人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达

目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，并可在大肠杆菌中得到高效表达     

人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA在大肠杆菌中表达的初步研究

将ＢａｍＨＩ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因ｃＤＮＡ克隆片段和表达载体ｐＧＥＸ５Ｔ重组后转化大肠杆菌，再筛选、趱ＩＰＴＧ诱导，结果显示：阳性克隆１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ有２条特异区带（４９ｋｄ和３５ｋｄ），Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交证实文具区带具ＭＢＰ抗原特异性，蛋白质含量测定、免疫斑点杂交和ＥＬＩＳＡ分析，该膜蛋白表达量占菌体裂液蛋白质总量６％（５０ｍｇ／Ｌ菌液）。     

血小板生成素基因的克隆及在原核细胞的表达

目的 克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）基因,并使其在原核细胞中获得表达。方法 先从人胚胎肝脏中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ获得编码氨基端１９５个氨基酸残基的ｈＴＰＯ１９５ｃＤＮＡ。将该片段亚克隆至ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ克隆质粒中,以双脱氧链末端终止法对克隆质粒直接测序。接着将ｈＴＰＯ１９５ｃＤＮＡ插入到原表达质粒ｐＥＴ２８－ａ中,转化大肠杆菌ＢＬＲ２１（ＤＥ３）,进行诱导表达,以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法及免疫印迹法进行检测。结果 得到的ｈＴＰＯ１９５ｃＤＮＡ与文献报道的序列完全一致。经诱导后ｈＴＰＯ基因在大肠杆菌中获得表达,目的蛋白占总菌体蛋白的１０％,以免疫印迹法证实表达产物正确。结论 得到ｈＴＰＯ１９５ｃＤＮＡ,并在原核细胞中获得表达,得到截短形式的ｒｈＴＰＯ１９５。     

人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA在大肠杆菌中表达的初步研究

将ＢａｍＨⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因ｃＤＮＡ克隆片段和表达载体ｐＧＥＸ－５Ｔ重组后转化大肠杆菌，再筛选、增殖和ＩＰＴＧ诱导。结果显示：阳性克隆１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ有２条特异区带（４９ｋｄ和３５ｋｄ）；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交证实该区带具ＭＢＰ抗原特异性；蛋白质含量测定、免疫斑点杂交和ＥＬＩＳＡ分析，该膜蛋白表达量占菌体裂解液蛋白质总量６％（５０ｍｇ／Ｌ菌液）。     

CONSTRUCTION AND APPLICATION OF HUMAN CHROMOSOMAL SPECIFIC DNA PROBE P

ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＨＵＭＡＮＣＨＲＯＭＯＳＯＭＡＬＳＰＥＣＩＦＩＣＤＮＡＰＲＯＢＥＰＯＯＬＳＬｉＬｕｙｕｎ李麓芸Ｉｎ１９８３－１９８６，ｔｗｅｎｔｙ－ｆｏｕｒｈｕｍａｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｔｙｐｅｓｗｅｒｅｃｏ...     

Experimental and clinical study on hepatobiliary surgery in China.

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＡＮＤＣＬＩＮＩＣＡＬＳＴＵＤＹＯＮＨＥＰＡＴＯＢＩＬＩＡＲＹＳＵＲＧＥＲＹＩＮＣＨＩＮＡＷｕＭｅｎｇｃｈａｏ吴孟超ＯｒｉｅｎｔａｌｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｅｃｏｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉ...     

pCDM8-GFP报告载体的构建及鉴定

1　实验资料　ｐＤＭ 8 ＰＢＬｃＤＮＡ文库由Ｊａｃｋｓｏｎ博士惠赠 ,ｐＥＧＦＰ Ｎ3真核表达载体购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司 .ＮｏｔＩ、ＨｉｎｄⅢ和Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自大连宝生物公司 .ＣＯＳ7细胞为本室冻存。ｐＣＤＭ8 ＧＦＰ载体的构建方法参照文献 .提取 ｐＣＤＭ8 Ｘ(Ｘ表示载体中插入的未知ｃＤＮＡ片段 )和 ｐＥＧＦＰ Ｎ3质粒 ,分别用ＮｏｔＩ和ＨｉｎｄⅢ进行双酶切 ,回收酶切片段 ,用Ｔ4连接酶进行连接 ,转化感受态宿主菌。挑单菌落培养 ,提取质粒用ＮｏｔＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切进行阳性克隆鉴定 .提取重组ｐＣＤＭ8 ＧＦＰ载…     

RELATIONSHIP BETWEEN NEUROENDOCRINE POLYPEPTIDE 7B2 AND T LYMPHOCYTE

ＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＮＥＵＲＯＥＮＤＯＣＲＩＮＥＰＯＬＹＰＥＰＴＩＤＥ７Ｂ２ＡＮＤＴＬＹＭＰＨＯＣＹＴＥＸｕＹｉｐｉｎｇ（许以平）（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｅｒｉａｔｒｉｃｓ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳＳＭＵ，Ｓｈａｎｇｈａｉ...     

人卵巢颗粒细胞雌激素β型受体cDNA的克隆和序列分析

目的 测定和分析人卵巢颗粒细胞中雌激素β型受体（ＥＲβ）ｃＤＮＡ的核苷酸序列结构。方法 采用ＤＭＥＭ培养基、以ＰＥＲＣＯＬＬ方法从人体外受精卵泡液中制备颗粒细胞。根据ＴＲｌｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ试剂盒方法抽提ＲＮＡ,并在Ｄｉｓｐｏｃｏｌｕｍｎ柱中用寡聚（ｄＴ）纯化ｍＲＮＡ。用ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐ＾ＴＭⅡＲＴ试剂盒反转录ＰＣＲ合成ｃＤＮＡ。扩增产物与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕ     

人骨形态发生蛋白-2的基因重组及其在大肠杆菌中的表达

目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白２（ｈＢＭＰ２）。方法将包含ｈＢＭＰ２部分前肽和成熟肽的３′端７３０ｂｐｃＤＮＡ片段,插入原核表达载体ｐｋｐＬ３ａ的多克隆位点,构建成ｐＫｐＬ３ａ／ｈＢＭＰ２重组表达载体,转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６,挑选阳性克隆,经诱导表达后用ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定。结果该克隆表达的ｈＢＭＰ２为ＭＷ２７０００,表达量占菌体总蛋白１０％,部分纯化后植入大鼠股部肌肉,组织学观察到肌肉内大量间充质细胞增生及骨与软骨形成。结论说明重组ｈＢＭＰ２具有诱导异位骨与软骨形成的生物学功能。     

人aFGF cDNA的次级克隆及其重组产物的纯化

目的：为使ａＦＧＦ表达产量提高，以便于纯化，将载有人酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）全编码区ｃＤＮＡ的ＰＫＫ２２３－３质粒自ＤＨ５α细菌转入ＪＭ１０５细菌。方法：采用超声法和溶菌酶破碎法裂解扩增的ＪＭ１０５细菌，通过ＨｅｐａｒｉｎＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ亲和层析法提纯表达的重组产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的结果表明，纯化重组产物的分子量约为１８０００。结论：人重组酸性成纤维生长因子在大肠杆菌中得到表达及鉴定     

A NEW METHOD OF EARLY DIAGNOSIS OF FAT EMBOLISM SYNDROME

ＡＮＥＷＭＥＴＨＯＤＯＦＥＡＲＬＹＤＩＡＧＮＯＳＩＳＯＦＦＡＴＥＭＢＯＬＩＳＭＳＹＮＤＲＯＭＥＡＮＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＹＯＦＴＨＥＰＵＬＭＯＮＡＲＹＭＩＣＲＯＶＡＳＣＵＬＡＲＣＹＴＯＬＯＧＹＴｅｎｇＱｉｎｇｓｈａｎ滕青山，ＺｈａｎｇＢｏｘ...     

人aFGF cDNA的次级克隆及其重组产物的纯化

目的：为使ａＦＧＦ表达产量提高，以便于纯化，将载有人酸性纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）全编码区ｃＤＮＡ的ＰＫＫ２２３－３质粒自ＤＨ５α细菌转入ＪＭ１０５细菌。方法；采用超声法和溶菌酶破碎法裂解扩增的ＪＭ０５细菌，通过Ｈｅｐａｒｉｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ亲和层析法提纯表达的重组产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的结果表明，纯化重组产物的分子量约为１８０００。结论：人重组酸性成纤维生长因子在大肠杆菌     

Effects of ginkgolide B on isobaric hypoxic pulmonary hypertension in rats.

ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＧＩＮＫＧＯＬＩＤＥＢＯＮＩＳＯＢＡＲＩＣＨＹＰＯＸＩＣＰＵＬＭＯＮＡＲＹＨＹＰＥＲＴＥＮＳＩＯＮＩＮＲＡＴＳＣｈｅｎｇＤｅｙｕｎ程德云，ａｎｄＣｈｅｎＷｅｎｂｉｎ陈文彬Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ．Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏ...     

Tropic 1808基因在大肠杆菌中的表达

目的;在大肠杆菌宿主系统中表达Ｔｒｏｐｉｃ１８０８基因编码的蛋白。方法：用ＰＣＲ方法从质粒中扩增出Ｔｒｏｐｉｃ１８０８ｃＤＮＡ开放阅读框架片段,并重组人表达载体ｐＥＴ－２１ａ中,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,用ＩＰＴＧ诱导Ｔｒｏｐｉｃ１８０８融合蛋白的表达,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,表达蛋白条带转至ＰＶＤＦ膜进行氨基酸序列分析,结果：构建了ｐＥＴ－２１ａ－１８０８重组质粒,外源性Ｔｒｏｐｉｃ１８０８基     

PATHOLOGIC CHANGES OF MUSCLE IN VENOUS INSUFFICIENCY

ＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＣＨＡＮＧＥＳＯＦＭＵＳＣＬＥＩＮＶＥＮＯＵＳＩＮＳＵＦＦＩＣＩＥＮＣＹｚｈａｎｇＢａｉｇｅｎ（张柏根）；ＱｉａｎＨｕｓｈｅｎｇ（钱虎声）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＶａｓｃｕｌａｒＳｕｒｇｅｒｙ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳＳＭ...     

A NEW METHOD OF DIGESTIVE TRACT RECONSTRUCTION OF ESOPHAGEAL CANCER IN POST─SUBTOTALGASTRECTOMYAREPORTOF3─CASES

ＡＮＥＷＭＥＴＨＯＤＯＦＤＩＧＥＳＴＩＶＥＴＲＡＣＴＲＥＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦＥＳＯＰＨＡＧＥＡＬＣＡＮＣＥＲＩＮＰＯＳＴ─ＳＵＢＴＯＴＡＬＧＡＳＴＲＥＣＴＯＭＹＡＲＥＰＯＲＴＯＦ３─ＣＡＳＥＳＷａｎｇＰｅｎｇ（Ｔａｉａｎｃｅｎｔｒａｌｈｏｓｐ...     

EXPRESSION OF TGF－β_1，PDGF AND IGF－1 mRNA IN LUNG OF BLEOMYCIN－A_5－INDUCED PULMONARY FIBROSIS IN RATS

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＧＦ－β１，ＰＤＧＦＡＮＤＩＧＦ－１ｍＲＮＡＩＮＬＵＮＧＯＦＢＬＥＯＭＹＣＩＮ－Ａ５－ＩＮＤＵＣＥＤＰＵＬＭＯＮＡＲＹＦＩＢＲＯＳＩＳＩＮＲＡＴＳＬｉＨａｉｃｈａｏ李海潮，ＨｅＢｉｎｇ何冰，ＱｕｅＣｈｅｎｇｌｉ阙呈立ａｎｄＷ...     

Advances in the study on rheological behavior of leukocyte during severe shock.

ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＴＨＥＳＴＵＤＹＯＮＲＨＥＯＬＯＧＩＣＡＬＢＥＨＡＶＩＯＲＯＦＬＥＵＫＯＣＹＴＥＤＵＲＩＮＧＳＥＶＥＲＥＳＨＯＣＫＺｈａｏＫｅｓｅｎ赵克森ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＦｉｒｓｔＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃ...     

人肝脏再生增强因子cDNA的克隆、表达及纯化

克隆人肝脏再生增强因子（ｈＡＬＲ）ｃＤＲＮＡ,构建重组表达载体并对其诱导表达,纯化。方法：提取胎儿肝组织总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出ｈＡＬＲｃＤＮＡ,克隆于载体ｐＧＥＭ－Ｔ,酶切鉴定后亚克隆至表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３,测序证实序列正确并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,ＩＰＴＧ诱导表达融合蛋白ＧＳＴ－ｈＡＬＲ,表达物通过谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化后进行Ｔｈｒｏｍｂｉｎ酶切,