miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的 研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法 收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用 qRT-PCR 法检测肝癌组织中 miR-424-5p,ATG14 的表达。培养人肝癌细胞系 HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组）,干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）;HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组）,另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14组（mi-miR-424-5p +ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果 在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P<0.05）;干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P<0.05）;miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）;过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）。结论 miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。     

肝癌细胞系Huh-7中EpCAM~+细胞亚群的肿瘤干细胞样特性

目的:观察从肝癌细胞系Huh-7中分选出的EpCAM+细胞亚群的肿瘤干细胞样特性。方法:采用免疫磁珠法从Huh-7细胞中分离EpCAM+和EpCAM-细胞亚群,比较其体外增殖、克隆形成、分化、耐药和体内成瘤能力。结果:EpCAM+细胞体外增殖能力强于EpCAM-细胞(P<0.001);EpCAM+细胞克隆形成数高于EpCAM-细胞(P<0.001);分选后随着培养时间的延长,EpCAM+细胞的比率逐渐降低;加入顺铂培养后,EpCAM+细胞亚群的比率增加(P<0.001);1×103个EpCAM+细胞接种裸鼠皮下4周即可成瘤,而在相同条件下,EpCAM-细胞至少需要接种1×105个和接种更长的时间才能成瘤。结论:EpCAM+细胞亚群具有肝癌干细胞样特性,EpCAM可作为分离纯化肝癌干细胞的一个标志物。     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-218在调控肝癌的形成和发展中的功能

目的:探讨miR-218在肝癌形成和发展中的功能。方法:将miR-218 mimics转染后肝癌细胞株后,检测其细胞增殖及细胞周期。并构建稳定过表达的miR-218慢病毒载体,感染肝癌细胞后得到稳定细胞株,并通过克隆增生检测其增殖情况。将miR-218稳定表达的肝癌细胞注射到裸鼠背部皮下,通过测定肿瘤体积、重量及免疫组化来评估其对肝癌形成发展的影响。结果:miR-218 mimics抑制细胞增殖及引起细胞周期抑制,稳定过表达miR-218抑制肝癌细胞的克隆增生,并且在裸鼠体内异位成瘤,过表达miR-218组显示出较小的肿瘤,显示出其对肿瘤的抑制效果。结论:miR-218体内体外抑制肝癌形成和发展。     

上调miR-27b表达对人肝癌Huh7细胞系增殖的影响

目的 通过在肝癌Huh7细胞系中上调miR-27b的表达,观察miR-27b对肝癌Huh7细胞系增殖及STK3表达的影响。 方法 人工合成miR-27b过表达慢病毒,感染肝癌Huh7细胞。利用CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力。定量PCR检测STK3 mRNA表达,Western Blotting检测STK3蛋白表达。 结果 miR-27b过表达组Huh7细胞增殖活性明显高于阴性对照组和空白对照组;miR-27b过表达组STK3 mRNA表达、STK3蛋白表达低于阴性对照组和空白对照组。 结论 上调miR-27b表达可促进肝癌细胞增殖,其机制可能与抑制STK3表达相关。     

稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型的建立及意义

目的利用慢病毒表达载体建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系,探讨miR-27b对结直肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法构建miR-27b过表达重组慢病毒载体,经包装病毒后感染结直肠癌细胞SW480,利用流式细胞仪分选获得绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞并荧光定量PCR检测miR-27b表达情况,建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系;通过MTT法和Transwel检测过表达miR-27b后细胞体外增殖、侵袭能力的变化。结果稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞中miR-27b的表达水平是空载体对照细胞中miR-27b的5.02倍;与对照细胞相比,miR-27b过表达能够促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论成功建立了稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型,为深入研究miR-27b在结直肠癌发生发展过程中的作用、调控靶基因和相应的作用机制奠定了基础。     

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

 目的  探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法  应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果  CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA 566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论  CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。     

miR-497抑制肝癌细胞的侵袭与转移

目的:检测miR-497/IGF-1R在肝癌中的表达并探讨其在肝癌侵袭与转移中的作用?方法:定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中miR-497的表达,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中miR-497/IGF-1R mRNA的表达水平,免疫组织化学及Western blot检测肝癌与肝癌细胞系中IGF-1R蛋白表达,通过过表达或干扰肝癌细胞系中miR-497的表达,分析其对肝癌细胞侵袭与转移的作用?结果:肝癌组织中miR-497表达水平低于癌旁组织?与无脉管转移组相比,有脉管转移组降低更为明显?同时在肝癌细胞系也有相似的结果,高侵袭性肝癌细胞系MHCC-97H中降低最为明显?IGF-1R在肝癌组织及肝癌细胞系中表达增加?过表达miR-497能降低MHCC-97H中IGF-1R的表达,抑制其侵袭和转移;干扰miR-497表达能增加IGF-1R表达,促进SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:miR-497在肝癌组织中表达降低,过表达miR-497能下调IGF-1R,抑制肝癌的侵袭与转移,miR-497可能为治疗肝细胞肝癌提供新的靶点?     

食管肿瘤干细胞的分选及鉴定的实验研究

目的 进行人食管肿瘤干细胞(CSCs)的分选及鉴定.方法 通过获取人食管癌标本进行肿瘤细胞的培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管肿瘤细胞(ECCs)中的表达,应用磁珠分选法(MACS)进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,研究p75NTR阳性细胞的增殖、分化、软琼脂集落形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力.结果 在8个食管肿瘤细胞系(株)中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系(株)中检测到p75NTR阳性细胞为0.32%～3.35%.MACS分选后的p75NTR阳性细胞的增殖能力明显强于阴性细胞[群体倍增时间分别为(17±3)h、(37±7)h,P<0.01];p75NTR阳性细胞具有分化产生其他表型细胞的能力;p75NTR阳性细胞在软琼脂中的集落形成能力(45.9%±8.9%)显著高于阴性细胞(3.7%±2.1%),P<0.01;行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,SHEC-7细胞只需2×103个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍.结论 人ECCs中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,并具有较强的致瘤能力,p75NTR阳性细胞具有CSCs的特性.     

miR-129-5p通过靶向SALL4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的：探讨miR-129-5p在肝细胞癌（HCC）发展中的作用及其机制。方法：通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测miR-129-5p在正常血清及肝癌患者血清、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况。采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics转染至人肝癌细胞HCCLM3细胞,应用Western印迹检测人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达。通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验和Transwell实验等检测在体外过表达miR-129-5p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。此外,通过生物信息学工具、数据库分析和荧光素酶报告基因检测实验,探索miR-129-5p在HCC中的靶点,并探讨靶点SALL4是否介导miR-129-5p对HCC细胞的作用。结果：与正常血清相比,肝癌患者血清miRNA-129-5p表达量显著降低（t=13.32,P<0.001）,与LO2相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B、HCCLM3、BEL-7402和QGY-7703的miR-129-5p表达量均显著降低（...     

miRNA-381靶向HMGB1对IHH-4细胞生长侵袭及迁移的影响

目的探究微小RNA-381 (miR-381)调控高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞生长、侵袭及迁移的影响。方法购置甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞及正常甲状腺细胞Nthy-ori-3各1株,取第3代细胞培养48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-381和HMGB1在甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000转染miR-381 mimic后,检测IHH-4细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。每孔按2×105/m L细胞密度接种IHH-4细胞,分为IHH-4组(甲状腺乳头状瘤细胞IHH-4组)、miR-381 mimic组(miR-381 mimic转染组)、pc-HMGB1组(HMGB1过表达转染组)、mimic+pc-HMGB1组(miR-381 mimic和pc-HMGB1共同转染组),每组设3个复孔,采用CCK8法检测各组IHH-4细胞活性,Transwell及划痕实验分别检测IHH-4细胞侵袭及迁移能力,免疫印迹法检测IHH-4细胞中Ki67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达水平。结果与Nthy-ori-3细胞比较,IHH-4细胞中miR-381mRNA水平降低,HMGB1 mRNA水平升高,差异有统计学意义(P <0. 01)。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组miR-381表达增加(P <0. 01)。miR-381和HMGB1存在靶向关系。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE表达均降低(P均<0. 01),pc-HMGB1组上述指标均升高(P均<0. 01);与miR-381mimic组相比,mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE水平也明显上升(P均<0. 01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制IHH-4细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-940慢病毒表达载体的构建以及对鼻咽癌细胞的影响

目的 构建microRNA-940(miR-940)的慢病毒表达栽体,制备重组慢病毒感染人鼻咽癌细胞5-8F,检测其对细胞迁移和增殖的影响。方法 构建慢病毒载体,包装后感染人鼻咽癌细胞,通过加药筛选方法获得稳定过表达miR-940的人鼻咽癌细胞株5-8F/miR-940。实时定量PCR(RT-PCR)检测miR-940的表达量。MTT测定miR-940对5-8F体外增殖的影响。划痕试验检测miR-940对5-8F迁移的影响。结果 构建稳定过表达miR-940的慢病毒表达栽体。MTT证明miR-940可以抑制5-8F在体外的增殖。划痕试验说明miR-940可以抑制5-8F的迁移能力。结论 miR-940能够抑制5-8F在体外的增殖以及迁移能力。     

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭

目的 探索microRNA145（miR-145）对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系。方法 选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力。Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况。结果 转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低（P<0.05）,c-Myc蛋白表达也明显较低（P<0.05）。结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力。总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点。     

MicroRNA-544在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 明确微RNA-544(microRNA-544,miR-544)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡、克隆形成及成球能力的影响,探讨其在肝癌发生、发展中的作用.方法 利用qPCR法检测二乙基亚硝胺(DEN)造模的大鼠肝组织和人肝癌组织与癌旁组织以及成球培养后肝癌干细胞球中miR-544的表达;肝癌细胞株Hep3B转染miR-544mimic或miR-544 inhibitor后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.肝癌细胞转染miR-544mimic后成球培养观察细胞形成肿瘤干细胞球能力的变化.结果 MiR544在DEN造模大鼠肝组织及人肝癌组织中的表达分别较未造模大鼠肝组织(P＜0.05)和癌旁组织(P＜0.01)下调.过表达miR-544可抑制肝癌细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01)和平板克隆形成能力(P＜0.05),并促进细胞凋亡(48 h和72 h,P＜0.01);而在肝癌细胞中抑制miR-544的作用可促进肝癌细胞的增殖(P＜0.01)和克隆形成能力(P＜0.05).在富集肝癌干细胞的成球培养中,miR-544的表达下调(P＜0.05);而过表达miR-544可抑制肝癌细胞形成干细胞球(P＜0.05).结论 MiR-544在肝癌组织中表达下调,且可抑制肝癌细胞的多种恶性生物学行为,提示其可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌作用.     

miR-23a调控ESRP1干预直肠癌细胞增殖和凋亡

目的 分析微小RNA-23a （microRNAs-23a,miR-23a）在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及miR-23a对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。方法 采用qRT-PCR检测miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用qRT-PCR检测miR-23a在直肠癌SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a抑制剂（inhibitor） RNA片段和抑制剂阴性对照RNA片段（inhibitor negative control,inhibitor NC）,并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率;Western blot法检测上皮剪接调节蛋白1（epithelial splicing regulatory protein 1,ESRPl）蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建野生型pGL3-ESRP1-3''UTR （wt-pGL3-ESRP1-3''UTR）或突变型pGL3-ESRP1-3''UTR （mut-pGL3-ESRP1-3''UTR）质粒,HEK293和SW480细胞经上述质粒分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染后测定双荧光素酶活性。结果 与癌旁正常组织相比较,miR-23a在直肠癌组织中的相对表达水平明显上调,差异有统计学意义（P=0.000）;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调,差异有统计学意义（P=0.000）;SW480细胞转染miR-23a inhibitor后,细胞增殖较inhibitor NC组下降35.54%±5.27%,两组结果差异有统计学意义（P=0.000）;转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显高于inhibitor NC组（P=0.000）;荧光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;SW480细胞转染inhibitor NC后对ESRP1蛋白表达无明显影响,而转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高。结论 miR-23a在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著升高,miR-23a可通过下游靶基因ESRP1从而调控直肠癌细胞增殖和凋亡。     

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的 通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法 应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G₀/G₁期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

miR-143通过负向调控Bcl-2抑制食管癌细胞的增殖

目的探讨miR-143通过负向调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)抑制食管癌细胞的增殖。方法 RTPCR法检测食管癌细胞TE-1、EC109、EC9706、KYSE150、KYSE510、SEG-1及人正常食管上皮细胞HEEC中miR-143表达,使用脂质体Lipofectamine~(TM) 2000将miR-143 mimics和miR-143 NC转入EC9706细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-143表达,CCK-8法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 miR-143在食管癌细胞TE-1,EC109,EC9706,KYSE150,KYSE510及SEG-1中的表达量[(1.36±0.13),(1.08±0.10),(0.89±0.09),(0.95±0.09),(1.32±0.14),(0.96±0.11)]显著低于miR-143在人正常食管上皮细胞HEEC(2.38±0.15)中的表达量(P0.01)。与miR-143 NC组比较,miR-143 mimics组miR-143表达量显著升高(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞增殖能力降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时Bcl-2蛋白及mRNA表达量显著降低(P0.01)。结论miR-143过表达能通过下调Bcl-2表达抑制EC9706细胞增殖。     

MicroRNA-340在肝细胞肝癌中抑制细胞增殖并促进凋亡

目的 探讨微RNA-340(miR-340)在肝细胞肝癌中的表达特点及其对细胞生物学行为的影响.方法 收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2015年3月至2016年9月收治的40例肝细胞肝癌患者手术后切除的癌组织和癌旁组织标本.通过qPCR检测组织标本中miR-340的表达,并分析miR-340表达与临床病理学指标的关系.分别培养肝癌细胞株Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721以及正常肝细胞株HL-7702,48 h后使用qPCR检测5种细胞中miR-340的表达水平.通过转染增加或抑制SMMC-7721细胞中miR-340的表达,然后分别于细胞培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.通过生物信息学软件预测miR-340的靶基因,并使用qPCR和蛋白质印迹法进一步验证miR-340对靶基因的作用.结果 癌组织中miR-340的表达低于癌旁组织(P＜0.01),并且miR-340的表达与乙肝表面抗原、HBV DNA载量、肿瘤大小以及临床TNM分期有关(P＜0.01).正常肝细胞HL-7702内miR-340的表达高于4种肝癌细胞Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721(P＜0.05,P＜0.01).增加miR-340表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01),而抑制miR-340的表达则促进SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01);增加miR-340的表达可促进SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01),而抑制miR-340则减少凋亡(P＜0.01).生物信息学分析显示S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因是miR-340下游的一个靶基因.qPCR和蛋白质印迹分析结果显示增加SMMC-7721细胞中miR-340的表达可抑制SKP2的mRNA和蛋白表达,抑制miR-340表达则增加SKP2的mRNA和蛋白表达.结论 miR-340的异常表达可能与乙肝病毒的感染有关,其异常表达有助于评价病情以及预后.在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中,miR-340能够抑制细胞增殖并促进凋亡,这一作用结果可能是通过miR-340对SKP2的抑制而实现的.     

MicroRNA-30e-5p通过下调泛素特异性蛋白酶22抑制非小细胞肺癌的发生和发展

目的 探讨microRNA-30e-5p(miR-30e-5p)是否可通过下调泛素特异性蛋白酶22(USP22)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)的发生和发展.方法 采用qPCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法检测miR-30e-5p、USP22在NSCLC组织和癌旁组织中的表达.NSCLC细胞株H460转染miR-30e-5p模拟物或miR-30e-5p抑制物后,利用qPCR和蛋白质印迹法检测细胞中miR-30e-5p、USP22的表达.构建USP22突变载体,采用荧光素酶报告基因检测miR-30e-5p在USP22基因中的结合位点.采用MTT法检测转染后H460细胞的增殖情况,并采用异种移植法检测裸鼠体内肿瘤生长情况.流式细胞术检测转染后H460细胞的周期阻滞和凋亡情况.结果 MiR-30e-5p、USP22在肿瘤组织中的表达均高于癌旁组织(P均＜0.01).在H460细胞中过表达miR-30e-5p后USP22 mRNA和蛋白的表达均下调(P均＜0.01),而抑制miR-30e-5p表达后USP22 mRNA和蛋白的表达均上调(P均＜0.01).NSCLC组织中miR-30e-5p与USP22的表达呈负相关(P＜0.01).miR-30e-5p可通过结合在3'UTR的特异序列负调控USP22的表达.过表达miR-30e-5p可抑制H460细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡,并抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P＜0.05,P＜0.01);而抑制miR-30e-5p的表达可促进H460细胞的增殖、抑制细胞周期阻滞和凋亡(P＜0.05,P＜0.01).结论 MiR-30e-5p可以下调USP22的表达,从而抑制NSCLC的发生和发展,提示其可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点.