Th22细胞和IL-22在结核病人外周血中的变化及临床意义

目的探讨Th22细胞和IL-22在结核病人外周血中的变化及其临床意义。方法选取2015年1月至2017年5月到我院初次就诊的结核病患者作为研究对象,将其分为空洞型肺结核组(n=34)、浸润性肺结核组(n=39)和结核性胸膜炎组(n=36),另选择同期到我院体检的健康者作为对照组(n=35),采用流式细胞术检测四组外周血Th22细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测四组IL-22表达水平,分析各组Th22细胞比例和IL-22表达水平的变化,并进行二者的相关性分析。结果空洞型肺结核组、浸润性肺结核组、结核性胸膜炎组患者的外周血Th22细胞比例和IL-22表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P 0. 05),空洞型肺结核组、浸润性肺结核组和结核性胸膜炎组三组间外周血Th22细胞比例及IL-22表达水平相比,差异均无统计学意义(均P 0. 05)。结核性胸膜炎组外周血Th22细胞比例与IL-22表达水平呈显著正相关(r=0. 683,P 0. 05),空洞型肺结核组、浸润性肺结核组及对照组外周血Th22细胞比例与IL-22表达水平之间无明显的相关性(均P 0. 05)。结论结核病人外周血中Th22细胞及IL-22水平显著升高,提示Th22细胞及IL-22可能参与了结核病的发病过程。     

Th22细胞研究的新进展

Th22细胞亚群是新发现的一类T细胞亚群,分泌白细胞介素-22、白细胞介素-13、白介素-6等细胞因子,而不产生干扰素-r、白细胞介素-4和白细胞介素-17。其功能主要通过白细胞介素-22来实现,介导炎症反应、自身免疫性疾病、肿瘤等的发生发展,在机体免疫调节、宿主防御及组织修复中发挥重要作用。该文对Th22细胞的研究进展作一简要综述。     

IL-17、IL-22与乙型病毒性肝病的相关性分析

目的探讨乙型病毒性肝病(HB)患者血清IL-17、IL-22水平变化规律,为其诊断及治疗提供依据。方法取84例HBD患者静脉血分离血清,采用ELISA法分别检测IL-17、IL-22、HA、LN、ⅣC水平,采用常规自动生化分析仪测定TBIL、γ-GT水平。结果与健康组(40例查体健者)比较,HBD患者血清IL-17及IL-22水平明显升高,P<0.01;随肝损害的程度加重,IL-17及IL-22表达水平增高(P<0.01)。IL-17、IL-22分别与HA、LN和ⅣC水平呈显著正相关(P均<0.05)。肝癌患者(16例)IL-22水平与TBIL、γ-GT呈正相关(P均<0.05)。结论 IL-17、IL-22在HBD的发生、发展中起重要作用;其水平变化在HBD临床诊断、病情分析及预后判断中均具有重要价值。深入研究IL-17、IL-22等细胞因子通路与肝脏损伤机理,可为HBD免疫干预治疗提供新的靶点。     

白细胞介素-1对血管平滑肌细胞的作用及其临床意义

本文综述了白细胞介素-1对血管平滑肌细胞的促增殖、迁移和凋亡的作用，及其诱导一氧化氮产生进而舒张血管，诱导粘附等作用，阐述了其多种病理生理意义。     

结核性胸膜炎中的IL-27对Th22细胞分化的影响

目的 探讨结核性胸腔积液IL-27对辅助性(Th) 22细胞定向分化过程的影响.方法 2014年6月至2015年6月在佛山市第一人民医院呼吸内科住院并且经胸腔镜取胸膜活检由病理学确诊的结核性胸膜炎患者20例,其中男11例,女9例,年龄25～60岁,平均35 5岁.从患者胸腔积液中的分离纯化出初始Th细胞,以含有抗-CD3+抗CD28单克隆抗体的基础培养条件为对照组,实验组则加入重组人IL-27、肿瘤坏死因子α(TNF-α) +IL-6或IL-27+ TNF-α+IL-6进行培养;在部分实验中,实验组为胸腔积液上清作为分化培养条件,加或不加入IL-27受体/Fc段嵌合体.培养7d后,使用流式细胞仪检测分化后的Th细胞表达IL-22以及特异性核转录因子芳香烃受体(AHR)的百分比.结果 对照组的Th22细胞比例为(2 2±0.9)％,AHR的比例为(4.2±0.8)％.与对照组相比,TNF-α+IL-6组的Th22细胞比例为(13.2±3.5)％、AHR的比例为(19.5±5.0)％,两者的比例显著上调(t=13.7、11.6,均P＜o.05).IL-27组的Th22细胞比例为(2.0±0.6)％、AHR的比例为(3.3±0.8)％,与对照组相比,两者的比例差异均无统计学意义(t =0.2、0.7,均P＞0.05).与TNF-α+ IL 6组相比,IL-27+TNF-α+IL 6组的Th22细胞比例为(6.0±2.0)％、AHR的比例为(8.4±2.6)％,两者的比例均显著下调(t =8.9、8.4,均P＜0.05);后续实验中,与对照组的Th22细胞比例(2.4±1 0)％以及AHR比例(4.2±1.1)％相比,胸腔积液上清组的Th22细胞比例(5.2±1.3)％以及AHR比例(6.5±1.6)％均显著上调(t=4.3、3.3,均P＜0.05).与胸腔积液上清组相比,胸腔积液上清+ IL-27受体/Fc段嵌合体组的Th22细胞比例(8.2±2.6)％以及AHR比例(13.8±2.0)％均进一步地显著上调(t=4.4、10.7,均P＜0.05).结论 IL-27本身不引起Th22细胞的分化,但对由TNF α+IL-6诱导的Th22细胞分化过程具有负向调节作用,在结核性胸膜炎微环境中能够抑制过强的Th22反应.     

IL-2I、L-21诱导人外周血单个核细胞及其抗肿瘤作用

目的探讨IL-2I、L-21对人外周血单个核细胞（PBMC）的诱导增殖和表型改变的影响及其体外抗瘤作用。方法取PBMC细胞,调整浓度为1×10^6个/ml,分为四组I,L-2组加入IL-2 100 IU/mlI,L-21组加入IL-21 100IU/ml,联合组加入IL-2 50 IU/ml和IL-21 50 IU/ml,对照组加入0.1 ml生理盐水,台盼蓝染色法计数各组活细胞,流式细胞仪检测各组PBMC表型;以上述四组为效应细胞（E）,以对数生长期的4种肿瘤细胞（人胃癌细胞系M85,胃癌细胞系BGC823,结肠癌细胞系HCT116,结直肠腺癌细胞系HCT8）为靶细胞（T）,稀释靶细胞5×10^3个/孔,E∶T为1∶1和2∶1,MTT法测定细胞毒性（杀伤率）。结果联合组活细胞计数高于IL-2组I、L-21组、对照组,P均〈0.05;联合组I、L-2组和IL-21组CD3^-/CD56^＋、CD3^＋/CD56^＋水平高于对照组,P〈0.05或0.01;联合组对4种肿瘤细胞的杀伤率均高于其余三组I,L-2组I、L-21组高于对照组,P均〈0.05。结论 IL-2联合IL-21的协同刺激作用,可有效地刺激PBMC的增殖和表型改变,对4种消化道肿瘤细胞株均有较强的杀伤力。     

急性心肌梗死患者IL-22动态变化及意义

目的观察急性心肌梗死(AMI)患者外周血白细胞介素-22(IL-22)及白细胞介素-22 mRNA(IL-22mRNA)水平在AMI后心室重塑过程中的动态变化,初步探讨IL-22在心室重塑中的作用。方法选取2015-01~2015-12在该院住院诊断为急性ST段抬高型心肌梗死并经冠脉造影证实的患者60例作为研究组,经冠脉造影排除冠心病的住院患者30例作为对照组。通过超声心动图检查比较不同时期左心室功能;酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者冠状动脉造影术后2 h、2周、4周血浆中IL-22的水平;实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中IL-22mRNA表达水平。结果与同时点对照组相比,研究组左心室功能出现不同程度下降及心室重塑;血清IL-22水平及IL-22mRNA表达水平随时间变化呈现上升趋势,且均高于同时点对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论IL-22在AMI患者外周血中呈现动态变化,可能参与AMI后的心室重塑过程。     

白细胞介素-22/白细胞介素-22结合蛋白在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是影响人类身体健康最主要的疾病之一,炎症在其发生发展中发挥着重要作用。二十多年的研究发现,白细胞介素(IL)-22是一把“双刃剑”,根据疾病所处微环境的不同,IL-22在炎症中既有保护作用,也有致病作用。IL-22可被可溶性受体IL-22结合蛋白(IL-22BP)中和。现综述以往关于IL-22/IL-22BP在心血管疾病中作用的研究结果。     

气道损伤上皮细胞诱导成纤维细胞转分化的病理意义及离子基础

目的研究气道损伤上皮对上皮下成纤维细胞（SEF）转分化为肌纤维母细胞的影响，探讨支气管哮喘（简称哮喘）特征性气道重塑的机制。方法将气道上皮细胞培养槽与SEF或成纤维细胞胶原凝胶共培养4d，根据培养槽中人气道上皮细胞株（16HBE）的不同处理方法分为7组。A组：培养槽中无细胞；B组：培养槽中为正常16HBE；C组：培养槽中为机械损伤的16HBE；D组：培养槽中为机械损伤并经细菌脂多糖刺激的16HBE；E组：培养槽中为预先加入内皮素受体A阻断剂BQ123继以机械损伤＋细菌脂多糖刺激的16HBE；F组：培养槽中为预先加入转化生长因子β1（TGF-β1）中和抗体继以机械损伤＋细菌脂多糖刺激的16HBE；G组：培养槽中为预先加入BQ123与TGF-β1中和抗体继以机械损伤＋细菌脂多糖刺激的16HBE。应用免疫荧光、免疫印迹法观察成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况，测量各组胶原凝胶（每组计数8个样本）的直径变化，以了解转分化的肌纤维母细胞的收缩反应及其上述处理因素的影响；此外，分别选择部分A、B、D组共培养的SEF以16HBE损伤（机械损伤＋细菌脂多糖刺激24h）上清液刺激，观察经共培养诱导转分化的SEF胞内钙离子（[Ca^2＋]i）浓度的动态变化（每组至少分析6个细胞）。结果与其他各组比较，D组SEF表达α-SMA凝胶收缩百分比为[（53±8）％]，与B组[（10±10）％]、C组[（24±8）％]、E组[（36±9）％]、F组[（37±3）％]、G组[（31±7）％]比较差异均有统计学意义（F=24．80、38．10，P均〈0．01）。共培养的成纤维细胞受16HBE损伤培养上清液刺激后荧光强度增强，D组增加幅度与A、B组比较差异有统计学意义（F=16．60、8．97，P均〈0．01）。结论气道损伤上皮促进SEF转分化为表达α-SMA、具有显著收缩反应能力的肌纤维母细胞；损伤上皮通过释放内皮素1（ET-1）和TGF-β1介导了这种转分化的过程；转分化的肌纤维母细胞在损伤上皮培养上清液刺激下，[Ca^2＋]i内流增加可能是启动其收缩反应能力增强的早期事件。     

Bidirectional roles of IL-22 in the pathogenesis of allergic airway inflammation

Asthma is the most prevalent allergic disease of the airway, which is characterized by eosinophilic inflammation, mucus hyperproduction, and airway hyper-responsiveness. Although these pathognomonic features are mainly mediated by antigen-specific Th2 cells and their cytokines, such as IL-4, IL-5, and IL-13, recent studies have revealed that other inflammatory cells, including Th17 cells and innate lymphoid cells (ILCs), also play a critical role in the pathogenesis of asthma. IL-22, one of the cytokines produced by Th17 cells and type 3 ILCs, has distinct functional properties, as IL-22 exclusively acts on non-hematopoietic cells including epithelial cells of mucosal surface and exhibits a broad range of action in regeneration and host protection. In accordance with the fact that lung epithelial cells play a critical role in the pathogenesis of asthma, we and other groups have shown that IL-22 is involved in the regulation of allergic airway inflammation. In this review, we discuss recent advances in the biology of IL-22 and its involvement in the pathogenesis of allergic airway inflammation.     

Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的影响,为哮喘防治提供新思路。方法组织块贴壁法培养人ASMCs,对数传代后随机分为4组,A组加入含10％FBS的DMEM培养基,B、C、D组分别加入浓度为0．4、2．0、10．0μmol／L的Y-27632＋含10％FBS的DMEM培养基,非放射性细胞增殖（MTS）／吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）法检测各组细胞增殖情况（490nm处A值）,流式细胞仪分析细胞周期。结果C、D组A值均显著低于A组（P〈0．05、0．01）;C、D组G0／G1期细胞比例显著高于A组,S、G2／M期细胞比例显著低于A组（P〈0．05、0．01）。结论Rho激酶抑制剂Y-27632可抑制人ASMCs增殖,阻滞细胞周期于G0／G1期;本研究为哮喘防治提供了新的选择。     

趋化素样因子1对人动脉平滑肌细胞的增殖促进作用

目的观察人趋化素样因子1(CKLF1)对人外周动脉血管平滑肌细胞(ASMCs)的作用。方法用CKLF1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,72 h后收集上清培养液,采用ELISA方法检测培养上清中CKLF1;用该上清培养人ASMCs细胞后,MTT法检测该上清对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示,10倍稀释的转染上清刺激ASMCs 72 h后,实验组OD490=0.480±0.024,与对照组OD490=0.424±0.011相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CKLF1对人ASMCs具有促增殖作用。CKLF1可能参与动脉粥样硬化血管内膜增厚的过程。     

Quercetin对人气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制

目的 体外培养人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs),探讨槲皮素(Quercetin,Que)对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)刺激的HASMCs增殖和迁移的影响及其机制.方法体外培养HASMCs,分为六组;对照组、PdGF-BB组、Que与PDGF-BB联合干预组、Que组、U0126组、U0126与PDGF-BB联合干预组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定HASMCs增殖,transwell法观察细胞迁移,Western blot法检测ERK的磷酸化及Cyclin D1表达水平.结果 与对照组相比,PDGF-BB(20μg/L)显著诱导HASMCs增殖和迁移(P＜0.05),Que(20～80μmol/L)呈浓度依赖性抑制PDGF-BB诱导的HASMCs的增殖和迁移(P＜0.05).PDGF-BB组ERK磷酸化及Cyclin D1 表达水平较对照组明显增高(P＜0.05).Que(80μmol/L)及PDGF-BB干预组其表达量低于PDGF-BB组,此抑制作用与ERK特异性拮抗剂U0126作用相当(P＞0.05).结论 Que抑制PDGF-BB诱导的HASMCs的增殖和迁移,可能是通过调节ERK/Cyelin D1通路起作用.     

反义c-myc RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

构建一个含1．53kb反义c－myc片段的逆转录病毒载体PAS-c-myc，将其通过Lipofectin导入PA317细胞并经G418筛选获得分泌病毒上清液的阳性克隆。病毒上清波感染血管平滑肌细胞（SMC）经G418筛选获得抗性克区。DNA印迹杂交证实了反义c-myc片段整合于SMC基因组中。RNA印迹杂交证实了反义c－mycRNA在SMC中得到了表达，且显著降低了SMC中c－mycmRNA的水平。蛋白印迹杂交证实了反义c－mycRNA抑制了c－myc蛋白的翻译。提示：c－myc基因表达在SMC增殖中起重要作用。     

sunitinib对人气道平滑肌细胞分泌纤维连接蛋白的影响及其机制研究

目的 探讨sunitinib对血管内皮生长因子165 (VEGF165)刺激的人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)合成、分泌纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响及其相关机制.方法 将HASMCs分成6个组:对照组、VEGF165组、VEGF165与sunitinib联合干预组、sunitinib组、U0126组、U0126与sunitinib联合干预组.Western blot检测p-VEGFR2、p-ERK表达水平.ELISA检测细胞上清液中FN的表达水平.结果 与对照组相比,VEGF165组p-VEGFR2、p-ERK 及FN表达水平增高(P＜0.05);sunitinib(3 nmol/L)干预后p-VEGFR2、p-ERK及FN表达水平下降(P＜0.05),其对ERK磷酸化及FN表达的抑制作用与ERK特异性拮抗剂U0126对ERK磷酸化及FN表达的抑制作用相当(P＞0.05).结论 sunitinib 抑制VEGF165诱导的HASMCs合成、分泌FN,可能是通过抑制VEGFR2磷酸化水平从而进一步调控ERK通路起作用.     

Effect of 1,25-(OH)2D3 (a vitamin D analogue) on passively sensitized human airway smooth muscle cells

BACKGROUND AND OBJECTIVES: In asthma, airway smooth muscle cell (ASMC) hyperplasia plays an important role in airway remodelling. Increased expression of matrix metalloproteinases-9 (MMP-9), a disintegrin and metalloprotease 33 (ADAM33) in ASMCs are also relevant to asthmatic airway remodelling. 1,25-dihydroxyvitamin D(3) (1,25-(OH)(2)D(3)) has potent antiproliferative properties in vitro in various cell types; however, its role in ASMCs is not well understood. This study investigated the effect of 1,25-(OH)(2)D(3) on passively sensitized human bronchial (airway) smooth muscle cell (HASMC) proliferation and MMP-9 and ADAM33 expressions. METHODS: The effect of 1,25-(OH)(2)D(3) on cell proliferation was examined by 3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium-bromide colorimetry assay; cell cycle analysis by flow cytometry; and immunocytochemical staining for proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The expression of MMP-9 and ADAM33 in HASMCs was investigated by real-time quantitative PCR and Western Blot analysis. RESULTS: 1,25-(OH)(2)D(3) effectively suppressed passively sensitized HASMC proliferation, proliferating cell nuclear antigen expression and G(1)/S transition in HASMCs passively sensitized with asthmatic serum. Further analysis showed that 1,25-(OH)(2)D(3) significantly down-regulated the expressions of protein for MMP-9 and ADAM33, as well as their mRNA levels in passively sensitized HASMCs. CONCLUSIONS: 1,25-(OH)(2)D(3) has direct inhibitory effects on passively sensitized HASMCs in vitro, including inhibition of cell proliferation and expression of MMP-9 and ADAM33, suggesting a possible beneficial role for 1,25-(OH)(2)D(3) in preventing and treating asthmatic airway remodelling.     

周期蛋白D1在香烟提取物促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）周期蛋白D1（cyclinD1）的表达变化,探讨cyclinD1在香烟提取物（CSE）促进哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法 16只SD大鼠随机分为对照组（n=8）和哮喘组（n=8）。原代培养大鼠ASMCs,分为对照组（A组）、对照＋CSE组（B组）、哮喘组（C组）、哮喘＋CSE组（D组）、哮喘＋CSE＋pcDNA3.1组（E组）和哮喘＋CSE＋pcDNA3.1-ascyclinD1组（F组）。检测ASMCs增殖及cyclinD1 mR-NA、蛋白表达情况。结果 ASMCs增殖水平及cyclinD1 mRNA、蛋白表达水平比较,A组与C组,C组与D组,D组与F组间均有统计学差异（P均〈0.01）。结论正常与哮喘大鼠ASMCs在CSE干预后增殖明显加快,cyclinD1表达明显增加。CSE可能是通过cyclinD1参与调控哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

棓丙酯对高糖诱导人肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 观察樯丙酯对高糖诱导人肾小管上皮细胞损伤的保护作用.方法 传代培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,分为对照组、高渗组、高糖组、处理组1（桔丙酯浓度2μg/ml）和处理组2（棓丙酯浓度4μg/ml）,观察各组细胞增殖能力、凋亡率、活性氧（ROS）水平以及bcl-2和BaxmRNA的表达情况.结果 高糖刺激HK-2细胞后,细胞增殖能力下降、凋亡增加、ROS水平升高、bcl-2 mRNA表达减少、Bax mRNA表达增多.棓丙酯可以提高细胞增殖能力,减少凋亡,降低ROS水平,上调bcl-2 mRNA表达以及下调BaxmRNA表达;处理组2上述改变较处理组1明显（P均＜0.05）.结论 桔丙酯改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤,其机制可能与减轻氧化应激、上调bcl-2 mRNA表达以及下调Bax mRNA表达有关.