快速检测抗日本血吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以血吸虫虫卵浸出液为抗原，金标记兔抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗血吸虫抗体的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。以该法检测血吸虫病患者血清８７份，阳性检出率为９８．９％；非流行区血清１００份，阴性符合率为１００％；１５例肺吸虫病患者血清，１例出现阳性反应，交叉反应率为６．７％；１０例华支睾吸虫病患者和２５例乙型肝炎患者，均无交叉反应。本法与ＥＬＩＳＡ比较，符合率达９６．７％。揭示ＤＩＧＦＡ的敏感性和特异性与ＥＬＩＳＡ相近，但方法简便、快速、试剂稳定，且无需特殊设备，适合于基层单位和现场应用     

金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上,以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体,金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体,建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果　用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份,其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ;１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性;１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ,与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应;１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性,交叉反应率为６－７ ％ ;与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ,经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论　用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性,并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备,有广阔的应用前景。     

金标渗滤法快速检测血吸虫循环抗原的现场应用研究

将抗重组蛋白ＳＶＬＢＰ－ＩｇＧ用于ＤＩＧＦＡ检测２２２１例血清中血吸虫循环抗原,其中急性血吸虫病人血清７０份,慢性血吸虫病人血清３０７份,循环抗原检出率分别为１００％和６８．４％。非流行区健康人血清２００份,未见阳性反应。除肺吸虫外,与其它寄生虫或非寄生虫感染病人血清无明显交叉反应。用ＤＩＧＦＡ单盲法检测２批血清,结果显示对急性血吸虫病人的敏感性均为１００％;对慢性血吸虫病人的敏感性分别为６９．４     

成虫童虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验…

以肺吸虫成虫童虫冰冻切片抗原片做间接荧光抗体试验及免疫酶染色试验对比检测９４份肺吸虫感染者和４０例正常健康人血清，两法的阳性率分别为９３．６、９５．７％和８９．４％，假阳性率均为０。ＩＦＡＴ和ＩＥＳＴ对比检测３４份血吸虫病人血清，３５份华支睾吸虫病人血清和３０份肺结核病人血清，ＩＦＡＴ出现的交叉反应率为１４．７％、５．７％、０和１４．７％、８．６％、０。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率为５．９％、０、０和     

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测？…

目的 探索一种简捷的检查血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）的多克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ），并以Ｓ－ＥＬＩＳＡ作对比。结果 用Ｓ－ＤＩＧＦＡ和Ｓ－ＥＬＩＳＡ平行检测９５例慢性血吸虫病患者，阳性检出率分别为８１．０５％和８２．１１％；正常人血清１８０份，两者的假阳性率分别     

血吸虫病快速免疫诊断——胶体染料试纸条法的研究

目的 开发一种血吸虫病快速免疫诊断方法。方法 用国产胶体染料Ｄ－１标记日本血吸早虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），以此标记物与血吸虫病人血清中的抗血吸虫抗体反应，再用点有羊抗人ＩｇＧ（第二抗体）的硝酸纤维层析膜以年捕获标记抗原与抗体的复合物。结果 用 纸条法检测急性血吸虫病人血清３０份，慢性血吸虫病人血清８４份，其敏感性分别为９６．７％和９４．０％，检测健康人血清６０份，其特异性为９６．７％，检测肝吸虫     

华支睾吸虫成虫抗原免疫酶染色试验和间接免疫…

应用成虫冰冻切片抗原作免疫酶染色试验及间接免疫荧光抗体试验，对比检测了５１份华支睾吸虫病患者和５０份健康人血清，两法的阳性率分别为９２％和８８％；假阳性率分别为２％和４％，应用ＩＥＳＴ和ＩＦＡＴ双比检查２２份急性血吸虫病患者血清，２０份慢性血吸虫病患者血清及１５份并殖吸虫病患者血清。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率分别为１４％、５％和０；ＩＦＡＴ出现的交叉反应率分别为１４％、１０％和０。表明两法诊断华支睾     

免疫金银染色法诊断班氏丝虫病的初步研究

应用免疫金银染色法（ＩＧＳＳ）检测１２３份班氏丝虫病人血清，５０份非流行区健康人血清和３２份流行区健康人滤纸于血液，阳性符合率为９８．３７％，阴性符合率分别为１００％和９６．８８％。非流行区健康人的阴性符合率显著高于ＩＦＡＴ的８６．００％（Ｐ＜０．０１）。与蛔虫病的交叉反应，１５例中１例出现阳性反应。用ＩＧＳＳ检测马来丝虫沙鼠血清抗体结果，阳性符合率与阴性符合率均为１００％。用班氏丝虫病人和健康人血清进行重复试验，结果均一致。表明ＩＧＳＳ敏感性高，特异性强，结果稳定，可用于班氏丝虫病的诊断。     

幽门螺杆菌cagA基因的克隆表达及其产物的应用

目的体外表达ＣａｇＡ蛋白，发展快速而简便的检测ｃａｇＡ＋Ｈｐ感染的免疫学方法．方法用ＰＣＲ技术克隆ｃａｇＡ基因５端片段（８５４ｂｐ）于ｐＢＶ２２０中，在ＤＨ５α中温度诱导表达Ｍｒ３８０００的单体ＦＣａｇＡ，复性后分别作阴离子交换及凝胶柱层析，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＦＣａｇＡ的抗原性．以重组ＦＣａｇＡ为抗原，通过制备胶体金及免疫胶体金，建立了斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）快速检测ｃａｇＡ＋Ｈｐ感染的方法．结果ＦＣａｇＡ具有抗原性．以该抗原所建立的斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）快速检测ｃａｇＡ＋Ｈｐ感染的方法仅需２ｍｉｎ～３ｍｉｎ可完成，无需特殊设备，并可单人份操作．经过与ＥＩＡ法对比检测２６２例患者血清，本方法的特异性为９８５％，敏感度为９６８％．结论具有抗原活性的ＦＣａｇＡ蛋白的表达及ＤＩＧＦＡ检测抗ＣａｇＡ抗体方法的建立，对ＣａｇＡ＋Ｈｐ感染的流行病学研究具有重要意义     

I型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶反应性T淋巴细胞与自身抗体的比较

应用ＮＡＧ微量酶反应比色法反映细胞增殖，检测３０例Ｉ型糖尿病（Ｉ型ＤＭ）患者外周血单个核细胞对谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）的反应性，并以Ⅱ型糖尿病（Ⅱ型ＤＭ）、其它自身免疫性疾病、正常人各３０例作对照。同时应用间接ＥＬＩＳＡ法检测Ｉ型ＤＭ患者血清中ＧＡＤ自身抗体作比较。结果ＧＡＤ反应性Ｔ淋巴细胞Ｉ型ＤＭ的阳性率为３６．７％（１１／３０），其它自身免疫性疾病１０％（３／３０），而Ⅱ型ＤＭ和正常对照组无一例     

DIFA等四项免疫学方法检测血吸虫病合并弓形虫感染的研究

弓形虫ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ对急性血吸虫病有严重的交叉反应，影响弓形虫病的临床诊断。本文用ＤＩ－ＦＡ、ＩＦＴ、ＩＳＡＧＡ－ＩｇＧ和ＩＨＡ检测６６例急性血吸虫病，结果其阳性率分别为１９．７０％、２２．７３％、１６．６７％和６５．１６％；用ＤＩＦＡ和ＩＦＴ检测健康人群的弓形体阳性率为９％；还用上述方法检测两种病的混合血清和兔急性血吸虫病血清。通过比较、分析认为前三种方法可用于两病的鉴别。本文还用上述方法检测２１例慢性血吸虫病，阳性率在０～１９．０５％之间，无明显血清交叉反应。     

成虫童虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验诊断肺吸虫病

以肺吸虫成虫童虫冰冻切片抗原片做间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）及免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ）对比检测９４份肺吸虫感染者和４０例正常健康人血清,两法的阳性率分别为９３．６％、９５．７％和８９．１％、９３．６％,假阳性率均为０。ＩＦＡＴ和ＩＥＳＴ对比检测３４份血吸虫病人血清,３５份华支睾吸虫病人血清和３０份肺结核病人血清。ＩＦＡＴ出现的交叉反应率为１４．７％、５．７％、０和１４．７％、８．６％、０。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率为５．９％、０、０和８．８％、５．７％、０。结果表明两法用于肺吸虫病的诊断均有较高的敏感性和特异性,而且抗原定位好,ＩＥＳＴ不需荧光显微镜或荧光设备,较易推广应用     

斑点金免疫渗滤试验快速检测抗Hp细胞毒素相关蛋白A抗体

目的建立快速检测抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）的斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）．方法将ＣａｇＡ抗原点于硝酸纤维素膜上，然后依次加入患者血清及用抗人ＩｇＧ抗体标记的胶体金颗粒，如血清中存在抗ＣａｇＡ的ＩｇＧ，在膜上便出现一个红色斑点．结果ＤＩＧＦＡ仅需几分种便可完成．当用ＤＩＧＦＡ及ＥＩＡ对１０８份血清进行检测时，两种方法之特异性及敏感性相当．当以聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测胃粘膜组织中ＨｐＣａｇＡ的结果作为参照时，ＤＩＧＦＡ的特异性及敏感性分别为９８％（５７／５８）和９４％（４５／４８）．结论ＤＩＧＦＡ特异性强，敏感度高，操作快速且简便，在ＣａｇＡ阳性Ｈｐ感染的检测方面有广泛应用前景     

双夹心DIGFA检测血吸虫循环抗原的应用研究

以日本血吸虫重组极低密度脂蛋白（ＳＶＬＢＰ）制备的多抗为捕捉抗体，胶体金标记血吸虫虫卵多克隆抗体为覆盖抗体，采用双夹心金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测血吸虫病病人血清中循环抗原。结果７０份急性血吸虫病病人血清的阳性率为１００％，１５９份慢性血吸虫病病人血清的阳性检出率为６２．３％；１２０份流行区健康人群血清检测均阴性；１００份非流行区健康人群血清，２份呈阳性反应，假阳性率为２％。与肺吸虫病病人血清     

弓形虫病直接凝集试验的研究

我们在国内首次建立了检测弓形虫病ｌｇＧ抗体的微孔板法直接凝集试验（ＤＡＴ）及其改良法（ＭＤＡＴ）。经近５年的研究和应用结果表明：该试验具有较高的敏感性和特异性，并能检出较早期的ｌｇＧ抗体。ＤＡＴ与法国的ＤＡＴ（法－ＤＡＴ）和日本的胶乳凝集试验（日－ＬＡＴ）比较，总符合率分别为９７．３％和９５．５％。ＤＡＴ与ＩＦＡ的比较，阳性检出率无显著差异，符合率为９３．４～９５．９％。ＭＤＡＴ与丹麦的染色试验（ＤＴ）和两种间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）比较，阳性检出率无显著差异，总符合率亦达９１．８～９６．０％。用ＷＨＯ国际生物标准化实验室提供的标准的抗弓形虫人血清定量测得ＭＤＡＴ的灵敏度为０．０９ＩＵ／ｍｌ，接近于改良前的灵敏度（０．０８ＩＵ／ｍｌ）和ＤＴ的灵敏度（０．１１ＩＵ／ｍｌ），而高于国外同类试剂盒的灵敏度。     

IFAT检测登革热IgM抗体的初步探讨

目的探讨用间接免疫荧光试验（ＩＦＡＴ）检测登革热ＩｇＭ抗体。方法采集１９９５年７～１１月份广东省登革热Ⅰ型流行期间疑似患者发病１～７ｄ血清６２份,用ＩＦＡＴ检测登革热ＩｇＭ抗体。结果阳性率为２４．１９％（１５／６２）,发病４～５ｄ的阳性率最高为４０．００％以上。ＩｇＭ阳性滴度在１∶１０～１∶４０之间,多数为１∶１０（８／１５）。本法与乙脑血清有交叉反应,与其他非登革热血清无交叉反应。在发病５～６ｄ的患者中可同时检测出登革热的ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结论发病１～３ｄ的血清可进行病毒分离,４～６ｄ的血清可检测ＩｇＭ抗体,如阴性则再检测ＩｇＧ,以提高登革热的检出率。     

混合或单一单抗检测肺吸虫病人血清中循环抗原的研究

本文报道应用由７种抗卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫单克隆抗体（ＰｗＭ和ＰｗＡ一ＭｃＡｂ）组成的混合ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ法检测辽宁省凤城县肺吸虫病流行区２０８份滤纸血循环抗原（ＣＡｇ），阳性率为３８％（７９／２０８）。对１００份同时有滤纸血和血清样本者同步检测进行比较，滤纸血ＣＡｇ阳性率为６２％（６２／１００），血清ＣＡｇ阳性率５７％（５７／１００），符合率为９１％，经确切概率法处理两者无显著性差异，说明滤纸血可代替血清作ＣＡｇ检测。分别用７种ＭｃＡｂ检测５５份混合ＭｃＡｂ检测为阳性的样本，４种抗囊蚴ＭｃＡｂ中Ｇ＿２Ｂ＿３检出率最高，Ａ＿３Ａ＿７次之，３种抗成虫ＭｃＡｂ中Ａ＿３Ｄ＿３检出率最高，表明用Ｇ＿２Ｂ＿３或Ａ＿３Ａ＿７与Ａ＿３Ｏ＿３混合检测Ｐｗ病人ＣＡｇ更省更好。但在斯氏肺吸虫流行区应首选Ａ＿２Ｅ＿７，因其与斯氏Ａｇ有强烈的交叉反应，对斯氏肺吸虫患者血清ＣＡｇ检出率高达９４．７％（１８／１９）。本研究结果提示上述７种ＭｃＡｂ单独应用或不同组合后应用有助于提高ＣＡｇ的检出率并有助于肺吸虫感染虫种和虫期的判别。     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其中３株ＭｃＡｂｓ（Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１）的靶抗原定位于配子体以及大滋养体和裂殖体期无性体原虫；其余５株仅定位于配子体。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验，ＭｃＡｂ所识别的蛋白区带各异（１６－１２０ｋＤ），与已发现的有性期特异性抗原相比较，３２ｋＤ抗原国内外尚未报道。各株ＭｃＡｂ与猴疟（Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ）红内期、鸡疟（Ｐ．ｇａｌｉｎａｃｅｕｍ）子孢子和杜氏利什曼原虫前鞭毛体均无交叉反应。     

人工合成九种人类免疫缺陷病毒多肽的抗原性研究

为了建立敏感、特异的人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）抗体检测方法，采用固相法合成了ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２的９条多肽，多肽分别位于ＨＩＶｇｐ４１、ｐ２４和ｇｐ３６区域，长度为１０～２７个氨基酸。以合成肽为抗原分别包被酶标板，采用间接ＥＬＩＳＡ法，比较检测了１０份抗－ＨＩＶ－１型和４份抗－ＨＩＶ－２型阳性血清，结果表明ｇｐ４１的１０肽（ＳＰ１）、２１肽（ＳＰ５）、２６肽（ＳＰ６）、２７肽（ＳＰ７）均能检出１００％的抗－ＨＩＶ－１阳性血清，以ＳＰ７抗原性最强。ｇｐ３６的２６肽（ＳＰ８）、２７肽（ＳＰ９）能检出全部的抗－ＨＩＶ－２阳性血清，两者对抗－ＨＩＶ－２血清的亲和性相似，但对抗－ＨＩＶ－１型血清的反应性以ＳＰ８强。以ＳＰ７和ＳＰ８混合包板，能同时检出全部抗－ＨＩＶ－１和抗－ＨＩＶ－２阳性血清；与ＵＢＩ试剂比较，检测了６０份抗－ＨＩＶ阳性血清标本及９６份阴性血清标本，其阳性符合率为９８．３３％（５９／６０），阴性符合率为１００％，总符合率为９９．３６％（１５５／１５６）。表明ＳＰ７和ＳＰ８混合包板可用于ＨＩＶ感染的诊断。     

浸棒-夹心-胶体染料免疫试验检测血吸虫病患者循环抗原方法的建立及应用

目的：建立检测感染宿主血清中循环抗原的简易免疫学试验方法。方法：从国产的工业染料中首次筛选出 １ 种能用于免疫显色反应的淡紫色染料莲（ Ｈ Ｆ Ｒ Ｌ）,用 Ｉｇ Ｍ 类别抗日本血吸虫组合单抗 Ｄ Ｈ Ｃ 标记染料,并探索最适标记条件。建立浸棒 夹心 胶体染料免疫试验（ Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ）,检测宿主血清中日本血吸虫循环抗原。结果： Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ检测日本血吸虫 Ｓ Ｅ Ａ 的最低检出极限为 ５ ｎｇ／ｍ ｌ,分别检测急性血吸虫病患者 １４ 例及慢性血吸虫患者 １１３ 例的血清,其阳性率分别为 １００％ 和 ５２．２％ ,检测正常学生血清 １１３ 例,特异性为 ９２．９％ 。该法的敏感性及特异性与ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 相似,且两法联合检测可提高检出率,而特异性不变,提示两法有一定的诊断互补叠加效应。标记染料室温下保存 １ ｗ ｋ 活性不变。结论： Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ 操作简便、试剂价廉,有广泛的应用潜力。