人热休克蛋白70D的基因克隆、表达及蛋白纯化

目的：研究热休克蛋白70D(heat shock protein 70D，HSP70D)的基因克隆、重组表达及纯化。方法：采用RT-PCR方法从HeLa细胞中克隆HSP70D全长编码区cDNA序列，构建原核表达载体pET24a（ ）-HSP70D，经过DNA序列测定证实共序列正确。完成基因工程人HSP70D的高表达工程菌的筛选后，对其发酵、蛋白表达条件及重组蛋白的纯化条件进行优化。结果：重组表达载体经序列测定及酶切鉴定与理论推测结果相符，高表达工程菌经优化表达条件后rhHSP70D的表达量可占菌体总蛋白的20％以上。经过低浓度乙醇沉淀、DEAE阴离子交换、疏水柱层及S200凝胶过滤柱后，获得了纯度大于95％的rhHSP70D。结论：本研究为进一步开展以HSP70D为基础的肿瘤免疫治疗研究提供了实验基础。     

人肾癌组织中热休克蛋白70的纯化与鉴定分析

目的探讨人肾癌组织中热休克蛋白70纯化的有效方法，并进行鉴定分析。方法应用两次亲和层析和离子交换层析获得目的蛋白，经电泳和Western-blot定性分析，应用改良的Bradford法定量分析。结果经过二次亲和层析和Mono Q柱的分离后，得到纯度较高的分子量约为70kDa的蛋白质，经免疫印迹分析证实该蛋白质即为HSP70。与其他方法相比HSP70的纯度更高，获得率接近。结论该文所述方法是一种简单有效的纯化肿瘤组织中HSP70的方法。     

内毒素血症时老年大鼠肝脏氧自由基代谢及热休克蛋白70的表达

目的探讨内毒素血症时老年大鼠肝脏功能、自由基代谢的变化以及热休克蛋白70（HSP70）的表达。方法39只SD大鼠分成四组：老年对照组（n=7）、青年对照组（n=12）、老年内毒素组（n=8）、青年内毒素组（n=12）。采用尾静脉注射LPS（3mg／kg体重）制造内毒素模型,4h后取血及肝脏。检测肝功能（ALT、AST、DBIL、IBIL）,血清及肝匀浆MDA,SOD水平,免疫组化测定肝脏HSP70表达。结果老年内毒素组较其对照组及青年内毒素组血清ALT及AST明显升高（P〈0．05）,血浆及肝匀浆MDA也均明显升高,SOD则明显下降（P〈0．05）。肝脏HSP70表达老年对照组较青年对照组、老年内毒素组较青年内毒素组均明显增强（P〈0．05）。结论内毒素血症时,老年大鼠存在更加严重的氧化／抗氧化比例失调,是老年组肝脏损伤明显的重要原因。老年内毒素组肝细胞的HSP70表达明显增强可能与其肝细胞内蛋白变性严重、存在更加强烈的氧化应激有关。     

小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的　探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法　采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果　获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论　采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。     

人热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的原核表达载体,诱导其表达并纯化.方法:应用PCR技术从人胆管癌组织中扩增出HSP 70基因片段,经T-A克隆连接到末端经平滑处理后的pMD18-T Simple质粒并测序.利用双酶切技术构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-HSP 70,并转化大肠杆菌JM 109,经IPTG诱导后表达得到HSP70融合蛋白.应用Glutathione-Sepharose4B亲和层析柱提纯融合蛋白,用生物素化凝血酶分离并纯化目的蛋白,最后行Wsetern blot鉴定.结果:PCR扩增结果与预计目的基因大小一致;序列分析与GeneBank中收录完全一致;重组表达载体pGEX-4T-1-HSP 70构建成功;Western blot结果显示目的蛋白可以与兔抗人的HSP70单克隆抗体特异性结合.结论:HSP 70编码序列已经成功克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,并在大肠杆菌JM 109中获得表达.     

热休克蛋白70与肿瘤免疫

近年热休克蛋白70(HSP70)在免疫中的作用日益受到重视。HSP70在肿瘤免疫中充当了多重角色,一方面作为“分子伴侣”参与肿瘤细胞的功能代谢,保护肿瘤细胞免受有害因素的损害;另一方面肿瘤细胞与机体正常细胞生长、代谢、分化的异质性,使HSP70成为与其相结合的肿瘤抗原多肽的靶载体,在参与肿瘤抗原的免疫反应中充当了举足轻重的角色。     

热休克蛋白70和热休克蛋白27在宫颈鳞癌中的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)和热休克蛋白27(HSP27)在宫颈鳞癌中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测HSP70、HSP27在60例宫颈鳞癌,18例宫颈上皮内瘤变(C IN),7例正常宫颈组织中的表达。结果宫颈鳞癌组织中HSP70,HSP27阳性表达率与正常宫颈组织相比差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌中HSP70的阳性表达与病理分级、临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05),HSP27的阳性表达与病理分级密切相关(P<0.05);HSP70与HSP27在宫颈鳞癌中的表达无相关关系(P>0.05)。结论HSP70、HSP27均在宫颈鳞癌发生和发展中起重要作用,HSP70可能作为判断宫颈癌预后的重要指标。     

热休克蛋白70与脑缺血

随着分子生物学研究手段的应用 ,人们已逐渐认识到在脑中存在着完善的适应机制 ,通过迅速诱导基因表达和蛋白质合成来阻止导致脑细胞死亡的病理生理变化。众多的研究表明脑缺血可诱导许多基因的表达 ,其中大多数参与脑的自我修复 [1 ]。热休克蛋白 (HSP)是机体在遭受各种应激刺激后诱导产生的一种应激蛋白 ,对细胞具有保护作用 ,与缺血型脑损伤等多种神经系统疾患关系密切。其中热休克蛋白 70(heat shock protein70 ,HSP70 )作为脑缺血所诱导的一种神经元保护性物质可阻止蛋白质在压力下发生聚集或错误折叠而日益受到医学界的广泛关注 ,…     

热休克蛋白70心肌保护研究进展

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是所有原核细胞和真核细胞在高温或应激情况下由热休克基因编码产生的一组序列高度保守的细胞蛋白,又称应激蛋白。参与细胞的损伤与修复。因R itossa[1]首先从果蝇在热应激环境中诱导合成而命名,随后的研究发现除高温外,缺血、低氧、重金属盐及大多数病理状态下都能诱导细胞产生HSP。根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子量HSP等几个家族,每个家族又有多个成员。HSP70是HSP中最保守、最主要、含量最丰富的一类。近年来国内外许多学者一直在探索HSP70的特性及…     

热休克蛋白70与心肌保护

热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）,也称应激蛋白,是生物体或离体培养细胞在应激状态下产生的一类内源性保护蛋白,因Ritossall^[1]首先从果蝇在热应激环境中诱导合成而命名。     

重组人热休克蛋白70D的免疫佐剂样效应研究

目的：研究重组人热休克蛋白70D(rhHSP70D)蛋白的免疫佐剂样效应。方法：用rhHSP70D诱导体外培养的树突状细胞（DC），观察DC分泌前炎性细胞因子的水平、DC成熟及刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力；用rhHSP70D与OVA257-264体外交联的蛋白免疫C57BL/6小鼠，观察能否诱导产生抗原特异性免疫保护作用。结果：rhHSP70D可以明显刺激DC分泌IL-1β、IL-12p70、TNF-α等细胞因子，可以促进DC表达HLA-DR、CD86、CD40等膜分子，增强DC诱导同种异体T淋巴细胞增殖的能力；rhHSP70D-OVA257-264交联蛋白可诱导小鼠产生具有明显抗原特异性的免疫保护作用，而rhHSP70D或OVA257-264单独免疫小鼠均不能产生这种保护作用。结论：rhHSP70D能通过促进DC成熟、刺激前炎性细胞因子的分泌增强DC的免疫激发功能，rhHSP70D-抗原肽复合物免疫能够诱导产生抗原特异性的免疫保护作用，提示rhHSP70D有望作为一种新的佐剂应用于抗肿瘤及抗感染免疫治疗。     

重组人热休克蛋白70生物活性的快速鉴定

目的　快速鉴定纯化后的重组人热休克蛋白 70 (rHSP70 )的特异性及其是否具有生物活性。方法　将rHSP70与肿瘤细胞内的小分子多肽在一定条件下温育 ,并利用含 5 %甘油的Nativepage电泳分析。 结果　可快速鉴定出rHSP70是否具有生物活性 ,电泳后凝胶可做Western -blot特异性鉴定。结论　该法操作简便 ,重复性好 ,既可快速鉴定rhsp70的生物活性 ,又可特异性鉴定rhsp70自身     

HSP-70与细胞保护的研究进展

热休克蛋白70（HSP-70）是生物体产生的一种有高度保守性的应激蛋白,可以增强细胞对损害的耐受程度,维持细胞的正常代谢功能,提高细胞的生存率。在中枢神经系统、心肌、肝脏、肺等组织器官损伤中具有保护作用。     

HSP70在内毒素休克大鼠胰腺的表达及其意义

目的:观察内毒素休克大鼠胰腺的病理改变及HSP70的表达情况.方法:33只健康Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素小刑量组(5 mg/kg)及大剂量组(10 mg/kg),于处理后1 h及处死时采血测血糖及血清淀粉酶,处死后取胰腺免疫组化法测定HSP70及INs的表达.结果:内毒素休克大鼠血糖及血清淀粉酶正常(P＞0.05);胰腺组织HSP70表达增强,处理组与对照组比较强阳性表达率明显增高(P＜0.01);小剂量组的强阳性率又较大剂量组显著增强(P＜0.01).3组的Ins表达率无显著差异(P＞0.05).结论:内毒素可诱导胰腺HSP70的表达增强,从而使胰腺产生内毒素耐受.     

强脉冲光对皮肤热休克蛋白70表达的影响

目的 观察强脉冲光对皮肤热休克蛋白70表达的影响,探讨光子嫩肤的分子生物学机制。方法 选择15只SD大鼠,每只选3个部位用强脉冲光照射,采用同一照射参数,能量密度34J/cm²,分为3个脉冲,脉宽各为4、5、6ms,脉冲延时为20及25ms。照射后第1、3、5、7、15、30天分别于治疗及非治疗部位切取皮肤样本,免疫组化染色,观察。结果 照射部位第1天皮肤表皮、皮脂腺细胞、毛细血管内皮细胞均呈阳性染色,第7天达高峰,第15天染色渐弱,第30天染色基本消失,非治疗部位染色阴性。结论 强脉冲光照射皮肤后可引起热休克蛋白70表达的增加,提示热休克蛋白70在光子嫩肤过程中起一定作用。     

次声作用后大鼠脑中热休克蛋白70的表达和分布

观察次声作用后大鼠脑中热休克蛋白ＨＳＰ７０的表达和分布。方法：ＳＤ大鼠接受频率为８Ｈｚ和１６Ｈｚ,声压为９０ｄＢ和１２０ｄＢ次分别作用１,３,７,１４,２１ｄ后,采用免疫组织化学方法观察大鼠脑中ＨＳＰ７０的表达和分布。结果：各参数次声作一定时间后,ＨＳＰ７０阳性神经元主要布在下丘脑,边缘系统,听觉中枢,皮质,海马等脑区,各脑区出现阳性反应的时间不同,且随次声频率增高、声压增强及作用次数增加,ＨＳＰ     

慢性萎缩性胃炎热休克蛋白70(HSP70)表达的相关研究

目的 探讨热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSF70)在人胃粘膜组织中的表达.方法 采用免疫组化SABC方法检测HSP70在浅表性炎、慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃窦腺癌组织中的表达.结果 HSP70在浅表性炙、慢性萎缩性胃炎伴高级别上皮内瘤变(CAG和H-IN)、胃癌组织中的阳性率分别为27%、49%、67%,过表达率分别为3%、37%、58%,细胞核内阳性过表达率分别为0%、14%、55%.结论 HSP70在胃癌、CAG和H-IN中过度表达,可能在其致病过程中起着重要的作用,进一步研究其分子机制将为胃癌的防治提供理论依据.