MicroRNA--429表达与肝细胞癌预后的关系研究

摘要：目的探讨MicroRNA--429（miR--429）在肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）中的表达情况及其与HCC临床病理特征和预后的关系。方法收集来自黄曲霉毒素BI高暴露区TNM分期为l～Ⅱ期的HCC患者（138例）手术切除标本,通过TaqMan--PCR技术检测miR--429在癌组织、癌旁组织、肝癌细胞株SMMC--7721以及非肝癌细胞．株QsG-7701中的表达情况,通过风险比例回归模型及逻辑回归模型分析miR--429表达与HCC临床病理学特征以及预后的关系。结果与癌旁组织相比,miR--429在HCC癌组织中的表达水平上调,升高约4倍（P〈O．01）,细胞学实验有类似发现;miR-429表达水平与HCC肿瘤大小及AFBl-DNA加合物水平相关-风险值分别为3．13（1．47～6．67）和2．70（1．28～5．56）;高miR--429表达影响HCC5年期总体生存率及肿瘤无复发生存率（P〈O．01）,增加总体死亡风险及肿瘤复发风险分别为3．64倍和5．94倍。结论miR--429表达参与HCC肿瘤化过程,并影响HCC预后。     

二甲双胍对人肝细胞癌SMMC7721增殖的抑制作用

[摘要]目的检测二甲双胍作用下肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡情况,并初步探讨了其中的机制。方法以不同浓度(0.2、1、2、5 mmol/L)二甲双胍处理SMMC-7721,用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,Hochest33342 DNA染色检测细胞凋亡,实时定量PCR法检测Bcl-2和Bid mRNA的表达情况。结果二甲双胍处理48 h 和96 h后,人肝细胞癌SMMC7721细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05),以2 mmol/L和5 mmol/L组最为明显(P<0.01),并呈时间和剂量依赖性。Hochest33342染色发现,1 mmol/L和5 mmol/L浓度的二甲双胍可促进细胞凋亡,细胞凋亡率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。二甲双胍处理后,SMMC7721细胞内抗凋亡分子Bcl-2表达下降(P<0.01),促凋亡分子Bid表达升高(P<0.05)。结论二甲双胍能抑制人肝细胞癌SMMC7721细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞内抗细胞凋亡分子Bcl-2表达下降及促凋亡分子Bid表达升高有关。     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

STAT3对肿瘤细胞分化增殖及抗凋亡的调节

肿瘤是一类常见病、多发病,其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病.在欧美一些国家,癌症的死亡率仅次于心血管系统疾病而居第二位.在我国,随着人口老龄化,肿瘤的发病率和死亡率都有增加.随着对肿瘤病因学及其防治的研究,信号传导途径在肿瘤细胞中抗凋亡和促进分化增殖作用越来越受到重视.这为探索肿瘤特别是恶性肿瘤的发病机制和防治手段提供了一条可能的新途径.其中,信号传导转录活化蛋白家族(STATS)途径的研究尤为突出.Garcia R[1]报道了在多种肿瘤组织中可检测到激活的STAT蛋白.本文就广受关注的STAT3介导的肿瘤细胞的增殖分化和抗凋亡作用的研究进展作一综述.     

整合素β1与原发性肝细胞癌分化增殖的相关性研究

目的：研究原发性肝细胞癌(Primary hepatocellular carcinoma，PHC)中整合素β1(CD29)的表达特征，探讨其对PHC发生发展的影响及其临床病理学意义。方法：采用免疫组化双标双染(DouS—P)法检测90例PHC中整合素β1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果；(1)整合素β1在癌旁血管强表达，癌血管表达减少。(2)癌中整合素β1与PCNA同时分别表达于癌血管与癌细胞；癌细胞表达PCNA的同时，其细胞膜可同时表达整合素β1。结论：整合素β1在PHC发生早期有促癌血管形成作用，可能促进PHC的发生发展。双标双染提示增殖状态的癌细胞有直接形成癌血管的趋势。     

增殖细胞核抗原在肝细胞癌、肝硬化组织中的表达

目的 :探讨肝硬变、肝细胞不典型增生 (L CD)与肝细胞癌 (HCC)的关系。方法 :应用 S- P免疫组化技术检测了 2 7例 HCC、 90例肝硬变组织中 PCNA的表达。结果 :肝癌组织中 PCNA阳性表达明显高于肝硬变组织 (P <0 .0 5 ) ;伴有 L CD改变或 HBV感染的肝硬变组织 PCNA阳性率明显高于无 L CD改变和 HBV感染者 (P <0 .0 5 )。结论 :(1) PCNA可能是检测各种细胞增殖状态的很有价值的标记物 ;(2 )具有较高 PCNA阳性表达率的 L CD有活跃的增殖能力 ,可能是一群具有肿瘤性增殖潜能的癌前细胞。     

Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

目的 Musashi1（MSI1）属于RNA结合蛋白（RBP）家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌（HCC）中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长（7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01）,且处于G0/G1期的细胞比率也从（58.42±3.18）%降至（40.67±1.22）%,而S期细胞比率则从（28.51±1.93）%增加至（40.06±1.92）%（P<0.01）。与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期（G0/G1期细胞比率从（43.83±1.57）%增加至（62.84±1.22）%（P<0.01）,同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。     

miR-652在HBV相关肝细胞癌中的表达、临床意义及靶基因功能分析

目的探讨miR-652在HBV相关肝细胞癌(HCC)中的表达情况及临床意义,分析靶基因功能并完成核心基因发掘。方法查找GEO数据库HBV相关HCC芯片,采用GEO2R分析得到前十位差异表达miRNAs。HCC肿瘤组织中miR-652表达检测采用miRNA荧光定量检测技术。比较分析不同临床特征分组情况下miR-652表达差异。MiR-652与肝癌患者生存率分析使用Kaplan-Meier plotter数据库。MiR-652靶基因分析使用miRWalk 2.0在线软件。靶基因GO功能注释和KEGG通路富集使用在线软件Web Gestalt。蛋白互作网络(PPI)分析采用在线软件string,并联合Cytoscape软件完成靶蛋白PPI构建及核心基因发掘。结果芯片数据发掘表明miR-652在HBV相关肝癌中表达显著升高。收集的肿瘤标本检测分析显示HBV感染HCC患者中miR-652表达显著高于未感染HBV的HCC患者。按照临床特征分组分析显示,miR-652表达在病理分级Ⅲ～Ⅳ级组显著高于Ⅰ～Ⅱ级组,在转移组显著高于未转移组,而在HBV DNA载量、肿瘤直径、TNM分期分组中无显著性差异。...     

MiR-30c通过靶向KRAS抑制肝癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

目的 探讨MiR-30c对肝癌细胞生长和侵袭的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 2000将MiR-30c模拟物组和MiR-30c模拟物组阴性对照转染至肝癌细胞Huh7,qRT-PCR检测转染效果,细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达,Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力、MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布的改变.结果 成功构建稳定过表达MiR-30c的肝癌细胞亚系Huh7-MiR30c,荧光定量PCR结果显示MiR-30c表达量明显上调,过表达MiR-30c后Huh7细胞的侵袭和增殖能力均受到明显抑制;抑制MiR-30c能明显抑制KRAS蛋白和减低p-ERK蛋白表达水平,对ERK蛋白水平无明显影响.结论 抑制MiR-30c表达可能通过调控RAS/MAPK/ERK通路抑制肝癌细胞Huh7增殖和侵袭.     

MiR-105抑制肝癌细胞增殖能力的实验研究

目的 探讨miR-105对人肝癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 改变QGY-7703及HepG2两种细胞的miR-105表达,细胞克隆形成实验和软琼脂增殖试验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 细胞克隆形成和软琼脂增殖实验显示,过表达miR-105可抑制QGY-7703及HepG2细胞增殖,反之抑制miR-105表达则促进细胞增殖;细胞流式检测显示miR-105过表达能促进两种癌细胞G0/G1期阻滞.结论 miR-105抑制肝癌细胞增殖,其机制与引起细胞周期阻滞有关.     

Midkine (MDK)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义

 目的 探讨Midkine(MDK)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达以及检测血清MDK对于肝癌诊断的初步临床意义。方法 通过免疫组织化学染色和Western blot法检测50例临床样本(包含肝癌,肝硬化及正常肝组织)及7种不同肝癌细胞系中MDK表达情况;进一步通过酶联免疫吸附反应定量检测120例不同受试人群的血清样本,分析血清MDK在诊断肝癌中的初步临床意义。结果 肝癌组织中MDK表达阳性率显著高于肝硬化(77% vs. 30%,P＜0.01)及正常肝组织(77% vs. 0%,P＜0.001);Western blot 检测结果显示,MDK在多株肝癌细胞系中表达上调;此外,HCC患者血清MDK的中位数水平(1.195 ng/mL,0.84~1.71)较正常人(0.102 ng/mL,0.02~0.53;P＜0.01)、 HBV相关肝硬化(0.57 ng/mL,0.26~0.67;P＜0.05)和HCV相关肝硬化(0.34 ng/mL,0.09~0.56;P＜0.01)患者显著升高。 结论 MDK在HCC患者中的表达显著上调,血清检测MDK可作为临床诊断肝癌的重要方法。     

肝细胞癌(HCC)肺转移切除术(PME)的预后影响因素分析

 目的 探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）肺转移切除术（pulmonary metastasectomy,PME）预后及其影响因素。方法 回顾性分析42例在复旦大学附属中山医院既往接受肝癌切除术又因异时性肺转移行PME的患者资料,通过单因素和多因素分析来筛选预后因素。结果 PME后HCC患者的2年和5年总体生存率分别为60.5%和33.2%,无瘤生存率分别为39.0%和18.6%。无瘤间隔时间<12个月（P=0.009）和双侧肺转移（P=0.023）是PME后总体生存的独立危险因素,无瘤间隔时间<12个月（P=0.042）和乙肝表面抗原阳性（P=0.012）是PME后无瘤生存的独立危险因素。结论 对于无瘤间隔时间短和双侧肺转移的PME后HCC患者需谨慎评估手术获益,对于无瘤间隔时间短或HBsAg阳性的手术患者需密切随访。     

CA19-9等肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断价值分析

目的 探讨多项肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断价值.方法 对70例原发性肝癌患者肿瘤标志物检测结果进行回顾性分析.结果 70例患者TSGF、CA15-3、CA19-9及AFP 4项肿瘤标志物的阳性率分别为4.7%、5.7%、54%和71%,CEA全部阴性.结论 CA19-9检测对AFP阴性及低水平AFP患者具有重要意义;CA19-9与AFP联合检测可提高阳性率并具有相互补充作用;CEA、TSGF、CA15-3对原发性肝癌的诊断价值不大.     

隐源性肝硬化伴肝癌发生危险因素的研究

目的研究在隐源性肝硬化基础上发生肝癌的危险因素.方法将287例伴肝硬化的原发性肝癌患者根据病因分为病毒性肝炎组和原因不明组,对相应的危险因素进行分析.结果与对照组相比,肝癌合并隐源性肝硬化患者的BMI、血脂以及合并糖尿病的机率均显著高于肝炎后肝硬化患者.结论 BMI升高、高血脂、2型糖尿病等是隐源性肝硬化患者发生肝癌的危险因素.     

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

 目的  探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法  应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果  CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA 566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论  CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。     

组织芯片检测肝细胞肝癌中ARF6蛋白的表达及临床意义

目的:探讨二磷酸腺苷核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达及临床意义?方法:收集肝癌手术切除标本150例,以癌旁肝硬化组织作对照,制作组织芯片,用组织芯片技术结合免疫组化法,检测肝癌组织和癌旁肝硬化组织ARF6的表达,探讨ARF6表达与临床病理特征及预后之间的关系?结果:肝癌组织中ARF6的阳性表达率为48.7%(73/150),在癌旁肝硬化组织中ARF6的阳性表达率为8.3%(4/48),两者比较差异有统计学意义(P < 0.05)?肝癌组织中ARF6阳性表达与门静脉癌栓?临床分期?肿瘤直径及甲胎蛋白(AFP)水平相关(P < 0.05)?ARF6表达阴性的肝癌患者在肝切除术后的无瘤中位存活时间为45个月,1?3?5年无瘤生存率分别为(93.22 ± 7.93)%?(58.91 ± 6.18)%?(24.59 ± 6.80)%;ARF6表达阳性患者的无瘤中位存活时间为36个月,1?3?5年无瘤生存率分别为(88.91 ± 3.70)%?(41.61 ± 5.93)%?(19.03 ± 4.94)%?ARF6表达阴性与表达阳性的肝癌患者的无瘤生存时间差异有统计学意义(P = 0.019 1)?结论:肝癌组织中ARF6的表达与预后密切相关,ARF6不仅可作为肝癌预后不良的判断指标,还有望成为一种新的肝癌预后判断的标志物和潜在的治疗靶标?     

紫花牡荆素诱导肝癌Hep G2细胞分化

目的:研究紫花牡荆素诱导人肝癌Hep G2细胞分化作用.方法:体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用瑞氏-姬姆萨染色显微镜下测量细胞核质比,放射免疫法检测细胞上清液甲胎蛋白(AFP)水平,酶促反应试剂盒检测细胞碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷胺酰转肽酶(γ-GT)的活性;Diamond stone分光光度法测定细胞酪氨酸α-...