经前平颗粒对愤怒模型大鼠皮质中5-HTR2C表达的干预作用

目的:观察愤怒反应模型大鼠顶区皮质和额区皮质5-羟色胺2C受体(5-HTR2C)的表达以及中药经前平颗粒的干预作用,探讨其可能的中枢作用机制。方法:采用居住入侵结合社会隔离的方法制备愤怒反应大鼠模型,并予以经前平颗粒进行药物干预,运用半定量RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠顶区皮质和额区皮质中5-HTR2C mRNA及其蛋白表达水平。结果:与正常组相比,愤怒模型大鼠顶区皮质和额区皮质中5-HTR2C mRNA和蛋白表达均显著性升高(P<0.05,P<0.01),经前平颗粒可显著下调其异常表达(P<0.01)。结论:愤怒情志刺激可导致大鼠顶区皮质和额区皮质5-HTR2C表达升高,经前平颗粒可对5-HTR2C表达异常变化起到调节作用,提示5-HTR2C基因与愤怒情绪密切相关,并且可能是经前平颗粒的中枢作用靶点之一。     

经前平和经前舒颗粒对愤怒郁怒情绪模型大鼠下丘脑γ氨基丁酸B2受体表达的影响

目的 探索愤怒、郁怒情绪与γ氨基丁酸B2受体(GABABR2)的关系,以及调肝方药经前平颗粒和经前舒颗粒的中枢干预机制.方法采用居住入侵和社会隔离的方法复制愤怒、郁怒情绪大鼠模型,用RT-PCR和Western Blot的方法检测GABARR2 mRNA和蛋白的表达差异.结果与正常对照组相比,愤怒、郁怒情绪模型大鼠下丘脑GABABR2 mRNA水平和蛋白水平均明显下降(P＜0.01～0.05),而且愤怒模型组的降低程度明显大于郁怒模型组.与各模型组相比,各给药组GABABR2 mRNA水平和蛋白水平均有不同程度的升高.结论大鼠下丘脑GABABR2表达降低可能是影响大鼠愤怒和郁怒情绪的重要共性机制之一;中药经前平和经前舒颗粒对GABABR2表达异常变化具有调节作用.     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB表达水平的影响

目的 通过研究PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB基因的表达,探讨PMS肝气郁证的微观发病机制及中药经前舒颗粒的作用靶点.方法 束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠,用经前舒颗粒干预治疗,运用半定量RT-PCR和Western Blotting方法检测正常组、模型组、给药组大鼠下丘脑区MAOA、MAOB mRNA及其蛋白表达水平;通过单因素方差分析及LSD法统计数据.结果 与正常组相比,PMS肝气郁证模型组大鼠MAOA mRNA在下丘脑表达显著升高(P<0.05),蛋白表达极显著升高(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与模型组相比,MAOA mRNA在下丘脑表达降低(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与正常组相比,MAOA、MAOB mRNA及蛋白在大鼠下丘脑中表达均无统计学差异(P>0.05).结论 模型组大鼠与正常组大鼠相比,下丘脑MAOA基因表达升高,通过经前舒颗粒干预后,恢复正常.说明MAOA基因与PMS肝气郁证相关,并且可能是经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一.     

经前舒颗粒对大鼠海马5-HT含量及其5-HT3B受体表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对郁怒模型大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA水平以及5-HT含量的影响,研究郁怒情绪的中枢机制,探讨经前舒颗粒的中枢作用机制.方法:以居住入侵方法制备大鼠郁怒情绪模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,用蛋白质印迹技术(WB)检测各组大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白水平表达量,半定量RT-PCR技术检测各组大鼠海马5-HT<,3B>受体mRNA的表达.高效液相色谱-荧光检测器检测海马中5-HT的含量.结果:与正常组比较,模型组大鼠海马5-HT<,3B>受体mRNA水平和蛋白表达水平都极显著升高(P<0.01),5-HT含量显著下降(P<0.05);与模型组比较,经前舒颗粒组大鼠海马蛋白表达和mRNA水平都极显著降低(P<0.01),5-HT含量显著升高.结论:郁怒刺激能显著升高大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA表达水平并显著降低5-HT的含量,调肝方药经前舒颗粒可能通过下调海马过高的5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA水平以及上调5-HT含量达到调肝解郁治疗疾病的目的.     

经前舒颗粒对大鼠海马5-HT3B受体mRNA水平和蛋白表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对郁怒模型大鼠海马5-HT3B受体蛋白表达和mRNA水平以及5-HT含量的影响,研究郁怒情绪的中枢机制,探讨经前舒颗粒的中枢作用机制。方法:以居住入侵方法制备大鼠郁怒情绪模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,用蛋白质印迹技术(WB)检测各组大鼠海马5-HT3B受体蛋白水平表达量,半定量RT-PCR技术检测各组大鼠海马5-HT3B受体mRNA的表达。高效液相色谱-荧光检测器检测海马中5-HT的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马5-HT3B受体mRNA水平和蛋白表达水平都极显著升高(P<0.01),5-HT含量显著下降(P<0.05);与模型组比较,经前舒颗粒组大鼠海马蛋白表达和mRNA水平都极显著降低(P<0.01),5-HT含量显著升高。结论:郁怒刺激能显著升高大鼠海马5-HT3B受体蛋白表达和mRNA表达水平并显著降低5-HT的含量,调肝方药经前舒颗粒可能通过下调海马过高的5-HT3B受体蛋白表达和mRNA水平以及上调5-HT含量达到调肝解郁治疗疾病的目的。     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑ERα、ERβ mRNA表达的研究

目的：检测经前期综合征（PMS）肝气逆证模型大鼠下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达,观察经前平颗粒对PMS肝气逆证的干预作用。方法：以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆大鼠模型,以经前平颗粒干预治疗,采用RT-PCR法检测模型大鼠下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达。结果：与正常组相比,PMS肝气逆证组下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达降低,PMS肝气逆给药组下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达无差异。结论：肝气逆证模型下丘脑ERαmRNA、ERβmRNA表达显著性升高,经前平颗粒对PMS肝气逆证的异常变化具有调节作用。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证 大鼠海马和下丘脑5-羟色胺转运体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠海马、下丘脑5-羟色胺转运体(5-HTT)表达的影响,从分子水平探讨经前舒颗粒的作用机制。方法:雌性SD大鼠随机分为正常对照组、肝郁模型组、经前舒颗粒给药组(10 g.kg-1)和氟西汀给药组(0.002 5 g.kg-1),束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组大鼠ig给药5 d后,旷场实验、糖水偏好实验对模型进行评价,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测大鼠海马和下丘脑5-HTT的mRNA及蛋白的表达。结果:与肝郁模型组相比经前舒和氟西汀给药组大鼠糖水偏好指数及旷场实验得分均显著升高(P<0.05,P<0.01);经前舒和氟西汀给药均能显著上调海马和下丘脑中5-HTT的mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),两给药组间无显著性差异。结论:经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马、下丘脑中5-HTT的表达而发挥作用。     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑和海马μ阿片受体表达的影响

目的探讨经前期综合征(PMS)肝气逆证的发病机制及经前平颗粒的干预机制。方法将30只处于非接受期的SD大鼠随机分为正常组、模型组、给药组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用数字脉冲电刺激噪音干扰仪刺激5天,制备PMS肝气逆证模型。同时,正常组和模型组灌胃生理盐水1ml/100g体重,给药组予经前平颗粒(0.16g/100g体重)。每天1次,连续5天。检测各组大鼠下丘脑和海马μ阿片受体mRNA和蛋白表达。结果 PMS肝气逆证大鼠下丘脑和海马μ阿片受体mRNA和蛋白表达均显著升高,经前平颗粒可使恢复至近似正常水平。结论下丘脑和海马μ阿片受体表达升高是经前期综合征的发病机制之一,经前平颗粒可通过抑制该受体表达而发挥疗效。     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证大鼠脑μ阿片受体mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察经前平颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome, PMS)肝气逆证大鼠脑顶区皮质、额区皮质、下丘脑、海马μ阿片受体(μ opioid receptor, MOR) mRNA及蛋白的表达的影响。方法 取20只大鼠制备PMS肝气逆证大鼠模型。造模后大鼠分为模型组、中药组,每组10只。另选取10只大鼠作为正常对照组(正常组)。造模同时,中药组大鼠给予经前平颗粒 (1.6 g/kg) 灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水(1 mL/100 g)灌胃,每天1次,连续5天。采用RT-PCR和Western blot法分别检测大鼠顶区皮质、额区皮质、下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带相对较弱,光密度值降低,顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白相对表达降低;下丘脑、海马MOR mRNA及蛋白电泳条带相对较强,光密度值升高;下丘脑、海马MOR mRNA及蛋白相对表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带增强,顶区皮质MOR mRNA表达升高,顶区皮质和额区皮质MOR蛋白相对表达升高;下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白电泳条带亮度减弱,下丘脑和海马MOR mRNA相对表达降低,海马MOR蛋白相对表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。结论 MOR在PMS肝气逆证大鼠不同脑区呈现特异性表达,经前平颗粒表现出相应调节作用。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马下丘脑5-羟色胺1A受体( serotonin receptor-1A,5-HT1AR)表达水平的影响.方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验评价模型,RTPCR和Western blot方法分别检测大鼠海马和下丘脑5-HT1AR的mRNA及蛋白的表达.结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,海马、下丘脑5-HT1AR mRNA和蛋白表达均显著升高.结论:经前舒颗粒可上调海马和下丘脑中5-HT1AR的表达,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证大鼠下丘脑ERα,ERβ分布与表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑不同核团雌激素受体(ER)α,ERβ蛋白分布及表达的影响,研究经前舒颗粒治疗该病症的中枢作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型给药组,每组10只.采用慢性束缚应激造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型.造模同时,模型给药组按10 g·kg-1剂量ig给药.造模结束后,通过免疫组织化学技术ABC法检测各组大鼠雌激素受体α,β在下丘脑中的定位分布并分析其积分吸光度(IA);HPLC检测各组大鼠下丘脑中5-羟色按(5-HT)含量.结果:3组大鼠雌激素受体ERα,ERβ主要分布在下丘脑的腹内侧区(VMH)核团,分布区域无差异.模型组VMH区ERα,ERβIA分别为163605±27284和147318±24924与正常组IA(130156±32579,105430±28641)相比显著升高(P ＜0.05,P＜0.01);给药组ERα,ERβIA为122020±21 287和77482±31112,与模型组相比显著降低(P＜0.01,P＜0.01).模型组大鼠下丘脑5-HT含量(454.51 ±65.18)μg·L-1与正常组(144.47±42.20) μg· L-1相比显著升高(P＜0.01),给药组(234.11±14.38)μg·L-1与模型组相比5-HT含量显著下降(P＜0.01).结论:下丘脑VMH区ERα,ERβ蛋白表达升高可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一.经前舒颗粒可有效改善这种状态,提示下丘脑ERα,ERβ可能是该药治疗PMS肝气郁证的部分作用靶点.     

经前平颗粒对PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体表达的影响

目的探讨PMS肝气逆证与μ阿片受体表达量的关系以及经前平颗粒的微观作用机制。方法以脉冲电刺激法制备PMS肝气逆证大鼠模型,运用半定量RT-PCR和Western blot技术检测PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体的表达量。结果 PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体的表达量均显著降低,给予经前平颗粒后能显著提高该基因表达。结论 PMS肝气逆证的发生可能与脑中枢顶区和额区皮质中μ阿片受体表达量下降有关,调节该基因表达异常可能是经前平颗粒的部分药理作用靶点。     

愤怒郁怒情绪反应猕猴模型制备及评价研究

目的：研制愤怒郁怒情绪反应猕猴模型,为愤怒郁怒情绪反应脑中枢机理研究提供合适的研究对象。方法：以雌性实验猕猴为对象,经由社会层级压力应激法诱发猕猴出现怒情绪,进而应用前期研制《雌性实验猕猴情绪评价量表》对猕猴不同情绪类型进行量化打分,并依据打分结果及判别标准鉴别分化出愤怒、郁怒情绪亚型,以期完成怒情绪不同亚型评价。结果：刺激造模后,愤怒模型组猕猴愤怒因子积分较正常对照组显著增加（P<0.01）,而郁怒模型组猕猴愤怒因子积分较正常对照组及愤怒模型组均有显著差异（P<0.01）。愤怒模型组猕猴抑郁因子积分较正常对照组无显著差异（P＞0.05）,而郁怒模型组猕猴抑郁因子积分较正常对照组及愤怒模型组均有显著差异（P<0.01）。结论：应用社会层级压力应激法造模能较好诱导出实验猕猴出现预期靶情绪,主观观测及客观评分结果可作为评价实验猕猴愤怒郁怒靶情绪的测量方法,该思路及手段可为愤怒郁怒产生机制及愤怒郁怒诱发情志病证发病机理研究提供合适的实验对象。     

电针对移动电话辐射小鼠耳蜗核中5-羟色胺受体基因表达的影响

目的:观察移动电话辐射对小鼠耳蜗核5-羟色胺受体1B(5-HTR 1B)、5-羟色胺受体2C(5-HTR 2C)基因表达的影响,进而探讨针刺治疗耳鸣的可能机制。方法:30只昆明小鼠随机分为2组,6只作为空白对照组,其余24只接受处于上网及通话状态的移动电话辐射复制耳鸣模型。造模结束后,6只小鼠为模型组,其余18只随机分为模型对照组、翳风穴组(电针双侧"翳风"穴)、肾俞穴组(电针双侧"肾俞"穴),翳风穴组、肾俞穴组每次治疗20min,每日1次,连续7d。RT-PCR法检测各组小鼠耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达情况。结果:与空白对照组比较,模型组及模型对照组小鼠耳蜗核5-HTR 1B明显降低(P0.05),5-HTR 2 C显著升高(P0.01);而翳风穴组较模型组耳蜗核5-HTR 1 B明显升高(P0.01),5-HTR 2C显著降低(P0.01);与翳风穴组相比,肾俞穴组干预效果较弱(P0.05)。结论:针刺"翳风"穴可以对小鼠耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达实现良性调整作用,针刺"肾俞"穴效果不明显;针刺调节耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达可能是治疗耳鸣等疾患的作用机制之一。     

Effects of ningdong granule on DA, DRD2, and HVA in a rat model of Tourette's syndrome

[OBJECTIVE]:Ningdong granule is a traditional Chinese medicine preparation for the treatment of Tourette's syndrome.[METHODS]:Sixty-four rats were randomly assigned to a control group and three experimental groups,respectively.Rat models of Tourette's syndromewere established via intraperitoneal injection ofapomorphine (Apo).The rats in the experimental groups were subsequently intragastrically injected with haloperidol at 10 mg/kg (haloperidol group),Ningdong granule at 370 mg/kg (NDG group),and normal saline (0.9％) at 10 mL/kg (Apo group),respectively.Rat behaviors were observed and recorded on a daily basis.After 12 w,all rats were sacrificed,and sera and striatal tissues were harvested.Homovanillic acid levels in sera,as well as dopamine and dopamine D2 receptor mRNA expressionin the striatum,were measured to determine possible mechanisms of Ningdong granule on the dopamine system in a rat model of Tourette's syndrome.[RESULTS]:Following intervention,stereotype actions of the Tourette's syndrome rats were significantly inhibited in the haloperidol and NDG groups,respectively (P＜0.01).Homovanillic levelswere significantly greater in the haloperidol andNDG groups,respectively (P＜0.05).In addition,dopamine levels were significantly less in the NDG group (P＜0.01),and DRD2 mRNA expression was significantly reduced in the haloperidol and NDG groups,respectively (P＜0.05).[CONCLUSION]:Results demonstrated that Ningdong granule effectively inhibited stereotype actions and Tourette's syndrome symptoms by promoting dopamine metabolism,reducing dopamine levels in the striatum,increasing homovanillic acid content in sera,and reducing mRNA expression of DRD2 in the striatum.