血清醛固酮候选参考测量程序的建立及性能评估

目的建立基于同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)的血清醛固酮候选参考方法。方法以甲基叔丁基醚为萃取剂,采用液液萃取方式进行样本前处理。以醛固酮-2H7为内标,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式建立检测血清醛固酮的ID-LC-MS/MS方法,并对方法的准确度、精密度、灵敏度、线性等基本分析性能进行验证。结果 ID-LC-MS/MS测定血清醛固酮的线性范围为0.08～3.55 nmol/L,检测限和定量限(LOQ)分别为0.012 nmol/L和0.045 nmol/L。批内和批间变异系数(CV)分别为5.0%和4.1%。平均加标回收率为98.52%～100.14%。测定国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本的结果偏移1.6%。结论建立的测定血清醛固酮的ID-LC-MS/MS方法准确、精密,有望作为测定血清醛固酮的参考方法。     

同位素稀释液相色谱-串联质谱法检测血清睾酮候选参考方法的建立及应用

目的建立基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清睾酮候选参考方法,并采用该方法对临床常规检测方法(微粒子化学发光法)的正确性进行评价。方法采用睾酮-2,3,4-~(13)C_3作为内标,以等体积比的正己烷-乙酸乙酯溶液对样本进行液液萃取,上清液采用氮气吹干后用流动相复溶,进行LC-MS/MS分析。采用五点包括法计算血清睾酮浓度。参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件和EP15-A3文件对建立的同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法进行性能评价(方法残留、特异性、线性范围、精密度、准确度),参考CLSI EP9-A3文件对微粒子化学发光法的正确性进行评价。结果建立的ID-LC-MS/MS方法检测血清睾酮的分析时间为5min,特异性好,无残留,线性范围为0.034～22.00ng/mL,批内不精密度≤2.3%,批间不精密度≤2.2%,测定有证参考物质SRM971(Level male)的相对偏移为0.2%,测定2017 RELA-A、2017 RELA-B样本的相对偏移分别为-2.9%、-3.3%,测定2017 RELA-A样本的不确定度为0.11 ng/mL。微粒子化学发光法与ID-LC-MS/MS的相关性较好(r=0.963),但偏差较大[总平均偏差为-24.4%,低浓度样本(≤1 ng/mL)平均偏差为-62.4%,高浓度样本(1 ng/mL)平均偏差为6.3%]。结论成功建立了检测血清睾酮的ID-LC-MS/MS候选参考方法。该方法的精密度、准确度均较好,且操作简单,分析时间短。     

ID-LC-MS/MS检测L-色氨酸及其代谢物的方法建立及方法学评价

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测血清中L-色氨酸及其代谢物。方法方法学建立及评价。收集2022年11月至2023年1月的华西医院166例健康体检者的血清样本。采用L-色氨酸(Trp)、L-犬尿氨酸(Kyn)和犬尿喹啉酸(KA)的同位素标记物为内标, 通过蛋白沉淀处理血清样本, 应用LC-MS/MS同时检测Trp、Kyn和KA含量。评价该方法的选择性、特异性、线性、检出限(LOD)、定量限(LOQ)、携带污染、精密度、加标回收率、基质效应和稀释一致性。结果 Trp、Kyn和KA的线性相关系数均>0.999, LOD分别为0.10 μmol/L、0.01 μmol/L和1.00 nmol/L, LOQ分别为0.20 μmol/L、0.04 μmol/L和2.00 nmol/L, 批内精密度和批间精密度均<10%, 平均加标回收率与相对基质效应均在100%左右, 超线性范围的样本最多可稀释16倍。健康体检者血清中Trp、Kyn、KA含量、Kyn/Trp和KA/Kyn比值分别为(59.55±10.92)μmol/L、(1.85±0.43)μmol...     

串联质谱技术检测孕妇胆汁酸谱的性能评估及其参考区间建立

目的对基于串联质谱(LC-MS/MS)技术检测胆汁酸谱的方法进行性能评估并建立适合于南京地区孕妇的15种胆汁酸亚型参考区间。方法采用LC-MS/MS技术检测孕中期孕妇血清15种胆汁酸亚型,根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)C62-A和美国食品药品监督管理局的生物分析方法验证标准,从定量检出限、准确度、精密度、线性、携带污染率等几个方面进行性能评估;根据CLSI EP28-A3c推荐的方法和程序建立南京地区孕妇孕中期15种胆汁酸亚型的参考区间,用小样本验证法对新建立的20例样本参考区间进行验证。结果 LC-MS/MS技术可同时检测孕妇血清中15种胆汁酸亚组分,最低定量限为标准曲线最低浓度点(S1)浓度,最低检出限为1/4 S1;线性:各种亚型均呈现良好的线性关系,r~2均大于0.99;准确度:各种亚型加标回收试验回收率均为80%～120%,偏倚15%;批内精密度和批间精密度变异系数均小于15%;携带污染率:小于最低定量限的25%;孕中期孕妇参考区间:以石胆酸为例,新的参考区间为0.07～13.46 ng/mL,95%的验证结果落于新的参考区间内。结论 LC-MC/MS技术可以精准、快速地检测胆汁酸谱15种亚型,评估结果符合各项性能验证要求;新建立的胆汁酸谱15种亚型的参考区间适合于南京地区孕中期孕妇。     

肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的方法学性能评价及参考值分析

目的对肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸进行方法学性能评价,初步估计尿肌氨酸的生物参考值。方法参考CLSI EP5-A2、EP17-A、EP6-A、C28-A3等文件,评价肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的重复性、空白限(limits of blank,LoB)、检测限(limitsof detection,LoD)、定量限(limits of quantitation,LoQ)、线性范围、回收率和生物参考值。结果肌氨酸氧化酶法检测2.0μmol/L肌氨酸溶液、2.9μmol/L新鲜尿液样本,总不精密度均14.0%;肌氨酸氧化酶法检测5.0、10.0μmol/L肌氨酸溶液及6.4、9.8μmol/L新鲜尿液样本,总不精密度均10.0%。肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的LoB约为0.35μmol/L;肌氨酸溶液的LoD、LoQ分别为1.1、1.9μmol/L,新鲜尿样本分别为1.2、2.0μmol/L;线性范围为2.0～125.6μmol/L;回收率为65.3%～90.5%。健康人群尿肌氨酸的生物参考值为0.01～0.06μmol/g肌酐。结论肌氨酸氧化酶方法检测尿肌氨酸的精密度、检测限、线性范围等可满足临床实验室的要求,但仍需在校准品基质方面有所改进以提高准确度。     

液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

全血免疫抑制剂ID-LC-MS/MS候选参考方法的建立和性能评价

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）检测全血免疫抑制剂（他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A）的候选参考方法,并评价其性能。方法 采用蛋白沉淀法（PPT）对全血样本进行前处理,采用ID-LC-MS/MS定量检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A。对建立的候选参考方法的分析性能（线性、定量限、基质效应、精密度和正确度等）进行评估。结果 ID-LC-MS/MS检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的总检测时间为4.5 min;环孢素A的线性范围为10～500 ng/mL,定量限为10 ng/mL;他克莫司、西罗莫司和依维莫司的线性范围均为1～50 ng/mL,定量限均为1 ng/mL。4种免疫抑制剂的相对基质效应范围均≤8.64%,批内、批间变异系数（CV）均≤5%,加标回收率为98.84%～100.99%。他克莫司的扩展测量不确定度≤7.91%(k=2)、西罗莫司≤7.97%(k=2),依维莫司≤7.14%(k=2),环孢素A≤7.91%(k=2)。结论 成功建立了ID-LC-MS/MS检测全血他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的候选参考方法,可用...     

LC-MS/MS技术检测新生儿干血斑甲基丙二酸、同型半胱氨酸cut-off值的建立

目的探讨建立高效液相色谱质谱-串联质谱联合检测(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术检测新生儿干血斑甲基丙二酸(methylmalonic acid,MMA)和同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)cut-off值的方法。方法收集本院分娩的新生儿MS/MS筛查中C3、C3/C2和C3/C0任一指标偏高的正常干血斑样本作为阴性样本,同时收集通过尿气相色谱质谱结合循环酶法确诊为甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症患儿的初筛干血斑样本作为阳性样本,采用LC-MS/MS技术分别检测该两类样本中MMA和Hcy的浓度。应用百分位数法并结合ROC曲线分析确定使用LC-MS/MS技术检测MMA和Hcy的cut-off值。结果共收集1 015例阴性样本和16例MMA患儿阳性样本,LC-MS/MS技术检测阳性样本的MMA和Hcy浓度均明显高于阴性样本,差异具有统计学意义(U_(MMA)=8.5,U_(Hcy)=23.5,P均0.05);MMA和Hcy的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))均为0.999,cut-off值分别为3.145μmol/L和7.295μmol/L,诊断特异性分别为99.5%和99.3%。结论百分位数法结合ROC曲线法可用于确定本地区MMA患儿干血斑中MMA和Hcy的cut-off值,且本地区人群的MMA和Hcy cut-off值明显低于梅奥诊所提供的cut-off值。     

人血清哇巴因UPLC-MS/MS检测方法的建立和方法比对

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测人血清哇巴因的方法。方法采用高特异性的UPLC-MS/MS,以氘标记的哇巴因-d3作为内标。样本采用固相萃取(SPE)前处理方法,以反相色谱柱负离子模式及电喷雾电离源(ESI)检测血清哇巴因水平。对建立的方法进行方法学(基质效应、回收率、准确度、批内精密度、批间精密度及稳定性)验证。采用建立的UPLC-MS/MS方法检测20名体检健康者及40例高血压患者血清哇巴因水平,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果 UPLC-MS/MS检测血清哇巴因的标准曲线范围为0.02～5.0 ng/mL,最低定量检测限(LLOQ)为0.02ng/mL。采用ABN固相萃取小柱进行样本前处理的基质效应较小,且回收率较高,达85%。LLOQ和低值(0.06 ng/mL)、中值(0.6 ng/mL)、高值(4 ng/mL)质控品的准确度分别为108.0%、89.2%、101.0%、103.0%。3个水平质控品的批内变异系数(CV)分别为2.87%、1.95%、0.56%,批间CV分别为5.98%、1.90%、0.75%。样本室温过夜放置16 h及样本前处理后室温放置自动进样器48 h的偏差均15%。采用UPLC-MS/MS检测哇巴因,正常对照者及高血压患者血清中均未检测到哇巴因。采用ELISA测定血清哇巴因,高血压患者为0.096 ng/mL,正常对照者为0.062 ng/mL。UPLC-MS/MS检测5个水平(0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 ng/mL)的哇巴因标准品,其测定结果与对应的哇巴因标准品浓度呈正相关,且线性较好(r20.99),准确度较高;而ELISA检测5个水平哇巴因标准品的结果均很接近(0.024 9～0.029 6 ng/mL)。结论建立了检测人血清哇巴因的UPLC-MS/MS方法,未检测到正常人及高血压患者的血清哇巴因。UPLC-MS/MS与ELISA检测血清哇巴因的结果存在较大差异。     

血清肌酐参考方法的建立及其在正确度调查中的应用

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定人血清肌酐的参考方法,并运用于临床实验室正确度调查新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法按照国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐方法,建立本实验室肌酐参考方法,利用参考物质SRM909c及RELA比对样本考察所建方法的精密度与准确度,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度调查新鲜冰冻血清肌酐靶值的确立。结果参考方法测量参考物质SRM909c相对偏移为0.69%,测量不精密度2%,初步验证了方法的准确度和精密度。正确度调查样本201411、201412、201421、201422酶法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为14.97%、-2.77%、-1.37%、-1.92%;苦味酸法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为21.39%、2.10%、6.22%、2.38%。除201411样本(为低浓度样本)外,其余样本不同常规分析系统测定的血清肌酐浓度与参考方法赋值结果的相对偏移均不超过8%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清肌酐的方法精密度、准确度均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望在上海地区临床实验室正确度计划中发挥一定作用,并建议临床实验室重视低浓度下肌酐测量的准确度和一致性。     

国产化时间分辨免疫荧光法游离雌三醇检测试剂盒性能验证

目的 对国产游离雌三醇定量检测试剂盒进行分析性能验证,判断该试剂盒是否能够满足医学实验室的临床检验要求。方法 分析中孕期母血清游离雌三醇定量检测试剂盒的批内精密度、批间精密度、总精密度,正确度和线性范围,同时与试剂盒厂家声称的参数范围进行比对。结果 在精密度验证中,低、中、高浓度检测样本的批内变异系数分别为4.72%、2.22%、2.25%;批间变异系数分别为2.76%、2.26%、3.33%;总精密度的变异系数分别为5.00%、3.00%、3.90%,均在厂家声称的标准上限范围之内。在正确度验证中作为验证样本的国家卫健委室间质评样本参考物质的均值分别为2.60、4.50、1.80、6.00、6.90 nmol/L均在验证区间之内。在线性范围验证中,配置覆盖整个标准曲线的6个浓度血清样本。以测量值为横坐标,理论值为纵坐标画出曲线,拟合曲线方程,得出相关系数r²=0.995 4。根据行业标准>0.995可判断厂家声称的线性范围符合要求。结论 本国产游离雌三醇定量检测试剂盒分析性能验证有效,可满足临床检验需求。     

基于UPLC-MS/MS 建立早产儿血清25-(OH)D3 和3-epi-25-(OH)D3 检测新方法及临床初步应用

目的 建立血清25- 羟维生素D3[25-hydroxyvitamin D3, 25-(OH)D3] 及3-epi-25- 羟维生素D3[3-epi-25-hydroxyvitaminD3, 3-epi-25-(OH)D3] 超高效液相色谱- 串联质谱检测新方法（ultra-performance liquid chromatography-tandem massspectrometry,UPLC-MS/MS）,并在早产儿中开展初步应用。方法 采用液- 液萃取法提取化合物,五氟苯基丙基（pentafluorophenylpropyl,PFPP）色谱柱分离25-(OH)D3 与3-epi-25-(OH)D3;从最低定量限、线性关系、精密度与准确度等四个方面对新建方法进行验证,并对134 例早产儿血清样本进行检测分析。结果 25-(OH)D3 及3-epi-25-(OH)D3 的最低定量限分别为6.05±0.78 nmol/L,1.48±0.20 nmol/L;线性范围3.78 ～ 480.00 nmol/L,1.00 ～ 128.00 nmol/L;相关系数r2 为0.992 2,0.992 8;25-(OH)D3 与3-epi-25-(OH)D3 低、中、高浓度质控品的日内精密度和日间精密度均小于15.00%;回收率109.92%,102.25%,98.76%;97.75%, 95.25%,99.80%。134 例早产儿血清25-(OH)D3 平均浓度22.35±13.28nmol/L,3-epi-25-(OH)D3 平均浓度5.43±4.35 nmol/L;3-epi-25-(OH)D3 占总25-(OH)D3 的平均比例为19.96%±12.08%,范围0.00% ～ 60.62%。以25-(OH)D3 计算,维生素D（Vitamin D, Vit D）缺乏率、不足率、充足率分别为78.36%,19.40%,2.24%;以总25-(OH)D3 计算,Vit D 缺乏率、不足率、充足率分别为65.67%,26.12%,8.21%;二者Vit D 缺乏率及充足率的比较, 差异均有统计学意义（χ2=5.351,1.719,4.823,均P ＜ 0.05）。结论 本研究建立的UPLC-MS/MS检测法性能良好且能精准检测早产儿血清25-(OH)D3 浓度,在早产儿Vit D 评估方面具有较好的应用价值。     

液相色谱-串联质谱法检测血清皮质醇方法的建立及性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC-MS/MS)检测血清皮质醇的方法并对其进行性能评价。方法采用ABSCIEX TRIPLE QUAD 5500液相色谱-串联质谱联用系统定量检测皮质醇,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件对建立的方法进行线性、精密度、提取回收率和准确性等基本性能验证。结果内标平衡时间为室温下1 h。ID-LC-MS/MS检测皮质醇的线性回归方程为Y=0.018 7X+0.043 4,r=0.999 8;线性范围为25~500 ng/mL。检出限为0.05 ng/mL。批内、批间变异系数(CV)分别为4%、6%。提取回收率为84.5%~90.4%。国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)-A和RELA-B样本测定结果的偏移分别为3.19%和2.84%。结论建立的ID-LC-MS/MS方法的精密度、准确度、重现性均较好,结果准确,可用于临床实验室检测血清皮质醇。     

LC-MS/MS检测血清万古霉素浓度方法的建立及评价

目的建立检测人血清中万古霉素浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,并与化学发光微粒子免疫法(CMIA)比较方法学性能。方法血清样品经过甲醇沉淀蛋白质,采用安捷伦Poroshell 120EC C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.7μm)梯度洗脱分离,流动相为甲醇(0.1%甲酸)-水(0.1%甲酸),流速为0.5 m L/min,内标采用去甲万古霉素,质谱采用ESI正离子多反应监测扫描模式。用该方法定量检测112例临床服用万古霉素患者血清万古霉素含量,并与临床常用的CMIA所得结果进行比较。结果万古霉素在1~100μg/m L内线性关系良好(r2=0.996 4);方法日内日间精密度、准确度均满足药物定量检测要求,且无基质效应和残留效应。Wilcoxon符号秩和检验结果显示,LC-MS/MS测定结果与CMIA结果比较,差异有统计学意义(P0.05);相关性检验结果显示,两者线性相关性良好,Y=1.06X-0.37(r=0.986)。结论 LC-MS/MS法性能较好,价格优廉,与CMIA法有较好的相关性,且检测在准确度、精密度上优势明显,可用于临床检测万古霉素的血清药物浓度。     

性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究

目的对性激素结合球蛋白(SHBG)商品试剂盒进行方法学评价,以确定其分析性能是否符合临床实验室应用的要求;建立SHBG的实验室参考范围,并分析其与睾酮、雌二醇的相关性。方法依据美国临床实验室标准化协会颁布的EP5-A、EP6-P文件,分别对SHBG试剂盒进行批内和日间精密度、线性评价;评价分析方法的最低检测限。通过健康人建立实验室SHBG的参考范围,分析睾酮或雌二醇水平与SHBG的相关性。结果不同SHBG浓度批内精密度变异系数(CV)分别为2.50%和2.16%,日间精密度CV分别为4.33%和2.63%;线性范围为0.80～183.60nmol/L时测定结果为线性;其他指标符合性能评价要求。男、女性SHBG呈正态分布,60岁以下男性SHBG参考范围确定为8.76～61.44nmol/L,60岁以上男性SHBG参考范围确定为20.41～97.43nmol/L;女性SHBG参考范围确定为10.26～129.94nmol/L。总睾酮或总雌二醇与SHBG无相关性。结论 Roche公司生产的SHBG试剂盒在精密度、线性范围等方面的性能满足实验室要求。总睾酮或总雌二醇与SHBG无相关性。     

基于电感耦合等离子体质谱法血清钙离子检测候选参考方法的建立

目的基于电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),建立一种检测血清钙离子的候选参考方法。方法方法学建立.将从医院收集到的血清标本以0.3%硝酸溶液直接稀释100倍,在血清标本基质溶液中添加不同浓度钙标准溶液,配制含血清基质的标准品溶液。以锗(Ge)为内标,采用标准加入法,计算血清钙离子浓度。对所建立的候选参考方法进行线性、精密度、正确度的性能评估和方法比对。结果血清钙离子浓度在0.000~20.400 mmol/L内(稀释后浓度为0.000~0.204 mmol/L)线性良好(R2>0.9999);批内不精密度为0.22%~0.47%,批间不精密度为0.64%~0.77%,总不精密度为0.98%~1.09%;检测3个浓度SRM 956d,结果均在证书要求的不确定度范围内,相对偏移分别为-0.16%,0.04%,0.23%;该方法参加2017年参考实验室外部质量评价计划(RELA),比对通过。与检验医学溯源联合委员会(JCTLM)所列参考方法进行比较,结果一致性良好。本研究所建立的候选参考方法与临床常规电极方法进行比较,具有良好的相关性。结论成功建立血清钙离子检测候选参考方法,线性范围宽、具有良好的精密度与准确度。     

应用EP10-A对Bayer脱氧吡啶酚试剂盒的评价

目的评价Bayer脱氧吡啶酚(DPD)试剂盒相关指标.方法应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的<定量临床实验室方法初步评价核准指南(EP10-A)>对Bayer DPD试剂盒进行初步评价.结果低、中、高三种浓度的DPD质控检测偏差分别为0.94nmol/L,1.25 nmol/L和3.88 nmol/L,远低于标定偏差的10.70 hmol/L,16.40 nmol/L和42.00 nmol/L;检测三种浓度的DPD质控总不精密度CV分别为4.618%,1.819%和1.175%,均小于NCCLS文件规定的5%.与ELISA法相关良好(r=0.9247).结论Bayer DPD试剂盒准确度和精密度良好,未见交叉污染、线性漂移等因素有明显影响,性能指标可靠,适合临床实验室使用.     

串联质谱法测定血清中20种游离氨基酸含量

目的建立串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清中20种游离氨基酸含量,为临床血清氨基酸检测提供可靠方法。方法血清样本未经衍生化处理,采用LC-MS/MS法,于电喷雾源(ESI)正离子模式下使用选择反应性离子扫描(SRM)进行定量。结果 20种氨基酸线性相关系数为0.9957～0.9999,日内、日间变异系数分别为0.5%～9.0%和0.6%～12.3%,加样回收率为87.6%～115.5%。样本在常温放置24h,8次冻融循环及-20℃冻存20d等条件下稳定性良好。结论该方法简便、稳定、定量准确,适用于血清氨基酸的临床检测,为氨基酸代谢疾病的临床诊断提供了重要的生化依据。     

液相色谱-串联质谱法监测血清茶碱浓度及室间质量评价

目的对液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测茶碱进行方法学评价,探讨其在茶碱治疗药物监测(TDM)中的应用。方法在血清添加放射性核素内标茶碱-D6,经蛋白沉淀稀释后采用LC-MS/MS测定。以Capcell C18 MGⅢ(100 mm×2.0 mm,5μm)为分析柱进行反相色谱分离;以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水[20∶80(v/v)]为流动相,流速为0.3 m L/min;以电喷雾离子化串联四级杆质谱、正离子多反应监测进行定量检测。用建立的方法从2008年起连续参加卫生部临检中心茶碱TDM室间质量评价。结果 LC-MS/MS检测茶碱的线性范围为1~50μg/m L,批内和批间精密度分别为2.26%~6.65%和4.70%~6.84%,准确度分别为94.14%~104.00%。单个样品的监测分析时间为3.5 min。冻融(-30℃室温反复解冻3次)、室温放置24 h、自动进样器放置24 h、长期保存(-30℃放置28 d)的稳定性均良好。LC-MS/MS测定结果与室间质量评价靶值偏差为2.75%,斜率为1.04,相关系数(r2)为0.983。结论该LC-MS/MS采用放射性内标稀释,具有简单、快速、特异性和灵敏度较好的特点,连续6年测定结果符合全国室间质量评价要求,可用于茶碱的临床TDM。     

液相色谱-串联质谱法检测人血浆中碘帕醇

目的建立一种稳定的检测人血浆碘帕醇的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并对该方法进行性能评价。方法以氘代同位素作为内标,人血浆样品经直接沉淀法前处理后进样,用XSelect^TM HSS PFP色谱柱进行分离,用含0.1%甲酸-5mmol/L九氟戊酸-10%乙腈的水溶液等度洗脱;正离子电喷雾离子化扫描检测,多反应监测(MRM)扫描分析,建立检测血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。根据CLSI EP10-A和CLSI C62-A,评价该方法的线性范围、正确度、精密度、选择性、基质效应、稳定性。结果 LC-MS/MS检测血浆碘帕醇的线性范围为1～1 000μgI/mL(以含碘量计算);低、中、高浓度(3、50、800μgI/mL)血浆质控品检测结果与理论靶值的偏移为-6.1%～7.5%,重复性以不精密度表示,CV<6.6%(4.6%～6.6%),期间精密度CV<8.5%(6.6%～8.5%),方法回收率为92.5%～95.9%,基质效应为88.8%～95.2%;方法选择性良好,溶血和脂血因素均不影响检测结果。血浆样品在室温下放置最好不要超过48 h,在-80℃下反复冻融不超过2次,经前处理后的血浆样品4℃自动进样器中放置不超过72 h,碘帕醇可稳定检测。结论建立并评价了一种可靠的检测人血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。