辐射对体外培养的小鼠成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 肿瘤放射治疗诱发骨组织损伤,辐射后成骨细胞Ⅰ型胶原的基因表达分析揭示辐射对早期和晚期的成骨细胞功能的影响.方法 在体外诱导骨髓基质细胞生成成骨细胞,对其特性进行确定.用聚合酶链式反应(PCR)方法分析了1～4 Gy照射的早期和晚期成骨细胞的Ⅰ型胶原表达.结果与对照组相比,经1～3 Gy剂量照射后的早期成骨细胞Ⅰ型...     

IL—6对分离培养的兔破骨细胞1型胶原酶mRNA表达的影响

采用地高辛精标记的反义ｃＤＮＡ探针原位杂交技术，观察了不同浓度的ＩＬ－６对分离培养的兔破骨细胞１型胶原酶ｍＲＮＡ表达的影响，结果表明，在ＩＬ－６≥１００Ｕ／ｍｌ时破骨细胞１型胶原酶ｍＲＮＡ量明显增加，提示ＩＬ－６对破骨细胞具有激活作用，此结果对于探索多发性骨髓瘤等具有溶骨性病变机制具有重要意义。     

人工虎骨粉干预大鼠成骨细胞增殖和Ⅰ型胶原的表达

背景：人工虎骨粉主要用于骨质疏松症、骨折、类风湿关节炎等骨科疾病的治疗,并在临床中取得较好的疗效,但其成骨作用的药物机制尚未明确。 目的：观察人工虎骨粉对大鼠成骨细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响。 方法：采用新生SD大鼠颅盖骨组织二次酶消化法培养原代成骨细胞,其中人工虎骨粉干预组细胞培养液的药物终质量浓度分别为10-4,10-5,10-6 g/L。对照组给予不含人工虎骨粉的无血清DMEM细胞培养液。 结果与结论：噻唑蓝比色法检测结果显示,人工虎骨粉可显著提高成骨细胞增殖活力(P < 0.05),流式细胞仪检测结果显示,人工虎骨粉可提高S期和M/G2期细胞分布比例,并伴有G0/ G1期细胞比例降低;RT-PCR和ELISA的检测结果显示,各质量浓度人工虎骨粉处理成骨细胞48 h,均可以提高成骨细胞Ⅰ型胶原的表达(P < 0.05)。结果表明人工虎骨粉对体外培养的大鼠原代成骨细胞具有促增殖作用并可以促进Ⅰ型胶原的合成和分泌。     

生物活性玻璃对成骨细胞Ⅰ型胶原和骨钙素基因表达的影响

背景：在成骨细胞培养液中加入生物活性玻璃离子,对成骨细胞的细胞因子分泌是正相关还是负相关？ 目的：观察生物活性玻璃对成骨细胞Ⅰ型胶原和骨钙素基因表达的影响,以进一步探讨生物活性玻璃促进成骨细胞增殖的可能机制。 方法：以DMEM完全培养液作为对照组培养液,以加入生物活性玻璃离子液的DMEM完全培养液作为实验组培养液,取第2代乳鼠颅骨源性成骨细胞,用两种培养液分别培养4 d进行实验观察。 结果与结论：鼠成骨细胞2种生长因子的表达量实验组与对照组之比为：Ⅰ型胶原=3.376、骨钙素=2.687,两者与内参基因相对量两两比较差异有显著性意义(P < 0.05)。生物活性玻璃促进成骨细胞对Ⅰ型胶原、骨钙素的基因表达,有利于骨修复过程中成骨细胞周围基质的形成和矿化,从而促进骨愈合。 关键词：生物活性玻璃;成骨细胞;细胞因子;Ⅰ型胶原;骨钙素 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.08.002     

雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及I型胶原代谢的影响。方法 分离大鼠胚胎头盖骨成骨细胞，分别给予不同浓度雌激素培养；观察细胞增殖情况和ALP活性变化；苦味酸天狼星红及I型胶原免疫组织化学染色，从蛋白质水平观察成骨细胞中I型胶原的变化；地高辛标记的I型胶原基因探针进行原位杂交，从mBNA水平观察I型胶原的变化。结果 雌激素可降低大鼠胚胎成骨细胞增殖水平而使ALP活性以及I型胶原蛋白质和mRNA水平均升高。结论 雌激素可促进成骨细胞分化，而抑制增殖。     

竞争性逆转录—聚合酶链反应检测Ⅰ型胶原mRNA的表达

近来出现的竞争性逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）能较简便、准确地用于基因表达的定量研究［１］。我们依其原理构建了一个竞争片段，成功地将竞争性ＲＴＰＣＲ法应用于Ⅰ型胶原ｍＲＮＡ表达的定量研究。一、材料与方法１．抽提ＲＮＡ：收集经不同浓度（０、１０－６、１０－８、１０－１０ｍｍｏｌ／Ｌ）血管紧张素Ⅱ（Ｓｉｇｍａ公司）刺激１２小时后的血管外膜成纤维细胞（血管外膜成纤维细胞的培养参照文献［２］），弃培养液进行以下操作：加入ＴＲＩｚｏｌ（ＧＩＢＣＯＬ）试剂１ｍｌ，反复吹打；加氯仿２００μｌ，振荡１５…     

雌二醇对人类成骨细胞HOS TE85增殖及Ⅰ型胶原产生的影响

雌激素替代疗法对更年期骨质疏松的预防及治疗效果显著,但作用机理不很明确,本研究通过体外培养的人类成骨细胞ＨＯＳＴＥ８５,观察雌二醇对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原产生的影响。方法：在体外培养的人类成骨细胞ＨＯＳＴＥ８５培养液中,加入雌二醇（０．０１－１０ｎｍｏｌ／Ｌ）,分别培养２４、４８、７２及９６ｈ,于结束培养前６ｈ,加入３Ｈ－胸腺脱氧核苷检测细胞增殖;或于细胞开始培养时,加入３Ｈ－脯氨酸检测Ｉ型胶原产生。结果：在２４ｈ时,雌二醇刺激细胞增殖,但与对照组无显著差异;在４８、７２及９６ｈ时,雌二醇抑制细胞增殖。但无明显量效关系。在４８、７２ｈ时,雌二醇明显刺激细胞Ｉ型胶原产生,量效关系显著,在９６ｈ时。也能刺激Ｉ型胜原产生。结论：雌二醇对人类成骨细胞ＨＯＳＴＥ８５增殖具有短期刺激,长期抑制的作用,对Ｉ型胶原产生具有促进作用,这可能是其临床治疗作用的主要机制。     

雌二醇对人类成骨细胞HOSTE85增殖及I型胶原产生的影响

目的：雌激素替代疗法更年期骨质疏松的预防及治疗效果显著，但作用机理不很明确，本研究通过体外培养的人类成骨细胞ＨＯＳＴＥ８５，观察雌二醇对成骨细胞增殖及１型胶原产生的影响。方法：在体外培养的人类成骨细胞ＨＯＳＴＥ８５培养兴衰，加入雌二醇（０．０１～１０ｎｍｏｌ／Ｌ），分别培养２４，４８，７２及９６ｈ，于结束培养前６ｈ加入＾３Ｈ－胸腺嘧啶脱氧核苷检测细胞增殖，或于细胞开始培养时，加入＾３Ｈ－脯氨酸检测     

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞IL-6 mRNA及其蛋白表达的影响

目的：从mRNA及蛋白水平探讨益骨胶囊含药血清对成骨细胞表达IL-6的影响。方法：分离、培养新生SD大鼠成骨细胞，传代后分为3组即含药血清组；空白血清组；DMEM组。采用RT-PCR法检测IL-6 mRNA相对表达量，用放射免疫法检测成骨细胞培养上清中的IL-6含量。结果：益骨胶囊含药血清组IL-6 mRNA相对表达量显著低于对照组（P<0.05）；益骨胶囊含药血清组IL-6蛋白表达量也低于对照组（P<0.05）。结论：益骨胶囊含药血清能下调成骨细胞IL-6 mRNA 表达；亦能在蛋白水平降低成骨细胞分泌骨吸收因子IL-6，这可能是益骨胶囊防治骨质疏松症的机制之一。     

川芎嗪对腹主动脉缩窄大鼠左室心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达的影响

目的:探讨川芎嗪对腹主动脉缩窄大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达的影响。方法:34只SD大鼠分为假手术组(12只)、模型组(10只)和川芎嗪组(12只)。模型组根据Doering等的银夹缩窄法造成腹主动脉部分狭窄(银夹内径0.7mm)。假手术组只分离腹主动脉而不缩窄。川芎嗪组手术同模型组。4周后川芎嗪组用川芎嗪注射液灌胃(25ml/kg)4周,手术组和模型组以等量双蒸水灌胃4周。之后处死动物,取其心脏测量左室心肌质量指数(LVMI);用免疫组化法进行左室心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色及定量图像分析,同时通过RT-PCR扩增并测定各组左室心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果:模型组造模8周时LVMI、Ⅰ型和Ⅲ型胶原及mRNA表达较假手术组显著升高(P0.01);免疫组化染色显示胶原纤维明显增多、增粗及排列紊乱。川芎嗪组左室心肌胶原纤维减少,排列转好,LVMI、Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达明显降低(P0.01)。结论:腹主动脉缩窄大鼠反应性左室心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高;川芎嗪可延缓心肌纤维化进程。     

病毒性肝炎患者Ⅰ型前胶原羧基端肽及表皮生长因子评价

通过观察各型病毒性肝炎及肝硬化患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)及表皮生长因子(EGF)水平,以评价其在肝纤维化中的临床意义.本文采用放射免疫分析方法测定了134例病毒性肝炎患者和30名正常人(对照组)的血清PICP及ECF水平.结果表明急性肝炎组两指标与对照组相比无显著差异(P＞0.05),而慢性肝炎轻中型组、慢性肝炎重型组及肝硬化组两指标与对照组相比,均有显著性差异(P＜0.05-0.01),其中慢性肝炎重型组两指标水平最高.以上结果说明,测定血清PICP及EGF水平可以反映肝纤维化程度及慢性肝病的活动度,是临床上判断肝病进展及预后的一项参考指标.     

中药骨康对成骨细胞IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响

目的 通过观察骨康含药血清对成骨细胞IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的作用机制。方法 体外分离、培养成骨细胞，实验分为3组：正常血清组、中药骨康血清组和雌二醇含药血清组。采用酶联免疫吸附法，检测成骨细胞IL-1、IL-6和TNF-α表达。结果 中药骨康含药血清组IL-1、IL-6和TNF-α含量显著低于空白对照组（P〈0．05），中药骨康含药血清组与雌二醇含药血清组IL-1、IL-6和TNF-α的含量无明显差异。结论 在去势状态下，中药骨康可能是抑制IL-1、IL-6和TNF-α分泌，而达到治疗骨质疏松症的作用。     

精神分裂症阳性与阴性症状的血清白介素水平治疗前后的对比研究

目的：探讨以阳性症状为主（P组）和以阴性症状为主（N组）精神分裂症患者IL－1β，IL－2，IL－6水平在治疗前后与正常对照者的差异。方法：利用放射免疫方法测定血清中的IL－1β，IL－2，IL－6水平。结果：患者组与对照组比较，IL－2血清水平与治疗前明显低于对照组（P＜0．01）。P组患者IL－1β血清水平在治疗后高于治疗前（P＜0．05）。P组与N组之间比较，治疗后IL－6水平呈现显著性差异（P＜0．05），未发现PANSS量表阳性症状得分（P分）和阴性症状得分（N分）与白介素水平的相关关系。未发现在患者组及对照组内部IL－1β，IL－2，IL－6之间的相关性。结论：精神分裂症患者与正常对照者相比血清白介素水平存在显著性差异。不同症状类型在治疗前后白介素水平改变的趋势不同。抗精神病药物对某些白介素水平有影响。     

酒精诱导大鼠脂肪肝变TNF-α、IL-6的表达

目的观察酒精诱导大鼠脂肪肝组织中肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平的变化。方法以56％酒精灌胃,造成大鼠酒精性脂肪肝模型,取血清测丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、门冬氨酸氨基转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活性,取肝组织做免疫组织化学检测TNF-α、IL-6表达。结果模型组大鼠毛发光泽差,食欲差,大便溏泻,体重增长缓慢（P〈0．01）,模型组大鼠肝组织出现不同程度的肝脂肪变性,血清中ALT、AST活性较正常组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,模型组肝组织中TNF-α、IL-6蛋白阳性产物呈棕褐色细颗粒状。结论肝细胞中TNF-α、IL-6水平的升高可能是酒精性脂肪肝发生的重要机制之一。     

Seminal plasma induces mRNA expression of IL-1beta, IL-6 and LIF in endometrial epithelial cells in vitro

The influence of seminal plasma on the mRNA expression of cytokines in human endometrial epithelial and stromal cells and the cytokine production of spermatozoa were investigated in vitro. Seminal plasma and spermatozoa were collected from healthy volunteers and were screened by enzyme-linked immunosorbent assay for cytokines. Epithelial and stromal cells from fertile women were cultured on matrigel or polystyrol and incubated with pooled seminal plasma or with transforming growth factor beta1 (TGF-beta1), interleukin 8 (IL-8) and vascular endothelial growth factor (VEGF), which were found to be significantly concentrated in seminal plasma. Endometrial cytokine expression was analysed by RNase protection assay and supported by RT-PCR. Supernatants of highly purified spermatozoa did not contain detectable levels of IL-1beta, IL-6 and VEGF. Screening of seminal plasma revealed concentrations >10-fold above the serum level for TGF-beta1, IL-8 and VEGF. Incubation of epithelial cells with 0.1, 1 and 10% seminal plasma resulted in concentration-dependant stimulation of IL-1beta, IL-6 and LIF mRNA expression. Maximum stimulation was found in epithelial cells from tissue samples taken in the mid secretory phase. Epithelial mRNA expression of IL-1beta, IL-6 and LIF increased by stimulation with TGF-beta1 and IL-8, but not with VEGF. In conclusion, seminal plasma stimulates expression of pro-inflammatory cytokines in endometrial epithelial cells in vitro. This effect might at least in part be exerted by TGF-beta1 and IL-8, abundantly present in seminal plasma. The in-vivo physiological relevance of these in-vitro studies remains to be determined.     

慢性心力衰竭大鼠模型TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达

目的：检测慢性心力衰竭病程肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）、干扰素-γ（inter-feron-γ,IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）和白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）水平的动态变化,以期探讨慢性心力衰竭过程免疫系统状况变化。方法：采用纯种Wistar大鼠作为实验动物,分为正常对照组、假手术组和模型组,每个亚组均10只。采用腹主动脉结扎方法制作慢性心力衰竭模型。术后每两周行超声心动图、血液动力学检测,并取静脉血放射免疫分析进行TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的检测。结果：腹主动脉结扎后3月内是心功能代偿期,6月时是心功能失代偿期。在心力衰竭进程中,TNF-α和IFN-γ先降低后升高,IL-4和IL-10水平先升高后降低。结论：心力衰竭的不同进程,免疫机制发生变化,心功能代偿期以体液免疫为主,心功能失代偿期以细胞免疫为主。     

白细胞介素-6 mRNA在内异症子宫内膜的表达变化

目的：探讨IL-6 mRNA与子宫内膜异位症发病的关系。方法：利用大鼠子宫内膜异位症（内异症）动物模型，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测子宫内膜白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达情况。结果：正常对照组，各时点间（2、4、6和8周）IL-6 mRNA表达无显著差异（P>0.05）。内异症模型组,在成模后（2、4、6和8周）其在位、异位子宫内膜IL-6 mRNA的表达呈增高趋势（P<0.01）。在各时点，内异症异位子宫内膜>内异症在位子宫内膜>正常子宫内膜IL-6 mRNA的表达（P<0.01）。结论：IL-6 mRNA可能与内异症的进展有关。IL-6 mRNA可能促进异位内膜的种植和生长。     

Localization of Type III Procollagen mRNA in Areas of Liver Fibrosis by in situ Hybridization

Localization of type III procollagen mRNA in human liver was studied by in situ hybridization using human 0-1(111) procollagen cDNA. Frozen and paraformaldehyde-fixed sections of biopsied human liver from patients with chronic hepatitis and cirrhosis were examined using the digox-igenin labeled cDNA probe. Localization of the type III procollagen mRNA was demonstrated not only in the cytoplasm of mesenchymal cells but also in a large number of hepatocytes, in proportion to the extent of fibrosis. These results suggest that hepatocytes play an important role in fibrogenesis in the liver.     

Interleukin-10- and corticosteroid-induced reduction in type I procollagen in a human ex vivo scar culture

Fibroblasts act as the effector cells of the fibrotic response via production of collagen. In an attempt to understand the regulation of fibroblasts from areas of active human tissue fibrosis, we have developed an ex vivo model in which biopsies of scars from patients 6 weeks post thoracotomy were cultured. This model has been used to investigate whether interleukin-10 (IL-10) and triamcinolone acetonide modulate the expression of type I procollagen mRNA and protein. In situ hybridization and a quantitative competitive RT-PCR were used to measure type I procollagen mRNA. Type I procollagen protein was evaluated by immunochemistry. Viability of biopsies in culture using ³H-uridine incorporation into RNA was observed to be > 80% for at least 96 hours. Following addition of either IL-10 or triamcinolone acetonide there was a modest but significant decrease ( P <0.05) in type I procollagen mRNA expression. Similarly, each agent added individually to biopsies reduced the proportion of cells staining positively for type I procollagen when compared to biopsies treated with medium alone ( P <0.05). These results extend in vitro data that IL-10 and corticosteroids down-regulate collagen synthesis in skin fibroblast cell lines and suggest that this ex vivo model may offer a closer approximation to the post-operative scarring process when testing new therapeutic agents for reducing an over-exuberent fibrotic response.