大豆胰蛋白酶抑制剂对大鼠胰岛分离纯化的影响

目的探讨大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）在大鼠胰岛分离纯化中对胰岛产量及功能的影响。方法按胶原酶中是否加入STI将大鼠分为实验组和对照组，实验组在胶原酶消化液中按2．0mg／ml加入STI，对照组不添加STI。2组均运用胶原酶原位灌注大鼠胰腺的方法来分离胰岛，使用Ficoll-400用非连续梯度离心法纯化胰岛，将纯化前、后获得的胰岛进行计数，并对纯化后的胰岛进行形态、功能检查。同时进行大鼠同种异体胰岛移植观察其体内功能。结果实验组和对照组在消化后纯化前所得胰岛数量无明显差别[（624±38．2）IEQVS（586±37．7）IEQ，P〉0．053；在纯化后实验组与对照组所得胰岛数量[（408±28．3）IEQVS（189±27．1）IEQ，P〈0．05]和纯度[（93±2．4）％VS（75±2．1）％，P〈0．05；差异有统计学意义。实验组与对照组最终所得胰岛的体外功能差异无统计学意义（P〉0．05），体内功能实验结果差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论使用在胶原酶中加入STI的消化液原位灌注大鼠胰腺，可以明显提高大鼠胰岛的最终产量和纯度，但对胰岛的功能无明显影响。     

胰腺移植和胰岛移植的现状

糖尿病是临床常见病 ,据推测至 2 0 10年全球糖尿病患者预计将超过 3 .5亿 ,其中 5 %～ 10 %的患者将因糖尿病晚期出现的糖尿病肾病、视网膜病变、微血管病变和神经末梢病变等并发症而直接影响生命 ,因此糖尿病及其并发症作为一项重要而艰巨的课题仍然困扰着广大医务工作者。胰腺移植和胰岛移植能增加患者胰岛素分泌细胞 ,从而有效地控制血糖 ,防止和改善糖尿病的并发症 ,提高生活质量 ,是治疗胰岛素依赖性糖尿病 (IDDM )的有效手段[1,2 ] 。现就胰腺移植和胰岛移植的现状综述如下。1　胰腺移植的现状自 1966年 12月Kelly等[3 ] 实施了首…     

胰岛和胰岛干细胞的微创移植

目前 ,I型糖尿病的常规治疗方法是应用外源性胰岛素注射控制血糖。胰岛素注射不能完全控制血糖和远期并发症 ,因为常有血糖波动和低血糖发生 ,而且患者难免遭受注射所带来的不便和痛苦。全胰腺移植始于 2 0世纪 6 0年代初期 ,到 2 0 0 0年全球实施了近 1 0 0 0例手术[1 ] ,虽然患者移植后 1年生存率和移植功能存活率逐渐提高 ,但胰腺单独移植存活率低 ,只有与肾或其它脏器联合移植才能获得较高的成活率[2 ,3 ] 。尽管胰腺移植是一种有效的治疗方法 ,但要求条件高 ,损伤大 ,费用高 ,而且只有少数单位能够承担此项工作 ,难以普及。另外 ,还受…     

预防性添加胰蛋白酶抑制剂对成年猪胰岛分离的影响

目的　开发成年猪胰岛分离方法。方法　取成年猪胰体尾部,胰管内注入0.1%冷胶原酶(type Ⅺ)消化液, 在38.5 ℃水箱中消化后,放入4 ℃Hanks液中分离并用600μm的滤过网过滤。残留的组织重新悬浮在冷Hanks液中,并放入Ricordi’s chamber内振荡5 min后再次过滤。胰岛分离分为对照组(n=14)、Pefabloc(胰蛋白酶抑制剂)组(n=8)及FOY(胰蛋白酶抑制剂)组(n=5)。Pefabloc组和FOY组消化液中分别添加1.0 mmol/LPefabloc或FOY。结果　Pefabloc组及FOY组的胰岛收获量分别为(11 848±3 530) 个/g 和(14 496±3 693)个/g,明显高于对照组的(8 505±3 349) 个/g,P<0.05。消化后的消化液胰蛋白酶活性对照组为(114.7±50.0)BAEEU,明显高于胰管内注入前的(4. 0±1. 8) BAEEU 及Pefabloc 组的(5. 5±2. 7) BAEEU(P<0. 01),但Pefabloc组与胰管内注入前却差异无统计学意义。对照组胰岛收获量≥8 000 个/g组的胰蛋白酶活性明显低于收获量<8 000 个/g组的活性〔(78.3±26.7) BAEEU vs (137.5±48.4) BAEEU〕,P<0.05。对照组、Pefabloc组及FOY组纯化后的胰岛对不同浓度葡萄糖显示了良好的胰岛素分泌能力。结论　本实验采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞,而且预防性添加胰蛋白酶抑制剂后进一步稳定地提高了胰岛收获     

胰岛移植和胰岛干细胞研究现状

近年来,糖尿病患病率在全球呈现快速增长的趋势,我国人口患病率已接近5％,与发达国家类似。糖尿病已经成为患者和社会的巨大负担。目前,几乎所有1型糖尿病和部分胰岛素依赖的2型糖尿病患者都需要应用外源性胰岛素注射来控制血糖。严格控制血糖不能保证血糖稳定,亦不能避免远期并发症的发生,同时可能导致低血糖晕厥发作相对增多。因此,重建内源性胰岛素分泌系统是近年来研究者关注的热点。全胰腺移植始于20世纪60年代初期,     

大鼠胰岛与神经生长因子共微囊提高异种移植胰岛存活率的实验研究

目的:探讨神经生长因子(NGF)与大鼠胰岛共微胶囊对提高皮下异种移植胰岛功效的作用.方法:选取C57 BL/6雄性小鼠皮下预血管化糖尿病模型20只,行微胶囊大鼠胰岛皮下移植.随机分为4组,每组5只.①A组:NGF与大鼠胰岛共微囊组;②B组:微胶囊大鼠胰岛组;③C组:大鼠胰岛移植组;④D组:空囊移植组.观察受体小鼠的血糖和体重变化,移植后8周比较微胶囊内胰岛存活数.结果:A组和B组间各时间点小鼠血糖均无显著差异(P>0.05),A组和B组间各时间点小鼠体重均无显著差异(P>0.05).C组和D组移植无效.移植后8周将糖尿病小鼠处死,两组间胰岛存活数有非常显著差异(F=19.84,P<0.01).结论:NGF与大鼠胰岛共微胶囊移植治疗糖尿病小鼠可有效缓解糖尿病小鼠高血糖状态,NGF可显著提高囊内胰岛的功能和胰岛存活数.     

胰岛和胰岛干细胞移植的研究进展

随着免疫学、分子生物学等相关学科不断发展,目前胰岛移植和胰岛干细胞研究取得了相当大的进展,文中将就研究的现状、面临的问题及其可能解决途径等进行综述。     

西罗莫司和FTY720对成人胰岛细胞毒性作用的体外研究

目的 探讨西罗莫司（SRL）和FTY720在体外培养试验中对成人胰岛细胞的毒性作用。方法 取成人尸体胰腺，用Liberase胶原酶消化，采用Ficoll密度梯度法纯化胰岛细胞。再将其分别与不同浓度的FTY 720（3、6、15μg／L）和SRL（3、6、15μg／L）共同培养，并设不用任何药物的对照组。各组用低糖和高糖刺激胰岛素分泌，以酶联免疫（ELISA）法检测各培养液中胰岛素的含量，并进行比较分析。结果 各组在高糖刺激下的胰岛素分泌量均大于低糖刺激下的胰岛素分泌量（P〈0．05）。在低糖和高糖刺激时，FTY720和SRL之间及同一免疫抑制剂不同浓度之间的胰岛素分泌量相比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；各组与对照组比较，差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论 FTY720和SRL对成人胰岛细胞无明显的毒性作用。FTY720和SRL可作为临床胰岛细胞移植后的主要免疫抑制剂。     

乌司他丁在大鼠胰岛分离过程中的保护作用

目的探讨乌司他丁在大鼠胰岛分离中的保护作用。方法用含胶原酶的Hanks溶液灌注大鼠胰腺。根据胶原酶中乌司他丁的含量分为3组。低浓度组:胶原酶中含乌司他丁2500U/ml;高浓度组:胶原酶中含乌司他丁5000U/ml;对照组:胶原酶中不含乌司他丁。将各组分离出的胰岛进行比较。结果加用乌司他丁的两组分离出的胰岛在形态、数量方面均优于对照组(P<0.01)。在无糖、低糖、高糖和茶碱 高糖刺激下,加用乌司他丁的两组胰岛素的释放量优于对照组(P<0.01)。结论用乌司他丁灌注胰腺对大鼠胰岛分离具有保护作用。     

胰岛移植治疗糖尿病的研究进展

Islet transplantation is effective in treating diabetes, however, its clinical use is highly restricted by a series of influencing factors. This review elucidates the non-immune factors including islet purification, instant blood-mediated inflammatory response and revascularization deficit on the development of islet transplantation, and also highlights the application and perspective of islet xenotrasplantation in the treatment of diabetes.     

胰岛移植即刻经血液介导的炎症反应应对策略

胰岛移植作为治疗1型糖尿病和终末期2型糖尿病的有效手段,可以使患者获得较好的血糖控制能力。即刻经血液介导的炎症反应(IBMIR)是胰岛移植早期出现的非特异性炎症反应,发生后可迅速出现凝血级联和补体系统激活、炎症细胞聚集等,造成大量移植胰岛丢失,严重影响胰岛移植的疗效。如何减轻IBMIR对胰岛造成损伤是目前胰岛移植的研究热点,临床推荐的治疗胰岛移植IBMIR的药物有肝素和肿瘤坏死因子-α抑制剂依那西普。新近研究表明多种方法和药物可以减轻IBMIR对胰岛的损伤,本文就这些临床研究成果和临床前研究成果进行综述,以期为胰岛移植IBMIR的应对提供参考。     

扶芳藤含药血清对大鼠胰岛细胞的保护机制

目的  探讨扶芳藤含药血清对大鼠胰岛细胞的保护作用及其机制。方法  将40只雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只,包括对照组（正常大鼠胰岛细胞予正常大鼠血清培养）、缺血预处理组（获取胰腺前阻断腹主动脉再开放,胰岛细胞予正常大鼠血清培养）、扶芳藤治疗组（正常大鼠胰岛细胞予大鼠扶芳藤含药血清培养）、扶芳藤组和空白组（正常大鼠分别予扶芳藤提取物或蒸馏水灌胃,用于制备大鼠血清）。采用双硫腙（DTZ）染色法观察并计算胰岛数量;采用吖啶橙（AO）/碘化丙啶（PI）染色法,计算胰岛细胞存活率;采用胰岛素释放实验计算刺激指数（SI）来评价胰岛细胞功能;采用谷胱甘肽（GSH）及一氧化氮（NO）试剂盒测定胰岛细胞内GSH、NO含量;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）信使核糖核酸（mRNA）的表达水平。结果  经DTZ染色后胰岛细胞呈特异性猩红色,各组间胰岛细胞数量比较,差异无统计学意义（均为P > 0.05）。随培养时间延长,各组胰岛细胞活性均逐渐降低,分离培养72 h后,与对照组比较,扶芳藤治疗组细胞存活率更高,差异有统计学意义（P < 0.05）。胰岛素释放实验检测结果提示,与对照组相比,缺血预处理组及扶芳藤治疗组的SI均升高,差异均有统计学意义（均为P < 0.05）。与对照组比较,缺血预处理组及扶芳藤治疗组胰岛细胞的GSH含量均升高、NO含量均降低、iNOS mRNA表达水平均降低,差异均有统计学意义（均为P < 0.05）。结论  扶芳藤能通过提高GSH、降低iNOS表达及NO产生,提高胰岛细胞存活率,增强胰岛功能。     

Successful simultaneous transplantation of kidney and fetal pancreatic islet masses

This paper reports our experience with the successful simultaneous transplantation of kidney and fetal pancreatic islets in a 46-year-old diabetic man. No detectable C-peptide level was noted and the end-stage nephropathy required hemodialysis. The cadaver kidney and two masses of 8-week-cultured fetal islets were grafted simultaneously. After revascularization of the kidney, the islet masses were placed under the kidney capsule. Following transplantation, islet function was demonstrated by a higher C-peptide level, which subsequently persisted. Twenty-four months after grafting, islet function was provoked by glucagon and glucose, which led to elevations in the C-peptide and insulin levels. The insulin requirement fell from 58 to 24 U/day during the post-transplant period of 24 months. The mean value of HbA_1c (5.6%±0.3%) indicated a constantly normal carbohydrate metabolism. Improvements in retinopathy were also noted. Three periods of kidney rejection were diagnosed, but these proved reversible with high-dose steroid treatment. The serum and urine beta-2-microglobulin levels correlated well with rejection and recovery. More than 2 years after grafting, kidney function is in the normal range. On sonography, the transplanted islet masses were repeatedly clearly visible, and 24 months following transplantation the volume was twice the original one. The results indicate that simultaneous kidney and fetal pancreatic islet grafting is advantageous in end-stage nephropathy secondary to type I diabetes mellitus.     

胰岛细胞封装技术的研究进展

糖尿病发病率呈上升趋势,临床治疗极具挑战性。虽然药物降糖具有一定疗效,但存在血糖波动的危险,1型糖尿病的临床治愈仍难以实现。胰岛细胞移植是解决胰岛素注射引起的血糖波动问题的有效方法之一。然而,在胰岛细胞移植的临床实践中存在受者需要长期服用免疫抑制剂、移植后胰岛细胞大量丢失等问题,目前并未在临床广泛使用。胰岛细胞封装技术可减少胰岛细胞丢失,减少或消除排斥反应,是提高胰岛细胞存活率的关键环节。本文简要回顾了胰岛细胞封装技术的发展历程,分析了不同胰岛细胞封装技术面临的挑战,并对今后的研究加以展望,旨在为促进胰岛细胞移植的发展提供参考。     

Improved islet yield and function with ductal injection of University of Wisconsin solution before pancreas preservation

BACKGROUND: Ensuring sufficient islet yield from preserved pancreases is a critical step in clinical islet transplantation. The aim of this study was to investigate whether pancreatic ductal injection, performed at procurement, using a small volume of preservation solution before cold storage (ductal preservation method) would improve islet yield and function from rat pancreases preserved for 6 and 24 hr. MATERIALS AND METHODS: Islets were isolated from Lewis rats. Pancreases were classified into five groups: fresh (group 1); preserved for 6 hr in University of Wisconsin solution without and with ductal preservation (groups 2 and 3); and preserved for 24 hr in University of Wisconsin solution without and with ductal preservation (groups 4 and 5). We assessed islet yield, function, and viability of pancreatic ductal cells. RESULTS: Islet yields per pancreas in groups 1 to 5 were 2010+/-774, 674+/-450, 1418+/-528, 527+/-263, and 1655+/-618 (islet equivalent) (+/-SD), respectively. Stimulation indices in groups 1 to 5 were 11.97+/-3.17, 6.48+/-4.04, 12.44+/-5.65, 2.56+/-2.03, and 5.55+/-2.71. Functional success rates in groups 1 to 5 were 100%, 0%, 100%, 0%, and 66.7%. Percentages of nonviable pancreatic duct cells in groups 1 to 5 were 3.8+/-2.7%, 59.7+/-4.4%, 19.5+/-7.3%, 64.7+/-4.5%, and 17.2+/-2.6%. In all experiments, the differences were significant between the groups without versus the groups with ductal preservation (P<0.05, group 2 vs. group 3 and group 4 vs. group 5). CONCLUSIONS: Ductal preservation improved islet yield and function after 6 and 24 hr of preservation. Well-preserved pancreatic ducts maintained good distribution of collagenase solution.     

大鼠胰岛转染人血红素氧合酶-1基因对同种胰岛移植的影响

目的探讨大鼠胰岛转染人血红素氧合酶-1(HO-1)基因在胰岛移植中的潜在应用价值。方法采用携带人HO-1基因的腺病毒对新分离的SD大鼠胰岛细胞进行转染;对体外培养的胰岛细胞使用重组人肿瘤坏死因子α及放线菌酮诱导凋亡。使用流式细胞术检测凋亡率;每只链脲霉素诱导的糖尿病模型大鼠门静脉内置入约1200个胰岛当量的胰岛后,观察糖尿病大鼠血糖及体重变化;免疫组织化学法检测肝内移植胰岛细胞的胰岛素、HO-1蛋白表达及表达CD3抗原的淋巴细胞浸润情况。结果转染人HO-1基因的胰岛细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);单纯胰岛细胞移植后移植物存活时间为(5.33±4.18)d,转染人HO-1基因的胰岛细胞移植后移植物存活时间为(10.56±4.33)d,两组比较,P<0.05;转染人HO-1基因的胰岛细胞培养48 h即见人HO-1蛋白表达;肝内移植7 d后移植物有人HO-1蛋白表达;移植胰岛周边及胰岛内淋巴细胞浸润程度较单纯胰岛移植组明显减轻。结论大鼠胰岛转染人HO-1基因能够增加体外培养胰岛细胞的抗凋亡能力,并能延长体内移植胰岛的存活时间,减轻淋巴细胞对胰岛的浸润。     

胃黏膜下层胰岛移植物的生存率与功能的实验研究

目的 探讨胃黏膜下层胰岛移植的可行性.方法 应用雄性Wistar-Furth大鼠,STZ介导糖尿病大鼠模型.同种同基因大鼠体外胰岛分离纯化,分别移植进入糖尿病大鼠胃黏膜下层或肾被膜下,移植后不同时间段评估移植物生存率与代谢功能.结果 移植后早期移植胰岛被有效确认,并迅速分泌胰岛素逆转大鼠高血糖状况,糖耐受功能良好,与肾被膜下移植组比较,差异无显著意义.移植后4周,胃黏膜下移植组胰岛移植物胰岛素分泌功能逐渐丧失.结论 胃黏膜下胰岛移植技术具有良好的开发前景,如何提高其远期效果有待进一步考证.