红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。     

转移程度不同的小鼠肝癌细胞株对腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 研究转移程度不同的小鼠肝癌细胞株对腹腔巨噬细胞功能的影响.方法 在两株转移程度不同的小鼠腹水型肝癌模型中,取荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞,检测其在干扰素γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)刺激下产生一氧化碳(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并检测其活化后的杀伤能力.进一步采用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,研究不同荷瘤小鼠腹水中IFN-γ与转化生长因子β1(TGF-β1)的水平,并用相应抗体封闭TGF-β1后,检测活化巨噬细胞产生NO能力及杀伤活性.结果 经IFN-γ和LPS活化后,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α能力明显低于正常巨噬细胞,杀伤能力下降.高转移性肝癌小鼠巨噬细胞分泌NO水平和杀伤能力均低于低转移性小鼠,但其分泌TNF-α量较高.此外,荷瘤小鼠腹水含较高水平IFN-γ与TGF-β1,不同转移程度荷瘤小鼠IFN-γ水平接近,但高转移性肝癌小鼠腹水含更多TGF-β1,而且TGF-β1的封闭可导致与肿瘤细胞共培养的巨噬细胞分泌NO的能力部分恢复.结论 肿瘤细胞可以通过分泌TGF-β1等抑制性因子下调巨噬细胞的活性和免疫功能.肿瘤的转移程度可能与其分泌免疫抑制因子的能力相关.     

约氏疟原虫感染早期抵抗和易感小鼠Th1反应特点的实验研究

为探讨疟原虫感染早期抵抗和易感小鼠Th1反应特点,以约氏疟原虫腹腔感染DBA/2和BALB/c小鼠为材料,用ELISA试剂盒和Griess实验分别检测感染第3天小鼠脾细胞、悬浮细胞以及巨噬细胞培养上清液中IFN-γ和NO水平。结果表明以PRBC或LPS刺激后,DBA/2小鼠脾细胞上清液中IFN-γ和NO水平随培养时间的延长均有不同程度的提高,但BALB/c小鼠48h培养组的IFN-γ和NO水平仅比24h培养组略有升高。两种小鼠单纯悬浮细胞或巨噬细胞上清液中IFN-γ或NO水平均明显低于其脾细胞上清液中的水平。这表明,约氏疟原虫感染早期,抵抗宿主对特异性或非特异性因子刺激的应答能力明显强于易感宿主,在相同因子刺激下前者建立的Th1反应可进一步被强化;巨噬细胞分泌NO明显依赖于IFN-γ的诱导效应。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞极化的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠骨髓细胞,经100 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导分化为骨髓巨噬细胞(BMDM),加入50 ng/ml干扰素γ(IFN-γ)和1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激,并同时暴露于12.5~50μmol/L EGCG处理48 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巨噬细胞促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和i NOS的mRNA表达水平和蛋白含量。结果:IFN-γ和LPS处理可刺激巨噬细胞IL-1β、TNF-α和i NOS表达显著上调,而EGCG则能抑制IFN-γ和LPS刺激的IL-1β、TNF-α和i NOS表达,且存在剂量依赖性。结论:EGCG能够减弱IFN-γ和LPS刺激的髓源性巨噬细胞的促炎作用。     

人血单核细胞和U937细胞产生IFN-α的比较

一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)产生较高水平的IFN-α;U937细胞只能产生低水平的IFN-α.     

LPS联合z-VAD-FMK介导IFN-γ预处理巨噬细胞发生程序性坏死

目的:探讨脂多糖(LPS)联合z-VAD-FMK介导M1亚型巨噬细胞程序性坏死的机制。方法:使用佛波酯(PMA)和干扰素γ(IFN-γ)诱导THP-1细胞系分化得到M0和M1亚型巨噬细胞。以LPS(100μg/L)分别处理M0和M1巨噬细胞,检测不同时点的乳酸脱氢酶释放和DNA断裂情况,并观察不同抑制剂的影响。采用Western blot法检测受体相互作用蛋白(RIP)1、RIP3、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、P38和NOD样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白水平。结果:LPS能够诱导M1亚型巨噬细胞发生死亡,联合z-VAD-FMK可特异性介导M1亚型巨噬细胞发生程序性坏死,而对M0亚型巨噬细胞无此作用。IFN-γ能够上调RIP3表达,并增强LPS介导的JNK磷酸化,RIP3和JNK抑制剂可部分阻断LPS联合z-VAD-FMK介导的M1亚型巨噬细胞程序性坏死。结论:IFN-γ上调RIP3和增强LPS介导的JNK磷酸化,使得LPS联合z-VAD-FMK能特异性诱导经过IFN-γ预处理的巨噬细胞发生程序性坏死。     

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产小鼠子宫组织IFN-γ/IL-4和巨噬细胞的影响

目的 探讨小鼠子宫组织中巨噬细胞在早期胚胎丢失中的意义,研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导流产孕小鼠的保胎效果,和对母胎界面免疫平衡的调节作用. 方法 选用LPS尾静脉注射(0.10μg/鼠),制造小鼠流产模型,孕4～7d分别口服不同保胎药物,用药前后检测各组( n =10)小鼠子宫组织干扰素γ/白细胞介素4(IFN-γ/IL-4)的含量和巨噬细胞数量的变化. 结果 LPS促流产后,子宫匀浆中IFN-γ含量升高,IL-4含量降低,IFN-γ/IL-4的比值升高,与对照组比较差异极显著;孕小鼠子宫壁巨噬细胞数量显著增多.预先口服槲皮素和乙酸龙脑酯可不同程度地抑制LPS的作用,其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显,IFN-γ/IL-4的比值基本达到正常水平,巨噬细胞数量降至16.199±0.802,较LPS流产模型组差异极显著. 结论 小鼠子宫组织中IFN-γ/IL-4的比值升高和巨噬细胞数量增多与早期胚胎丢失关系密切,槲皮素和乙酸龙脑酯能调节子宫局部的免疫微环境,从而起到一定的促孕保胎作用.     

微量全血诱生γ-干扰素的酶免疫测定法

建立了一种微量全血诱生γ-干扰素(IFN-γ)的酶免疫测定法.将抗凝全血、脂多糖(LPS)、植物血凝素(PHA)、RPMI 1640培养基和HRP标记的抗IFN-γ单克隆抗体,同置于用抗IFN-γ多克隆抗体包被的反应板微孔中.此法IFN-γ最小检出量为0.5ng/ml,特异性、重复性均较好,适于临床应用.     

IFN-γ对沙眼衣原体感染细胞的细胞毒作用及其机制

目的：探讨IFN-γ对沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）感染细胞的细胞毒作用的特点及可能机制。方法：用MTT法检测IFN-γ对感染Ct（K血清型）的Mc-Coy细胞的细胞毒作用，酶法检测NO的含量，应用NO合酶抑制剂N-硝基左旋精氨酸（L-NNA）分析细胞毒作用与NO水平的关系。结果：①IFN-γ对Ct感染的McCoy细胞产生显著的细胞毒作用，且呈时间和剂量依赖性；随着Ct感染剂量的加大，IFN-γ的细胞毒作用增强；L-NNA剂量依赖性地阻断IFN-γ对Ct感染细胞的细胞毒作用。②IFN-γ诱导Ct感染的McCoy细胞分泌NO，且IFN-γ作用浓度增大和作用时间延长，NO含量增大；L-NNA剂量依赖性地抑制了IFN-γ所诱生的NO的合成。结论：①IFN-γ对Ct感染的McCoy细胞产生细胞毒作用，且呈时间和剂量依赖性；细胞毒作用随Ct感染量增加而增大；②NO可能是IFN-γ对Ct感染细胞产生细胞毒作用的效应分子。     

小鼠IFN-γ和IFN-α/β对正常和带瘤小鼠体外诱生抗体的影响

IFN-γ因有较强的抗肿瘤和免疫调节作用而日益受到人们的重视。然而,目前有关IFN-γ对特异性体液免疫影响方面的研究还较少,IFN-γ对抗体形成的影响究竟如何,是否比IFN-α和IFN-β有更强的调节作用尚有争议。目前,IFNs多用于肿瘤病人,对其影响肿瘤机体产生抗体的能力也缺乏了解,为此,我们观察比较了小鼠IFN-γ和IFN-α/β对正常和带瘤小鼠体外诱生原发直接PFC的影响。     

秦皮乙素增强小鼠腹腔巨噬细胞的趋化和吞噬及一氧化氮生成

目的观察秦皮乙素(esculetin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化、吞噬及一氧化氮(NO)释放功能的影响。方法用淀粉肉汤液加秦皮乙素注射小鼠腹腔,以台盼蓝鉴别巨噬细胞并计数判定秦皮乙素对巨噬细胞趋化作用的影响;用流式细胞仪检测秦皮乙素对LPS诱导的巨噬细胞吞噬肠出血性大肠杆菌(EHEC)∶O157能力的调节作用;用Griess试剂检测秦皮乙素和LPS作用于巨噬细胞后对其NO生成量的影响。结果秦皮乙素能显著增强淀粉肉汤液诱导的巨噬细胞趋化能力,对LPS诱导的巨噬细胞吞噬EHEC∶O157发挥明显的正向调节作用,也能使LPS诱导的巨噬细胞NO生成量显著提高,并呈显著的剂量依赖性。结论秦皮乙素增强LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化、吞噬和NO生成量。     

IFN-α、rIFN-γ对正常人外周血单个核细胞诱生IL-2、IFN-γ能力和环核苷酸含量及比值的影响

应用PHA、ConA刺激经IFN-α,rIFN-γ作用24小时后的正常人外周血单个核细胞,观察其对产生IL-2、IF N-γ能力与环核苷酸含量的影响。结果表明rFN-α、IFN-γ对单个核细胞产生IL-2、IFN-γ能力的影响取决于外源性IFNs的剂量,随作用的IFN-α、rIFN-γ剂量增加,渐出现抑制性效应。IFNs作用后的单个核细胞诱生IL-2、IFN-γ能力之间有较好的相关关系,提示它们关系密切。此外,IFN-α,rIFN-γ能够增加单个核细胞内cAMP含量与cAMP/cGMP比值,提示这一作用可能同IL-2、IFN-γ等免疫调节因子的细胞生物学调节效应有关。     

LPSp辅佐HBsAg诱导机体产生特异性抗体的机制

目的:研究革兰阴性非致病性成团泛菌脂多糖(LPSp)作为佐剂促进乙型肝炎表面抗原蛋白(HBsAg)诱导小鼠产生抗-HBs抗体的作用机制。方法:在体外用LPSp HBsAg、HBsAg、LPSp、生理盐水分别致敏小鼠腹腔巨噬细胞,观察致敏细胞回输体内后诱导HBs抗体产生水平,检测巨噬细胞培养上清中TNF-α活性和NO浓度;观察4组巨噬细胞吞噬功能变化,并检测致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞分泌IL-4和IFN-γ的能力。结果:HBsAg LPSp致敏巨噬细胞促进小鼠HBs抗体产生,LPSp致敏的巨噬细胞的吞噬能力显著增强(P<0.05),释放TNF-α和NO水平增加(P<0.05)。LPSp HBsAg致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞释放IL-4水平升高(P<0.05),诱导IFN-γ水平与单纯HBsAg致敏组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LPSp的佐剂机制为参与活化巨噬细胞,增强巨噬细胞对抗原的吞噬、消化和处理能力;同时促进HBsAg致敏的巨噬细胞诱导淋巴结内淋巴细胞释放IL-4,增强HBsAg致敏的巨噬细胞诱导Th2淋巴细胞活化,促进B细胞产生抗体。     

漆黄素对巨噬细胞和T淋巴细胞的免疫调节作用

目的探讨漆黄素(Fisetin,FIS)对小鼠巨噬细胞吞噬功能、NO的释放及对T淋巴细胞体外活化、增殖的影响。方法无菌制备小鼠巨噬细胞悬液及淋巴细胞悬液;荧光微球结合流式细胞术(FCM)分析FIS对巨噬细胞吞噬作用的影响;Griess试剂盒检测巨噬细胞NO的释放;双色荧光抗体染色结合FCM,检测CD3+T细胞CD69的表达水平;CFSE标记技术检测T细胞增殖的情况。结果 2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/LFIS均能明显抑制巨噬细胞的吞噬微球的能力;FIS能抑制LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞的NO的产生(P<0.05);FIS对ConA刺激的T细胞表达CD69有抑制作用,并能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖(P<0.01),且均呈剂量依赖性。结论 FIS能显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和分泌NO的能力,并能够抑制T细胞的活化和增殖,有望发展成为一种新的免疫抑制药物。     

腺病毒介导重组人单链IL-27融合基因在肝癌细胞的表达及活性鉴定

目的:利用腺病毒表达系统在肝癌细胞表达有生物活性的单链重组人白细胞介素-27(rhscIL-27)并检测其生物学活性。方法:将rhscIL-27基因片段从pcDNA3.1载体克隆到腺病毒载体pAdTrack-CMV,然后在细菌内与pAdEasy同源重组构建AdIL-27腺病毒载体并转染293细胞包装、扩增腺病毒颗粒。将重组腺病毒感染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜、RT-PCR及ELISA等方法进行检测蛋白表达情况,IFN-γ诱生实验检测rhscIL-27的生物学活性。结果:成功构建AdIL-27腺病毒载体,经293细胞包装扩增后感染HepG2细胞观察到有GFP表达,RT-PCR及ELISA检测到细胞有rhscIL-27表达,IFN-γ诱生实验证实表达的rhscIL-27具有诱导产生IFN-γ的生物学活性。结论:利用腺病毒表达系统成功在肝癌细胞表达有生物活性的重组人单链IL-27(rhscIL-27),并具有诱导产生IFN-γ的生物学活性,为研究IL-27的生物学功能及其对肝癌的基因治疗奠定了基础。     

白细胞介素-18与临床疾病关系的研究(文献综述)

白细胞介素-18（IL-18）是1995年由Okamura等[1]新发现的细胞因子,具有与IL-12相似的生物学活性,但诱生IFN-γ的能力比IL-12强,故称为IFN-γ诱生因子,1996年命名为IL-18.近年研究表明,IL-18具有多种生物学功能,在抗感染、抗肿瘤、免疫性疾病及免疫调节等诸多方面发挥重要作用.在异常情况下,IL-18的升高可能对机体产生不利影响,造成组织损害和加重病情发展.     

抗菌肽FALL-39及其突变肽对诱生型一氧化氮产生的影响

目的：比较人抗菌肽FALL-39及其突变肽对细菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）介导的诱生型一氧化氮（nitric oxide, NO）产生的影响。方法：体外常规培养人单核吞噬细胞THP-1，LPS刺激细胞，分别用人抗菌肽FALL-39以及突变肽FALL-39-Lys24，FALL-39-Lys32，FALL-39-Lys24′32处理细胞。应用RT-PCR方法测定LPS诱生型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase，iNOS） 以及FALL-39 mRNA的表达，用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO的含量。小鼠腹腔注射更生霉素和LPS建立内毒素血症模型，分别用抗菌肽处理动物，取?舛ㄑ逯蠳O的含量。结果：LPS刺激FALL-39 mRNA的表达增加；同时也诱导NO mRNA的表达以及细胞培养上清液中NO含量的增加。人抗菌肽FALL-39及其突变肽FALL-39-Lys24，FALL-39-Lys32，FALL-39-Lys24′32可以抑制LPS诱导的NO的产生；其中FALL-39-Lys24′32的抑制作用最为明显。结论：抗菌肽FALL-39及其突变肽具有抗内毒素作用，其机制与抑制LPS诱导的NO产生有关。     

088 IL-12和IL-18与Ⅰ型辅助T细胞应答

ID-12和IL-18具有许多类似的生物学活性，在诱导IFN-γ和Th1反应的产生上两者相互协同。本文就IL-12和IL-18在诱生IFN-γ和Th1反应中的作用作一综述。     

小鼠巨噬细胞一氧化氮诱生型合酶的免疫测定

<正> 一氧化氮(NO)在细胞信号传递中起着重要作用,参与调节心血管、神经和免疫系统功能,与许多疾病的发病过程有关。一氧化氮合酶(nitric oxidesynthase,NOS)是NO合成过程的关键酶。目前已知有3种异构体:神经型(neuronal,nNOS),内皮型(endothelial,eNOS),及诱生型(inducible,iNOS)。前两者又称为原生型(constitutive,cNOS),其活性依赖细胞内钙离子浓度的增加,cNOS活化后可生成少量NO,引起局部效应:而iN-OS活性不依赖钙离子浓度,受多种细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-1β))和 LPS等诱导激活,可产生大量NO,导致广泛效应,iNOS存在于多种细胞的胞浆内,故测定iNOS具有重要意义。     

硒肽Se-ZnCu-65P增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能并抑制一氧化氮和过氧化氢的分泌

目的研究硒肽Se-Zn Cu-65P对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力与NO和H2O2分泌水平的影响。方法以不同剂量的具有超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)双抗氧化酶活性的硒肽Se-Zn Cu-65P作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,培养24 h,采用MTT法检测巨噬细胞的相对活力,中性红摄入法检测巨噬细胞的吞噬能力,硝酸还原酶法测定NO分泌水平,钼酸铵比色法测定H2O2分泌水平。结果 Se-Zn Cu-65P单独作用于巨噬细胞时,可增强细胞的相对活力,却不影响细胞的吞噬能力;能降低巨噬细胞分泌H2O2的水平,而不能抑制NO的分泌。而LPS诱导的巨噬细胞吞噬能力增强,同时NO和H2O2的水平也显著上升。当Se-Zn Cu-65P作用于LPS诱导的巨噬细胞时,细胞的吞噬能力进一步增强,细胞NO和H2O2的水平却显著降低。结论 Se-Zn Cu-65P能有效提高LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的相对活力,增强细胞的吞噬能力,降低NO和H2O2的分泌水平。