当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

山茱萸提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响

目的:研究山茱萸提取物对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞HaCaT共培养模型酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA表达的影响。方法:以1∶2的比例构建的A375细胞与HaCat细胞共培养模型,将质量浓度为1.0,0.5 g·L-1的山茱萸提取物作用48 h,RT-PCR法检测药物对共培养模型中A375细胞TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA表达。结果:与阴性对照组相比,山茱萸提取物1.0,0.5 g·L-1组TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达量显著下调(P<0.01),mRNA下调率分别为36.07%,62.34%,44.69%和24.10%,53.00%,16.11%。结论:山茱萸提取物可能通过下调TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。     

小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01);小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.     

马钱苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：探讨马钱苷对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养模型黑素合成的影响。方法：将A375细胞和Hacat细胞构建共培养模型,以不同浓度马钱苷进行干预,通过MTY法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定共培养模型的细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果：与阴性对照组相比,马钱苷10-mol／L、1016moL／L和10-7mol／L组对共培养细胞增殖率无显著性差异（P〉0．05）。马钱苷10-mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成及酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）。与阳性对照组相比,马钱苷10。moL／L组对共培养模型酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）,马钱苷10山mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成无显著差异（P〉0．05）。结论：马钱苷可能通过抑制酪氨酸酶活性减少共培养模型黑素合成。     

刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的:探讨刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法:采用MTT法测定刺蒺藜对人表皮共培养细胞活力的影响,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,490 nm比色法测定黑素含量。结果:0.1 mg/ml、0.2 mg/ml和0.5 mg/ml刺蒺藜对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用,0.2 mg/ml及0.5 mg/ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异(P0.01)。结论:刺蒺藜对于人表皮共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

染料木素对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控作用的初步探讨

目的:研究染料木素对A375细胞黑素合成的影响,并探讨MAPK信号通路与此作用的相关性。方法:以人黑素瘤细胞A375为研究对象,将不同浓度的染料木素作用于A375细胞48 h,另设空白组,采用MTT法检测细胞活性;Na OH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR)活性;RT-PCR法测定酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)以及MAPK信号通路关键胞外信号调节激酶1(ERK1),ERK2,c-Jun氨基末端激酶2(JNK2)mRNA的表达。结果:与空白组比较,染料木素在安全剂量(10-1,10-2,10-3μmol·L-1)下均可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性(P0.01),1μmol·L-1染料木素明显下调A375细胞TYR,TRP-2,TRP-1(P0.05,P0.01)mRNA表达,以及ERK1,ERK2,JNK2(P0.05,P0.01)mRNA表达。结论:染料木素可通过抑制TYR活性和/或下调TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制A375细胞的黑素合成,此作用与抑制ERK1,ERK2,JNK2的表达有关。     

不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。     

三叶青脂溶性提取物对A375细胞增殖及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青三氯甲烷提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量;采用光学显微镜法观察其对细胞形态的影响。结果三叶青三氯甲烷提取物在6～500μg/ml浓度范围内对A375细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01),且呈时间-剂量依赖性;浓度小于50μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;在100～500μg/ml时,对A375肿瘤细胞有较强的抑制作用;光学显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。结论三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成具有抑制作用。     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控的研究

目的 研究补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的作用。方法 将补骨脂素作用于A375细胞,采用MTT法检测细胞活性;NaOH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶（TYR）活性;RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白-1和酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-1、TRP-2）以及ERK1、ERK2、JNK2这3个MAPK信号通路关键蛋白激酶的mRNA表达。结果 补骨脂素在安全剂量下可显著抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,1 μmol·L-1补骨脂素能明显下调A375细胞TYR、TRP-1、TRP-2以及ERK1、ERK2、JNK2 mRNA表达。结论 推测补骨脂素通过抑制ERK1、ERK2、JNK2的表达来抑制TYR活性和/或下调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制A375细胞的黑素合成。     

山茱萸提取物抗肿瘤作用及机制探讨

目的:研究山茱萸提取物的抗肿瘤作用及其作用机制。方法:取生长良好接种10~14 d的Lewis肺癌C57BL小鼠,制备Lewis肺癌细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测山茱萸提取物对癌细胞的抑制情况,流式细胞仪检测山茱萸提取物对细胞周期和细胞凋亡的影响;激光共聚焦显微镜检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及p53蛋白表达;用健康C57BL小鼠腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,接种成功后按山茱萸提取物100,200,400 mg·kg~(-1)剂量ig给药2周,检测小鼠体内瘤的质量、肺转移灶数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠血清中癌胚抗原的含量。结果:与空白组比较,山茱萸提取物可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05),山茱萸提取物对Lewis肺癌细胞处理48 h后,细胞周期阻滞在G0/G1期(P0.05,P0.01);与空白组比较,山茱萸提取物400 mg·kg~(-1)组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax及p53蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,山茱萸提取物400 mg·kg~(-1)组小鼠体内瘤的质量、肺转移灶数均显著降低,小鼠血清中癌胚抗原含量明显降低(P0.05)。结论:山茱萸提取物在体内外对Lewis肺癌细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期分布有关。     

阿育魏实提取物对酪氨酸酶的激活作用

目的： 研究阿育魏实不同提取物对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。 方法： 以阿育魏实为材料,通过乙醇提取得到总提取物即醇提物,然后依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到相应的提取物。采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法和NaOH裂解法研究了该提取物对酪氨酸酶的效应和黑色素上调率。 结果： 所得阿育魏实乙醇和乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用较明显,对黑色素生成具有直接刺激作用,与对照品补骨脂和驱虫斑鸠菊相比,阿育魏实乙酸乙酯提取物IC₅₀为（13.64±7.78） g·L^-1,对酪氨酸酶激活作用优于临床治疗白癜风药物补骨脂[IC₅₀ （21.18±2.88） g·L^-1]。 结论： 阿育魏实乙酸乙酯提取物具有较好的体外酪氨酸酶激活及促进黑色素生成作用,可为临床治疗白癜风药物提供依据。     

扶正抗痨方辅助治疗继发性肺结核114例

目的：研究白薇经皮透过液对B16黑色素瘤细胞增殖的抑制效果,初步探讨白薇作为皮肤美白剂的可行性。方法：以每孔3×10³ 个B16细胞接种于96孔板,分别加入质量浓度为20,60,100,140,180,200 mg·L^-1的白薇经皮透过液,作用24,48,72 h,采用MTT法测定白薇经皮透过液对B16细胞增殖的影响;L-Dopa氧化法测定透过液对B16细胞内酪氨酸酶（TYR）活性的影响;NaOH裂解法测定透过液对黑色素含量的影响;4’,6二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色法及原位末端转移酶标记染色（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果：与空白组相比,不同浓度不同提取方法的白薇经皮透过液均对B16细胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑色素的含量具有抑制作用（P<0.05）,作用效果：95%醇提>50%醇提>水提,最佳作用质量浓度为200 mg·L^-1,最佳作用时间为48 h。结论：白薇具有一定的美白作用,可用于美白产品的开发。     

近红外漫反射光谱法快速测定山茱萸水分含量

目的: 利用近红外光谱建立一种快速测定山茱萸水分含量的方法。 方法: 采用烘干法测定山茱萸样品中的水分含量,运用偏最小二乘法（PLS）建立其含量与近红外光谱之间的校正模型,对山茱萸样品中的水分含量进行快速测定。 结果: 通过比较不同的建模参数,优化模型,建立水分模型的相关系数（R²）,校正均方差（RMSEC）和预测校正均方差（RMSEP）分别为0.990 52,0.297,0.819。 结论: 该方法具有简便快速、准确、无损的特点,可应用于大批量山茱萸药材中水分的快速检测。