复方中药对小鼠B—16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的激 …

目的 研究复方中药对小鼠Ｂ－１６黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响,及其对细胞内酪氨酸酶的激活作用。方法 四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定中药对细胞增殖的影响;酶学方法研究中药对酷氨酸酶活性的作用;４７０ｎｍ比色标准曲线法测定黑素含量。结果 研究发现复方３号（补肝肾为主）促进黑素细胞增殖和色素合成的能力高于复方１号（光敏感性药物）或复方２号（活血化瘀）,而酶激活能力复方１号较为稳定。结论 在白     

血清药理学方法研究复方中药对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的运用血清药理学方法研究复方中药白斑一号对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响.方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,运用血清药理学、细胞学的方法,测定药物对B16黑素瘤细胞增殖情况,对酪氨酸酶活性调节作用及黑素含量的影响.结果复方中药白斑一号能促进黑素合成和激活酪氨酸酶,从而阐明了该方在白癜风治疗中的机制.     

七白膏方剂中药提取物对离体人黑素细胞的作用

目的:评价七白膏方剂中的药物对离体培养人黑素细胞的作用.方法:建立体外人表皮黑素细胞模型.醇提法提取各种中药活性成分.以熊果苷为实验对照,检测各种中药提取液对于离体培养人黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的干预作用.结果:低浓度白芷对黑素细胞增殖呈抑制作用(P＜0.05),但高浓度时略呈激活作用.其它中药对黑素细胞增殖和酪氨酸酶活性有抑制作用.不同中药提取液对于黑素合成抑制作用不同.结论:各种中药提取液可影响黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成,从而干预体外人黑素细胞的代谢.     

中药滋补肝肾方对人黑素细胞株黑素合成的影响

目的通过中药滋补肝肾方对人黑素细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量影响的研究,探讨本方治疗白癜风的作用机制.方法采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定本方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定中药对黑素含量的影响.结果滋补肝肾方对体外培养的人黑素细胞具有促进细胞增殖、提高黑素含量和酪氨酸酶活性作用.结论本方能促进黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗白癜风的作用机理之一.     

复方中药白癜冲剂对B16黑素瘤细胞生物学特性影响的实验研究

目的：观察复方中药白癜冲剂对体外培养的B16黑素瘤细胞生物学特性的影响。方法：体外培养B16黑素瘤细胞,测定不同浓度白癜冲剂对B16黑素瘤细胞增殖、对酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。结果：低浓度剂量组白癜冲剂对B16黑素瘤细胞较对照组有明显促增殖作用,黑素合成增多,酪氨酸酶活力增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：复方中药白癜冲剂能促进B16黑素瘤细胞的黑素合成,提高酪氨酸酶活力。     

白癜风丸系列对酪氨酸酶活性影响的实验研究

采用蘑菇酪氯酸酶多巴速率氧化法测定白癜风丸系列对酪氨酸酶活性的影响。白癜风丸系列能上调酪氨酸酶的活性，其中1、3号几与对照组相比有显著性差异（P〈0．01）。提示这些中药可能通过调节酪氨酸酶活性促进黑素合成治疗白癜风。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 研究复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 培养小鼠B16黑素瘤细胞,采用MTT法测定不同浓度复方木尼孜其颗粒对细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定其对细胞酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测细胞黑素含量.结果 复方木尼孜其颗粒高剂量组能明显抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,但是对酪氨酸酶活性无影响.结论 复方木尼孜其颗粒能抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,在治疗色素性皮肤病中有一定前景.     

女贞子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响

目的 研究女贞子单体酪醇和齐墩果酸对人黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法 采用MTT法测定细胞增殖情况,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,半定量RT-PCR检测药物对黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达的影响。结果 加入酪醇72h后,各组黑素细胞的酪氨酸酶活性和合成黑素能力明显增强,且呈浓度依赖性;酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达量分别比空白对照增加39.10%和99.26%;齐墩果酸也能明显激活酪氨酸酶(P<0.01),促进黑素合成(P<0.05),并使黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1mRNA表达量分别比加入无水乙醇的对照增加31.88%和17.73%。结论 酪醇和齐墩果酸可能通过上调酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA的表达而增强正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性:两者可能是女贞子中影响黑素细胞生物学活性的主要成分。     

六种中药复方乙醇提取物对酪氨酸酶激活作用及动物致色素作用的研究

目的探讨中医理法和实验药效的关系及其可能的作用机制,为临床治疗白癜风优化组方提供实验依据。方法离体实验为中药复方乙醇提取物对酪氨酸酶的影响;动物实验选用棕色豚鼠为模型,观察中药致色素作用。结果Ⅰ方、Ⅱ方、Ⅲ方、Ⅵ方对酪氨酸酶有激活作用(P<0.05);6种中药复方均使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多(P<0.05);Ⅱ方、Ⅲ方、Ⅵ方中药使豚鼠表皮内Dopa阳性细胞增多(P<0.05)。结论对酪氨酸酶具有激活作用的中药组成复方并不一定对酪氨酸酶有激活作用;中药复方在离体和活体上的作用并不完全平行,提示中药对黑素生成的机理,不仅限于对酪氨酸酶的激活作用。     

黄芩甙对紫外线诱导人正常黑素细胞黑素合成的抑制作用研究

体外培养黑素细胞（MC）分别经隔日长波紫外线（UVA）或中波紫外线（UVB）照射和（或）黄芩处理后，观察细胞增殖情况，测定酪氨酸酶活性和黑素含量。结果：（1）UVA使细胞增殖增快，但剂量较大时增殖减发电量；UVB使细胞增殖减慢。二者均可使细胞酪氨酸酶活性和黑素含量高于对照组。（2）黄芩具有抑制UVA和UVB诱导的MC增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成改变的作用。提示黄芩能抑制UVA和UVB诱导的细胞反应，还可通过抑制酪氨酸酶减少MC黑素合成。     

龙胆草在人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的：探讨龙胆草对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法：培养人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果：0．1mg／mL、0．2mg／mL和0．5mg／mL龙胆草对于共培养细胞酪氨酸酶活性有较强的剂量相关性激活作用（P〈0．01）,0．2mg／mL及0．5mg／mL龙胆草与对于共培养细胞黑素生成有较强的剂量相关性激活作用（P〈0．01）。结论：龙胆草对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。     

阿魏酸对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨阿魏酸对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响.方法 以不同浓度的阿魏酸干预体外培养的正常人表皮黑素细胞,用MTS法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性.用NaOH裂解法检测培养72 h后黑素细胞的黑素合成.用多巴氧化反应法测定培养72 h后黑素细胞酪氨酸酶活性.用Western印迹法测定培养72 h黑素细胞c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸在作用24、48、72 h后,抑制黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（均P＜ 0.05）,其中1 mg/ml阿魏酸作用72 h抑制黑素细胞活性最高.0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸均能显著影响黑素合成和酪氨酸酶活性,并可降低黑素细胞中c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 阿魏酸可抑制培养的人表皮黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶活性,并可下调黑素细胞c-kit蛋白及ERK蛋白的表达.     

白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

探讨白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.采用MTT法测定白芷对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较.结果显示,白芷浓度在0.1～10mg/mL对人A375黑素瘤细胞增殖无影响.1、2和5mg/mL白芷对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用,2mg/mL及5mg/mL白芷与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).白芷对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用.     

中药含药血清对体外培养黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨中药补肾化瘀胶囊含药血清对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法体外培养人黑素细胞株,制备大鼠中药含药血清,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)和蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性。结果中药含药血清均能促进黑素细胞增殖,与空白对照组差异有显著性(P<0.05);三组含药血清间两两比较差异无显著性(P>0.05)。补肾化瘀胶囊组较六味地黄丸组、逍遥丸组、空白对照组有显著抑制酪氨酸酶活性的作用,差异有显著性(P<0.01);六味地黄丸组、逍遥丸组、空白对照组三组两两比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论补肾化瘀胶囊含药血清对黑素细胞增殖具有促进作用,对酪氨酸酶活性具有明显抑制作用,在促进黑素细胞增殖上各组中药含药血清作用相当,在抑制酪氨酸酶活性上补肾化瘀胶囊组优于六味地黄丸组和逍遥丸组。     

川芎嗪对正常人黑素细胞黑素合成的抑制作用

目的　了解川芎嗪对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法　采用黑素细胞体外纯培养技术 ,在药物处理后的细胞中掺入3H TdR测定细胞增殖情况 ,用氧化DOPA反应测定酪氨酸酶活性 ,NaOH法测量黑素生成量。结果　随着药物浓度增加 ,黑素细胞增殖降低 ,但浓度过高 ( >5 0 0 μg/ml)则显示其毒性作用。细胞酪氨酸酶活性及黑素生成量同药物浓度成反比。结论　川芎嗪在较低的相对安全浓度下 ( 5 0～ 40 0 μg/ml)即可有效抑制黑素细胞增殖 ,降低酪氨酸酶活性 ,从而减少黑素合成。     

七组中药醇提物通过HaCaT细胞对黑素细胞株BIOBR增殖和黑素合成的影响

目的研究黑胡椒等中药醇提物通过角质形成细胞对黑素细胞增殖及黑素合成的间接作用．探讨其外用治疗白癜风的可能机理。方法选取七组中药的醇提物，其中Ⅰ号：透骨草、浮萍各等份；Ⅱ号：白芷、蛇床子各等份；Ⅲ号：补骨脂；Ⅳ号：黑胡椒；Ⅴ号：黑胡椒、补骨脂各等份；Ⅵ号：女贞子；Ⅶ号：复方卡力孜然酊．加入到HaCaT细胞培养基中，采用ELISA法测定上述中药干预后HaCaT细胞上清液中内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量；MTT法测定经中药干预后HaCaT细胞上清液对永生化黑素细胞株B10BR增殖的影响，多巴氧化法检测酪氨酸酶活性，氢氧化钠裂解法测定黑素含量。结果Ⅱ号和Ⅴ号中药能明显刺激HaCaT细胞分泌内皮素-1（P〈0．01及P〈0．05）．Ⅲ号、Ⅳ号和Ⅶ号可促进HaCaT细胞分泌bFGF（P〈0．01，P〈0．05及P〈0．05）。经各组中药处理后的HaCaT细胞培养上清液，Ⅲ号、Ⅵ号能显著促进B10BR的增殖（P〈0．01），Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号能明显提高B10BR酪氨酸酶活性（P〈0．01）；Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅵ号、Ⅶ号能明显促进B10BR黑素的合成（P〈0．01或〈0．05）。结论部分中药醇提物治疗白癜风有效可能与中药促进了角质形成细胞分泌细胞因子、改变表皮的微环境有关。     

山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响

目的:观察山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响。方法:山奈素干预melan-a后,观察对黑素细胞增殖率的影响并测定各组酪氨酸酶活性大小及黑素量。结果:山奈素表现出轻度的促melan-a增殖作用(P<0.01),当山奈素浓度在0.001mmol/L至0.1mmol/L之间时,细胞增殖率和浓度呈指数关系,而浓度高于0.1mmol/L后进入平台期。山奈素在1mmol/L浓度时,促黑素合成的作用与同浓度8-MOP类似(P>0.05)。Fontana-Masson染色后与空白对照比较,经山奈素干预的细胞内,黑素颗粒染成黑色,融合成片,明显多于空白对照。结论:山奈素能够激活melan-a黑素细胞酪氨酸酶的活性,并具有促进黑素细胞增殖、使黑素合成量增加的作用。     

胡椒碱等6种中药单体促进黑素瘤Cloudman S91细胞株黑素合成的研究

目的研究胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂等6种中药单体对小鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响,初步探讨不同的中药单体影响黑素合成的作用机制。方法培养的黑素瘤CloudmanS91细胞分别以系列浓度的6种中药单体作用72h,测定细胞黑素含量、酪氨酸酶活性并与体外蘑菇酪氨酸酶活性直接测定方法(多巴速率氧化法)测定的结果进行比较。结果6种单体均能促进CloudmanS91细胞的黑素量生成。胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂在最佳促进浓度均较100μmol/L的8-甲氧补骨脂素作用明显(P<0.05),其中0.5mmol/L胡椒碱对黑素含量促进作用最为明显。在实验浓度(0.01～1.00mmol/L)胡椒碱可促进酪氨酸酶活性,体外可直接增加蘑菇酪氨酸酶的活性;原儿茶醛对酪氨酸酶活性无明显影响,体外可直接促进蘑菇酪氨酸酶的活性;白果内脂对酪氨酸酶活性起促进作用,体外对蘑菇酪氨酸酶的活性无影响。结论中药单体胡椒碱、原儿茶醛、白果内脂可明显促进黑素瘤细胞黑素的合成,原儿茶醛的作用可能不依赖于酪氨酸酶的活化作用。