肺纤维化大鼠模型中细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达

目的探讨细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达在肺纤维化过程中的作用。方法通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR法检测肺组织细胞凋亡以及Fas/FasL mR-NA表达。结果肺纤维化模型复制成功。模型组肺组织细胞凋亡上调可持续至第28d,于第14d前后达高峰。Fas/FasL mRNA表达与细胞凋亡呈同步改变。结论细胞凋亡及Fas/FasL mRNA表达的上调可能是博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的重要原因。     

肺纤维化鼠细胞凋亡及Fas/Bcl-2动态变化

目的 探讨细胞凋亡及Fas/Bcl-2在肺纤维化发病中的作用. 方法 选取SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组,每组各24只,应用博莱霉素(5 mg/kg)气管内注入建立实验性大鼠肺纤维化模型,对照组注入等量生理盐水,各组动物于7、14、28天随机处死8只,取肺组织采用HE染色观察病理变化,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡、RT-PCR和免疫组织化学法分别检测肺组织Fas/Bcl-2 mRNA以及蛋白的表达. 结果 实验性大鼠肺纤维化发病过程中,呈现典型的肺泡炎(7天)、肺泡炎与纤维化并存(14天)及稳定的肺纤维化(28天)等表现;同时间段模型组肺组织细胞凋亡指数、Fas mRNA及蛋白表达均显著高于对照组(P＜0.01).Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01);模型组细胞凋亡从7天开始逐步升高,第28天达最高峰,Fas蛋白与Fas mRNA表达趋势与细胞凋亡相同;模型组Bcl-2蛋白与Bcl-2 mRNA表达在第7天开始下降,第14天达最低峰,第28天略有回升(P＜0.05),但仍低于对照组(P＜0.01). 结论 肺泡及支气管上皮细胞凋亡与肺纤维化的形成有关,可能是肺纤维化的发病机制之一;Fas mRNA及蛋白表达上调和Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,可能引起肺上皮细胞的凋亡从而导致肺纤维化增生.     

阻断白介素-17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及肺组织Fas/FasL表达的影响

目的：探讨阻断白介素-17(interleukin-17,IL-17)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化、细胞凋亡和肺组织Fas/FasL表达的影响。方法：80只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组(SG)、BLM组(BG)、中和抗体组(NG)和抗体对照组(IG),经小鼠气管内一次性注入BLM诱导肺纤维化的形成,假手术组则给予等量生理盐水。NG和IG小鼠分别从造模前1天每隔3 d通过尾静脉给予抗鼠IL-17单克隆中和抗体或同型对照抗体,SG和BG则给予等量PBS。于造模后28 d,处死各组小鼠,取肺组织,通过Masson染色及羟脯氨酸含量测定评价各组小鼠肺纤维化程度,用流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测肺组织细胞凋亡和Fas/FasL的表达情况。结果：与BG和IG相比,NG小鼠肺纤维化程度明显减弱(P＜0.01),羟脯氨酸含量显著下降(P＜0.01),细胞凋亡率和Fas/FasL表达亦显著降低(P＜0.01)。结论：内源性IL-17被阻断后,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低细胞凋亡率和Fas/FasL表达,表明阻断IL-17对BLM诱导的小鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。     

肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL基因的表达

目的:检测大鼠肺纤维化时肺组织细胞凋亡及Fas/FasL 基因的表达,探讨细胞凋亡在肺纤维化过程中的作用.方法:通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR 和Western Blot法检测肺组织细胞凋亡、Fas/FasL mRNA以及蛋白的表达.结果:肺纤维化模型复制成功;模型组肺组织细胞凋亡率、Fas/FasL mRNA和蛋白表达均显著高于对照组.结论:细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的上调在博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的过程中起了重要作用.     

百草枯致大鼠肺纤维化肺组织内质网相关凋亡基因Caspase-12的表达

目的 观察内质网相关凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12） 在百草枯诱导肺纤维化模型大鼠肺组织中的表达。方法 30 只Spragne-Dawley（ SD） 大鼠随机分为对照组、14 d模型组和28 d 模型组。采用百草枯灌胃法复制肺纤维化模型。逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）检测肺内Caspase-12 mRNA 表达, 免疫组化检测其蛋白表达。HE 和Masson 染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度。结果 HE 和Masson 染色结果证实成功复制肺纤维化模型。模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重（ P 〈0. 01） 。与对照组比较, Caspase-12 表达在14 d 模型组中明显升高（ P 〈0. 01） , 在28 d 模型组中更高（ P 〈 0. 01） 。结论 百草枯中毒大鼠肺内质网相关凋亡基因Caspase-12 表达增高, 提示内质网应激在百草枯中毒引起的肺纤维化中发挥重要作用。     

虎杖对肺纤维化大鼠肺组织中SOD、GSH、MDA的影响

目的：通过观察虎杖干预后肺纤维化大鼠肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性及谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的影响,探讨虎杖防治肺纤维化的作用机制。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为5组：模型组30只,气管内一次性注入博莱霉素50.5mg/100g制作肺纤维化大鼠模型,当日予0.9%氯化钠溶液5ml/100g灌胃;预防组30只,于造模前2d开始予虎杖5ml/100g灌胃;肺泡炎组20只,于造模后第7天开始虎杖灌胃;肺纤维化组10只,于造模后第28天开始虎杖灌胃;对照组30只,于造模当日开始0.9%氯化钠溶液5ml/100g灌胃。各组大鼠灌胃均1次/d。5组大鼠分别于第3、7、14、28、42或56天分阶段处死5只,取肺组织制成匀浆,测定SOD活性及GSH、MDA的含量。结果模型组第3、7、14天肺组织中SOD活性及GSH含量低于对照组（均P＜0.05）,预防组上述指标较模型组升高（P＜0.05或0.01）,肺泡炎组、肺纤维化组与模型组的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。模型组第7、14天肺组织中MDA含量明显高于对照组和预防组（均P＜0.05）。结论虎杖能通过增强肺组织局部抗氧化能力,减轻博莱霉素诱导的肺泡炎和肺纤维化程度,可能是治疗肺纤维化的有效药物。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1及Smad2/7mRNA表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的作用及其机制。方法健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组及EGCG大、中、小剂量组,经气管内滴注博莱霉素复制肺纤维化模型,于造模后第2天开始给药,给药28 d后,取肺组织作病理形态学观察并测定其羟脯氨酸含量,采用RT-PCR法检测肺组织中转化生长因子（TGF）-β1、Smad2、Smad7 mRNA的表达。结果 EGCG各给药组大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻（P〈0.05或〈0.01）,羟脯氨酸含量明显降低（P〈0.05或〈0.01）。RT-PCR检测结果显示,EGCG给药组大鼠TGF-β1、Smad2表达下调（P〈0.05或〈0.01）,Smad7表达明显上调（P〈0.05或〈0.01）。结论 EGCG可减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化程度,其作用机制可能与其调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究

目的探讨芍药苷对Fas配体（FasL）诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响。方法采用1月龄SD大鼠（雌雄不拘）的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养。传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型。实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体（FasL）诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预。Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平。结果药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组（P〈0.01）,药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组（P〈0.01）。结论芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用及其机制探讨

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对博莱霉素（BLM）所致小鼠肺纤维化的干预作用及其相关机制。方法 32只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、EGCG治疗组和醋酸泼尼松阳性对照组,每组8只。采用气管内注射博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型。造模后,治疗组分别灌服相应的受试药物,假手术组和模型组灌服等量的生理盐水。28d后观察肺组织肺系数、羟脯氨酸（HYP）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量的变化;取固定部位肺组织做病理组织学检查;免疫组织化学技术测定肺组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和I型胶原（ColⅠ）蛋白的表达。结果给药治疗28d后,EGCG能明显降低肺系数（P〈0.01）、肺组织HYP含量（P〈0.01）和MDA含量（P〈0.05）,明显升高肺组织中GSH含量（P〈0.01）;病理组织学检查结果显示,EGCG组肺组织肺泡炎程度和肺组织纤维化程度明显减轻（P〈0.01,P〈0.05）;EGCG能明显抑制肺组织中α-SMA、TGF-β1和ColⅠ蛋白的表达（P〈0.01）。结论 EGCG对博莱霉素所致小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与抗氧化作用和降低TGF-β1蛋白的表达进而抑制肺肌成纤维细胞的活化有关。     

Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中的作用

目的 探讨Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗肾小球基底膜(CBM)肾炎中的作用.方法 复制大鼠抗GBM肾炎模型,在实验室的2、7、14、21和28 d,行以下处理:收集24 h尿、血清样本检测大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察肾组织病理变化;采用KT-PCR法和Western blot法检测肾组织中Fas、FasL和Caspase-3的表达情况;采用分光光度法检测肾组织中Caspase-3活性;采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况.结果 与正常对照组大鼠相比,肾炎模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量均明显升高(P<0.01);肾组织中Fas、FasLmRNA及其蛋白和Caspase-3mRNA及其蛋白活性均明显增加(P<0.01);肾组织中凋亡细胞数明显增多(P<0.01),且与Fas、FasL及Caspase-3表达呈正相关(P<0.01).结论 Fas/FasL诱导的细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中发挥重要作用.     

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制.方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组.实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化.结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P＜0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均＜0.01).肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P＜0.01).结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生.     

Fas/FasL途径在海水诱导大鼠肺组织细胞凋亡中的作用

目的通过观察和验证Fas/FasL信号途径对海水诱导大鼠肺组织细胞凋亡的影响,研究海水淹溺型肺损伤的致病机制。方法 24只大鼠随机分为正常对照组、2 h海水组和4 h海水组。2个海水处理组大鼠气管内注入4 ml/kg海水,分别作用2 h和4 h,测肺组织湿重/干重(W/D)比,采用HE染色观察肺组织病理形态改变,流式细胞仪检测肺组织细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分析Fas、FasL及活化caspase-3的蛋白表达。结果与正常对照组相比,海水可导致典型的肺组织损伤,海水作用下肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.01),Fas、FasL和活化caspase-3蛋白表达也显著上调(P<0.01)。结论海水可导致大鼠淹溺型肺损伤和肺组织细胞凋亡,Fas/FasL介导的死亡受体信号途径参与了凋亡的调控。     

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织相关凋亡基因表达的研究

目的 探讨bcl-1、bax、Fas、FasL凋亡相关基因在低氧肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其与发病的关系。方法 60只Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组；低氧肺动脉高压组；血晶素组；锡原卟啉；低浓度CO组；每组12只。采用组织的原位细胞凋亡、DNA片段检测，免疫组织化学染色，原位杂交等方法进行检测。结果 低浓度CO组和血晶素组肺组织有典型的DNA梯带，bcl-2、bax、Fas、FasL免疫组化显示的表达呈强棕黄色，比低氧组均显著升高，原位杂交可见，低浓度CO组和血晶素组肺内支气管和小血管壁细胞胞浆呈强的紫蓝色，bcl-2基因呈棕黄色，比低氧组降低，原位杂交可见呈紫蓝色，结论 CO可以调节bcl-2、bax、Fas、和FasL凋亡基因的表达，而这些凋亡基因又通过不同途径参与低氧肺动脉高压肺组织的细胞凋亡的调节，并在慢性阻塞性肺疾病的发生与发展中发挥重要作用。     

Fas／FasL、Bax及Bcl-2在1型糖尿病大鼠中的表达及其与凋亡的关系

目的探讨Fas／FasL、Bax及Bcl-2在1型糖尿病大鼠中的表达及其与凋亡的关系。方法链脲佐菌素诱导1型糖尿病大鼠模型,TUNEL法检测1型糖尿病大鼠（模型组）及其正常大鼠（正常组）胰腺组织的细胞凋亡,应用RT-PCR法及其免疫组化法检测Fas／FasLmRNA、Bcl-2／BaxmRNA及蛋白的表达情况。结果模型组胰腺组织中细胞的凋亡比正常组的大鼠多,Fas／FasLmRNA及BaxmRNA的表达水平在模型组的表达均比正常组显著提高,而Bcl-2mRNA的表达水平显著下降,两者相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。随血糖的升高,凋亡指数亦增加,Fas／FasLmRNA及BaxmRNA的表达升高,但Bcl-2mRNA的表达下降。结论Fas／FasL的表达及其细胞凋亡在大鼠l型糖尿病的形成中起着重要作用,Bax对凋亡起促进作用,Bcl-2对凋亡起抑制作用。     

肺气虚证模型大鼠肺组织细胞凋亡及Fas、FasL蛋白表达变化

目的:探讨肺气虚证细胞凋亡机制.方法:用两次气管内注入脂多糖(LPS)及熏香烟4周的复合刺激法复制肺气虚证大鼠模型,4周后对两组动物进行电镜观察和免疫组化检测.结果:与对照组比较,模型组可见肺组织细胞凋亡明显增加,Fas、FasL蛋白在肺组织中的表达明显上调.结论:Fas、FasL可能参与了肺气虚的发病及肺组织细胞凋亡的调控.     

Fas／FasL和颗粒酶B在口腔扁平苔藓中的表达及意义

OBJECTIVE: To define the association of the expressions of Fas/FasL and granzyme B with cell apoptosis in oral lichen planus (OLP) and progression of the disease. METHOD: Immunohistochemical method and TUNEL were employed to study the expressions of Fas, FasL and granzyme B and cell apoptosis in 50 OLP cases (including 20 cases of atrophic-erosive OLP and 30 nonerosive OLP cases) and 10 normal oral mucosa specimens. RESULTS: Compared with the control group, the OLP cases showed increased apoptotic index (AI, 95.32+/-28.99) in the epithelial layer and the decreased AI (35.12+/-9.89) in the lamina propria (P<0.05), with the apoptotic cells confined within the basal or suprabasal cell layer instead of the superficial cell layer in the control group. The positivity rates of FasL and granzyme B expression were both 68/ in the lamina propria of the OLP cases, remarkably higher than those in the normal control group (P<0.05); significantly higher rates were noted in atrophic-erosive than in nonerosive OLP cases (P<0.05). CONCLUSIONS: The AI significantly differs between the epithelial layer and lamina propria in OLP cases, for which the expressions of Fas, FasL and granzyme B might be held responsible. The over-expressions of FasL and granzyme B are closely related to the progression of OLP.     

p38／Fas／FasL对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用

目的探讨p38／Fas／FasL对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用。方法SD大鼠20只随机分成2组（假手术组、模型组）,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,30min后剪断结扎线制作心肌缺血再灌注模型。对心肌组织进行苏木精一伊红（H—E）染色,观察心肌组织病理变化;免疫印迹（WesternBlotting）检测Fas、Fas配体（FasL）、p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及磷酸化p38MAPK（P—p38MAPK）在缺血再灌注心肌组织中的表达;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡模型。结果H—E染色结果显示,模型组心肌纤维变性;Western Blotting结果显示模型组大鼠心肌组织中Fas、FasL、p38MAPK及P—p38MAPK蛋白的表达明显增高;TUNEL结果显示模型组的心肌组织中细胞凋亡明显增多。结论心肌缺血再灌注时Fas、FasL、p38MAPK和P—p3SMAPK表达明显增多,且与细胞凋亡率呈正相关,提示心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡可能是通过激活Fas／FasL／p38MAPK途径实现的。     

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠,建立不同严重程度的急性胰腺炎模型,用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,且呈现共区域化特点,凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织,Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高．腺泡细胞凋亡指数亦明显提高,随胰腺炎症程度的加重,Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降．腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳;是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。     

反义寡核苷酸抑制MMP7基因表达对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性影响的研究

目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP7)反义寡核苷酸(antisense ligodeoxynucleotide,ASODN)对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP7ASODN,通过脂质体导入A549细胞后,RT-PCR检测MMP7 ASODN对MMP7 mRNA表达的影响;流式细胞仪检测其对细胞膜Fas抗原表达率的影响;加入重组FasL,诱导凋亡,流式细胞仪检测凋亡率。结果RT-PCR结果表明,MMP7 ASODN转染能显著抑制A549细胞MMP7 mRNA表达。流式细胞仪检测表明,MMP7ASODN转染A549细胞后,与未转染组和错义寡核苷酸(scrambled oligodeoxynucleotide,SCODN)组比较,细胞膜Fas蛋白表达率增高,有显著性差异(P<0.01)。加入重组FasL,诱导细胞凋亡,细胞凋亡率明显增高,与未转染组和SCODN组有显著性差异(P<0.01)。结论MMP7ASODN可以抑制肺腺癌A549细胞株MMP7基因的表达,上调细胞膜Fas抗原表达,增强A549细胞凋亡敏感性。