Duchenne型肌营养不良症(DMD)基因诊断研究——地高辛配基标记探针进行DMD产前基因诊断

Duchenne型肌营养不良症（DMD）是最常见的性连锁隐性遗传病，患儿常5岁发病，20岁夭折目前防治本病的最有效的手段是进行遗传咨询携带者检测，产前基因诊断。以往进行基因诊断，常采用同位素标记方法，同位素的安全防护来源标记效率等便基因检测技术不能广泛开展。     

DMD／BMD基因诊断的新体系—Amp—FLP单体型连锁分析

应用同位素掺入的多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因内含子44、45、49、50中的CA重复序列,在聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影检测扩增产物。中国人在这4个位点均具有长度多态性:各位点等位片段数目分别为9、7、11、4,多态性信息含量(PIC)分别为0.872、0.772、0.870、0.710。应用这4个位点及先前报道的5‘CA及3‘CA进行了非缺失型DMD家系的单体型连锁分析及产前基因诊断,并用此方法检出了1例缺失。由此建立了以PCR为基础的DMD/BMD基因诊断新体系—Amp-FLP(扩增片段长度多态性连锁分析),此方法简便快速、灵敏高效,使缺失型与非缺失型DMD/BMD的基因诊断连贯性一次完成,有效地提高了DMD/BMD基因诊断的效率和成功率。     

用银染Amp-FLP和多重PCR进行DMD和性连锁鱼鳞病的快速基因诊断

假性肥大型肌营养不良(Duchennemuscular dystrophy,DMD)是一种性连锁隐性遗传病,发病率约为出生男婴的1/3500,患者通常在20岁前死亡.DMD的病因是位于Xp21上编码dystrophin的基因发生突变。其突变方式中,基因缺失约占60%,其余为非缺失型。由于目前对DMD尚无有效的治疗方法,因而,通过产前基因诊断防止患儿出生具有重要意义。     

甲型血友病基因诊断的新方法(简报)

甲型血友病是最常见的遗传性出血性疾病之一。本病由凝血因子Ⅷ缺陷所致,为X连锁隐性遗传病,目前尚无满意的治疗方法。随着分子克隆技术的进展,现已发现Ⅷ因子基因内DNA序列中具有限制性内切酶BclI.BgJI和XbaI多态性,并已用于携带者的检测和产前基因诊断。最近发展起来的聚合酶链反应(PCR)技术利用一对与特定DNA区段两侧互补的寡核苷酸引物,体外进行DNA合成,经反复的DNA变性、引物退火和DNA合成,待测DNA序列的数目可扩增几十万倍。     

LD-PCR直接基因诊断重型血友病A的研究

目的：检测凝血因子VⅢ基因倒位，提高对重型血友病A患者及其携带者的诊断水平。方法：根据患者的出血症状及遗传史，采用国际通用的一期法检测患者血浆凝因因子VⅢ活性（FVⅢ：C），ELISA法检测血浆vWF:Ag浓度，确诊血友病A及其携带者，对38例重型HA患者及其母亲或姨母，采用长距离DNA扩增（LD－PCR）技术检测是否存在凝血因子VⅢ（FVⅢ）基因倒位，进行直接基因诊断。结果：38例无亲缘关系的重型血友病A患者中，发现15例患者（或家系）有FVⅢ基因倒位，占重型患者的41％；该15例家系中查出基因倒位携带者5名，结论：利用LD－PCR检测FVⅢ基因倒位技术可以准确，简便而快速地直接进行重型血友病A的基因诊断和携带者检测。     

DMD／BMD基因诊断研究 Ⅱ．Dystrophin基因中央突变热区缺失和重复分析

应用ｃＤＭＤ５ｂ－７，８，９，１０ＤｙｓｔｒｏｐｈｉｎｃＤＮＡ探针，对１１０例ＤＭＤ／ＢＭＤ无关个体进行核酸杂交分析，发现５３例存在不同程度的分子缺失，２例重复突变，且多发生于ｃＤＭＤ８所探测位置。为准确、快速地进行基因诊断和产前基因诊断提供了基础。     

DMD／BMD基因诊断研究：II.Dystrophin基因中央突变热区缺失和重…

应用ｃＤＭＤ５ｂ－７，８，９，１０Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ ｃＤＮＡ探针，对１１０例ＤＭＤ／ＢＭＤ无关个体进行核酸杂交分析，发现５３例存在不同程度的分子缺失，２例重复突变，且多发生于ｃＤＭＤ８所探测位量。为准确、快速地进行基因诊断和产前基因诊断提供了基础。     

甲型血友病产前诊断——应用DNA聚合酶链反应(PCR)进行家系RFLP连锁分析

应用PCR技术分析了7个甲型血友病家系,对其中4例做了产前基因诊断。基因诊断的方法选择应是:首先采用PCR法扩增所需的特异DNA片段,随之用Bcll的RFLPs分析;对BclI不能诊断的标本进一步用XbaI的RFLPs分析;对XbaI不能诊断的标本进行其他DNA探针的Southern印迹杂交分析,诊断率可达85％。     

中国人凝血因子Ⅷ基因多态性和血友病A的产前诊断

本文应用克隆化的凝血因子Ⅷ(下称FⅧ)基因cDNA及其旁侧的DNA片段作为探针,分析了123名中国正常人和22例血友病A患者的FⅧ基因及其旁侧的多态性位点Bcl Ⅰ/18e,Xbal/221,MspI/St14和BgI I/DX13。获得了中国人上述4个位点的RFLP资料,并应用RFLP连锁分析对2例血友病A高危妊娠进行了产前诊断。     

溶酶体贮积症的产前诊断(简报)

溶酶体贮积症是一组遗传性疾病,是由于基因突变导致溶酶体的有关酸性水解酶缺陷,以致其天然底物在溶酶体中贮积而造成的。其中绝大多数为常染色体隐性遗传。此组疾病无有效的治疗方法,因此对高危的孕妇进行产前诊断,是防止患儿出生的唯一有效措施,现将我们产前诊断成功的两例报导如下。     

儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断(附10例报告)

目的:建立儿童型脊髓性肌萎缩症(SMA)的特异性基因诊断平台。方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术,对10例临床诊断为SMA的患儿及15例正常个体的运动神经元存活(SMN)基因第7、第8号外显子进行检测。结果:10例SMA患儿的SMN基因第7、第8外显子全部缺失,而15例正常个体均无SMN基因第7、第8外显子的缺失。结论:应用PCR-RFLP技术对儿童型脊髓性肌萎缩症患儿进行基因诊断具有高度的敏感性和特异性,可作为SMA的诊断方法。     

X-连锁进行性肌营养不良症(附Becker型肌营养不良一家系基因诊断)

目的 应用分子遗传学方法对患者在基因水平上作出诊断。方法 应用dystrophin cDNA 14kb探针（包括6个亚探针1－2a,2b-3,4-5a,5b-7,8,9-14)与1名18岁的临床表现温和肌营养不良患者及2例对照者[1例正常25岁男性及1例12岁DMD（Duchenne muscular dystrophy)患者]的基因组DNA／HindⅢ片段进行Southern印记分析。结果 患者在亚探针5b-7杂交中,发现其1.5kb,0.5kb杂交带缺失,在与亚探针8杂交中,发现10．0kb杂交带缺失。DMD对照者在与5b-7杂交中,发现0．5kb杂交带缺失。正常对照者在与全部探针杂交中,未发现杂交带缺失。结论 这三个Hd片段分别含有基因的45,46,47号外显子,证明患者缺失了45,46,47号外显子,故诊断该患者为Becker型肌营养不良,从而为该家系的遗传咨询获得了可靠的资料。     

遗传性疾病的产前诊断(四)——X连锁和其他指征

X连镇隐性疾病某些先天性代谢缺陷X连锁隐性疾病可用生化技术进行产前诊断(见前篇和表3.1)。不能用培养羊水细胞作产前诊断的X连锁隐性疾病(例如Duchenne肌萎缩和血友病),父母可考虑作胎儿染色体检查,断定胎儿的性别,中止男性胎儿的妊娠,以防止病儿的出生。因为当母亲是一个携带者时,其男性胎儿罹病的危险性是50％,女性胎儿不罹病,但是女性胎儿有50％为隐性携带者。母亲是携带者,所生的为携带者的女孩将来也像她的母亲那样以同样的方式传递疾病。有此种情况而想建立家庭的夫妇发现晚期中止男性胎儿妊娠是一种严重的精神负担。表4.1列举了一些可作为胎儿性别指征的X连锁隐性疾病。Duchenne肌萎缩和血友病在实践中,是这种胎儿性别指征最常见的例子。     

药物性血小板减少症引起致死性隐性肺出血(译文)

药物性血小板减少症并非少见,而引起致死性隐性肺出血则属罕见。作者遇到一例。女性71岁,因肩痛服羟保泰松100mg发生上下肢弥漫性瘀斑入院。既往曾服该药2年余。体检:血压180/100mmHg,脉博96次/分,右第肋二间Ⅲ°SM,肺部(一),眼底     

杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断

目的 对杜氏肌营养不良症(ducherule muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantafton genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生.方法 针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精一胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法 .再对在该中心进行超排和体外授精一胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果 选择健康的优质的胚胎移植入子宫.结果 携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28).分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠.病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植.结论 该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD惠儿出生的目的 .     

超声评估血友病A性膝关节和踝关节病的临床研究

目的 观察血友病A性膝关节和踝关节病的超声特征及临床意义。 方法 2015年1月—2016年6月在浙江中医药大学附属第一医院就诊的28例血友病A患者的55个膝关节和55个踝关节行超声探查并评分,分析血友病A患者关节滑膜增厚超声评分与软骨改变超声评分的相关性,以及膝关节超声评分与踝关节超声评分的相关性。 结果 全部28例患者均为男性,中位年龄33.4(669)岁。膝关节超声评分与踝关节平均超声评分分别为5.16±0.67和3.87±0.57,差异有统计学意义(P<0.01),且膝关节和踝关节骨侵蚀发生率差异存在统计学意义(P<0.05)。轻型与中间型、重型血友病A患者关节超声评分差异存在统计学意义(P<0.01),但中间型和重型血友病A患者关节超声评分差异无统计学意义(P=0.134)。<18岁和≥18岁年龄组关节超声评分别为3.50±1.00、4.87±0.482,差异无统计学意义(P=0.169)。膝关节超声评分与踝关节超声评分有一定正相关性,差异有统计学意义(r=0.479,P<0.01);滑膜厚度超声评分与软骨改变超声评分存在显著正相关性,差异有统计学意义(r=0.728,P<0.01)。 结论 超声可有效识别血友病A性膝关节和踝关节病病变,是评估血友病A性膝关节和踝关节病简便易行、安全有效、快捷低廉的检测手段,具有较强的临床实用价值。      

钩端螺旋体CPL5x、BMD－3A、BMD－10基因转录表达的初步研究

经氯化锂—脲提取ＲＮＡ的方法提取钩端螺旋体（钧体）赖型０１７株的总ＲＮＡ，用生物素标记的钩体保护基因ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、问号钩体种特异性基因ＣＰＬ５ｘ及赖型钩体０１７株总ＤＮＡ作为探针，分别与所提取的总ＲＮＡ进行斑点杂交。结果显示：以上探针均出现了不同强弱的杂交信号，证明了ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、ＣＰＬ５ｘ三个特异性基因片段在０１７株钩体中得到了转录表达，提示其可能分别在钩体免疫保护及钩体种特异性鉴定中具有重要作用。     

囊性纤维化疾病的产前诊断 (一)羊水酶活性分析

根据胎儿消化道上皮分泌的酶可经肠道排入羊水,利用简便、易行的酶分析法对35例正常妊娠羊水的胎儿肠绒毛上皮细胞酶:AKP、GGT进行测定。(初步确定了不同妊期入羊水AKP、GGT进行测定。初步确定了不同妊期人羊水AKP、GGT活性的正常参考值。AKP、GGT活性分别为:25.8±9.3、402±58.3(16～26周),30.7±10.8、441士70.2(26～36周),37.5±11.2、437士72.3(36周以上)。为进一步开展囊性纤维化病变的产前诊断奠定了基础。     

胎儿性别的产前诊断(滋养叶细胞性染色质的检查)

胎儿性别的产前诊断是现代临床医学预防性连锁遗传病的有效措施之一。目前可用于胎儿性别预测的方法颇多,我们选用了滋养叶细胞性染色质检查作为胎儿性别产前诊断的方法,获得了较为满意的结果。材料来源和方法 1977年8月起利用中期引产的胎盘滋养叶细胞作为观察性染色质的检材,并与娩出胎儿尸检性腺性别作对照,共60例。1977年12月起对早孕要求人工流产者,术前先吸取