ICAM-1在缺氧-再氧化引起的白细胞内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子(ICAM-1是否介导缺氧-再氧化引起的中性粒细胞(PMN)和血管内皮细胞(VEC)的粘附反应.方法血管内皮细胞(VEC)经缺氧再氧化(H/R)处理后,加入PMN,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ICAM-1及ICAM-1mRNA表达.结果VEC经H/R处理后,PMN与其粘附率增高1倍(P＜0.01),ICAM-1单克隆抗体(mAb)与CD11a/CD18mAb可明显降低粘附率的增高,H/R能增加VEC的ICAM-1及ICAM-1mRNA表达.结论ICAM-1介导H/R后的PMN-VEC间粘附反应.     

肝窦内皮细胞-肝脏的守门员

肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)作为肝脏窦状毛细血管通道,是肝脏最丰富的非实质细胞群.LSECs不仅在肝窦内形成屏障,且具有重要的生理和免疫学功能,包括滤过、内吞、抗原提呈和白细胞募集.现已明确,LSECs在维持肝脏内的免疫稳态及延缓急、慢性肝损伤免疫反应...     

缺氧对786-0细胞体外黏附和迁移能力的影响

目的:探讨缺氧条件下肾癌786-0细胞体外黏附和迁移能力的变化.方法:将786-0细胞分别置于正常氧(37℃体积分数为5%CO2和21%O2饱和度,正常组)和缺氧(37℃体积分数为10%O2、5%CO2及85%N2,缺氧组)环境中培养,采用MTT法和Boyden小室法检测2组细胞的黏附能力和侵袭能力.结果:正常组786-0细胞的黏附率为(71.6±6.1)%,与缺氧组的(84.2±4.4)%相比,差异有统计学意义(t=3.748,P=0.006).缺氧组786-0细胞的穿膜细胞数为(48±6),高于正常组的(28±5)(t=5.722,P=0.001).结论:缺氧条件下肾癌786-0细胞的黏附和迁移能力增强.     

二氧化碳气腹对大鼠肝窦内皮细胞的影响

目的 观察二氧化碳气腹对大鼠肝窦内皮细胞(SEC)和肝功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠60只分成CO2气腹组和O2气腹组,每组30只,分别检测两组大鼠气腹前和气腹24 h后谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)和血清透明质酸酶(HA)的变化,并用电镜观察两组大鼠气腹24 h后肝窦内皮细胞的变化....     

救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子表达的影响

【目的】以内皮细胞(EC)为研究对象，观察救心胶囊对缺氧损伤内皮细胞黏附分子释放的影响。【方法】运用免疫细胞化学技术，通过进行内皮细胞培养，观察内皮细胞缺氧损伤后，黏附分子(VCAM-1、ICAM-1)在细胞浆的表达情况。【结果】缺氧损伤使VCAM-1、ICAM-1表达显著升高。救心胶囊组，VCAM-1、ICAM-1表达显著降低【结论】救心胶囊能显著降低黏附分子表达，保护内皮细胞免受炎症介质损伤。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

α-1抗胰蛋白酶对肝窦内皮细胞缺氧-复氧损伤保护作用的实验研究

目的 探讨α-1抗胰蛋白酶对人肝窦内皮细胞(LSEC)冷缺氧-复氧损伤的保护作用。方法 人LSEC在体外培养,通过低温、缺氧-复氧建立缺氧-复氧损伤实验模型,观察α-1抗胰蛋白酶对LSEC缺氧-复氧损伤的影响。细胞凋亡应用原位免疫组织化学和DNA梯状条带方法检测;产生基质金属蛋白酶(MMP)的活性应用酶谱方法分析;一氧化氮的产生通过检测亚硝酸盐含量进行分析;一氧化氮合酶的表达采用细胞免疫组织化学方法进行分析。结果 低温、缺氧-复氧引起LSEC凋亡,而α-1抗胰蛋白酶抑制LSEC的凋亡。应用一氧化氮的抑制剂N-ω-硝基左旋精氨酸(L-NAME)或MMP的抑制剂BB3103明显减少缺氧-复氧诱导的LSEC的凋亡,而应用外源性一氧化氮的供体S-亚硝基-N-乙酰青霉氨(SNAP)则明显增加LSEC的凋亡,表明一氧化氮和MMP在LSEC凋亡过程中是重要的介导物。在缺氧-复氧过程中,一氧化氮合酶表达增强,一氧化氮产生增多,产生MMP的活性增强。α-1抗胰蛋白酶明显抑制缺氧一复氧过程中MMP的释放,并通过抑制一氧化氮合酶的表达减少一氧化氮的产生。结论 α-1抗胰蛋白酶通过抑制一氧化氮和MMP的产生保护LSEC的冷缺氧一复氧损伤。     

川芎嗪、阿魏酸对心脏微血管内皮细胞白细胞黏附的影响

[目的]探讨川芎嗪、阿魏酸对心脏微血管内皮细胞白细胞黏附的影响。[方法]培养人心脏微血管内皮细胞,建立缺氧复氧模型,分离人外周血白细胞,计数法检测白细胞内皮细胞黏附率,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测内皮细胞黏附分子表达。[结果]缺氧培养2h,恢复正常培养1h,心脏微血管内皮细胞白细胞黏附率明显增加,川芎嗪、阿魏酸可降低缺氧复氧心脏微血管内皮细胞与白细胞黏附。缺氧2h复氧0.5h,细胞间黏附分子-1(ICAM-1),P选择素mRNA的表达较正常组升高,缺氧2h复氧4h,ICAM-1,P选择素,E选择素mRNA的表达较正常组升高。阿魏酸和川芎嗪均不同程度降低ICAM-1、P选择素、E选择素mRNA的表达。[结论]川芎嗪、阿魏酸可通过降低内皮细胞黏附分子表达,降低白细胞内皮细胞黏附,从而可能成为预防及治疗缺血再灌注损伤的有效方法。     

油茶皂苷对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的影响

目的研究油茶皂苷(SQS)对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的作用及可能的机制。方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧-复氧损伤模型,取培养细胞上清液测定LDH活性,分别测定HU-VEC存活率,中性粒细胞黏附率、线粒体丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。同法检测中性粒细胞黏附。结果缺氧-复氧可导致HUVEC损伤及中性粒细胞黏附的增加,表现为LDH活性、MDA水平及中性粒细胞黏附率显著升高,而SOD和GSH-Px活性显著下降;SQS呈浓度依赖性地对抗上述改变。结论SQS对缺氧-复氧诱导的HUVEC损伤有保护作用,其机制可能与其抗脂质过氧化和抑制白细胞黏附有关。     

血管内皮生长因子对乙醇诱发大鼠肝窦内皮细胞凋亡的作用

目的 研究乙醇引起肝窦内皮细胞(SEC)死亡的类型和血管内皮生长因子(VEGF)对这种死亡的作用,以及涉及Ets-1和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8的作用机制.方法 按照Braet等的方法 并作改进,从Wistar雄性大鼠分离和培养SEC.然后,将SEC与乙醇(25～100 mmol/L)和VEGF(20～30 ng/ml)共同孵育6 h,采用缺口末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡.以Western印迹法测定Ets-1蛋白表达和FLICE/Caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定Caspase-8活性的变化.结果 相差显微镜下,培养3 d的SEC呈纺锤状并基本融合.而与乙醇孵育的过程中SEC趋于皱缩和死亡.荧光显微镜下,对照SEC绝大多数呈TUNEL染色阴性;添加乙醇(100 mmol/L)2 h后TUNEL染色阳性细胞开始增加,6 h后约75%细胞呈TUNEL染色阳性;并且,SEC与乙醇(25～100 mmol/L)共同孵育6 h,TUNEL染色阳性的SEC增加呈明显剂量依赖性关系(均P＜0.05).VEGF(20～30 ng/ml)明显抑制100 mmol/L的乙醇引起SEC凋亡,呈明显剂量依赖性关系(P＜0.05);加入VEGF(30 ng/ml)以后引起的TUNEL染色阳性细胞数只是单纯与乙醇孵育的71%(P＜0.05).加入100 mmol/L乙醇培养6 h后,SEC的Ets-1蛋白表达明显减少,VEGF(30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Ets-1蛋白减少.SEC与乙醇(100 mmol/L)孵育2 h时Caspase-8活性明显增加至44.9±14.3;VEGF(20和30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Gaspase-8活性增加(分别为30.4±2.0和25.2±2.2,均P＜0.05).结论 VEGF防止乙醇诱导的SEC凋亡,至少部分可能是通过抑制乙醇下调SEC表达Ets-1蛋白和乙醇上调Caspase-8活性表达.     

氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1表达的影响

目的 研究氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1（ELAM-1）表达的影响,探讨氧化应激诱导的ELAM-1的表达与白细胞介素1α（IL-1α）的关系。方法原代培养的猪眼小梁细胞经过血清饥饿培养后,用不同浓度白细胞介素-1受体拈抗剂（IL-1rα）处理或直接用1mmol／L的H2O2刺激后,用免疫细胞化学法检测小梁细胞ELAM-1的表达。结果 H2O2处理的原代培养的猪眼小梁细胞中ELAM-1表达呈阳性,高浓度（180μg／ml和600μg／m1）拈抗剂IL-1rα预处理的猪眼小梁细胞ELAM-1表达呈阴性。结论 氧化应激可诱导猪眼小梁细胞表达ELAM-1。在体外细胞培养体系,高浓度的IL-1α可拮抗氧化应激对ELAM-1表达的作用。     

珍珠水解液对肝窦内皮细胞活力及肝窦毛细血管化的干预作用

目的 探讨珍珠水解液对肝纤维化时肝窦毛细血管化病变的干预作用及机制。方法 合浦珍珠水解液与肝窦内皮细胞(HSEC)和肝星状细胞(HSC-LX2)共同孵育,采用MTT比色法测定HSEC和HSC-LX2的细胞增殖抑制率,流式细胞术测定HSC-LX2的细胞周期及细胞凋亡情况,透射电镜观察HSEC的窗孔及基底膜等微结构的变化情况。结果 瘦素激活后,HSC-LX2细胞活性显著增高(P=0.041),HSEC则出现细胞活性显著降低(P=0.004)、窗孔数量减少、窗孔直径下降、连续基底膜形成等肝窦毛细血管化现象。瘦素干预后给予低、中、高不同浓度珍珠水解液治疗,各浓度组均可使缩小及消失了的HSEC窗孔发生增多和扩大(低浓度组：P=0.020;中浓度组：P=0.028;高浓度组：P=0.032),使HSEC外成片的基膜变得稀薄甚至消失(低浓度组：P=0.020;中浓度组：P=0.028;高浓度组：P=0.032);使活化的HSC-LX2活力下降(低浓度组：P=0.018;中浓度组：P=0.013;高浓度组：P=0.009),并诱导其发生细胞凋亡(低浓度组：P=0.012;中浓度组：P=0.006;高浓...     

活血化瘀中药加高压氧对脑缺血再灌注血小板膜糖蛋白及白细胞黏附分子表达的影响

目的 观察活血化瘀中药与高压氧对脑缺血再灌注小鼠血小板膜糖蛋白、白细胞黏附分子表达的影响.方法 采用暂时结扎双侧颈总动脉的方法制造脑缺血再灌注模型,实验共分7组:假手术组、缺血再灌注组(模型组)、高压氧组、联合治疗大剂量组、联合治疗中剂量组、联合治疗小剂量组、中药中剂量组.高压氧处理组在造模后第1天开始进行高压氧处理;药物处理组在造模前5 d开始按规定剂量经胃灌服中药,每天1次;各组分别在造模后1、3、5 d 3个不同时间点处死小鼠,从小鼠眶动脉和眶静脉采血1 mL,采用流式细胞术观察各组小鼠各时点血小板膜糖蛋白CD31、CD61、CD62p及白细胞黏附分子CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD62L的变化.结果 ①活血化瘀中药联合高压氧可有效抑制脑缺血再灌注后血小板膜糖蛋白CD31、CD61、CD62p及白细胞黏附分子CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD62L的异常表达.从3种用药剂量对检测指标的作用效果来看,以活血化瘀中药中剂量组与高压氧联合应用效果更好.②单纯活血化瘀中药中剂量组亦可明显抑制脑缺血再灌注后血小板膜糖蛋白CD31、CD61、CD62p及白细胞黏附分子CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD62L的异常表达.结论 活血化瘀中药对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

缺氧对家兔白细胞与肺微血管内皮细胞粘附的影响

目的：研究缺氧所至的兔多形核白细胞－肺微血管内皮细胞占附与缺氧时间的关系及探讨缺氧所致粘附分子变化在其中的作用。方法：利用培养的家兔微血管内皮细胞及体外缺氧模型,测定家兔多形核白细胞微血管内皮细胞的粘附率,运用免疫组化及流式细胞技术测定ＣＤ１８一ＣＤ５４的表达。结果：随着缺氧时间的延长,粘附率进行性增加,缺氧可明显加强ＣＤ１８和ＣＤ５４的表达,ＣＤ１８和ＣＤ５４单抗能明显降低粘附率的增加。结论：缺     

ICAM—1在缺氧—再氧化引起的白细胞与内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）是否介导缺氧－再氧化引起的中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）的粘附反应。方法血管内皮细胞（ＶＥＣ）经缺氧再氧化（Ｈ／Ｒ）处理后,加入ＰＭＮ,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结果ＶＥＣ经Ｈ／Ｒ处理后,ＰＭＮ与其粘附率增高１倍（Ｐ＜０．０１）,ＩＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）与ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ可明显降低粘附率的增高,Ｈ／Ｒ能增加ＶＥＣ的ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结论ＩＣＡＭ－１介导Ｈ／Ｒ后的ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附反应。     

循环血小板活化与血小板-白细胞黏附的流式细胞分析法及其应用

目的建立流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析循环血小板活化(circulating platelet activation,CPA)与血小板-白细胞黏附(platelet-leukocyte adhesion,PLA)方法,为临床开展血小板相关疾病研究奠定基础。方法选择50例健康志愿者,收集枸橼酸钠抗凝血,采用CD61/PAC-1/CD62P三色法检测CPA,分析血小板早期活化率(PAC-1~+CD62P~-)和晚期活化率(PAC-1~+CD62P~+);并设置0、5、10、15、20、30、60 min 7个时间点染色,分析样本放置时间对血小板活化的影响,建立参考值。采用CD61/CD3/CD19/CD11b/CD14/CD45六色法检测PLA,分析血小板一白细胞黏附CD45~+CD61~+(PLA)、血小板-T淋巴细胞黏附CD3~+CD61~+(PTLA)、血小板-B淋巴细胞黏附CD19~+CD61~+(PBLA)、血小板-单核细胞黏附CD14~+CD61~+(PMA)、血小板-中性粒细胞黏附CD45~(low+)CD11b~+CD61~+(PNA)表达率。结果宜选用15 min点建立健康人血小板活化参考范围,早期活化百分比为:3.75(1.00~9.80)%,晚期活化百分比为:0.10(0.00~0.10)%;FCM检测PIA、PTLA、PBLA、PMA、PNA表达率,其中PMA比例最高为:(10.75±3.23)%。结论 CPA检测血样放置时间不应超过15 min,PLA检测关键在于PMA分析。建立快速、稳定、准确的CPA和PLA检测方法是正确评价血小板功能的技术保障。     

二氧化碳气腹对大鼠肝窦内皮细胞影响的实验研究

目的：观察二氧化碳气腹对大鼠肝窦内皮细胞（SEC）和肝功能的影响。方法：大鼠分成CO2气腹组和O2气腹组，分别检测两组大鼠气腹前和气腹24h后谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、凝血酶原时间（PT）和血清透明质酸酶（HA）的变化，并用电镜观察两组大鼠气腹24h后肝窦内皮细胞的变化。结果：两组大鼠气腹前和气腹24h后ALT、ALB和PT无明显变化（P>0.05）, CO2气腹组气腹24h后HA较气腹前明显增高（P<0.05）,而O2气腹组无明显变化（P>0.05）。CO2气腹组气腹24h后SEC的窗孔数明显减少，SEC下出现断续基底膜，并可见部分SEC脱落。结论：CO2气腹对大鼠SEC具有损伤作用，且损伤发生在肝功能损伤前。     

信号素3F对大鼠心肌细胞氧化应激、炎症反应及白细胞跨内皮迁移的影响

目的 探讨信号素3F对心脏骤停大鼠存活心肌细胞氧化应激、炎症反应以及白细胞跨内皮迁移的影响.方法 18只雄性Sprague-Dawley大鼠构建心脏骤停心肺复苏模型后随机分为模型组和信号素3F组,另取9只大鼠作为对照组;检测各组大鼠心肌细胞内活性氧(ROS)和过氧化氢(H2 O2)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测...     

正常和缺氧条件下磁场对人脑微血管内皮细胞增殖的影响

[目的] 观察不同强度的永磁磁场对正常和缺氧条件下人脑微血管内皮细胞（HBMEC）增殖的影响。[方法] 采用正常和缺氧两种条件体外培养HBMEC,实验分为10组,即对照组、药物组（银杏叶注射液350 mg/L）、不同强度磁场组（3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT）,各组细胞于磁场作用48 h后收集样本,用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞增殖。[结果] 正常和缺氧条件下,与对照组相比较,药物组有统计学意义（P<0.05）,各磁场组差异均无统计学意义（P>0.05）;磁场组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）.[结论] 正常和缺氧条件下,磁感强度3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT的磁场对人脑微血管内皮细胞的增殖无影响。     

肝窦内皮细胞保存—再灌注损伤的研究现状

肝脏保存—再灌注损伤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｉｅｓ）是肝移植时不可避免的病理生理过程。研究表明，在此过程中肝窦内皮细胞结构及功能的改变是引发肝内微循环障碍，最终导致肝功能损伤的根本原因。本文就此领域的研究现状综述如...