大鼠肝微粒体CYP450酶对芦荟大黄素体外代谢的影响

目的:通过考察芦荟大黄素在大鼠肝微粒体外代谢的主要条件,研究CYP450酶对芦荟大黄素代谢的影响。方法:随机将12只SD雄性大鼠分为空白对照组和苯巴比妥钠组,对空白对照组(0.5%CMC-Na溶液,10 ml/kg,ig)和PB组(苯巴比妥钠,75.0 mg/kg,ip)进行大鼠肝微粒体的诱导和制备,再将芦荟大黄素与大鼠肝微粒体进行体外孵育代谢,-80℃终止反应,三氯甲烷提取样品。用高效液相-荧光检测器(HPLC-FLD)测定芦荟大黄素含量,流动相为甲醇:0.1%磷酸水(70:30),激发波长435nm,发射波长515nm。结果:测定方法专属性,回收率高,日内和日间精密度良好,稳定性好满足生物样品检测要求。以芦荟大黄素代谢消失率计,在肝微粒体蛋白浓度为0¹.0mg/ml范围内成线性增加趋势,1.01.0mg/ml范围内成线性增加趋势,1.0².5mg/ml趋势不明显;孵化时间02.5mg/ml趋势不明显;孵化时间0³0min成线性增加,且高于60%。芦荟大黄素代谢消失率随其浓度的增加呈线性增加趋势,达到一定浓度后成降低趋势。芦荟大黄素低、中、高浓度在PB、CMC-Na肝微粒中代谢消失率比较均为PPB-CMC-Na<0.01。结论:芦荟大黄素在大鼠肝微粒体中的体外代谢具有酶促动力学特征,CYP450酶对芦荟大黄素的代谢起促进作用,苯巴比妥钠诱导的CYP450亚型酶参与了芦荟大黄素的代谢。     

川芎嗪在大鼠肝微粒体系统中的代谢研究

目的：通过离体和整体实验来研究川芎嗪（TMPz）代谢转化过程,探讨参与TMPz代谢的CYP450亚酶,为临床上合理用药提供科学依据。方法：建立TMPz的UV-HPLC检测方法,测定大鼠血浆和肝微粒体温孵液中TMPz及代谢产物,分析TMPz代谢消除率与各诱导和抑制剂之间的相关性；Nash法测定肝微粒体温孵液中ERY N-脱甲基酶活性,探索其与代谢物生成量之间的相关关系；测定DEX,Ket在体诱导或抑制后,大鼠血中的TMPz药物浓度,计算和比较药动学参数。结果：特异性CYP3A诱导剂DEX组中TMPz代谢物生成速率明显高于对照组,而主要诱导CYP2B的PB,β-NF组与对照组无明显区别；强效的CYP3A抑制剂Ket则显著抑制TMPz的代谢；TMPz的代谢速率与CYP3A的特征性ERY N-脱甲基反应呈现高度的相关性；在体诱导或抑制后TMPz的药动学参数中DEX组的CL(s)大于对照组,t_1/2小于对照组；而Ket抑制的CL(s)小于对照组,t_1/2大于对照组,差异均具有统计学意义。结论： CYP3A是介导TMPz生物转化的CYP450亚酶,川芎嗪与CYP3A酶抑制或诱导药合用可能存在药物间的相互作用。     

野百合碱在5种肝微粒体中的体外代谢研究

目的研究野百合碱在5种不同肝微粒体中的体外代谢。方法通过对肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等条件的考察优化野百合碱与肝微粒体的反应体系,用HPLC-MS定性/定量检测孵育体系中的野百合碱及代谢产物,分析比较野百合碱在经地塞米松诱导的F344大鼠、F344大鼠、人、SD大鼠、ICR小鼠肝微粒体中代谢率和代谢产物的差异。结果体系的优选条件为肝微粒体质量浓度2 mg/mL,孵育时间90 min,野百合碱在地塞米松诱导的F344大鼠、F344大鼠、人、SD大鼠、ICR小鼠肝微粒体代谢率分别为9.91%,5.45%,0.25%,1.01%,4.25%。在5种肝微粒体中均检测到两个代谢产物:野百合碱-N-氧化物和DHP[(+/-)6,7-dihydro-7-hydroxy-1-hydroxymethyl-5H-pyrrolizine]。结论野百合碱在地塞米松诱导的F344大鼠、F344大鼠、SD大鼠、人及ICR小鼠肝微粒体均可发生代谢,但代谢率有一定差异。     

黄芩苷对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制作用

目的:观察黄芩苷对大鼠/人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶活性的抑制作用,比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法:通过采用体外肝微粒体温孵体系结合特异性探针底物的方法,结合应用LC-MS/MS检测各探针底物的代谢物的生成量,质谱检测条件为电喷雾离子化(ESI)源,选择性反应监测(SRM)扫描方式,色谱分离条件为ZORBAX Eclipse-plus C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,计算半抑制浓度(IC₅₀)。结果:黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP450酶7种亚型均无抑制作用,而对人肝微粒体CYP1A2,CYP2C19和CYP2E1有较弱的抑制作用,IC₅₀分别为39.72,40.91,32.83 μmol·L^-1。结论:黄芩苷对CYP450酶的抑制作用存在种属差异性,是人CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1的弱抑制剂,临床静脉用药时,应注意可能因CYP450酶抑制引起的药物相互作用。     

HPLC-MS/MS测定大鼠肝微粒体孵育体系中兰索拉唑代谢产物浓度

目的 建立大鼠肝微粒体酶孵育系统中兰索拉唑代谢产物5-羟基兰索拉唑及兰索拉唑砜的检测方法,并对体外孵育条件进行优化。方法 采用HPLC-MS/MS测定微粒体酶孵育系统中代谢产物的浓度,用单因素法对各孵育条件进行优化,采用Lineweaver-Burk双倒数法研究CYP2C19及CYP3A4的酶促动力学。结果 5-羟基兰索拉唑、兰索拉唑砜分别在5.57~2 520、5.42~2 480 ng·mL内线性关系良好。体外酶孵育条件为：兰索拉唑10 μmol·L, 肝微粒体酶量0.16 mg,孵育时间为10 min。结论 本实验建立的HPLC-MS/MS的方法快捷、灵敏,适用于兰索拉唑两种代谢产物的测定。体外酶孵育条件的优化,同时也为研究其他多种经CYP2C19及CYP3A4代谢的药物对兰索拉唑的代谢影响及相互作用奠定了基础。     

艾迪注射液对体外人和大鼠肝微粒体中CYP450酶的抑制作用

目的研究艾迪注射液(斑蝥、人参、黄芪等)对体外人和大鼠肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶的抑制作用,并比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法在肝微粒体孵育体系中,将艾迪注射液分别与混合探针底物(非那西丁/CYP1A2、氯唑沙宗/CYP2E1、右美沙芬/CYP2D6、奥美拉唑/CYP2C19、甲苯磺丁脲/CYP2C9、咪达唑仑/CYP3A4、睾酮/CYP3A4)共同孵育,UPLC-MS/MS检测各探针底物的代谢物生成量,采用Graph Pad v5.0软件计算半数抑制浓度(IC50)。结果艾迪注射液对人和大鼠肝微粒体中CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6、CYP2C19和CYP2C9的IC50值在4.101%~10.07%范围内,对人和大鼠肝微粒体中CYP3A4(咪达唑仑)的IC50值分别为169.6%和9.133%,对CYP3A4(睾酮)的IC50值分别为8.472%和49.25%。结论艾迪注射液对CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4有不同程度的抑制作用,其中CYP3A4具有明显的种属差异性。     

隐丹参酮对大鼠肝微粒体CYP酶的影响

目的 研究隐丹参酮(CTS)对大鼠肝微粒体CYP酶各亚型的影响.方法 取SD大鼠,按体重随机分为6组,每组3只,隐丹参酮各剂量组分别灌胃给予隐丹参酮20、60、180、540mg/kg,连续10 d;阴性对照组,灌胃给予羟丙基环糊精水溶液10 mL/kg,连续10 d;阳性对照组从实验第7天开始按80 mg/kg腹腔注射B-NF,于第10天最后1次给药后将大鼠断头处死,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法、蛋白免疫印记及逆转录聚合酶链反应观察CTS对CYP酶各亚型酶活性、蛋白表达及基因表达的影响.结果 CTS灌胃后对大鼠肝微粒体CYP1A2有明显的诱导作用,并呈剂量依赖性,CTS 20～540 mg/kg剂量组CYP1A2探针代谢物的量、蛋白表达及基因表达分别较阴性对照组提高60%～430%、130%～320%及10%～150%;隐丹参酮对CYP酶其他亚型无明显作用.结论 CTS能显著地诱导大鼠肝微粒体CYP1A2,提示经CYP1A2代谢的药物在临床上与CTS合用时,可能发生药物之间的相互作用.     

药物代谢在新药研究中的作用

 目的综述药物代谢在新药研究中的作用。方法依据国外文献,对有关药物代谢进行分类、归纳整理。结果细胞色素P450在药物代谢中具有重要作用。结论研究药物代谢有助于新药研究与开发。     

肝药代谢酶研究方法及中药影响的研究进展

目的：综述近年来国内外学者就中药对肝药酶影响的研究思路、方法和进展。方法：查阅近年来国内外报道中药对肝药酶影响的相关文献,进行归类、分析,并加以总结。结果：通过综述发现,近年来研究者越来越重视研究中药对肝药酶活性的影响。随着科研技术的进步,方法在不断更新,研究在不断深入,在临床合理用药方面也突现出越来越重要的指导意义。结论：深入研究中药对肝药酶活性的影响,有利于中药基础理论的深入和发展;临床上中药与其它药物合用时应该更加重视代谢性相互作用,可优化中药的给药方案,提高临床用药的有效性和安全性。     

丹参酮Ⅱ_A在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学

目的研究丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢,以及选择性细胞色素P450(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法超速离心法制备大鼠肝微粒体,采用高效液相-质谱联用方法测定孵育液中丹参酮ⅡA原形药物的浓度。研究丹参酮ⅡA的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint)。同时观察不同浓度和不同种类的CYP酶特异性抑制剂对丹参酮ⅡA代谢的影响。结果丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的Vmax为(1.20±0.18)nmol/(min·mg);Km为(4.35±0.67)nmol/mL;CLint为(0.28±0.06)mL/(min·mg)。噻氯匹啶和酮康唑能够显著抑制丹参酮ⅡA的代谢,奎尼丁对丹参酮ⅡA的代谢也有一定的抑制作用,而其他CYP酶抑制剂对丹参酮ⅡA的代谢无明显影响。结论CYP2C19和CYP3A1主要参与了丹参酮ⅡA的代谢,CYP2D6也起到了部分代谢作用;这些CYP酶的抑制剂可能使丹参酮ⅡA的代谢受到抑制,造成药物药效或毒性的增加。     

覆盆子鞣质对大鼠肝微粒体代谢酶活性的影响

目的探究覆盆子鞣质对大鼠肝微粒体内蛋白含量以及细胞色素p450(CYP450)和细胞色素b5(CYPb5)活性的影响。方法将30只SD雄性大鼠置于SPF环境中喂养1周后,随机分为5组,每组6只,分别为覆盆子鞣质高、中、低剂量组,阳性对照组和空白对照组。覆盆子鞣质高、中、低剂量组分别按150、100、75 mg·kg^-1·d^-1灌胃给药,空白对照组给予等量的生理盐水,连续灌胃给药7 d;苯巴比妥钠对照组连续5 d以80 mg·kg^-1·d^-1剂量经腹腔注射方式给药。结束给药后禁食12 h,利用一氧化碳(CO)还原差示光谱法测量各组肝微粒体中CYP450和CYPb5的含量。结果与空白对照组比较,覆盆子鞣质高、中、低剂量组均能降低CYP450和CYPb5含量,差异有统计学意义(P<0.01),且随着给药剂量的增加,抑制作用也随之增强。结论覆盆子鞣质对大鼠肝微粒体代谢酶CYP450和CYPb5的活性有显著的抑制作用,且呈现剂量依耐性。该结果为覆盆子鞣质的深度开发及临床应用等提供重要的实验依据。     

089 银杏提取物EGb 761对大鼠肝细胞色素P450及对大鼠和人类固醇代谢和排泄的影响

一些对大鼠的体内、体外试验显示，服用银杏提取物可能影响肝的异生物体代谢和引起药物相互作用，而在人体试验未获得该提取物能调节细胞色素P450（CYP450）酶活性的证据。     

HPLC-MS-MS法测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物及甘草对CYP450酶活性的影响

目的: 建立高效液相色谱-二级质谱联用(HPLC-MS-MS)法同时测定大鼠血浆中6种细胞色素P450(CYP450)探针药物,即非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、酒石酸美托洛尔、氯唑沙宗和睾酮,并用于体内评价甘草对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1,CYP3A4酶活性的影响. 方法: 采用汉邦C₁₈柱(2.0 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(70:30),流速为0.2 mL·min^-1,柱温35℃.电喷雾离子化,检测方式为多反应离子监测.大鼠分为2组,分别ig生理盐水和甘草提取液,连续10 d,于第11天给予大鼠探针药物,用HPLC-MS-MS法测定6种探针药物的血药浓度,并分析比较其药动学参数. 结果: HPLC-MS-MS方法的灵敏度、精密度、回收率及稳定性良好.甘草能明显诱导大鼠体内CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1的活性,抑制 CYP3A4的活性. 结论: 本法简便、准确,适用于甘草或其他药物对CYP450同工酶活性的研究.     

清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP450酶6种亚型的体外抑制作用研究

 目的 研究清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法 采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;清开灵注射液、黄芩苷、栀子苷和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC₅₀值表示对CYP450酶的抑制程度。结果 在人肝微粒体体外孵育体系中,清开灵注射液对CYP1A2的IC₅₀值为0.6%,对其他亚型的IC₅₀值从1.1%到6.0%;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型的IC₅₀值均大于100 μmol·L-1。结论 在正常剂量下,清开灵注射液对人肝微粒体CYP1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4无明显抑制作用;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型均无抑制作用。     

松脂醇二葡萄糖苷在人和大鼠肝微粒体中的代谢比较

目的 比较松脂醇二葡萄糖苷在人和大鼠肝微粒体中的代谢.方法 将人和大鼠肝微粒体在体外分别与松脂醇二葡萄糖苷共同孵育,高效液相色谱串联四极杆质谱(HPLC/QQQ-MS)法分析该成分及其代谢产物,二级质谱扫描来推测化学结构.结果 最佳条件为肝微粒体质量浓度20 mg/mL,孵育时间120 min,松脂醇二葡萄糖苷在人和大...     

浅谈细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用

细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)酶是人体中参与药物代谢密切相关的重要酶系之一,90%以上的药物的氧化是由P450酶催化的,多药合用对机体P450酶的影响能造成临床上显著的药物相互作用。联合用药时药物可通过对药酶的干扰如酶促、酶抑等,影响另一药物的代谢,使其药效发生改变。简述几种重要的细胞色素P450酶的作用特点及与之相关的相互作用。     

生脉注射液体外对CYP450酶与转运体抑制作用的研究

目的 评价生脉注射液对细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)酶与转运体活性的影响.方法 根据美国食品和药品管理局(FDA)发布的《药物相互作用研究指导原则(2017)》以及我国发布的《药物相互作用研究技术指导原则(试行)》,在有无生脉注射液的人肝微粒体、人源多药耐药蛋白1 (multidru...     

中草药代谢与细胞色素P450的关系研究进展

目的:阐述中草药代谢与细胞色素P450酶(CYP450)的关系。方法:查阅近年来国内外相关文献100余篇,从CYP450概述、CYP450研究方法、代谢性相互作用以及中草药-药物相互作用与CYP450之间关系等方面进行文献归纳。结果:CYP450研究方法主要包括体外细胞、亚细胞水平研究及体内研究,CYP450酶活性改变是代谢性相互作用的主要原因,中草药复杂成分对CYP450酶活性影响较大。结论:CYP450在药物代谢中起重要作用,由中草药引起药物相互作用屡的原因大多缘于中草药影响了机体CYP450活性或机体CYP450蛋白表达,导致由CYP450参与代谢的其它药物在机体内代谢特征的改变,引发不良药物反应。     

大鼠原位肝灌流及体外肝微粒体温孵研究对甲基苯磺酰胺代谢的影响因素

 目的研究抗肿瘤新药对甲基苯磺酰胺(PTS)肝代谢过程中对大鼠CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2的影响,P-糖蛋白抑制剂对PTS代谢的影响,PTS合并用药时的代谢变化。方法♂Wistar大鼠分组ip苯巴比妥,酮康唑和维拉帕米连续给药3 d后肝灌流PTS 25μmol·L^-1,比较空白组与各处理组PTS代谢变化。♂Wistar大鼠分组ip PTS 33和99 mg·kg^-1·d^-1连续给药4 d后分别肝灌流CYP3A2,CYP2D1底物右美沙芬和CYP1A2底物非那西丁。比较空白组与PTS处理组对CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性的影响。体外实验右美沙芬40μmol·L^-1和非那西丁20μmol·L^-1与不同浓度的PTS在空白微粒体中温孵。PTS与不同浓度依托泊苷(VP-16),氟尿嘧啶(5-FU)在空白微粒体中温孵。结果苯巴比妥诱导组PTS代谢加快,酮康唑组代谢减慢。右美沙芬和非那西丁代谢在温孵反应中与空白组无显著差别。依托泊苷体外实验中抑制PTS代谢达50.7%,氟尿嘧啶对PTS代谢没有影响。结论大鼠原位肝灌流是良好的整体器官药物代谢模型,是体外实验有力的补充。PTS大鼠肝代谢与CYP450相关。PTS代谢不影响CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性。P-糖蛋白抑制剂不影响PTS在实验条件下的代谢。合并用药的依托泊苷对PTS肝代谢有显著抑制。     

体内、体外相结合测定及评价CYP2C19 酶活性研究的方法建立

目的:建立一种快速、准确的以奥美拉唑(Omeprazole,OPZ)作为“探针药物”评价或测定细胞色素P450 2C19(CYP2C19)酶活性的高效液相色谱(HPLC)-紫外检测(VWD)方法.方法:采用的色谱柱为Agilent Extend-C18柱(4.6 mm×100 mm,5μm),流速1.0 mL·min-1,紫外检测波长290 nm,柱温40℃.体内实验:大鼠静脉注射OPZ(20 mg· kg-1),按时间点眼眶取血,检测OPZ与其代谢产物5’-羟基奥美拉唑(5’-hydroxy omeprazole,5 '-OHOPZ)的血浆药物浓度.体外实验:不同浓度OPZ与大鼠肝微粒体温孵后,检测温孵体系中5’-OHOPZ的浓度,以其生成的速率来评价CYP2C19酶的活性.结果:体内实验:内标非那西丁、OPZ与5’-OHOPZ保留时间(tR)分别为8.91,10.26,14.93 min,OPZ线性范围为0.28 ～18.0 mg·L-1,最低定量限(lower limit of quantitation,LLOQ)为0.28 mg·L-1,高、中、低浓度提取回收率分别为91.13％,97.21％,96.55％,OPZ的日内、日间相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于10％;5’-OHOPZ线性范围为0.19 ～6.25 mg·L-1,LLOQ为0.19 mg·L-1,高、中、低浓度提取回收率分别为94.36％,97.57％,90.64％,5’-OHOPZ的日内、日间RSD小于10％.体外实验:内标非那西丁、OPZ与5’-OHOPZ的保留时间(tR)分别为8.91,10.26,14.93 min,5’-OHOPZ的线性范围为0.06 ～2.0 mg·L-1,LLOQ为0.06 mg·L-1,高、中、低浓度提取回收率分别为96.53％,99.40％,98.00％,日内、日间RSD差小于10％.结论:大鼠血浆及肝微粒体温孵体系中的其他内源性物质不干扰待测物的测定.该方法快速、稳定、灵敏度高,适合OPZ及其代谢产物5’-OHOPZ的测定,该文建立了体内、体外相结合测定及评价CYP2C19酶活性研究的方法.