漆姑草醇提物对白血病细胞K562的诱导分化作用

目的： 研究漆姑草醇提物（HSJ）对人慢性髓系白血病细胞（K562）的诱导分化作用。方法： 实验设HSJ不同浓度（250、125、62.5 μg/mL）实验组,阴性对照组（等体积1640培养基）,作用48 h后,采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测K562细胞增殖抑制率;瑞氏-吉姆萨染色观察K562细胞形态;硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验法测定K562细胞分化能力;流式细胞术检测K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞的表达率;Western blot法检测K562细胞中珠蛋白转录因子1（GATA1）和造血转录因子1（PU.1）蛋白的表达。结果： 与阴性对照组比较,各浓度HSJ均能有效抑制K562细胞的增殖（P < 0.05）;经HSJ作用后,各实验组K562细胞核浆比例减小,出现分叶状细胞核,部分细胞核凹陷出现明显的细胞分化形态;与阴性对照组相比,3个不同浓度HSJ组的NBT还原率均提高（P < 0.05）;CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞表达率均增加（P < 0.05）;GATA1和PU.1蛋白相对含量亦增加,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论： 漆姑草醇提物能诱导K562细胞向成熟细胞方向分化。     

胡椒碱诱导人红白血病细胞株K562的分化

背景与目的:白血病是一种血液系统的恶性肿瘤,诱导分化是治疗白血病非常有效的方法之一。胡椒碱(piperine)是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。本研究旨在探讨胡椒碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法:采用台盼蓝染色计数法绘制生长曲线和流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,观察胡椒碱对K562细胞增殖的影响;通过观察细胞形态学变化、检测硝基蓝四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力、流式细胞术检测细胞表面标志CD33和CD14的变化,探讨胡椒碱对K562细胞的诱导分化作用。结果:20μmol/L和40μmol/L胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬细胞和单核系细胞分化。40μmol/L胡椒碱作用3d,K562细胞的NBT还原阳性率由(8.5±1.9)%上升到(76.7±5.3)%;20μmol/L胡椒碱作用3d,流式细胞术结果显示细胞表面分化抗原CD33的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)下降42.05%(P<0.01),而CD14的MFI则升高了1倍(P<0.01);20μmol/L以上浓度的胡椒碱对K562细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用随时间的延长或剂量的增加有增强的趋势。结论:胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬和单核系细胞分化。     

苦参碱诱导K562细胞分化方向的研究

[目的]体外研究苦参碱诱导白血病细胞株K562的分化方向.[方法] 0.2mg/ml浓度苦参碱诱导K562细胞7天,观察苦参碱作用前后K562细胞形态学、细胞化学及细胞谱系特征性标记变化.[结果]K562细胞出现分化的形态特征,联苯胺染色及过碘酸-希夫反应(PAS)阳性细胞数分别由5%上升至31%,3%上升至35%,α-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)、中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)阳性细胞数分别由36%下降至3%,22%下降至0,CD34、CD41表达阳性细胞数分别由1.1%上调至6.4%,23.8%上调至69.2%,CD68表达阳性细胞数由8.6%下调至1.1%,CD3、CD45RO、CD56及CD20表达阳性细胞数无明显变化.[结论]苦参碱是白血病细胞K562良好诱导分化剂,可诱导K562细胞向髓系非单核巨噬细胞方向分化.     

STI571诱导K562细胞红系分化及其机制的初步研究

目的 :探讨 STI5 71诱导 K5 6 2细胞向红系分化的可能机制。方法 :单用 STI5 71及联用信号传导阻滞剂处理 K5 6 2细胞 ,采用联苯胺染色法检测 K5 6 2细胞向红系分化比例变化 ,流式细胞术检测细胞周期改变 ,Western blot检测 Rb、p- Rb、Erk、p- Erk、p2 7蛋白改变 ,RT- PCR检测 GATA1、GATA2、p2 7m RNA水平变化。结果 :STI5 71诱导 K5 6 2细胞向红系分化 ,呈时间剂量依赖性改变。K5 6 2细胞经 STI5 71处理后 1 2 h即可发生 G1 期阻滞 ,随时间延长趋于明显 ,伴随 p2 7,p- Rb水平下降。p- Erk水平升高。STI5 71与信号传导阻滞剂 U0 1 2 6联合应用后 ,K5 6 2细胞联苯胺阳性率明显下降 (P<0 .0 5 )。STI5 71作用后 ,GATA1、GATA2、m RNA水平未见明显变化。结论 :STI5 71通过上调p2 7,降低 p- Rb水平 ,诱导 K5 6 2细胞发生 G1 期阻滞 ,活化 Erk促使 K5 6 2细胞向红系分化     

环腺苷酸对人白血病多药耐药 K562/ADM 细胞的诱导分化作用

目的：研究环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP)对人白血病多药耐药K562／ADM细胞的诱导分化作用。方法：K562／ADM细胞经0.25-2.0mmol/L cAMP处理后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（flow cytometry,FCM)检测细胞周期和P－糖蛋白（P－glycoprotein,P-gp)的表达,免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclin D1和转录因子E2F的表达;同时观察细胞形态学变化和血红蛋白合成功能。结果：cAMP呈浓度和时间依赖性地抑制K562／ADM细胞的增殖（P＜0．01）,细胞形态学上出现红系细胞的形态特征;被诱导的细胞能够合成血红蛋白、cyclinD1和E2F的表达减低。cAMP(0.25mmol/L和1.0mmol/L)诱导24h,多数细胞被阻滞在G1期,S期和G2＋M期细胞显著降低,诱导72h后K562／ADM细胞P－gp表达的阳性率无明显变化（99．8％－99．9％）,但P－gp的表达量显著增加,平均荧光强度分别增高1．24倍和1．28倍。结论：K562／ADM细胞仍保留了分化成熟的潜能,可被cAMP诱导向正常血细胞分化,但在分化诱导过程中,化学诱导剂可导致耐药细胞发生P－gp的应激性表达增强而可能阻抑后续的化学治疗,或对诱导剂产生耐受性。     

PMA诱导K562细胞向单核细胞分化机制探讨

目的：探讨佛波酯（phorbol-12-myristate-13-ace-tate,PMA）诱导K562细胞向单核/巨噬细胞分化的作用机制。方法：采用CCK8法检测0、6.25、12.5、25、50、100和200nmol/L PMA对K562细胞增殖的影响,应用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达变化,采用RT-PCR分析TGF-β1及其下游基因SMAD3和SMAD4在基因水平的表达趋势,并采用蛋白质印迹法检测TGF-β1在蛋白水平的表达变化。结果：K562细胞经6.25nmol/L PMA处理后72h增殖抑制率为（22.03±2.7）%,12.5nmol/L为（31.04±4.3）%,25nmol/L为（35.03±3.5）%,50nmol/L为（47.01±4.1）%,100nmol/L为（55.06±5.2）%,200nmol/L为（76.72±5.4）%,差异有统计学意义,F=2.24,P〈0.05。PMA能抑制K562细胞的增殖并能促进其分化,作用效果随剂量的加大逐渐增强;细胞形态学上趋向于成熟分化;细胞表面分子CD11b和CD14的表达量升高。在mRNA水平,TGF-β/SMAD信号通路因子TGF-β1的表达量随时间的延长逐渐升高其下游因子SMAD3和SMAD4的表达也呈上升趋势;在蛋白水平,TGF-β1的表达亦呈上升趋势。结论：PMA可通过促进TGF-β/SMAD信号的传导诱导白血病细胞株K562细胞向单核/巨噬细胞分化。     

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

中药苏木提取物诱导K562细胞凋亡的研究

目的：探讨中药苏木提取诱导人类慢性髓性白细胞病K562细胞的凋亡作用。方法：采用MTT法检测苏木提取物对K562细胞增殖抑作用。荧光显微镜观察细胞形态变化,库尔特全自动颗粒粒度分析药物引起K562细胞体积大小的分布变化,琼脂糖凝胶是电泳测定DNAladder及流式细胞术检测细胞周期变化,结果：25μg/ml苏木浸膏能明显诱导K562细胞凋亡,产生凋亡细胞所具有的典型形态学及生化学特征,同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用呈一定的浓度依赖性,结论：中药苏木提取物能诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增殖呈一定的浓度依赖关系。     

链式CIK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性

目的： 研究细胞因子诱导的体外细胞经过链式激活后获得的链式CIK细胞对白血病K562细胞的杀伤效应。 方法: 采用血细胞单采机从外周血分离单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）,经过细胞因子诱导、扩增、培养得到链式CIK细胞,以CIK细胞作对照,检测链式CIK细胞的增殖能力, LDH释放法测定其对K562细胞的杀伤活性。 结果: 链式CIK细胞组在培养第5、第14天的细胞数低于CIK细胞组（P<0.01）;链式CIK细胞对K562细胞的杀伤活性在效靶比40 ∶1和20 ∶1时分别为（56.1±2.24）%、（34.4±3.56）%,均低于CIK细胞（均P<0.01）。 结论: 链式CIK细胞是一种培养周期短、对白血病K562杀伤活性较弱的免疫细胞。     

Induction of Erythroid Differentiation by 5-Fluorouracil in K562 Leukemia Cells

K562 cell line, established from a patient in the blast crisis of chronic myeloid leukemia, expresses high levels of c-myc and bcr/abl gene products. Exposure of K562 cells to 5-fluorouracil (5-FU) resulted in a marked benzidine-positive erythroid differentiation with concomitant reduction in cell proliferation. No change in c-myc mRNA or protein levels occurred during 96 h of drug treatment. In contrast, a biphasic change of p210 ^bcr/abl and the abl -associated kinase activities was observed upon treatment with 5-FU. The change in p210 ^bcr/abl expression may be mediated at the translational level, since the steady-state level and the enzymatic activity of p210 ^bcr/abl are reduced, whereas bcr/abl mRNA levels are unaltered. The results are consistent with the existence of pleiotropic differentiation pathways in K562 cells.     

氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的　探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法　采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果　0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论　GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。     

鱼藤素作用K562细胞Topo Ⅰ表达的探讨

目的：探讨鱼藤素对DNA拓扑异构酶TopoⅠ表达的影响，进一步明确鱼藤素抑制肿瘤细胞增殖的作用机制。方法：流式细胞术及RT-PCR法分析鱼藤素作用K562细胞后TopoⅠ蛋白及mRNA含量的变化。结果：流式细胞术分析结果发现TopoⅠ蛋白的平均荧光强度随着鱼藤素作用浓度的增高而逐渐减少，与空白对照组比较有显著差异（P〈0．05）；RT-PCR半定量检测结果显示，鱼藤素作用K562细胞引起TopoⅠmRNA含量减少，并与其浓度正相关。结论：鱼藤素可通过抑制肿瘤细胞内TopoⅠ而发挥作用。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对白血病细胞K562增殖的影响

目的：探讨人类端粒酶RNA的反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响。方法：采用MTT和试验和平板集落形成实验观察反义寡核苷酸作用后K562细胞的生长情况，采用流式细胞仪分析细胞周期的改变，采用电镜观察细胞超微结构的改变，用PCR－ELISA分析细胞端粒酶活性的改变。结果：端粒酶RNA的反义寡核苷酸作用K562细胞后，细胞超微结构和细胞周期发生明显改变。端粒酶活生到明显抑制，细胞增殖受到明显抑制。结论：靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制白血病细胞K562的增殖。     

Angelica Sinensis Polysaccharide Induces Erythroid Differentiation of Human Chronic Myelogenous Leukemia K562 Cells

Leukemia is a clonal disorder with blocked normal differentiation and cell death of hematopoietic progenitorcells. Traditional modalities with most used radiation and chemotherapy are nonspecific and toxic which causeadverse effects on normal cells. Differentiation inducing therapy forcing malignant cells to undergo terminaldifferentiation has been proven to be a promising strategy. However, there is still scarce of potent differentiationinducing agents. We show here that Angelica sinensis polysaccharide (ASP), a major active component in Dongquai (Chinese Angelica sinensis), has potential differentiation inducing activity in human chronic erythromegakaryoblasticleukemia K562 cells. MTT assays and flow cytometric analysis demonstrated that ASPinhibited K562 cell proliferation and arrested the cell cycle at the G0/G1 phase. ASP also triggered K562 cellsto undergo erythroid differentiaton as revealed by morphological changes, intensive benzidine staining andhemoglobin colorimetric reaction, as well as increased expression of glycophorin A (GPA) protein. ASP inducedredistribution of STAT5 protein from the cytoplasm to the nucleus. Western blotting analysis further identifiedthat ASP markedly sensitized K562 cells to exogenous erythropoietin (EPO) by activating EPO-induced JAK2/STAT5 tyrosine phosphorylation, thus augmenting the EPO-mediated JAK2/STAT5 signaling pathway. On thebasis of these findings, we propose that ASP might be developed as a potential candidate for chronic myelogenousleukemia inducing differentiation treatment.     

青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

Hoxa10真核表达载体增强K562细胞对柔红霉素敏感度的研究

目的构建高效干扰Hoxa10基因表达的shRNA真核载体,探讨其对人慢性髓系白血病细胞株K562对化疗药物柔红霉素（daunorubicin,DNR）敏感度的影响。方法设计合成针对Hoxa10的特异性shRNA寡核苷酸链,构建真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。实验分三组：正常对照组、阴性对照组、实验组（分别为正常K562细胞、阴性对照质粒转染K562细胞、pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10转染K562细胞）,三组细胞均加入不同浓度的DNR。RT-PCR检测Hoxa10 mRNA的表达,应用MTT检测各组细胞对DNR的敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10载体并转染K562细胞,该载体能有效降低Hoxa10mRNA表达水平ODR=（38.864±4.488）%;MTT结果显示Hoxa10重组载体可显著降低K562细胞对DNR的IC50（P<0.05),对DNR的敏感度能提高约3.58倍。流式细胞术结果显示,该载体下调Hoxa10的表达后,细胞的凋亡率显著增加,可达（16.207±4.891）%（P<0.05),且联合DNR后细胞凋亡率明显提高,凋亡率达（76.887±0.967）%（P<0.05)。结论本实验构建的靶向Hoxa10的真核表达载体对K562细胞中Hoxa10的表达有明显抑制作用,并能明显增强其对DNR的化疗敏感度。     

Inhibition of abl Oncogene Tyrosine Kinase Induces Erythroid Differentiation of Human Myelogenous Leukemia K562 Cells

The human chronic myelogenous leukemia cell line K562 expresses a structurally altered c- abl protein with tyrosine kinase activity. Erythroid differentiation of K562 cells was induced by tyrosine kinase inhibitors, but not by other kinase inhibitors. Treatment of K562 cells with 5'd(TACTGGCCGCTG-AAGGGC)3', complementary to the second exon (codons 2 to 7) of c- abl mRNA, inhibited cell growth and induced benzidine-positive cells in a dose-dependent manner. However, exposure to the sense oligomer did not induce erythroid differentiation of the cells. These results suggest that inhibition of abl tyrosine kinase activity is closely related to induction of erythroid differentiation of K562 cells. A multidrug-resistant subline (K562R) was induced to undergo erythroid differentiation by tyrosine kinase inhibitors such as genistein or herbimycin A as effectively as the parent K562 cells were. Therefore, tyrosine kinase inhibitors might be useful as cancer chemotherapeutic agents against some multidrug-resistant leukemias having abnormally high activity of oncogene tyrosine kinase(s).