高卵巢储备力,其机制可能是通过上调卵巢局部因子INHB及AMH的表达而实现的.     

针刺联合护卵汤对雷公藤多甙致卵巢储备功能受损大鼠卵巢形态及雌激素受体表达的影响

目的观察针刺联合护卵汤对雷公藤多甙致卵巢储备功能受损大鼠卵巢形态及雌激素受体表达的影响,研究其作用机理。方法 SPF级4~6月龄SD雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、针刺组、中药组、针药组(针刺加中药)以及西药组。除正常对照组不参与造模外,其余各组大鼠均以雷公藤多甙片50mg/kg灌胃,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。每日9:00时,正常对照组予等量生理盐水灌胃,造模大鼠灌服雷公藤多苷药液;15:00时,中药组、针药组予护卵汤药液灌胃,西药组予克龄蒙药液灌胃,针刺组、模型组和正常对照组予等量生理盐水灌胃,针刺组、针药组灌胃同时予以针刺,连续16d。采用HE染色后观察子宫、卵巢组织形态学变化,免疫组织化学法观察卵巢ER-蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组卵巢指数、子宫指数明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少;卵巢ER-表达明显减少(0.05);各给药组卵巢、子宫指数增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,ER-表达明显增加(0.05,0.01),针药组尤为明显。结论针刺联合护卵汤可能通过上调卵巢ER-蛋白表达,改善卵巢功能。     

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集因子GDF-9、AMH表达的影响

目的:研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢功能的调节,探讨补肾调冲方通过调控卵巢始基卵泡募集因子GDF-9及AMH调节卵巢功能及治疗POF的机制。方法:建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只,另设正常对照组。于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周。实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9及AMH mRNA表达水平。结果:①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P<0.05),提高E2水平(P<0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学检测结果显示治疗组大鼠卵巢体积较POF模型组增大,各级卵泡生长较好,颗粒细胞层次多,黄体数目明显增多;始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少。②与正常组比较,POF大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平均明显降低(P<0.01),而治疗组大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾调冲方治疗POF的作用机制之一可能是通过上调卵巢局部始基卵泡募集因子GDF-9及AMH的表达,促进卵泡的生长发育,抑制卵泡的过度耗竭与闭锁,恢复始基卵泡的正常募集状态,从而抑制卵巢功能的过早衰竭。     

温针结合电针对卵巢早衰大鼠血清性激素及炎症因子的影响

目的观察温针"关元"结合电针"三阴交"对卵巢早衰(POF)模型大鼠血清性激素及炎症因子的影响。方法将动情周期规律SPF级雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和药物组,雷公藤多苷灌胃制备POF模型,并给予相应干预。HE染色观察大鼠卵巢形态,ELISA测定血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)及抗苗勒氏管激素(AMH)的含量,免疫组化检测卵巢组织干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清E_2、AMH含量明显减少,FSH含量明显增加(P0.05,P0.01),卵巢组织IFN-γ蛋白表达显著升高,IL-4蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05);与模型组比较,针刺组、药物组大鼠血清E_2、AMH含量明显增加,FSH含量明显减少(P0.05,P0.01),卵巢组织IFN-γ蛋白表达显著降低,IL-4蛋白表达显著升高(P0.01,P0.05)。结论温针"关元"结合电针"三阴交"可调节POF大鼠血清性激素水平,改善生殖内分泌环境,降低卵巢炎性反应。     

菟丝子总提物对雷公藤多苷POF大鼠模型影响的探讨

目的:探讨菟丝子总提物对雷公藤多苷POF大鼠模型卵巢功能修复作用,为临床治疗POF提供药效学依据,并初步探讨其作用机制。方法:采用雷公藤多苷75mg/(kg·30d)建立POF大鼠模型,共44只,随机分成4组:对照组、模型组、补佳乐组及菟丝子总提物组(TSZ组)。30d造模成功后,TSZ组以菟丝子总提物水溶液、补佳乐组予补佳乐水溶液灌胃;对照组及模型组予同等量纯净水灌胃,日一次,连续30d。灌胃期间每日观察大鼠动情周期的变化;实验结束后选择非动情期大鼠处死,检测血清E2、FSH、LH、AMH以及观察卵泡计数、卵巢病理切片。结果:造模至10d开始除对照组外各组开始出现动情周期紊乱、延长。与模型组,两治疗组E2水平升高,FSH、LH、AMH升高(P0.01或0.05);两治疗组生长卵泡及黄体增多(P0.01或0.05),闭锁卵泡减少(P0.05);两治疗组组间比较无显著性差异(P0.05);治疗组大鼠卵巢镜下各级卵泡较模型组明显增多,可见成熟卵泡,黄体数量增加,可见少量闭锁卵泡,间质未见明显纤维组织增生。结论:菟丝子总提物可显著提高卵巢储备能力,修复卵巢组织损伤。     

不同时机电针对卵巢损伤大鼠卵巢储备功能的影响

目的：基于血清与卵巢组织抗缪勒氏管激素(anti-müllieus hormones, AMH)表达探讨造模前和造模中电针对卵巢损伤大鼠卵巢储备功能的调控作用。方法：经阴道涂片法检测具有规则动情周期的32只SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、模前组、模中组,每组8只,除空白组外的3组以连续15d腹腔注射去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide, VCD)160 mg/kg造模,其中模前组连续进行4周的电针预处理然后进行造模给药,模中组在造模用药的第1天即开始电针处理并连续电针干预4周,2电针组治疗频率均为前2周5次/周,后2周3次/周,模型组无电针干预。在模型组造模成功后,比较各组大鼠卵巢各级卵泡数,检测各组大鼠血清AMH水平以及卵巢组织AMH蛋白和mRNA表达。结果：与空白组比较,模型组原始卵泡、初级卵泡数相对降低,闭锁卵泡数相对增多,卵巢组织AMH蛋白明显降低(均P<0.05),血清AMH和卵巢组织mRNA表达均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,模前组大鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡数相对增加,闭锁卵泡相对减少(均P<0.05)...     

电针预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢保护作用的实验研究

目的:探讨电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢的保护作用和可能机制。方法:将动情周期规律的32只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、捆绑组,每组8只。模型组、电针组和捆绑组采用去氧乙烯基环己烯(VCD)按160 mg/kg体质量连续腹腔注射15 d造模。电针组自造模之日起于"中髎""天枢"穴进行电针预处理,前2周每日1次、5次/周,后2周隔日1次、3次/周。每次20 min,共4周。捆绑组只捆绑固定,时间、频次和总次数同电针组。空白组、模型组不干预。模型组造模成功后处死大鼠,检测各组大鼠性腺湿重和性腺指数;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清性激素抗苗勒激素(AMH)、抑制素B(inhibin B)水平,采用放射免疫分析法检测促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平,并观察卵巢组织形态和卵泡数量,采用蛋白印迹法检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白基因(Bax)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均降低,子宫湿重和子宫指数均降低(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均降低(均P0.01),血清FSH、LH、T升高(均P0.01),E2、P降低(均P0.01);卵巢组织中原始卵泡、初级卵泡相应降低(均P0.01),闭锁卵泡增多(P0.01);Bax蛋白表达明显升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01)。与模型组相比,电针组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均升高,子宫湿重升高(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均升高,血清FSH、LH降低,E2、P升高(P0.05,P0.01);卵巢原始卵泡、初级卵泡相应升高,闭锁卵泡减少(P0.05,P0.01);卵巢组织Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。捆绑组和模型组各指标间比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:4周的电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠的卵巢有一定的保护作用,该保护作用可能是通过上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子Bcl-2蛋白的表达、下调促凋亡因子Bax蛋白的表达来发挥作用的。     

电针“中髎”“天枢”改善早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢功能的实验研究

目的:探讨电针"中髎""天枢"穴对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵巢功能的影响。方法:将动情周期规则的48只SD雌性大鼠分为空白组、模型组、电针组、捆绑组、他莫昔芬组,除空白组8只外,其余各10只。模型组、电针组、捆绑组、他莫昔芬组使用去氧乙烯基环己烯(VCD)造模,160 mg/kg,腹腔注射,连续15 d。空白组在造模期间给予正常饲养。造模成功当天,电针组使用"中髎""天枢"穴进行电针干预(连续波,1~3 Hz,0.1~1 mA),每次20 min,前2周每日1次,每周5次,后2周隔日1次,每周3次;他莫昔芬组使用枸橼酸他莫昔芬(1 mg/kg,每次注射总体积0.3~0.5 mL)皮下注射,前2周每日1次、每周5次,后两周隔日1次,每周3次;捆绑组同电针组捆绑固定;空白组、模型组正常饲养。干预4周后检测各组大鼠性腺湿重和性腺指数,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清抗苗勒激素(AMH)、抑制素B(inhibin B),观察卵巢组织形态、计数原始卵泡、初级卵泡、窦状卵泡和闭锁卵泡数量,检测卵巢组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)m RNA相对表达量。结果:(1)干预后,与空白组比较,模型组、电针组、捆绑组和他莫昔芬组大鼠左、右侧卵巢湿重、卵巢指数、子宫湿重和子宫指数均明显降低(均P0.01),但电针组、捆绑组和他莫昔芬组与模型组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。(2)干预后,与空白组比较,模型组、电针组、捆绑组和他莫昔芬组大鼠血清AMH和inhibin B水平明显降低,血清FSH、LH水平升高,E_2水平降低(均P0.01);与模型组比较,电针组、他莫昔芬组大鼠血清AMH和inhibin B水平明显升高、血清FSH、LH水平明显降低,E_2水平明显升高(均P0.01)。(3)干预后,与空白组比较,模型组、电针组、捆绑组和他莫昔芬组大鼠卵巢颜色暗红苍白,周围散在或不存在颗粒状小体,形态较小,呈萎缩状;原始卵泡明显减少,甚至大部分视野无法看到,初级卵泡结构破坏,排列松散,成熟卵泡较少,闭锁卵泡及间质腺明显增加。与空白组比较,模型组、电针组、捆绑组和他莫昔芬组大鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡数量降低,闭锁卵泡数量增多(P0.05,P0.01),窦状卵泡差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,电针组、他莫昔芬组大鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、窦状卵泡数量差异均无统计学意义(均P0.05),闭锁卵泡数量降低(均P0.01)。(4)干预后,与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织IGF-1 mRNA、IGF-1R mRNA表达升高(均P0.01),捆绑组大鼠卵巢组织IGF-1 mRNA表达升高(P0.05),IGF-1R mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,电针组、捆绑组、他莫昔芬组大鼠卵巢组织IGF-1 mRNA表达差异均无统计学意义(均P0.05),IGF-1R mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论:电针"中髎""天枢"穴对VCD致POI大鼠的卵巢功能有一定的改善作用,该改善作用可能是通过调节卵巢组织中IGF-1R mRNA的表达,进而干预IGF-1/IGF-1R轴来实现的。     

养精种玉汤对卵巢储备功能减退模型大鼠RNA-m6A修饰的影响

目的 观察养精种玉汤对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠RNA-m⁶A修饰的影响,探讨其改善卵巢储备功能的机制。方法 选取60只动情周期正常的SD雌性大鼠,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,将大鼠分为空白组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组和养精种玉汤低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组),每组10只,给药组分别灌胃相应药液,连续2周。HE染色观察卵巢组织形态,ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗米勒管激素(AMH)含量,Western blot、qPCR测定卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白和基因表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织皮质区损伤,颗粒细胞脱落,各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡及黄体数量增加(P<0.05);血清E2、AMH含量减少,FSH、LH含量增加(P<0.05),卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组大鼠卵巢组织损伤明显改善,各级卵泡数量增加,闭锁卵泡及黄体数量减少(P<0.05);血清E2...     

养阴舒肝颗粒对VCD诱导卵巢功能下降大鼠Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨养阴舒肝颗粒对卵巢功能下降模型大鼠卵巢功能及;B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的影响。方法:选取动情周期规则的雌性SD大鼠,取10只作为正常组,其余大鼠均采用160 mg·kg~(-1)去氧乙烯基环己烯(VCD)腹腔注射诱导卵巢功能下降模型,取造模成功的56只大鼠按体质量随机分为模型组,养阴舒肝颗粒低(2.1 g·kg~(-1)),中(4.2 g·kg~(-1)),高剂量组(8.4 g·kg~(-1))和坤泰胶囊组,每组11只(模型组12只)。采用养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊进行灌胃给药,干预治疗4周后进行卵巢称质量,计算各级卵泡的数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清性激素水平卵泡刺激素(FSH),雌二醇(E_2),抗缪勒氏管激素(AMH),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的卵巢质量和卵巢指数下降(P0.01),闭锁卵泡数目增多(P0.01),FSH水平升高(P0.01),E_2和AMH水平下降(P0.05),卵巢组织Bcl-2蛋白的表达减少(P0.01),Bax,Caspase-3蛋白的表达(P0.01);与模型组比较,养阴舒肝颗粒可以增加模型大鼠的双侧卵巢质量(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊可以增加卵巢指数(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒可以减少闭锁卵泡的数目(P0.05);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊均可以降低FSH水平(P0.05),升高E_2和AMH水平(P0.05),增加卵巢组织Bcl-2的表达(P0.01),同时抑制Bax,Caspase-3的表达(P0.01)。结论:养阴舒肝颗粒可以提高卵巢功能下降模型大鼠的卵巢功能,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

针刺对卵巢储备功能减退模型大鼠血清炎性因子及卵巢组织Nrf2/HO-1/NLRP3信号通路的影响

目的探讨针刺对卵巢储备功能减退模型大鼠动情周期的影响及可能作用机制。方法将40只动情周期正常的SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、激素组,每组10只。除空白组外,其余3组大鼠予雷公藤多苷片混悬液按50mg/(kg·d)连续灌胃14天建立卵巢储备功能减退大鼠模型。针刺组在每日雷公藤多苷灌胃1h后进行针刺干预,选取"肾俞""关元""中脘"穴,每次行针10s,共留针10min。同时激素组进行雌激素、孕激素序贯疗法。实验第8天起观察大鼠动情周期,第15天采用HE染色法观察各组大鼠卵巢中卵泡、黄体发育情况;检测大鼠血清激素[包括抗苗勒管激素(AMH)、雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)]及炎性因子[包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素21(IL-21)、白细胞介素10(IL-10)]水平;检测卵巢组织中转录因子核因子E_2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达及Nrf2、HO-1、核苷酸结合寡聚化结构域受体3(NLRP3)mRNA相对表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠的动情周期延长或紊乱,生长卵泡颗粒细胞层减少,黄体萎缩,闭锁卵泡和炎性浸润增多;血清AMH、E_2、IL-10水平降低,FSH、TNF-α、IL-21水平升高,卵巢组织中Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达降低,NLRP3 mRNA升高(P0.01)。与模型组比较,针刺组及激素组生长卵泡颗粒细胞层增多,闭锁卵泡和炎性浸润减少;血清AMH、E_2、IL-10升高,FSH、IL-21下降;卵巢组织中Nrf2、HO-1蛋白和mRNA增高,NLRP3 mRNA降低(P0.05或P0.01)。针刺组和激素组各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论针刺能够恢复卵巢储备功能减退模型大鼠的动情周期,有效调节大鼠性激素水平,可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制NLRP3 mRNA表达,从而抑制炎症反应。     

坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠卵巢GDF-9、Egr-1的影响

目的:观察预防性应用坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠血清性激素FSH、LH、E2、AMH水平的影响以及对卵巢GDF-9(生长分化因子9)、Egr-1(早期生长反应基因)基因及蛋白表达的影响,探讨坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠的治疗作用及作用机制。方法:将60只12周龄SD雌性大鼠随机分为空白组、环磷酰胺模型组(模型组)、坤泰胶囊组(分设高中低剂量)、结合雌激素组。空白组正常喂养;模型组用环磷酰胺腹腔注射法建立卵巢储备功能低下大鼠模型~([1]);各给药组于造模同时分别给予不同剂量的坤泰胶囊及结合雌激素片灌胃。实验期间观察大鼠行为学改变,行阴道涂片观察大鼠动情周期的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清性激素AMH及FSH、LH、E2水平变化;光镜下观察卵巢形态与卵泡数;实时荧光定量(RT-PCR)检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1m RNA表达水平的变化;免疫组化法检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1蛋白表达水平的变化。结果:坤泰胶囊能够降低模型大鼠体内性激素FSH、LH的水平,升高E2及AMH水平,并且能够增加大鼠卵巢中GDF-9、EGR-1蛋白及m RNA表达,修复大鼠受损的卵巢组织结构,改善卵巢血供,减少卵泡闭锁,提高成熟卵泡存在数量,改善大鼠动情周期及行为学变化。结论:预防性应用坤泰胶囊,可有效提升卵巢敏感性,治疗效果与西药结合雌激素片无明显差异。     

针刺对雷公藤所致卵巢功能减退模型小鼠卵巢的影响

目的观察针刺对卵巢功能减退模型小鼠卵巢的保护作用。方法 40只动情周期正常的小鼠随机分为4组,每组10只,分别为空白组、模型组、雌二醇组、针刺组。除空白组每日灌胃等体积生理盐水外,其余3组每日予50mg/kg雷公藤多苷片混悬液灌胃;针刺组每日予双侧"肾俞","关元"及"中脘"穴隔日一次轮流交替针刺,每5min行针10s,共留针10min。其余3组给予同步抓取。雌二醇组另予0.2mg/kg戊酸雌二醇片混悬液灌胃。连续干预14天。结果与空白组相比,模型组卵巢指数明显下降(P0.01),血清E_2下降,FSH、LH上升(P0.01);与模型组相比,针刺组和雌二醇组卵巢指数上升(P0.01),血清E_2上升,FSH、LH下降(P0.01)。HE染色见模型组卵泡及黄体减少,闭锁卵泡增多;针刺组及雌二醇组黄体、卵泡数量增多,闭锁卵泡数量减少。电镜下模型组颗粒细胞排列分散,细胞器损坏,脂滴减少;针刺组及雌二醇组细胞器损坏减少,颗粒细胞排列紧密,细胞器损坏较少,脂滴丰富。结论针刺可以保护雷公藤所致卵巢功能减退。     

“秩边透水道”针法对早发性卵巢功能不全大鼠HPO轴和Bcl-2、Bax蛋白的影响研究

摘要：目的 探讨“秩边透水道”针法对早发性卵巢功能不全大鼠模型的作用机制研究。方法 筛选60只雌性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、秩边组（“秩边透水道”）、普针组（“关元”、“三阴交”、“肾俞”）和西药组（戊酸雌二醇片）,每组12只。除空白组, 其余组连续15日腹腔注射环磷酰胺建立早发性卵巢功能不全大鼠模型。普针组和秩边组分别行隔日针刺,西药组采用戊酸雌二醇灌胃,每天1次,均治疗1个月。治疗结束,采用苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理变化;酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）水平;免疫印迹法（Western blotting）检测卵巢组织中Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 ① 空白组卵巢组织结构清晰,含有数量丰富的生长卵泡;模型组生长卵泡几不可见,闭锁卵泡数量明显增多;干预组闭锁卵泡数量减少,生长卵泡的数量均有所增加。 ②与空白组相比,模型组FSH、LH水平明显升高（P<0.01）,E2水平显著降低（P<0.01）;与模型组相比,干预组FSH、LH水平明显降低（P<0.01）,E2水平显著升高（P<0.01）;与秩边组相比,普针组FSH水平明显升高（P<0.01）,E2水平明显降低（P<0.01）,LH水平无显著性差异（P>0.05）,西药组FSH、LH、E2水平无显著性差异（均P>0.05）。③较空白组,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax蛋白水平明显增加（P<0.01）,Bcl-2/Bax值明显下降（P<0.01）;较模型组,秩边和西药组Bcl-2水平明显增加（P<0.01）,普针组Bcl-2水平无显著性差异（P>0.05）,秩边、普针、西药组Bax水平均降低（P<0.05）,以及Bcl-2/Bax值均显著升高（P<0.01）;较秩边组,普针组Bcl-2水平明显降低（P<0.01）,Bax水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2/Bax值显著降低（P<0.01）,西药组Bcl-2、Bax水平,Bcl-2/Bax值均无显著性差异（P>0.05）。 结论 “秩边透水道” 针法通过降低大鼠血清中FSH、LH水平,增加E2水平,纠正紊乱的下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO）,上调Bcl-2蛋白以及下调Bax蛋白水平,延缓细胞凋亡速度,减少闭锁卵泡数量,改善POI大鼠的卵巢功能,效果优于普针组,和西药组相当。     

补肾健脾方对卵巢早衰大鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能的影响

目的观察补肾健脾方对卵巢早衰(POF)大鼠下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)功能的影响机制。方法筛选具有正常动情周期的雌性SD大鼠34只,按随机数字表法分为正常组10只和造模组24只,正常组不予处理,造模组采用环磷酰胺法成功建立POF大鼠模型19只。将造模组随机分为模型组10只和补肾健脾组9只。补肾健脾组予补肾健脾方10 mL/(kg·d)灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,共4周。监测3组大鼠动情周期变化,计算体质量增量及卵巢指数,观察卵巢组织形态变化,检测促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)、抗苗勒管激素(AMH)水平以及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组体质量增量、卵巢指数、Akt和mTOR mRNA表达量下降(P均0.05),血清FSH、GnRH水平显著提高(P均0.05),E_2、AMH水平显著降低(P均0.01),动情周期延长、紊乱,卵巢组织病理显示闭锁卵泡数量增多,生长卵泡数量少,未见成熟卵泡;与模型组比较,补肾健脾组体质量增量升高不明显(P0.05),卵巢指数、Akt和mTOR mRNA表达量增加(P均0.05),血清FSH、GnRH水平显著下降(P均0.05),E_2、AMH水平显著升高(P均0.01),动情周期缩短、趋向规律,卵巢组织病理可见少量闭锁卵泡,生长卵泡与成熟卵泡数量增加,且卵泡液含量增多。结论补肾健脾方能在一定程度上促进卵泡发育并排卵,提高卵巢储备功能,其机制可能与上调PI3K/Akt/mTOR信号通路中的Akt、mTOR mRNA分子表达从而调控下丘脑-垂体-性腺轴功能,影响激素分泌有关。     

针药结合对癫痫大鼠PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨针灸结合中药对癫痫大鼠PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将100只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、针药组、中药组和西药组5组。空白组、模型组均采用灌服等体积生理盐水;西药组:丙戊酸钠连续灌胃治疗;中药组:祛痰活血方灌胃治疗;针药组:在中药组的基础上,选用百会、神门针刺治疗。结果:行为学结果:与模型组比较,西药组、针药组、中药组大鼠的逃避时间均缩短(P0.05或0.01),跨越次数均增加(P0.05或0.01);与西药组比较,针药组逃避时间、跨越次数均无差异,中药组逃避时间、跨越次数均有统计学意义(P0.05)。PI3K-P85蛋白表达结果:与模型组相比,中药组和针药组均具有统计学意义(P0.05),西药组具有显著意义(P0.01);与针药组相比,西药组具有统计学意义(P0.05)。AKT蛋白表达结果:与模型组相比,中药组和针药组均具有统计学意义(P0.05),西药组具有显著意义(P0.01);与针药组相比,西药组具有统计学意义(P0.05)。结论:针灸结合中药可激活PI3K/AKT信号通路,抑制海马神经细胞的凋亡。