FK506对肝脏保存再灌注中肝窦内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨他克莫司（FK506）对肝脏低温保存再灌注中肝窦内皮细胞损伤的保护作用。方法 应用离体鼠肝脏保存再灌注模型,测定保存不同的时间后肝脏灌注流出液中内皮素（ET）及丙氨酸转氨酶（ALT）的含量以及透明质酸（HA）的摄取量,光镜及电镜下观察肝窦内皮细胞的形态学改变,比较分析FK506对上述指标的影响。结果 对照组随肝脏保存再灌注时间延长,灌注流出液中ET含量明显升高（P＜0．05）,HA摄取明显降低（P＜0．05）,并伴随ALT活性显著增高（P＜0．05）和肝窦内皮细胞形态学的异常改变;保存液和灌注液中均加入FK506后,上述指标异常变化均明显减轻,其差异有显著性（P＜0．05）。结论 FK506对离体大鼠肝脏肝窦内皮细胞的再灌注损伤有保护作用。     

自制HYD液低温保存大鼠肝脏方法的改进

为探讨改进大鼠肝脏低渐保存方法对鼠肝的影响，即将切取后的鼠肝灌入一定量的自制保存液（ＨＹＤ）后结扎进出肝脏的各血管，应用大鼠离体肝灌注模型，地传统保存法（对照组）和改进保存法（２０％组，３０％组及４０％组）肝脏微循环指标（门静脉灌注压，流出液内内皮素－１，台盼蓝分布时间及组织学改变），流出液有关酶指标水平及分泌胆汁量进行了系统，结果：２０％组，３０％组及４０％组肝脏微循环指标及分泌胆汁量明显优于对     

自制KYL液对大鼠肝脏低温保存后细胞凋亡影响的研究

目的 研究自制的KYL液对大鼠肝脏低温保存后细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型（noncirculated isolated perfusion of ratliver，IPRL），随机以KYL液和UW液对大鼠肝脏保存0、4、8、16、24、48h，测定灌注流出液氧自由基代谢产物（丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD）的含量，检测肝细胞内钙离子浓度，检测肝细胞凋亡率和凋亡相关基因表达，观察肝脏组织形态学变化。同时设生理盐水保存阴性对照组，了解器官保存液对大鼠肝脏有无保护作用。结果 KYL液保存的大鼠肝脏肝细胞内钙离子浓度较UW液保存者低，灌注流出液MDA和SOD含量与UW液保存者相近，两者肝细胞凋亡率及凋亡基因表达情况相近，光、电镜观察两者形态学变化基本一致。两组所有指标均较生理盐水保存组好，说明两种液体对大鼠肝脏均有保护作用。结论 自制的KYL液对大鼠肝脏的保存效果在钙拮抗方面略优于UW液，在抑制细胞凋亡方面与UW液相当，而在防止细胞水肿方面较UW液稍差。     

两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较

目的探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法。方法制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝脏灌注模型,分为实验组（经门静脉和腹主动脉灌注法,10只）;对照组（经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,10只）,灌注后取出肝脏置于4℃威斯康星大学保存液保存,12h后切取肝组织。行苏木素-伊红（HE）染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子（NF）-κB（SABC法）的表达情况。结果经12h冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示：肝脏小叶结构紊乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱落,但两组之间无明显差别。两组之间NF-κB阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论经门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大鼠肝脏的保护作用无差异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用。     

兔肝缺血/再灌注损伤肝组织氧压及线粒体形态观察

目的　观察兔肝缺血 /再灌注损伤不同时相肝组织氧压及线粒体形态变化 ,研究常温下肝脏缺血 /再灌注的损伤及其机制。方法　 4 0只兔随机分为 2组即缺血组和对照组。组织气体分析仪持续测定兔肝组织氧压 (Hepatic tissue oxygeonpressure Ptio2 ) ;电镜观察肝脏病理及线粒体形态改变 ,图像分析仪对线粒体的立体形态计量分析。结果　缺血组兔在肝脏缺血后肝 Ptio2值开始下降 ,再灌注 6 0 min时肝 Ptio2仍未恢复正常 (P<0 .0 5 )。电镜观察发现 :肝缺血 30 min,线粒体肿胀、内质网扩张 ,再灌注 6 0 m in后线粒体肿胀进一步加重 ,部分线粒体破坏 ,结构不清 ,线粒体空泡变性。兔肝缺血再灌注损伤后肝细胞线粒体与对照组相比 ,其比表面减小、平均体积增大 (P<0 .0 5 )。结论　常温下入肝血流阻断可以导致肝脏缺血 /再灌注后肝细胞功能障碍和病理损害。其作用机制与缺血期肝细胞缺氧、再灌注期肝脏微循环障碍和肝细胞线粒体的损伤有关     

FK506对大鼠离体肝脏保存再灌注肝细胞凋亡的影响

肝细胞凋亡是引起肝脏缺血再灌注损伤的重要机制[1].我们建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,观察肝脏保存再灌注中肝细胞凋亡变化和FK506对肝细胞凋亡的影响.为临床肝移植围手术期提供肝保护探讨新的方法和理论依据.     

还原型谷胱甘肽在离体肝脏保存中应用的实验研究

目的:研究UW液中加入还原型谷胱甘肽在离体肝脏保存中对肝细胞的保护作用。方法:封闭群雄性Wistar大鼠,采用原位灌注切取肝脏,分别用UW液、改良UW液(加入谷胱甘肽0.95g/L)0～4℃保存12h、24h、36h后行Krebs-Henseleit液离体灌注,记录肝脏胆汁分泌总量,并检测灌注流出液AST、LDH含量。结果:随着保存时限延长,灌洗液中AST、LDH值升高,胆汁分泌总量呈下降趋势。12h、24h,两组之间均无统计学差异(P>0.05)。保存36h,两组差异均无统计学意义(P<0.05)。离体灌注液生化指标显示改良UW液组长时间保存时肝脏细胞损伤程度较低。结论:在离体肝脏保存过程中,UW液中加入还原型谷胱甘肽对肝脏长期保存(36h)有保护作用,但24h内对肝脏保存效果影响不大,临床需在24小时内完成肝移植手术,故保存不需要添加还原型谷胱甘肽。     

丹参对大鼠离体保存再灌注肝脏IL-10 mRNA的影响

目的：探讨丹参对大鼠离体保存后再灌注肝脏IL-10 mRNA的影响.方法：建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,.应用RT-PCR方法检测UV液、UV液＋丹参保存并再灌注的离体肝脏的IL-10 mRNA表达.结果：丹参保存1 6、24、32 h再灌注的大鼠离体肝脏IL-10 mRNA表达分别为68.55±5.37、49.73±3.74、32.65±2.39;明显高于对照组（37.62±3.3723.70±2.35、1371±1.28）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：丹参能够增加肝脏保存后再灌注IL-10 mRNA表达,对肝脏保存再灌注损伤可能具有防治作用.     

异氟醚减少离体鼠肝缺氧-复氧损伤

目的研究不同浓度异氟醚对离体鼠肝缺氧-复氧损伤的影响.方法将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林氏碳酸氢盐缓冲液恒压灌流（有氧状态用1.2kPa,缺氧状态用0.2kPa）,维持生理pH值和温度,实时监测灌流液中乳酸脱氢酶（LDH）变化.不同浓度异氟醚随混合气带入人工肺.用细胞色素C还原法测非循环灌流中氧自由基（O2^-）产量.结果（1）异氟醚对基础状态下离体肝LDH释放无明显影响,而对缺氧-复氧后离体肝LDH释放呈剂量依赖性抑制作用.（2）2 MAC异氟醚可明显抑制肝复氧后O2^-产生.结论异氟醚抑制了复氧后LDH升高与抑制复氧即刻O2^-产生密切相关,异氟醚可能通过减少细胞外氧应激,从而保护肝脏免受损伤.     

环孢霉素A预处理对大鼠移植肝脏影响的实验研究

目的：研究环孢霉素A（CsA）预处理保存大鼠肝脏对原位移植后的植肝功能影响。方法：将大鼠随机分为A组（对照组，HTK液保存组）和B组（实验组，HTK液＋CsA保存组），两组均保存12h后行原位肝移植，分别于供肝保存0h、12h及植术后7d检测各组血清谷丙转氨酶（AST），谷草转氨酶（AST），乳酸脱氢酶（LDH）浓度及各时间段线粒体呼吸功能RCR及P／O值。通过HE染色及原位凋亡染色观察各组肝脏组织细胞形态学改变及凋亡情况。结果：B组血清ALT、AST、LDH活性于保存12h显著低于A组，B组各时间段RCR及P／O值于保存12h，移植术后0．5h及术后7d均高于A组。细胞形态学检查B组移植肝组织细胞结构改变轻微，凋亡指数于保存12h．术后0．5h均低于A组。结论：CsA预处理供肝主要通过保护线粒体功能减轻冷保存期和再灌注对大鼠供肝的损伤及抑制肝细胞的凋亡，使大鼠原位肝移植后存活率升高。