中国南方部分城市泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型研究

目的 了解中国南方4个城市性病高危人群中沙眼衣原体(Ct)基因型的分布特征。方法 从衡阳、上海、广州、江门四个城市的性病门诊收集1180份泌尿生殖道标本,经质粒PCR筛选后,阳性者用巢式PCR扩增Ctomp1基因片段,酶切omp1扩增产物,分析Ct各临床株omp1基因的限制性片段长度多态性(RFLP),将临床株分型。结果 Ct质粒PCR阳性者301份,用于分型者286份。通过RFLP分型,共检出10个基因型,其中常见的是E(30.8%)、J(23.8%)、D(17.5%)、F(10.5%)、G(6.2%)型,并且不同城市间基因型的分布差异无统计学意义(χ²=0.981,P>0.05)。结论 4个城市存在Ct多种基因型,并且基因型的分布大致相同。     

北京地区育龄妇女泌尿生殖道沙眼衣原体感染状况及基因分 …

目的 对北京地区育龄妇女沙眼衣原体的感染状况及春基因分型进行初步研究。方法 利用胶体金免疫法对１７７例计划生育门诊及妇科体检的育龄妇女进行筛查,对９例沙眼衣原体感染阳性者的拭子标本直接进行套式ＰＣＲ扩增主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因。将扩增的ＤＮＡ进行限制性内切酶长度多态性分析,并对ＭＯＭＰ基因易变区ＶＳ１、ＶＳ２、ＶＳ３、ＶＳ４进行基因序列分析。结果 １７７名育龄妇女有９例沙眼衣原体感染阳性,９份     

用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析进行沙眼衣原体的基因分型

为了研究泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的分子流行病学，我们建立了一种不需做培养的ＣＴ血清型鉴定方法。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＣＴ大部分主要外膜蛋白基因（ｏｍｐｌ），将扩增产物做限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，即用限制性内切酶ＡｌｕⅠ和ＭｓｐⅠ同时消化，产生的片段通过１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。经硝酸银染色后，１５个ＣＴ血清型标准株产生１３个特征性带谱。血清型Ｃ和Ｊ带型相似，用ＨｉｎｆⅠ酶切后区分；Ｈ和Ｌ３带型相同，用ＤｄｅⅠ和ＥｃｏＲⅠ同时酶切后区分。对１２份ＣＴ培养阳性的临床标本行ＰＣＲＲＦＬＰ分型检测。结果：Ｄ血清型为６份标本，Ｅ型２份，Ｆ型２份，Ｆ／Ｇ混合型１份，Ｂ型１份。研究表明对ｏｍｐｌ的ＰＣＲＲＦＬＰ基因分型方法能用于大范围ＣＴ感染的流行病学研究     

沙眼衣原体分型研究的某些进展

用单克隆抗体技术将沙眼衣原体分为１８个血清型，Ａ～Ｋ，Ｌ１～Ｌ３，Ｂａ，Ｄａ，Ｉａ和Ｌ２ａ。随着研究的深入，又鉴定出血清变异型Ｄ，Ｄ＾＋，Ｉ＾－和Ｇａ，沙眼衣原体主要外膜蛋白基因的限制性片段多态性分析和序列分析为分辨力高而简便的基因分型方法，与血清分型有较高的符合率，并鉴定出基因变异型Ｄｖ，Ｇ，Ｉｂ，Ｊｖ１和Ｊｖ２。沙眼衣原体全染色基因分型能提供血清或基因型内的多态性，可作为沙眼衣原体分型研究的辅     

37例性病门诊患者泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型研究

目的:了解性病门诊高危人群中沙眼衣原体分型特征.方法:采用巢式PCR扩增omp 1基因的VS1-VS2序列,自动测序仪测序,对沙眼衣原体临床菌株分型.结果:以12株标准株omp 1基因VS1-VS2序列为标准,37例沙眼衣原体感染样本基因分型共检出9个血清型,B型1株(2.7%)、D型5株(13.5%)、E型11株(29.7%)、F型5株(13.5%)、G型1株(2.7%)、H型3株(8.1%)、J型9株(24.3%)、K型1株(2.7%)、混合感染型1例(2.7%).结论:本组泌尿生殖道沙眼衣原体感染的基因型以E型、J型、F型、D型为主,分型对于监测特定型别的流行动态有重要意义.     

沙眼衣原体感染免疫和DNA疫苗的免疫效应

沙眼衣原体是沙眼和性传播疾病的主要病原体之一,沙眼衣原体感染还使HIV-1更易传播。沙眼衣原体感染宿主能诱发机体保护性的体液免疫和细胞免疫,在初次感染,是细胞免疫而不是抗体起主要保护作用;对于继发感染,保护性免疫高度依赖Th1型CD4^ T细胞,并且诱导迟发型超敏反应。发展疫苗是预防沙眼衣原体感染的有效途径。     

沙眼衣原体泌尿生殖道感染患者血清Pmp蛋白抗体的检测

目的 检测沙眼衣原体（C.t）泌尿生殖道感染患者多形外膜蛋白（Pmp）的血清抗体,初步探讨Pmp蛋白与C.t泌尿生殖道感染的相关性。方法 从临床选择20例正常人作为阴性对照组,77例C.t泌尿生殖道感染患者作为阳性对照组,随访43例患者3个月,分为C.t持续感染组（19例）与转阴组（24例）,采集患者和对照组的血清,Western印迹法检测Pmp蛋白血清抗体（Pmp-Ab）,分组比较Pmp-Ab的阳性率,并同临床资料进行相关性分析。结果 Pmp-Ab阳性率在C.t感染组为90.20%（71/77）,阴性对照组为20%（4/20）,感染组明显高于阴性对照组（P < 0.05）。在C.t感染组,9种Pmp-Ab都可检测到,但不同抗体的阳性率不同,PmpA ～ PmpI分别为61.04%（47例）、88.31%（68例）、63.63%（49例）、28.57%（22例）、63.63%（49例）、75.32%（58例）、62.34%（48例）、77.92%（60例）和70.13%（54例）;其中PmpB-Ab阳性率最高, PmpD-Ab阳性率最低。持续感染组与转阴组9种Pmp-Ab阳性率差异均无统计学意义。结论 C.t泌尿生殖道感染患者可产生针对Pmp蛋白的抗体,不同的Pmp蛋白免疫原性有差别,Pmp蛋白抗体对机体的免疫保护作用不强,血清抗体存在个体差异。E型C.t 的9种Pmp蛋白全部表达。     

沙眼衣原体分型研究的某些进展

用单克隆抗体技术将沙眼衣原体分为18个血清型:A～K,L_1～L_3,Ba、Da、Ia和L2a。随着研究的深入,又鉴定出血清变异型D~(?)、D~(?)、I和Ga。沙眼衣原体主要外膜蛋白基因的限制性片段多态性分析和序列分析为分辨力高而简便的基因分型方法,与血清分型有较高的符合率,并鉴定出墓因变异型Dv、G、Ib、J_(v1)和J_(v2)。沙眼衣原体全染色体基因分型能提供血清或基因型内的多态性,可作为沙眼衣原体分型研究的辅助方法。     

pEGFP/MOMP真核表达重组体的构建及表达

目的：克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因，构建pEGFP／MOMP真核表达重组质粒，为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据．方法：用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段，克隆人真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中，阳性重组子经BanH I、Kpn I双酶切、PCR扩增及测序鉴定；并经脂质体介导转染HeLa细胞，36h后观察瞬时表达情况。结果：PCR扩增得到约1．2kb的特异性MOMP基因片段；序列测定证实与GenBank卺录的D型沙眼衣原体一致；筛选鉴定出真核表达重组体pEGFP／MOMP。结论：成功地构建了pEGFP／MOMP真核表达重组体，并在HeLa细胞中表达了MOMP。     

检测血清中沙眼衣原体IgG IgM抗体对泌尿生殖道感染的诊断价值

目的探讨检测血清中沙眼衣原体ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体的应用价值。方法应用间接免疫荧光技术（ＩＦＡ）,检测三组共６０例血清标本中沙眼衣原体ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体水平,其中实验组、阳性对照组和正常对照组各２０例。结果实验组和阳性对照组血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体效价分别与正常血清对照组进行比较,均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论用免疫荧光技术检测血清中沙眼衣原体ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体可为泌尿生殖道感染的诊断和评价病情提供有价值的依据。     

性病门诊男性尿道炎患者沙眼衣原体基因分型

目的 了解性病门诊就诊的尿道炎男性患者中,沙眼衣原体血清型分布情况。 方法 采集2013年1 - 12月中国医学科学院皮肤病医院性病门诊有尿道炎症状的男性患者的尿液,荧光定量PCR检测沙眼衣原体,对沙眼衣原体阳性患者的尿液提取DNA,用巢式 PCR法扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白基因ompA的VS1-VS2片段,然后对此片段测序,测序结果用DNAStar5.0软件与每种血清型的参考菌株做比对,分析其血清型。 结果 对2013年432例男性尿道炎患者进行了沙眼衣原体筛查,阳性标本143例,阳性率33.1%。143例沙眼衣原体阳性标本,127例扩增出ompA的VS1-VS2片段,16例未扩增出。127例阳性标本经测序分析获得9种血清型。血清型分布情况如下：E型29（22.83%）、F型28株（22.05%）、D型19（14.96%）、G型16株（12.60%）、J型16株（12.60%）、K型8株（6.30%）、H株5株（3.94%）、I型3株（2.36%）、B型3株（2.36%）,E、F、D、J、G型占85.02%。与标准菌种比对,发现127例菌株中有14株存在碱基突变,为同义突变。 结论 性病门诊男性尿道炎沙眼衣原体血清型主要是E型、F型、D型和G型,与20年前相比,E型菌株比例有所下降,J型菌株比例增高。     

女性不同基因型沙眼衣原体生殖道感染与临床表现相关性的初步研究

目的:研究不同基因型沙眼衣原体(CT)女性生殖道感染与临床表现的相关性;比较不同基因型CT感染宫颈分泌物中衣原体热休克蛋白60(c HSP60)表达的差异。方法:收集女性CT感染标本60例,巢式PCR扩增外膜蛋白Omp1基因的VS1-VS2序列,扩增产物通过基因测序进行分型。ELISA检测不同基因型沙眼衣原体感染宫颈分泌物中c HSP60表达,分析不同基因型沙眼衣原体感染与临床表现的相关性。结果:60例女性生殖道CT感染阳性标本中E型14例(23.33%),J型14例(23.33%),F型13例(21.67%),G型9例(15%),D型5例(8.33%),不确定型5例(8.33%)。女性生殖道J型CT感染患者宫颈分泌物中c HSP60表达均明显高于E型、F型、G型及D型(P值均0.05);E型c HSP60水平高于G型,差异有统计学意义(P0.05)。女性泌尿生殖道不同基因型CT感染者间的临床表现差异无统计学意义(2=2.42,P0.05)。结论:女性生殖道CT感染患者中不同基因型CT感染与临床表现之间缺乏关联性,结果尚需扩大样本量进一步确定。     

沙眼衣原体主要外膜蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的 克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建原核表达重组载体,并通过E.coli BL21实现MOMP的融合表达.方法 用PCR法扩增MOMP基因,克隆插入到pUCm-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,采用Ni-NTA亲和层析法纯化表达产物,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定.结果 PCR扩增出约1200bpDNA片段,序列测定证实与基因库登陆的D型沙眼衣原体一致;表达产物的相对分子质量为47000,与预期分子质量相符,蛋白印迹证实表达产物为特异性蛋白.结论 沙眼衣原体MOMP基因可以在大肠杆菌中得到表达,其表达产物能与相应的抗体结合,为沙眼衣原体核酸疫苗的研究奠定了基础.     

银屑病患者甘露糖结合凝集素基因多态性及血清水平的研究

【摘要】 目的 探讨银屑病患者甘露糖结合凝集素（MBL）基因多态性及血清水平与疾病的关系。 方法 寻常性银屑病患者67例,健康对照组69例。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法检测MBL基因第54号密码子基因多态性,ELISA法测定血清MBL浓度。 结果 67例银屑病患者GGC/GAC基因型频率高于健康对照组,GGC/GGC基因型频率低于健康对照组,两组比较,差异有统计学意义（χ2 = 10.36,P ＜ 0.05）;银屑病组GAC等位基因频率增高,GGC等位基因频率降低,两组差异有统计学意义（χ2 = 8.31,P ＜ 0.05）。GAC型等位基因与银屑病显著相关（OR = 3.383,95％置信区间1.585 ~ 7.211,P ＜ 0.05）。银屑病组与健康对照组血清MBL浓度分别为（2.1937 ± 0.8163） mg/L和（3.2695 ± 1.2058） mg/L,银屑病组显著低于健康对照组（t = 6.11,P ＜ 0.05）。 结论 MBL与银屑病的发病可能存在一定关系。     

北京地区人乳头瘤病毒16E6E7基因变异和序列分析

目的 了解北京地区人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7结构特点，为研制HPV16疫苗奠定基础。方法 从HPV感染组织中提取DNA，PCR鉴别其型别，从单独HPV16感染的标本中分离HPV16 E6E7基因，克隆入载体pGEM-3ZF，进行双向测序，与德同标准株进行比较。结果 构建了北京地区HPV16E6E7的重组质粒。测序结果表明该基因全长为776bp，与已发表的德同标准株长度相等，3处核苷酸发生变异，同源性99．7％。分别位于第60、96和565nt(相当于HPV16全长序列中第142、178和647nt)，2处位于F6区，1处位于E7，其对应氨基酸分别为第20、32和188个氨基酸，分别由Pro(CCA)、Asp(GAT)和Asn(AAT）变异为Pro(CCG)、Glu(GAG)和Ser(AGT)。结论 北京地区HPV16E6E7基因结构与德国标准株存在差异。     

雌激素受体基因多态性与江西籍汉族女性SLE相关性研究

目的 探讨雌激素受体α（ERα）基因多态性与江西籍汉族女性SLE患者是否存在相关性。方法 95例江西籍汉族女性SLE患者（18例月经初潮前起病和77例月经初潮后起病）及100例江西籍健康女性,通过PCR－限制性片段长度多态性技术,对其全血ERα PvuⅡ和XbaⅠ位点进行分型,并分析SLE患者月经初潮前与初潮后起病组等位基因及基因型频率分布差异。结果 P等位基因频率SLE组（35.8%）高于对照组（27%）,两组差异有统计学意义（P < 0.05）;月经初潮前起病组（19.4%）低于初潮后（39.6%）起病组（P < 0.05）。月经初潮前起病组Xxpp基因频率（16.7%）明显高于正常对照组（1%）和初潮后起病组（1.3%）。结论 江西籍汉族女性SLE患者ERα基因的P基因频率表达增高,Xxpp基因型SLE女性患者更易出现初潮前起病的特征。