从卷柏中提取雌激素类成分的实验研究

目的：对不同提取方法所得的卷柏各提取物进行雌激素活性筛选,探索卷柏中雌激素类活性物质的提取方法;明确卷柏发挥雌激素作用的活性成分的极性。方法：采用小鼠子宫增重实验,将卷柏分别以70%乙醇回流所得总部位经聚酰胺柱分离;95%乙醇回流药渣经水提取;药渣水提物去除多糖等所得的卷柏各组分进行雌激素活性筛选。运用HPLC指纹图谱技术对卷柏95%醇提物、药渣水提物进行分析。结果：70%乙醇回流所得的卷柏总部位、药渣水提物高剂量、药渣水提物去多糖组与空白组比,均能显著性增加小鼠子宫系数(p＜0.01),卷柏其余各组与空白组相比无明显作用(p＞0.05);HPLC指纹图谱显示卷柏95%醇提物中穗花杉双黄酮为其主要成分,而药渣水提物中基本不含穗花杉双黄酮。结论：95%乙醇回流药渣水提法与聚酰胺柱分离法相比,前者更适合于卷柏雌激素活性物质的提取分离;卷柏中发挥雌激素作用的活性成分主要为水溶性除多糖物质;HPLC指纹图谱结果提示,穗花杉双黄酮不是卷柏发挥雌激素作用的成分。     

大黄药材蒽醌苷元类成分的HPLC指纹图谱研究

目的 :应用HPLC法研究清热解毒注射剂中大黄药材蒽醌苷元类成分的指纹图谱。方法 :以大黄酸为参照物 ,应用HPLC色谱法 ,色谱柱 :μBondapak C18( 3 .9mm× 3 0 0mm ,10 μm) ,流动相 :乙腈 :0 .5 %磷酸 (梯度洗脱 ) ,柱温 :3 0°C ,检测波长 :43 0nm ,分析时间 :60min ,流速 :1.0mL。结果 :共标出大黄药材蒽醌苷元类成分 12个共有峰。结论 :方法稳定、可靠、重复性好。为大黄药材质量控制提供参考     

卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱及穗花杉双黄酮的含量测定研究

目的 建立卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱分析方法并进行穗花杉双黄酮的含量测定.方法 采用HPLC方法测定24批不同产地的卷柏及垫状卷柏药材,分析两者的指纹图谱特征及穗花杉双黄酮的含量.结果 以穗花杉双黄酮为主的不同的7个特征峰分别共同构成卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱概貌,卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别为1...     

散结镇痛胶囊中皂苷类成分的指纹图谱研究和多指标成分定量测定

目的：建立散结镇痛胶囊中皂苷类成分的指纹图谱,为评价散结镇痛胶囊质量提供依据。方法：采用Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（4.6 mmx250 mm,5 μm）,以乙腈-水梯度洗脱,流速1.2 mL· min-1,柱温30℃,检测波长203 nm。结果：各批次样品相似度在0.95 以上,标示出9 个共有峰;通过对照品比对,确定了5 个成分,分别为三七皂苷R1 和人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd,并对其进行定量分析。结论：该方法快速、简便、准确,可作为评价该制剂质量的有效方法之一。     

江南卷柏炒制品HPLC指纹图谱的研究

目的 建立江南卷柏炒制品的HPLC指纹图谱鉴别方法.方法 利用RP-HPLC法,采用Zorbax Cu(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:0.5%醋酸:乙腈,梯度洗脱.流速:1 mL/min,检测波长为260nm、338 nm.结果 有12个特征峰共同构成江南卷柏炒制品的HPLC指纹图谱共有模式.结论 该方法简便、准确、重复性好,可用于江南卷柏炒制品的质量控制.     

补中益气丸中氨基酸类成分HPLC指纹图谱研究

目的应用HPLC法研究补中益气丸中氨基酸类成分的指纹图谱。方法采用柱前衍生化HPLC,以脯氨酸为参照物。色谱柱:AccQ·TagTMC18分析柱(3.9×150mm);流动相:0.15mol/L的醋酸钠缓冲液-60%乙腈(梯度洗脱);柱温:37℃;荧光检测:激发波长(Ex)为250nm,发射波长(Em)为395nm;分析时间:35min;流速:1.0mL/min。结果在补中益气丸氨基酸类成分指纹图谱中共标出12个共有峰,采用相关系数、夹角余弦系数及色谱指纹图谱相似度评价系统软件等多种统计方法,计算10批样品相似度在0.97～1.00之间。结论方法稳定、可靠、重复性好,为有效控制补中益气丸质量提供参考。     

配伍对补中益气汤中氨基酸类成分影响的研究

目的:利用补中益气汤氨基酸类成分指纹图谱技术,考察不同配伍对各氨基酸类成分的影响.方法:以柱前衍生HPLC法测定不同配伍氨基酸类成分指纹图谱,提取指纹图谱数字化信息,采用直观、方差等统计方法分析配伍对氨基酸类成分的影响.结果:君药、臣药对整体氨基酸指纹图谱的影响有显著差异,佐、使及两两交互作用不显著;君药、臣药对指纹图谱中4强峰影响有显著差异,君药、使药对5个必需氨基酸影响有显著差异.结论:此君臣佐使配伍方案设计简化实验次数,可靠、重复性好,为复方配伍化学成分变化研究提供一定参考.     

卷柏等5种中药植物雌激素活性筛选的实验研究

目的：对几种中药进行了植物雌激素的活性筛选。方法:采用动物实验结合报告基因技术，对5种中药进行了植物雌激素活性的研究。在体动物实验：采用出生21 d刚断乳昆明种雌性小鼠，随机分组，分别给予卷柏、松针、石胆草、贯众、益母草水提取物，阳性药为尼尔雌醇，持续给药7 d后处死小鼠，子宫称重，计算子宫系数；以雌激素应答元件（ERE）调控的报告基因瞬时表达检测，用荧光素酶检测试剂盒检测细胞上清液荧光素酶的活性，筛选出对α亚型雌激素受体（ERα）或β亚型雌激素受体（ERβ）有作用的中药。结果:卷柏提取物可使小鼠子宫重增加（P<0.01）；且ERE调控的报告基因瞬时表达检测中，不论由ERα或ERβ介导均具有雌激素活性（P<0.01）。进一步子宫增重实验，对卷柏的有效部位进行了筛选，确定卷柏的有效部位为水部位和正丁醇部位。结论:卷柏及其水部位和正丁醇部位具有雌激素活性，且卷柏与ERβ的亲和力比与ERα的亲和力大，说明卷柏激活基因转录主要是通过ERβ介导的。     

杭锦旗产麻黄生物碱类成分的指纹图谱研究

目的研究麻黄Ephedra sinicaStapf.药材生物碱类成分的指纹图谱测定方法,确定杭锦旗产麻黄Ephedra sinicaStapf.药材HPLC标准指纹图谱。方法采用Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水-三乙胺-磷酸(5∶95∶0.05∶0.1)为流动相,流速:1mL/min。结果获得5个共有指纹峰。结论该方法准确、可靠,为更好地控制麻黄的内在质量提供了科学依据。     

水红花子黄酮类成分的HPLC指纹图谱研究

目的:对不同产地水红花子进行HPLC指纹图谱比较研究。方法:选择D iamonsilTMC18柱(250 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 m l/m in,检测波长为310 nm。结果:建立了水红花子黄酮类成分的指纹图谱,发现11个共有峰,确定了其相对保留时间和峰面积比值范围。结论:利用该指纹图谱,可以对不同产地水红花子药材进行鉴别,并可在一定程度上进行质量控制。     

HPLC同时测定卷柏药材中炔多酚和双黄酮的含量

目的:采用HPLC-DAD,同时测定不同产地的10批卷柏和12批垫状卷柏中2种炔多酚(selaginellin,selaginellinB)和4种双黄酮(穗花杉双黄酮,穗花杉双黄酮-7-甲醚,扁柏双黄酮,异柳杉双黄酮)的含量。方法:采用Agilent 1100高效液相色谱系统,Waters Cosmosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长280,337 nm,柱温30℃。结果:所测样品中6种活性成分的量差异较大,穗花杉双黄酮在卷柏中的质量分数(5.628～9.184 mg.g-1)普遍高于垫状卷柏(0.823～7.131 mg.g-1),而selaginellin在垫状卷柏中的质量分数(0.123～0.593 mg.g-1)普遍高于卷柏(0.067～0.133 mg.g-1)。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论:该方法简便快速、分离效果好、灵敏度高、重现性好,可为全面控制卷柏药材的质量提供参考。     

卷柏提取物对去势大鼠股骨中羟脯氨酸含量的影响

目的:采用柱前衍生化法对去势大鼠股骨中羟脯氨酸(HyP)的含量进行测定,观察卷柏提取物对去势大鼠股骨中HyP含量的影响。方法:Wistar雌性大鼠摘除卵巢后1周开始ip卷柏总提物665 mg·kg-1,卷柏正丁醇部位85 mg·kg-1,卷柏水部位490 mg·kg-1,持续11周后处死,取其股骨,采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化反相高效液相色谱法,观察卷柏提取物对去势大鼠股骨中HyP含量的影响。结果:HyP 0.125～2.00 g.L-1线性关系良好(r=0.999 4),精密度试验RSD<1%,24 h内稳定性试验RSD<5%,加样回收率均在90%～110%;卷柏水部位和正丁醇部位均能增加去势大鼠股骨中HyP含量。结论:卷柏提取物能增加去势大鼠股骨中HyP含量,其中卷柏水部位和正丁醇部位,对去势大鼠骨质疏松具有一定的干预作用。     

江南卷柏提取物脱脂工艺优选

目的: 优选江南卷柏提取物的石油醚脱脂工艺,为该植物的资源开发与利用提供参考. 方法: 以穗花杉双黄酮提取量和浸膏得率为评价指标,通过正交试验考察石油醚用量、提取时间和提取次数对脱脂工艺的影响.采用HPLC测定穗花杉双黄酮含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~5 min,25%A;5~12 min,25%~35%A;12~17 min,35%~45%A;17~25 min,45%~50%A;25~40 min,50%~55%A;40~45 min,55%~70%A;45~50 min,70%~100%A;50~55 min,100%A;55~60 min,100%~25%A),检测波长330 nm. 结果: 最佳脱脂工艺为加6倍量石油醚回流提取2次,每次1 h;穗花杉双黄酮提取量72.77 mg,浸膏得率11.04%. 结论: 该脱脂工艺稳定可行,适用于江南卷柏提取物的纯化.     

银杏根皮中萜内酯提取工艺研究

目的:探索出以乙醇-水为浸提溶剂的银杏根皮中萜内酯的提取工艺,确定最佳提取参数.方法:通过对银杏根皮提取参数中浸提温度、浸提时间、料液比、浸提醇浓度、浸提酸度进行单因素梯度试验,采用HPLC法检测含量,确定银杏根皮中萜内酯浸提最佳参数.结果:银杏根皮中萜内酯最佳浸提条件:浸提时间2 h;料液比1:15;浸提温度50℃;浸提液pH 3;30%乙醇.结论:以乙醇-水为溶剂从银杏根皮中提取萜内酯的方法具可行性和生产应用价值.     

不同产地单芽狗脊蕨HPLC指纹图谱

目的:建立不同产地单芽狗脊蕨HPLC指纹图谱测定方法.方法:采用HPLC测定了9个不同产地单芽狗脊蕨样品.色谱条件为DiamonsilTM C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm);流动相A相为乙腈,B相为水(梯度洗脱0～60 min22％A→100％ A);检测波长265 nm;流速1.0mL· min-1;柱温25℃.结果:建立了不同产地单芽狗脊蕨的HPLC指纹图谱,并进行了相似度比较,进一步对其中的山柰素-3-O-α-L-鼠李糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷、山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙酰基)鼠李糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷进行了归属.结论:该法操作简便、重复性好,可用于单芽狗脊蕨质量控制.     

广西产山豆根HPLC指纹图谱测定

目的:建立广西主产山豆根药材的HPLC指纹图谱。方法:以氧化苦参碱为参照物,采用C18色谱柱,以甲醇-水(0.2%磷酸+0.32%三乙胺)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,柱温25℃,检测波长24 min后由220 nm转换到280nm。结果:其重复性、精密度均符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中的有关规定。结论:本实验结果为广豆根药材的质量控制提供了参考。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

东北地区11种蒲公英RP-HPLC指纹图谱研究

目的:运用RP-HPLC建立中药蒲公英指纹图谱,为提高蒲公英的质量控制手段提供依据.方法:采用Kromasil100-5 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-水(含0.5%冰乙酸)系统梯度洗脱,检测波长为323 mn,流速为1.0mL·min-1,柱温35℃,进样量10μL,测定东北地区11种蒲公英指纹图谱.结果:用梯度洗脱得到的色谱图中,多数峰都可以达到较好分离.11种蒲公英指纹图谱可检测出25个相对位置稳定的共有峰,通过与标准品的保留时间及紫外光谱比较,10号峰(1),12号峰(2),16号峰(3),25号峰(4)分别鉴定为绿原酸、咖啡酸、对香豆酸和木犀草素.该分析方法具有很好的精密度、重复性和稳定性,符合指纹图谱相关要求.结论:方法准确可靠,可用于蒲公英药材的质量的控制.     

优化酶提取贯叶连翘药材活性成分工艺

目的:探讨贯叶连翘中金丝桃素的酶提取法的最优酶及其最佳工艺。方法:以高效液相色谱法测定金丝桃素含量为指标,在纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、复合酶SPE-007A中筛选出最优2种酶,继考察这2种酶复合后的浸提倍数、加酶量、pH、温度、酶解时间等因素对提取工艺的影响,并用正交试验优选提取条件,从而得到最佳工艺。结果:最优酶为纤维素酶与果胶酶复合酶,pH 4.8、酶用量(纤维素酶/果胶酶)2.0%/2.0%、温度50℃、酶解时间6 h、酶解液浸提倍数15倍。结论:该工艺高效、稳定,可用于今后对贯叶连翘的研究。