早期环境干预对脑损伤仔鼠脑神经丝蛋白表达的影响

目的 观察早期环境干预对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织神经丝蛋白(NFP)的表达及对其神经行为的影响.方法 孕第17天的孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)450 μg/(kg·d),连续2 d,建立感染性脑损伤仔鼠模型(LPS组);对照组腹腔注射同等剂量的9 g/L盐水.孕22 d前分娩的仔鼠为早产鼠,二组均去除早产鼠.仔鼠出生后,立即取孕鼠子宫胎盘行HE染色观察宫内感染情况;仔鼠出生24 h,随机选取对照组和LPS组仔鼠脑组织,常规HE染色,观察脑白质损伤情况.LPS组足月产仔鼠随机分为干预组与非干预组,干预组于仔鼠出生8 d起进行早期抚触和丰富环境刺激;对照组和非干预组常规饲养.仔鼠出生21 d采用悬吊试验进行神经行为学检测;应用免疫组织化学方法 对各组仔鼠脑组织NFP阳性染色进行分析.结果 LPS组胎盘病理检测可见腹腔注射LPS造成的宫内感染;1 d仔鼠脑白质结构稀疏.对照组悬吊试验得分最高,干预组次之,非干预组最低,两两比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).NFP的阳性表达在对照组最高,干预组其次,非干预组最低;两两比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).结论 早期环境干预可促进宫内感染致脑损伤的恢复,NFP表达增加是其可能的机制之一.     

针刺对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察针刺对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达影响。方法对孕17、18d脂多糖（LPS）组大鼠腹腔注射LPS,建立宫内感染致脑损伤仔鼠动物模型,以腹腔注射9g/L盐水为对照组。LPS组仔鼠随机分为针刺组与模型组,针刺组自7～21日龄予针刺干预。3组分别于生后21d取幼鼠脑组织应用免疫组织化学方法检测脑白质GFAP表达。结果针刺组GFAP免疫阳性细胞数量多,染色深;对照组GFAP免疫阳性细胞数量少,染色浅;模型组介于二者间。结论GFAP表达增加可能是针刺对宫内感染致脑损伤仔鼠的治疗机制之一。     

早期脑损伤新生大鼠脑白质神经蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖表达及意义

目的观察宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质Neurocan和Versican表达情况。方法 40只受孕母鼠随机分为对照组(n=10)和脂多糖组(n=30),给予受孕18 d的脂多糖组孕鼠脂多糖(血清型055)380μg/kg,连续2 d腹腔注射;对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水。每组随机选取幼鼠各60只,于0,1,7,14,21,28日龄各处死10只仔鼠,HE染色法检测脑组织病理变化,荧光定量RT-PCR方法测定Neurocan和Versican相对表达量。结果对照组孕鼠无死亡及提前分娩,共娩出活产足月仔鼠124只;脂多糖组中孕鼠5只死亡,6只提前分娩,剩余19只共娩出活产足月仔鼠132只,死亡24只。与对照组比较,0,1,7,14,21,28日龄脂多糖组新生大鼠脑白质Neurocan mRNA和Versican mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内感染致脑损伤后,脑白质区Neurocan和Versican的表达明显上调。     

早期干预对宫内感染致脑损伤仔鼠脑S-100蛋白及神经行为学的影响

目的研究早期干预对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织S-100蛋白表达和神经行为学的影响。方法孕第18天的Wistar大鼠连续2d腹腔注射脂多糖(LPS),制备宫内感染模型,9g·L-1盐水组给予同剂量9g·L-1盐水。随机选取9g·L-1盐水组仔鼠30只(对照组)和LPS组仔鼠50只。LPS组仔鼠随机分为干预组(n=20)和非干预组(n=30)。出生第1天非干预组和对照组各取10只大鼠,断头处死,取其脑组织,应用免疫组织化学方法测定其S-100蛋白水平,并在出生第25天对3组大鼠S-100蛋白水平行免疫组织化学检测和神经行为学检测。结果LPS组母鼠胎盘病理检测见胎盘内血管充血、水肿,并见大量中性粒细胞浸润,9g·L-1盐水组母鼠胎盘病理检测未见明显炎症反应;非干预组1日龄仔鼠脑组织各部位S-100蛋白阳性染色与对照组仔鼠比较,均有明显增加(Pa<0.01);25日龄仔鼠中,非干预组S-100蛋白表达最强,对照组最弱,干预组介于两者之间,各组间两两比较差异有统计学意义(Pa<0.01);非干预组仔鼠在悬吊试验、姿势反射、肌张力、不自主运动、旷场试验中的得分明显低于干预组和对照组,干预组明显高于非干预组(Pa<0.05...     

基于"多重打击"理论建立SD大鼠认知功能障碍模型及相关机制研究

目的通过脑发育早期脂多糖(LPS)重复刺激, 建立SD大鼠认知障碍模型, 探讨炎症反应介导下的"多重打击"对其组织学、行为学的影响及相关的分子机制。方法本研究的实验设计类型为成组设计。通过腹腔注射LPS构建SD大鼠"多重打击"认知障碍模型, 将24只孕鼠按照随机数字表法分为对照组、LPS1组、LPS2组、LPS3组, 每组6只。对照组孕18 d孕鼠和20日龄仔鼠均腹腔注射9 g/L盐水;LPS1组孕18 d孕鼠腹腔注射9 g/L盐水;LPS2组孕18 d孕鼠腹腔注射0.05 mg/kg LPS;LPS3组孕18 d孕鼠注射0.1 mg/kg LPS。LPS1～3组仔鼠均在20日龄时腹腔注射1 mg/kg LPS。通过前肢悬吊、网格和水迷宫等行为学实验, 对仔鼠运动和认知功能进行整体评估。组织学和蛋白免疫印迹(WB)实验检测仔鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Notch1和Jagged1的相对表达量。采用单因素方差分析进行多组数据之间比较, 采用独立样本t检验进行2组数据之间比较。结果 1.行为学实验:与对照组比较, LPS1～3组仔鼠的前肢悬吊时间递减[(34.81±5.66) ...     

Ghrelin mRNA和蛋白在小于胎龄仔鼠胃底组织中表达的变化

目的了解胃底组织Ghrelin mRNA和蛋白表达与小于胎龄(SGA)仔鼠追赶生长的关系。方法采用妊娠中后期食物摄入限制法获得SGA和适于胎龄(AGA)仔鼠,并设对照组。孕鼠分娩后收获仔鼠,分别于0、20、40日龄3个时间点每组随机抽取仔鼠10只,取其胃底组织。采用实时荧光定量PCR法测定其Ghrelin mRNA,免疫组织化学法测定Ghrelin蛋白在各组仔鼠胃底组织中的表达。结果0日龄限食组SGA仔鼠胃底组织Gherlin mRNA表达高于限食组AGA仔鼠和对照组AGA仔鼠(Pa<0.05);20日龄和40日龄的SGA未追赶生长仔鼠、SGA追赶生长仔鼠和对照组AGA仔鼠胃底组织Gherlin mRNA表达均无统计学差异(Pa>0.05)。0日龄限食组SGA仔鼠胃底组织Ghrelin免疫阳性细胞的积分光密度(A)值高于限食组AGA和对照组AGA仔鼠(Pa<0.05);20日龄SGA追赶生长仔鼠胃底组织中Ghrelin免疫阳性细胞的A值高于SGA未追赶生长仔鼠和对照组AGA仔鼠(Pa<0.05);40日龄时3者间无统计学差异(P>0.05)。结论0日龄SGA仔鼠Ghrelin mRNA在胃底组织中表达增加,提示Ghrelin可能在宫内就开始参与宫内发育迟缓胎鼠的生理调节或病理过程,或是宫内的营养状况和环境变化对胎鼠胃底细胞的生理功能产生了影响,使Ghrelin mRNA表达上调;20日龄追赶生长SGA仔鼠胃底Ghrelin表达的变化进一步提示,Ghrelin可能参与了SGA早期的追赶生长调控。     

胆红素脑病仔鼠血清S-100蛋白水平及其脑组织蛋白表达的动态变化

目的探讨胆红素脑病血清S-100蛋白(S-100)水平的变化及其意义。方法7日龄Wistar大鼠腹腔注射胆红素200 mg/kg,制备胆红素脑病动物模型。应用酶联免疫法动态观察胆红素脑病仔鼠血清S-100水平及免疫组织化学的方法动态观察胆红素脑病仔鼠不同时间点脑组织S-100蛋白水平。结果与对照组比较,造模后12 h仔鼠血清S-100水平升高(P<0.001),24 h达峰值,至72 h仍高于对照组,96 h降至正常组水平;造模后仔鼠不同时间点脑组织S-100蛋白的表达阳性面积的变化随时间变化逐渐增加。结论S-100可反映胆红素脑病仔鼠神经胶质的损伤程度,是判定胆红素脑病的可靠指标。     

L-精氨酸对宫内发育迟缓大鼠肾脏Pax2表达的影响

目的：研究L-精氨酸（L-Arg）对宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肾脏 Pax2表达的影响。方法：孕鼠随机分为 3 组：正常对照组、IUGR 组和干预组。正常对照组母鼠全程以普通饲料（含 21％ 蛋白）喂养。IUGR 组和干预组大鼠孕期均采用低蛋白饲料（含 10% 蛋白）喂养。仔鼠出生后,IUGR 组母鼠常规饲料喂养;干预组母鼠在常规饲料喂养的基础上,于部分饮水中每日添加 L-Arg 200 mg/kg。取 7 d、21 d、2月和 3月龄仔鼠肾脏组织,用免疫组化和 Western blot 法检测 Pax2 表达。结果：免疫组化显示正常对照组仔鼠在各时间点均未见明显 Pax2 表达。IUGR 组、干预组仔鼠2月龄和 3月龄时,两组大鼠在肾小球和肾小管区可见 Pax2 阳性细胞,且 3月龄鼠的 Pax2 表达比 2月龄的更显著（P<0.05）;干预组的 Pax2 表达低于同龄IUGR组（P<0.05）。Western blot 检测发现,3 组仔鼠肾脏在 7 d 和 21 d 均未见 Pax2 蛋白明显表达。到 2月龄和 3月龄时,干预组和 IUGR 组仔鼠肾组织 Pax2 蛋白表达均较正常对照组显著增多,但干预组的表达低于 IUGR 组（P＜0.01）。结论：IUGR 大鼠成年后肾脏 Pax2 基因有再表达现象;用L-Arg 干预后Pax2 表达明显减少。     

亚低温干预对缺氧缺血新生鼠脑源性神经营养因子mRNA表达的影响

目的 探讨亚低温对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达的影响.方法 新生7日龄Wistar大鼠84只,随机分为:假手术组(n=6),31 ℃亚低温干预组(n=36),非亚低温干预组(对照组,n=36)及正常对照组(n=6).于分组后6、12、24、48、72、96 h用原位杂交技术测定BDNF mRNA.用Tunel染色和免疫组化技术检测神经元凋亡数.结果 HIBD缺血再灌注后脑组织BDNFmRNA表达增加,亚低温组HIBD脑组织BDNFmRNA表达与未干预组比较差异有统计学意义,亚低温组脑组织海马、皮层区细胞凋亡数与未干预组比较差异有统计学意义.结论 亚低温可通过增加HIBD后脑组织海马、皮层BDNFmRNA的表达水平,抑制细胞凋亡而发挥脑保护作用.     

孕早期大鼠人巨细胞病毒感染对仔鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶通路的影响

目的观察孕早期大鼠人巨细胞病毒(HCMV)感染对仔鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路的影响,为研究HCMV先天性感染对子代大鼠海马学习记忆损伤的机制及防治HCMV先天性感染导致的学习记忆障碍等神经系统后遗症提供实验依据。方法取8～9周龄雌性SPF级SD大鼠12只,按雌雄=31配对,孕鼠随机分为对照组和实验组,每组6只。于孕第5天实验组孕鼠腹腔内注射100半数组织细胞感染量HCMV悬液0.8 mL,对照组孕鼠腹腔内注射等量的人胚肺成纤维细胞上清液。于出生后30 d每组随机取10只仔鼠,取仔鼠脑组织,采用HE染色观察仔鼠海马齿状回(DG)区颗粒细胞的形态学改变;免疫组织化学法观察仔鼠海马DG区ERK1、ERK2、p-ERK的表达,并应用SPSS 13.0软件进行分析。结果对照组仔鼠海马未见明显的神经元缺失,排列紧密,均匀整齐,胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显,染色质均匀;实验组仔鼠海马细胞数减少,组织结构较稀疏,排列紊乱。ERK1、ERK2、p-ERK主要表达于胞核和胞质,阳性部位呈现棕黄色。实验组仔鼠海马DG区的ERK1、ERK2、p-ERK染色强度及平均积分光密度均低于对照组,差异均有统计学意义(Pa<0.01)。结论孕早期HCMV感染可降低仔鼠海马DG区ERK1、ERK2、p-ERK的表达,可能与HCMV先天感染损伤海马的学习记忆功能有关。     

缺氧缺血性脑病大鼠脑多巴胺含量的动态变化及病理观察

目的：探讨多巴胺（DA）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的变化规律，揭示HIBD中细胞形态变化及其死亡形式，为缺氧缺血性脑病（HIE）的发病机制提供实验和理论依据。方法：利用7日龄SD大鼠99只，随机分为对照组，假手术组和实验组，用高效液相－电化学检测法测定脑损伤后0min,30min,1h,3h,6h,9h,12h,24h,48h皮层、纹状体、脑干DNA含量的动态变化。光镜下观察组织的病理改变。结果：1．动物缺氧缺血（HI）后DA在30min即有明显上升，纹状体和皮层、脑干内DA含量分别在HI后6h,9h达高峰，之后缓慢下降。2．细胞病理改变；HI后3h时水肿，6h时有局灶性坏死，12h,24h及48h出现大量坏死的神经细胞。3．凋（APO）出现在细胞坏死之前，HI后3h APO细胞出现，6h后APO细胞明显增加。结论：1．新生鼠HI后早期脑细胞内DA含量即增高，6h,9h可达到最高水平，脑细胞损伤与DA含量有关。2．HI后脑细胞死亡有APO和坏死两种形式。     

磷酸蛋白聚糖在脑发育、脑损伤方面的研究进展

磷酸蛋白聚糖是中枢神经系统一种重要的硫酸软骨素蛋白聚糖,在脑发育期介导多巴胺能神经元迁移方面发挥了重要作用.在脑损伤后可抑制轴突再生,防止脑损伤再次发生.其核心蛋白氨基末端重组蛋白质P1可促进变性神经元死亡.     

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??The brain structure and function of premature infant is underdevelopment, it is easy to be injured and develop abnormally. Correctly evaluating the state of brain in different stages can help early detection of brain injury, early intervention and reduction of disability rate. In this paper, the evaluation methods of brain development and brain injury of premature infants are summarized.     

Magnetoencephalography of the newborn brain

This paper reviews the use of event-related magnetic fields (ERFs) in infants; ERFs can be derived from magnetoencephalography by means of averaging. Basic perceptive skills are important prerequisites for the infant's later development. The automatic cortical processes related to processing auditory, somatosensory and visual stimuli can be addressed by using responses recorded directly from the brain. The traditional method, the event-related potential (ERP), has recently been accompanied by ERFs. Similarly to ERPs, higher processes related to short-term memory, stimulus comparisons, and attention allocation can also be studied with ERFs. Further, since addressing the neonatal higher cognitive and social capabilities is challenging using only behavioural means, ERFs provide information on these important functions at a very early stage immediately after birth or in some cases even before birth. The main advantage of ERFs, compared to ERPs, is detection of the signals with high accuracy both with respect to the noise level and estimation of the spatial location.     

Protecting the brain of the micropreemie

Advances in perinatal care have seen substantial improvements in survival without disability for extremely preterm infants. Protecting the developing brain and reducing neurodevelopmental sequelae of extremely preterm birth are strategic priorities for both research and clinical care. A number of evidence-based interventions exist for neuroprotection in micropreemies, inclusive of prevention of preterm birth and multiple births with implantation of only one embryo during in vitro fertilisation, as well as antenatal care to optimize fetal wellbeing, strategies for supporting neonatal transition, and neuroprotective developmental care. Avoidance of complications that trigger ischemia and inflammation is vital for minimizing brain dysmaturation and injury, particularly of the white matter. Neurodevelopmental surveillance, early diagnosis of cerebral palsy and early intervention are essential for optimizing long-term outcomes and quality of life. Research priorities include further evaluation of putative neuroprotective agents, and investigation of common neonatal interventions in trials adequately powered to assess neurodevelopmental outcome.     

MRI of the newborn brain

MRI is an essential tool in the assessment and care of term neonates with suspected brain injury. It also provides insights into brain development and injury in preterm infants. Successful neonatal brain imaging requires modifications to the hardware and sequences used in adults, particularly if using higher magnet strengths. Different types of sequences give information on the macroscopic and microscopic structure of the brain. Qualitative analysis can detect patterns of injury and provide valuable information on prognosis; quantitative analysis can give more detailed and subtle information of brain structures. MRI can be used as a biomarker of brain injury in term-born infants, enabling the efficacy of neuroprotective agents (e.g. hypothermia) to be assessed. Exciting recent developments in fetal imaging allow study of normal brain development even before birth.