特布他林对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠钾泵及钠通道的影响

目的 探讨特布他林对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠水转运通道的影响.方法 将常规培养的A549细胞分为海水处理(SG)组、特布他林(20 μmol/L孵育6h)处理(TG)组和阴性对照(NG)组.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵α1亚单位(Na+/K+-adenosine triphosphatase-α1,NKA-α1)、钠通道α亚单位(epithelail sodium channds-α,α-ENaC)的表达,水解比色法检测Na+-K+-ATP酶(Na-/K+-exchanging ATPase,NKA)活性.结果 MTT法及流式细胞仪检测结果均显示,特布他林处理对海水孵育后细胞的存活率无影响.NG组的NKA-α1和α-ENaC蛋白表达显著高于SG组(P＜0.01)和TG组(t=3.71,3.78,P＜0.01),TG组显著高于SG组(t=2.58,2.64;P＜0.05).与NG组NKA酶活性[(31.298±5.779)μmol/(mg·h)]比较,SG组[(14.211±3.885)μmol/(mg·h)]和TG组[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]明显降低(t=2.54,2.71;P＜0.05);TG组的NKA酶活性[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]较SG组升高(t=2.51,P＜0.05).结论 特布他林不影响人肺泡上皮细胞存活,并且可以抑制海水浸泡引起的α-ENaC、NKA-α1含量及NKA活性的下降.     

不同剂量地塞米松对海水淹溺型急性肺损伤的治疗作用观察

目的 通过比较不同剂量地塞米松对海水淹溺型急性肺损伤(SWD-ALI)的治疗作用,探讨地塞米松的应用价值并选择理想的治疗剂量.方法 健康成年新西兰兔28只,用随机数字表法均分为4组:S组(制作SWD-ALI模型后不做任何处理)及DO.5组、D1组、D5组(制作SWD-ALI模型后,分别经耳缘静脉注入地塞米松磷酸钠0.5、1.0、5.0mg/kg).分别观察各组灌注前、灌注即刻(Omin)及灌注后30、60、120、180min时的呼吸频率、动脉血气及部分时间点血清TNF-a水平,于实验终点测定血清总蛋白含量,并进行肺组织病理学检查,测定肺湿/干重比、肺微血管通透指数.结果 海水灌注后各组动物均出现呼吸频数,D5组出现四肢阵挛;与s组比较,各地塞米松治疗组PaO2、PaCO2及BE均轻度改善,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及中性粒细胞比例均明显减少(P＜0.01),肺组织湿/干重比、肺微血管通透指数、肺组织病理评分及TNF-a表达水平均显著减低(P均＜0.01),除TNF-a水平下降以D5组为著外,其余各项指标改变均以D0.5组最为显著.结论 地塞米松治疗可有效改善低氧血症,减轻肺水肿和肺损伤程度,降低肺微血管通透性,减轻炎症反应,并且以小剂量使用更为安全有效.     

海水浸泡对失血性休克大鼠心肌和肝细胞线粒体功能的影响

目的：研究海水浸泡对失血性休克大鼠心肌和肝细胞线粒体功能的影响。方法：采用雄性Wistar大鼠24只,分为正常对照组,平原休克组和海水休克组,每组8只。测定血液动力学及心肌和肝细胞线粒H^ -ATP酶、琥珀酸脱氢酶（SDH）,Ca^2 -Mg^2 -ATP酶,质子转运及线粒体总钙的变化。结果：海水浸泡失血性休克大鼠血液动力学,心肌和肝细胞线粒体H^ -ATP酶,SDH,Ca^2 -Mg^2 -ATP酶活性均显著低于正常对照组和平原休克组,线粒体总钙含量显著高于平均体克组,海水浸泡失血性休克亚线粒体质子跨膜转运能力与平原休克组比较,差异无显著性意义。结论：海水浸泡失血性休克大鼠心肌和肝细胞线粒体酶活性显著下降,线粒体钙含量升高,伤情显著加重。     

不同潮气量通气对海水淹溺致急性肺损伤的炎症抑制作用

目的 观察在治疗海水淹溺所致急性肺损伤时不同潮气量通气对肺炎症的抑制作用.方法 新西兰兔35只,气管内缓慢灌入2ml/kg海水制备海水淹溺致急性肺损伤(SWD-ALI)动物模型.然后随机分为5组(n=7):WD-ALI动物模型组(对照组)及6、8、10、12ml/kg潮气量机械通气组(吸呼比1;2,吸入氧浓度40%,呼气末正压为O,连续通气3h).实验后测定血清及肺泡灌洗液肿瘤坏死因子a(TNF-a)、白介素6(IL-6)水平,并进行肺组织学检查,以评价治疗效果.结果 6ml/kg潮气量机械通气治疗后肺泡灌洗液TNF-a(1.58+0.56 pg/ml)与对照组(1.73±0.81pg/ml)相比明显降低(P＜0.05),余各组机械通气治疗后血清及肺泡灌洗液TNF-a、IL-6水平与对照组比较无明显差异(P>0.05).机械通气后,与对照组相比,各组肺干湿重比均明显增加(P＜0.05),炎细胞浸润均明显好转(P＜0.05).6～8ml/kg潮气量机械通气治疗后肺泡隔断裂无增加,但肺泡萎陷、局灶性肺不张、肺水肿亦无明显好转(P>0.05).12ml/kg潮气量机械通气治疗后肺泡隔断裂明显增加(P＜0.05),肺泡萎陷、局灶性肺不张、肺水肿无明显改变(P>0.05).结论 小潮气量通气策略治疗SWD-ALI能够在一定程度上抑制肺内炎症反应,避免继发肺损伤.     

地塞米松对大鼠烧伤合并海水浸泡后内皮祖细胞数目的影响

目的观察早期应用地塞米松对大鼠烧伤合并海水浸泡后内皮祖细胞数目的影响。方法将52只SD大鼠随机分成6组：正常对照组,单纯烧伤组,烧伤合并海水浸泡组,单纯注射地塞米松组,烧伤＋地塞米松组和烧伤合并海水浸泡＋地塞米松组。在模型制备后的30分钟、2小时、6小时和24小时,使用双色荧光标记流式细胞术检测不同组别大鼠的血中的内皮祖细胞（EPC）数目。结果烧伤和海水浸泡均可显著降低血中EPC的数目。地塞米松可以部分逆转烧伤和海水浸泡对EPC数目减少的作用。结论在烧伤和海水浸泡情况下,地塞米松的使用有助于增加血EPC数目,并可能增强创面的修复能力。     

海水浸泡对兔胫骨开放性骨折愈合进程的影响

目的 观察海水浸泡对兔胫骨开放性骨折愈合进程的影响.方法 44只新西兰兔按数字表法随机分为实验组和对照组,每组22只,均造成双侧胫骨横行骨折.实验组伤口浸泡于人工海水中3 h,对照组旷置3 h,清创后依次缝合伤口.电镜和光镜下观察2组第7、14、21、28天成骨细胞损伤情况、组织中血管内皮生长因子(VEGF)、转移生长因子-β1(TGF-β1)的表达及骨痂形成过程.结果 (1)电镜下,实验组骨折处成骨细胞在骨折后第7～14天可见明显损害,表现为胞膜及核膜破坏、线粒体肿胀空泡变、胞核溶解坏死,第21天及第28天成骨细胞形态恢复正常.(2)免疫组化显示,对照组VEGF及TGF-β1的表达于骨折后逐渐增强,至第14天时达到高峰,之后呈减弱趋势;实验组表达未见延迟,但各时段表达强度均明显弱于对照组.(3)第28天时,对照组骨痂完全为骨性骨痂者共15肢,占75%;为混合性骨痂(即软骨骨痂与骨性骨痂共存)者共5肢,占25%.实验组骨痂完全为骨性骨痂者共6肢,占30%;为混合性骨痂者共14肢,占70%.2组比较差异有统计学意义(χ2=8.12,P<0.01).结论 肢体开放性骨折经海水浸泡3 h后,膜内成骨及软骨内成骨进程延缓,骨折愈合延迟.

Abstract：

Objective To observe the effects of seawater immersion on the healing process of open tibial fracture in rabbits.Methods Forty-four New Zealand rabbits were randomly divided into two groups: the experimental group (group A) and the control group (group B), each consisting of 22 animals. The 2 groups of animals all had bilateral open fracture of tibia. The wounded limbs of the animals in group A were immersed in the artificial seawater for 3 hours. And the animals in group B were left there untended for 3 hours. Following debridement, wounds were sutured. Lesion of osteoblast, vascular endothelial growth factor (VEGF),the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and the process of porosis in the animals of both groups were observed on the 7th,14th,21st and 28th days respectively under the electron and optical microscopes.Results (1) Under the electron microscope, obvious lesion of osteoblast in the animals of group A was observed at the fractured sites, 7-14 days after the fracture, displaying cell membrane and nuclear membrane damage, mitochondrial swelling and vacuolation, cell nucleus dissolution and necrosis. On the 21st and 28th days, morphology of osteoblasts in the animals of group A returned to normal. (2) Immunohistochemistry indicated that the expression of VEGF and TGF-β1 in the animals of group A increased and gradually rose to the peak on the 14th day after fracture, and then decreased. The expression of VEGF and TGF-β1 was not delayed in the animals of group A, but their expression intensity at various times was all obviously weaker than that of group B.(3)On the 28th day, for the animal in group B, 15 limbs were of complete osseous callus, accounting for 75%, while 5 limbs were of mixed type osseous callus, accounting for 25%. For the animal in group A, 6 limbs were of complete osseous callus, accounting for 30%, while 14 limbs were of mixed type osseous callus, accounting for 70%. Significant statistical differences could be seen, when a comparison was made between the groups(P<0.01).Conclusions The process of intramembranous/cartilaginous ossification and fracture healing delayed, following open fracture of limbs coupled with 3-hour seawater immersion.     

海水浸泡对大鼠晶状体Na+,K+-ATP酶表达的影响

目的研究大鼠晶状体海水浸泡伤后Na^＋，K^＋浓度和Na^＋，K^＋-ATP酶在mRNA水平的表达与形态学损伤之间的关系。方法用逆转录聚合酶链式反应法测定大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶α亚单位在mRNA水平的表达状况，并与Na^＋，K^＋浓度和超微结构的变化进行对比分析。结果海水浸泡大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶的α1，α2，α3亚单位mRNA水平的表达首先代偿性增高，随后呈失代偿性降低，并随时间的延长而逐渐降低。海水浸泡30min缝合伤口观察1周组的α1及α2亚单位的表达高于对照组，α3亚单位的表达基本恢复正常。结论在晶状体海水浸泡伤的病变过程中，Na^＋，K^＋-ATP酶亚单位活性的表达有不同变化。     

海水浸泡对失血性休克大鼠血流动力学和一些生化代谢的影响

目的　研究 1 5℃低温海水浸泡对失血性休克大鼠血流动力学和一些生化代谢的影响。方法　采用雄性 Wistar大鼠 ,分为 3组 :正常对照组 (n=8) ;失血性休克组 (n=8) ;海水浸泡失血性休克组 (n=8)。测定血流动力学 ,血乳酸 (L A)、乳酸脱氢酶 (L DH )、磷脂酶 A2 (PL A2 ) ,血液和组织 MDA,分离肝线粒体 ,测定线粒体 H - ATP酶和琥珀酸脱氢酶 (SDH)。结果　海水浸泡失血性休克大鼠血浆L A、L DH、PL A2 、血浆和组织 MDA均显著高于失血性休克组和对照组 ,而血流动力学、肝细胞、心肌细胞线粒体 H - ATP酶和 SDH均显著低于失血性休克组和对照组。结论　 1 5℃海水浸泡失血性休克大鼠伤情明显加重 ,血流动力学减弱 ,缺血再灌流损伤加重 ,线粒体酶及能量合成和分解均下降 ;代谢性酸中毒加重 ,磷脂酶活性升高 ,膜通透性升高     

地塞米松对培养的人视网膜色素上皮细胞生长的调控

目的检测地塞米松(dexamethasone,DEX)对培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelia,RPE)的调控。方法用四唑盐(MTT)实验,氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入和流式细胞仪检测不同浓度DEX对RPE的作用。结果通过MTT及3H-TdR法,DEX浓度从32mg/L-320mg/L可增加培养的RPE的存活率和DNA合成,相反1000mg/L-3200mg/L为抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。当DEX浓度为320mg/L时,S期和G2/M期细胞数增加28.3%,而1000mg/LDEX使其减少41.8%(P<0.05)。结论32mg/L-320mg/L的DEX促进培养的RPE的增殖,当DEX浓度>320mg/L时,则抑制增殖。DEX的抑制作用可能发生在S期和G2/M期。     

海水浸泡对开放性骨折组织修复的影响研究

目的：观察海水浸泡对开放性骨折组织修复的影响。方法：将新西兰兔46只,随机分为观察组25只和对照组21只,均造成桡骨横行1．5mm缺损完全开放性骨折。观察组用海水浸泡伤口3h,对照组旷置3h,之后依次缝合伤口。观察第1、3、7、14、21、28天两组在骨折愈合中的骨痂形成过程及骨痂中骨形态发生蛋白（BMP）的表达。结果：第28天观察组骨折断端形成骨性骨痂6例、软骨骨痂14例,对照组形成骨性骨痂8例、软骨骨痂4例,观察组骨痂形成较对照组显著延迟（P〈0．01）;观察组愈合过程中新生骨痂的BMP表达主要在骨祖细胞、新生软骨细胞和成骨细胞上,与对照组愈合过程一致。结论：海水浸泡可延缓骨痂形成,但对愈合中BMP的表达无显著影响。     

X射线对人肺癌A549细胞CCR7表达影响的研究

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺癌A549细胞CC-趋化因子受体7(CCR7)表达的影响.方法 体外培养A549细胞,实验组采用直线加速器X射线一次性照射,细胞吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy(源皮距100 cm;剂量率442.89 cGy/min),照射后4、12、24、48和72 h分别采用实时荧光定量PCR技术及Western blot方法分别进行CCR7 mRNA及蛋白质表达水平检测;对照组A549细胞除不接受x射线照射外,余处理同实验组.结果 A549细胞经2、4、6和8 Gy的X射线照射后,CCR7 mRNA及蛋白质在照射4 h后开始表达升高,达到高峰后相继出现下降;72 h后6和8 Gy组mRNA表达量仍高于对照组水平(t=6.75～7.26,P＜0.01),2和6 Gy组蛋白质表达量高于对照组(t=11.13～14.17,P＜0.01),而4和8 Gy组蛋白质表达量在48和72 h已降至对照组水平.结论 2、4、6和8 Gy的X射线照射A549细胞后,A549细胞CCR7mRNA及蛋白质的表达量明显增加,可能与一定剂量X射线辐射促进A549细胞增殖和转移有关.

Abstract：

Objective To study the effects of X-ray radiation on CC-chemokine receptor 7(CCR7) expression in human non-small cell lung cancer (NSCLC) cells.Methods Humanadenocarcinoma cells of the line A549 were cultured and irradiated by X-ray at the absorbed doses of 2,4,6,and 8 Gy respectively by linear accelerator (with the source skin distance of 100 cm and dose rate of 442.89 cGy/min).The relative levels of CCR7 mRNA and protein expression in the A549 cells were respectively detected by real time-PCR and Western blotting 4,12,24,48,and 72 h after radiation.Untreated A549 cells were used as control group.Results The expression levels of CCR7 mRNA and protein in the A549 cells began to increase since 4 h after radiation and then decreased gradually after they reached the peak.The CCR7 mRNA expression levels 72 h after radiation of the 6 and 8 Gy groups were still significantly higher than those of the control group (t = 6.75-7.26,both P < 0.01),and the CCR7 protein expression levels of the 2 and 6 Gy group were still significantly higher than those of the control group(t=11.13-14.17,both P <0.01).Then the CCR7 protein expression levels of the 4 and 8 Gy groups decreased to the control group level 48 and 72 h after radiation respectively.Conclusions The CCR7 mRNA and protein expression levels in the NSCLC cells increase after X-ray irradiation,which may be correlated with the promotion of proliferation and metastasis of NSCLC cells by X-ray irradiation at a certain dose.     

X射线对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响.方法 用吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy的X射线照射体外堵养的人肺腺癌A549细胞,2、4、8、12、24、48和72 ha,用实时定量PCR技术检测其中的Pokemon mRNA表达水平,以未照射组为对照.结果 在2、4、6、8 Gy X射线照射后的早期(除2 Gy照射后的2和4 h外)Pokemon mRNA的表达降低,但在晚期(48 h以后)呈升高趋势,在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义(t=3.40～154.76,P<0.05).结论 较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞Pokemon基因mRNA的表达,诱导肿瘤细胞凋亡;但在晚期又可诱导A549细胞高表达PokemonmRNA,这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关.

Abstract：

Objective To study the dose-and time-effects of X-ray irradiation on the expression of Pokemon gene in A549 cells of human lung adenocarcinoma.Methods A549 cells were cultured in vitro and exposed to X-rays with the doses of 2,4,6 and 8 Gy,respectively.Untreated A549 cells were used as control group.The relative levels of Pokemon mRNA expression in the cells were detected by using quantitative real-time PCR at 2,4,8,12,24,48 and 72 h after irradiation.Results The Pokemon mRNA expression levels decreased in the early period after irradiation(except 2 and 4 h after irradiation in 2 Gy group)and then increased in the later stage(48 h after irradiation)with significant statistical differences at the most time points in comparison with the control group(t=3.40-154.76,P<0.05).Conclusions Higher doses of X-rays may degrade the expression of Pokemon mRNA in the human A549 cells and induce apoptosis in the early period,hut also may upgrade its expression in the later period, which might be correlated with the cell cycle regulation and DNA damage repair in the A549 cells.     

X射线对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响.方法 用吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy的X射线照射体外堵养的人肺腺癌A549细胞,2、4、8、12、24、48和72 ha,用实时定量PCR技术检测其中的Pokemon mRNA表达水平,以未照射组为对照.结果 在2、4、6、8 Gy X射线照射后的早期(除2 Gy照射后的2和4 h外)Pokemon mRNA的表达降低,但在晚期(48 h以后)呈升高趋势,在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义(t=3.40～154.76,P<0.05).结论 较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞Pokemon基因mRNA的表达,诱导肿瘤细胞凋亡;但在晚期又可诱导A549细胞高表达PokemonmRNA,这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关.     

囊性纤维化跨膜调节因子氯离子通道在人肺泡上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨人肺泡上皮细胞囊性纤维化跨膜通道调节因子(CFTR)氯离子(Cl~-)通道对肺泡上皮细胞损伤的保护作用.方法采用全细胞膜片钳法,在OmV钳制电压下,对正常A549细胞或H_2O_2处理(氧化损伤)的A549细胞分别按照不同方式给予4-氯苯[F]异喹啉(CBIQ)、二苯胺-2-羧酸(DPC)及钙通道阻断剂尼卡地平,观察细胞从-90mV至50mV经步阶电压(20mV)刺激后CFTR Cl~-电流随时间变化的曲线,并绘制电流-电压(I-V)曲线.结果 正常及H_2O_2损伤后的细胞中均记录到典型的CFTR Cl~-电流,均可被相对特异性的CFTR Cl~-通道阻断剂DPC抑制.H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流较正常细胞明显减小.CBIQ对H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流以及被DPC+尼卡地平阻断后的正常细胞中的CFTR Cl~-电流均有激动作用.结论 氧化应激可导致CFTR Cl~-通道功能异常,CBIQ可以抑制这种作用.CFTRCl~-通道激活剂CBIQ可能通过调节CFTR Cl~-通道和Ca~(2+)通道发挥保护受损细胞的作用.     

电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响

目的 研究电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响。方法 0、0.5、3和8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射A549细胞后,利用JC-1探针检测照射后肺腺癌细胞A549线粒体膜电位的变化;使用ATP试剂盒检测辐射对A549细胞ATP生成的影响;利用实时定量PCR方法检测线粒体拷贝数。结果 在照射后24 h,各剂量组A549细胞膜电位出现明显改变（F=243.44,P<0.05）,与0 Gy照射组相比,0.5和3 Gy照射的A549细胞线粒体膜电位显著升高（t=-10.12、-5.59,P<0.05）,而8 Gy照射的线粒体膜电位显著降低（t=15.22,P<0.05）,照后48 h各照射组线粒体膜电位基本恢复正常（F=10.36,P<0.05）;照射后24 h ATP水平与膜电位变化趋势一致（F=97.08,P<0.05）,其中0.5和3 Gy A549细胞中ATP水平升高（t=1.66、7.27,P<0.05）,8 Gy照射组降低（t=-8.24,P<0.05）;照射后48 h,ATP水平也发生变化（F=39.49,P<0.05）,0.5和3 Gy照射后A549细胞中ATP水平显著高于0 Gy组（t=4.60、8.53,P<0.05）。照射后24 h线粒体拷贝数显著增加,其中0.5 Gy mtDNA拷贝数增加至对照组的12倍（t=0.02,P<0.05）,3和8 Gy组mtDNA拷贝数分别增加至对照组的7和10倍（t=9.68、15.10,P<0.05）。结论 大剂量电离辐射会导致A549细胞线粒体膜电位降低,从而影响ATP的生成,中等剂量以下的照射会导致A549细胞线粒体膜电位代偿性增高,从而使ATP的生成增多,8 Gy以内的电离辐射可使mtDNA拷贝数代偿性升高。     

LPS对A549和Hela细胞SPLUNC1蛋白表达的影响

 目的 探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate, lung and nasal epithelium clone 1, SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法 将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LPS与细胞增殖活性的时间-反应和剂量-反应关系,筛选各自的最佳效应浓度和作用时间,以LPS最佳效应浓度和作用时间处理后,免疫组化和免疫荧光定量法检测两类细胞SPLUNC1蛋白相对表达量的变化。结果 LPS对A549细胞的最佳效应浓度为20 mg/L,最佳效应时间为12 h,对Hela细胞的最佳效应浓度为40 mg/L,12~24 h为其最佳效应时间窗。SPLUNC1在两类细胞中均呈阳性表达,LPS处理后表达均显著上调(P＜0.05),两类细胞间比较,LPS处理后Hela细胞SPLUNC1相对表达量高于A549细胞(P＜0.05),较对照的增量值(Δ)也明显大于A549细胞(P＜0.05)。结论 SPLUNC1在宫颈癌细胞中存在表达,可能是肺腺癌和宫颈癌病变中的保护性因子,具有潜在的临床应用价值。     

抑制CHD6表达对A549细胞辐射敏感性的影响

目的通过RNA干扰技术建立染色质重构蛋白CHD6基因表达抑制的细胞模型,研究CHD6对人肺腺癌细胞A549细胞增殖及辐射敏感性的影响.方法利用质粒介导的siRNA技术建立CHD6基因表达抑制细胞模型,RT-PCR检测CHD6 mRNA的表达,细胞生长曲线和流式细胞技术分别检测A549细胞增殖及细胞周期的变化,荧光染色法检测细胞凋亡,细胞克隆形成率检测A549细胞辐射敏感性.结果通过本研究,成功构建了siRNA抑制CHD6表达的细胞模型;通过siRNA抑制CHD6的表达,A549细胞增殖能力明显增强,细胞对2 Gy以内γ射线照射有明显辐射抗性;大剂量照射后的细胞凋亡率无明显改变.结论抑制CHD6基因表达将提高细胞增殖能力和细胞的辐射抗性.     

肝细胞生长因子对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法将体外培养的HKC分为正常组、TGF-β1组、HGF组、TGF-β1 HGF组、延迟加入HGF组。应用间接免疫荧光技术观察HKC中α-SMA蛋白、E-cadherin的表达。用RT-PCR技术检测细胞中α-SMA mRNA的表达。结果免疫荧光技术显示,TGF-β1能诱导HKC表达α-SMA蛋白,减少E-cadhefin表达;同时加入HGF能减少α-SMA蛋白表达,而延迟加入HGF能使部分转分化的HKC细胞恢复E-cadherin的表达。RT-PCR结果显示,正常组无α-SMA mRNA表达,TGF-β1可诱导HKC表达α-SMA mRNA;同时加入HGF后α-SMA mRNA基本无表达,而延迟加入HGF后α-SMA mRNA表达明显下降。结论TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞转分化,而HGF能抑制TGF-β1诱导的转分化,延迟加入HGF能使部分发生转分化的肾小管细胞恢复上皮表型。