实时荧光RT-PCR法在手足口病患儿病原检测中的应用

目的:了解核酸检测(RT-PCR)法在抚顺市手足口病患儿病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法:在全市范围内收集2013年和2014年疑似手足口病患儿咽拭子、肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(Cox A16)引物,采用实时荧光RT-PCR方法进行病原核酸检测。结果:2013年检测标本461份,其中EV71阳性16份,Cox A16阳性316份,其他肠道病毒阳性46份。2014年检测标本253份,其中EV71阳性112份,Cox A16阳性57份,其他肠道病毒阳性35份。两年标本肠道阳性率平均为81.51%,其中EV71型和Cox A16型占阳性标本总数的86.08%。结论:实时荧光RT-PCR方法因具有操作简便、快速和特异性高的优点,非常适合于手足口病患儿病毒核酸的快速分型。EV71型和Cox A16型肠道病毒是抚顺市近两年引起手足口病患儿感染的主要病原体。     

2017-2018年西宁地区手足口病病原检测结果分析

目的 分析2017-2018年西宁地区手足口病病原学特点,为手足口病防控提供科学依据.方法 应用实时荧光PCR法对2017-2018年西宁地区疑似手足口病病例咽拭子进行肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)、柯萨奇病毒 A 组 16型(Coxsackie virus A16,Cox A16)、柯萨奇病毒...     

2012-2014年陕西省商洛市手足口病病原学监测分析

目的了解商洛市2012-2014年手足口病病原学分布情况,为制定肠道病毒感染防控措施提供实验室依据。方法收集2012-2014年商洛市各区县送检临床手足口病重症和普通病例咽拭子标本,采用real-time RT-PCR技术进行核酸检测。结果共采集手足口病临床标本1 161份,核酸阳性703份,总阳性率为60.55%,其中其他肠道病毒阳性220份(阳性率18.95%)、EV 71阳性364份(阳性率31.35%)和Cox A16阳性119份(阳性率10.25%)。男性阳性率高于女性,差异有统计学意义(χ2=5.450,P<0.05)。不同区县肠道病毒核酸阳性率差异有统计学意义(χ2=119.533,P<0.01)。结论 2012年、2014年病商洛市手足口病毒株以EV 71型为主,2013年主要为其他肠道病毒。重症病例主要由EV 71型引起。     

2010~2013年濉溪县手足口病病原学及流行病学特征分析

目的了解本地区手足口病(HFMD)病原及流行病学特征,为HFMD防治提供科学依据。方法 251例临床诊断手足口病患者来自濉溪县医院2010年1月至2013年12月住院病例,采集咽拭子标本,应用实时荧光RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)特异性核酸,分析手足口病的流行病学特征。结果251例HFMD患者标本,肠道病毒阳性率为28.69%(72/251),EV71阳性率为19.92%(50/251),Cox A16阳性率为6.77%(17/251),其他HEV阳性率为1.99%(5/251)。72例检测阳性病例中,EV71阳性病例50例占69.44%,Cox A16 17例占23.61%,CoxA16在年检测阳性率方面有统计学意义(P<0.05),EV71病毒在每年病原检测比例中都处于较高水平,为2010~2013年手足口病的优势病原。流行高峰主要是每年的3~6月份,发病年龄主要集中在1~3岁幼儿,肠道病毒检测阳性率在性别、年龄、流行季节方面比较无差异统计学意义(P>0.05)。结论 2010~2013年手足口病流行中,病原体主要为以EV71和Cox A16,其中EV71是优势病毒型,应加强1~3岁婴幼儿手足口病的预防和监测。     

165例手足口病重症患者病原学检测分析

目的分析2010年百色市手足口病重症病例的病原学特点,为制定防控措施提供依据。方法取患者咽拭子和肛拭子标本,用荧光PCR法检测肠道病毒通用型(EV)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)、肠道病毒71型(EV71)。结果在165例临床诊断为手足口病重症的患者中,肠道病毒核酸阳性137例,阳性率83.03%。其中EV71感染91例,占55.15%;CoxA16感染7例,占4.24%;其他型肠道病毒感染39例,占23.64%。结论 2010年引起百色市重症手足病的病原体主要为EV71病毒。应做好该病的防控工作,向大众普及健康卫生常识。     

湖北省2015年手足口病实验室确诊情况分析

目的分析湖北省2015年手足口病病原学特征,为手足口病科学防控提供依据。方法对手足口病临床诊断病例标本用实时荧光定量PCR法进行肠道病毒检测及EV 71、Cox A16特异性核酸检测。结果全年共检测粪便标本1 308份、咽拭子标本5 131份、疱疹液137份,粪便标本检测阳性率最高。2015年实验室确诊手足口病病例2 880例,其中EV 71、Cox A16和其他肠道病毒感染的构成比分别为21.0%、20.7%和58.3%。EV 71、Cox A16和其他肠道病毒均为男性病例多于女性.三者病例均以1~3岁组为主。4~6月为发病顶峰,Cox A16比EV 71和其他肠道病毒发病峰提前一个月。结论 2015年湖北省手足口病病原主要由其他肠道病毒引起,发病具有明显季节、人群特征。应做好重点人群、重点时段监测,同时进一步加强其他肠道病毒病原深入研究.     

泰安市2013年手足口病病原体检测结果分析

目的对2013年泰安市手足口病病例进行病原体检测和分析。方法对临床诊断为手足口病病例的粪便标本505份,用实时荧光定量PCR筛选出肠道病毒通用引物阳性的标本,再分别使用Cox A 16和EV71型的特异引物进行分类检测。结果标本总肠道病毒阳性率为95.05%（408/505）,Cox A 16阳性率为31.09%（157/505）,EV71阳性率为27.92%（141/505）,其他肠道病毒阳性率为36.24%（183/505）,Cox A 16的阳性率高于EV71。发病年龄多为1-6岁,男性多于女性。结论 2013年度泰安市的手足口病疫情以EV71和Cox A 16并发为主,采用分子生物学方法检测手足口病的病原体,对手足口病的监测及防控具有重要作用。     

唐山市手足口病病原学特征及重症病例危险因素研究

目的分析唐山市手足口病病原体分布特征、手足口病重症危险因素,比对不同类型临床标本检出率,为做好手足口病预防和治疗提供科学依据。方法对2009-2011年唐山市手足口病临床诊断病例肛拭子及咽拭子标本进行肠道病毒71型(Human enterovirus 71,EV 71)、柯萨奇病毒A16型(Coxsackie virus A16,Cox A16)及其他肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)核酸检测及重症病例危险因素分析。结果 1 286例被检测手足口病病例标本中859例为肠道病毒阳性,阳性率为66.80%(859/1 286)。病原体构成以EV 71病毒感染率最高,占37.37%。肛拭子标本检出率明显高于咽拭子标本检出率,低龄、北部地区和EV 71均为手足口病并发重症病例的危险因素,感染EV 71引发重症是Cox A16和其他肠道病毒的6.3倍和2.9倍。结论 2009-2011年引起唐山市手足口病的主要病原体是EV 71,提高病原体检出率对手足口病的临床治疗、流行病学调查意义重大。     

2012年贵阳地区住院患儿手足口病的病原学研究

目的：了解2012年贵阳地区儿童手足口病住院患者的病原体分布情况,为手足口病的诊断、治疗及预防提供依据。方法收集3179例手足口病患儿资料,用荧光定量PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）定量分型。结果共检测手足口病病例标本3179份,CA16阳性151份,占4．75％;EV71型331份,占10．41％;CA16和EV71混合感染7份,占0．22％;其他型肠道病毒897份,占28．22％。全年有2个发病高峰,分别为4～7月及10～11月,发病年龄主要集中在5岁以下儿童,其中0～3岁发病最高;男性患儿多于女性。结论2012年贵阳地区儿童手足口病住院患者的病原学分布以其他型肠道病毒和EV71型为主。     

广东五华县手足口病病原学监测研究

目的了解五华县手足口病病原学特征及变化规律,为科学制定防控策略提供可靠依据。方法采集2010--2012年五华县哨点监测医院诊治的普通手足口病病例的粪便标本,使用实时荧光定量PCR法检测总肠道病毒（Ev）、EV71和CoxA16核酸。结果共采集152例病例粪便标本,EV阳性115例,阳性率75．66％,不同年份EV阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）;EV71、CoxA16和其他肠道病毒阳性率分别为23．03％、18．42％和34．21％,差异有统计学意义（P〈0．01）。2010年流行优势株为EV71,2011—2012年流行优势株为其他肠道病毒,不同性别、不同年龄EV71、CoxA16和其他肠道病毒阳性率差异均无统计学意义（P〉0．05）。EV71、CoxA16和其他肠道病毒三种型别的肠道病毒全年交替变更流行。结论五华县手足口病流行优势株发生动态改变。加强手足口病病原学监测研究,掌握毒株变化规律,有助于更好地采取预防和控制措施。     

2012年保定市手足口病病原学特征分析

目的通过对手足口病病例进行病原检测,研究保定市手足口病病原分布情况,为手足口病预防控制提供依据。方法采用荧光RT-PCR法对收集的手足口病病例咽拭子标本进行特异性核酸检测。结果保定市手足口病病原体有肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV 71）、柯萨奇病毒A组16型（Coxakivirus A16,Co A16）及其他肠道病毒（other enteroviruses,EV）。发病以4岁以下儿童为主。全年均有病例分布,以5-8月为高峰。样品采集时间以3 d内为好,病毒检出率高。结论引起手足口病的病原以EV7 1病毒、Co A16病毒为主,手足口病防控应以4岁以下儿童为主,在5-8月加强监测和预防控制工作。     

沧州市2010年手足口病流行病学分析

目的了解沧州市手足口病疫情流行特征,防控手足口疫情发展及蔓延。方法收集2010年疫情报告手足口病例流行病学资料和实验室核酸检测结果进行统计分析。结果 2010年沧州市手足口病病例累计报告11 687例,重症206例,死亡1例,较去年同期(9 771例)上升19.61%。对648例患者的咽试子等标本进行EV71、CoxA16、肠道通用病毒核酸检测,阳性599份,阳性率92.44%。其中EV71型187份、CoxA16型137份、其他肠道病毒感染275份,分别占31.22%、22.87%和45.91%。结论沧州市2010年手足口病感染以EV71型和其他肠道病毒为主。     

2012–2020年成都市手足口病流行病学特征及EV71疫苗接种效果分析

  目的  分析2012–2020年成都市的手足口病流行病学特征,比较成都市在疫苗接种前后的发病差异,为手足口病的预防提供依据。  方法  采用描述性流行病学分析方法,对成都市2012–2020年报告的手足口病病例的发病率、病死率、重症率等进行分析。  结果  2012–2020年成都市手足口病累计发病279216例,重症2201例,死亡16例。2012–2019年发病率隔年上升,2018年达最大发病率（326.43/105）;重症率和病死率自2016年以来,呈现下降趋势。共有实验室检测病例11892例,EV71、Cox A16和其他肠道病毒分别占总数的14.8%、18.8%、66.3%。自2016年EV71型病毒感染发病总体呈下降趋势,Cox A16病毒型感染隔年上升,其他肠道病毒型感染总体呈上升趋势。病例主要集中在0～<5岁儿童组（92.1%）,尤以1～<2岁组发病最多,各年份均表现为男性发病高于女性。地区分布表明手足口病的高发地区在中心城市,平局发病率增速最大的三个区分别为:青白江区、双流区、龙泉驿区。时间分布表明手足口病发病呈明显的双峰分布,大部分集中在每年5–8月和10–12月,2018年7月发病达历年最高（12309例）。  结论  成都市未来在继续推进EV71疫苗接种的同时,更需要关注除EV71和Cox A16外的血清型病毒感染,开展针对多种肠道病毒的多价疫苗的相关研究。防控重点可放在人口密度大、流动人口多、涉农街道多以及人员卫生意识不够强的地区。针对第二圈层的城区,可以加强对涉农街道的消毒,同时对卫生意识不强的人员和托幼机构进行卫生宣讲等活动。另外手足口病防控也可在高发季节给予更多关注。     

2011-2012年深圳市重症手足口病的病原学和流行病学分析

目的了解深圳市手足口病(HFMD)重症病例的病原学类型和流行病学特征,为本地区手足口病的预防控制提供理论依据。方法收集2011-2012年深圳市各医院送检的220例手足口病重症病例的粪便样本,应用Real-time RT-PCR技术检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)、肠道病毒通用型(EN)。结果 2011-2012年深圳市共发现220例重症手足口病病例,其中,2012年HFMD重症患者数量为2011年的32.53%。220例重症手足口病病例中,EV71型占80.45%,CA16型占5.00%,其他肠道病毒则占13.19%。2011年5、6月为深圳市手足口病重症的高发月份,而2012年5月和7月为高发月份。1岁组重症病例最多有82人,占重症病例总数的37.27%。重症病例人群男性多于女性(1.62∶1)。结论 EV71是引起深圳市手足口病重症病例的最主要原因,其他肠道病毒比CA16更容易引起手足口病重症。     

蚌埠市2008—2016年手足口病流行特征分析

目的 通过对手足口病报告和监测资料的分析,探讨手足口病流行特点和规律,为防控提供科学依据。 方法 利用国家疾病监测信息管理系统,对蚌埠市2008-2016年手足口病监测资料进行分析。其中部分病例由哨点医院采集咽拭子标本,采用RT-PCR的方法,由市疾控中心进行肠道病毒核酸检测。 结果 2008-2016年共报告蚌埠市手足口病病例65 464例,年均报告发病率218.48/10万,其中市区271.32/10万,县域194.98/10万,市区高于农村(χ2=189.35,P<0.001)。5岁及以下儿童占病例总数的96.67%(63 286/65 464),其中3岁以下占74.09%(48 502/65 464)。33例重症病例中实验室诊断13例,其中EV71占构成比的76.92%(10/13),6例死亡病例全部为EV71。病原分型2013年以前奇数年以EV71为绝对流行株,偶数年EV71和Cox-A16混合流行,2014-2016年其他肠道病毒占了较大比重。临床病例核酸检测阳性率46.62%(1 588/3 406),阳性率在不同采样时间之间差异有统计学意义(χ2=104.292,P<0.001)。 结论 蚌埠市手足口病处于较高的流行水平,具有较明显的地区性、季节性和人群性,重症和死亡病例的流行优势毒株为EV71,其他肠道病毒逐渐成为近年来的流行毒株。监测工作应尽早采集病例标本并送检。      

深圳市社区人群EV71和CoxA16隐性感染的流行病学分析

目的为了解肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）在深圳市健康人群中的隐性感染情况,进一步探讨隐性感染在儿童手足口病（HFMD）中的传播特征及危害性。方法实验采用酶联免疫（ELISA）法检测不同年龄层（0～59岁之间）的健康人群血清中抗肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）的IgM和IgG抗体水平,并采用荧光定量PCR检测IgM阳性的样本中病毒核酸的阳性率。结果抗EV71和CoxA16 IgG抗体的阳性率都随着年龄段的增长呈下降趋势,0～5岁儿童组的IgG抗体阳性率最高,其中抗EV71的IgG抗体阳性率为79.7%,抗CoxA16的IgG抗体阳性率为91.93%。30岁以下者,两种病毒的抗体阳性率在70%以上,显著高于30岁以上人群,P〈0.01。5岁以下儿童抗EV71抗IgM抗体阳性率达15.9%。49份抗EV71 IgM阳性样本中有42份EV71的核酸阳性,阳性率为85.7%;31份抗CoxA16 IgM阳性样本中有25份CoxA16核酸阳性样本,阳性率为80.6%。结论人群对EV71和CoxA16普遍容易感染,健康人群中存在较高的隐性感染,隐性感染率与人群的年龄分布存在相关性,因此隐性感染人群也是病原体传播的传染源之一。     

重庆地区2009年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征

目的 对2009年重庆市手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)患儿粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源.方法 将47例手足口病患儿临床标本接种人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)进行分离培养,采用EV、EV71、Cox A16特异性引物对出现细胞病变的细胞上清进行PCR鉴定,同时电镜观察病毒颗粒形态,将鉴定的病毒基因组分为4个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序.通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树.结果 在47例HFMD患儿临床标本接种RD细胞培养中,有7份观察到明显的细胞病变,通过RT-PCR检测有3份呈EV特异性引物及EV71特异性引物阳性,而所有标本Cox A16特异性引物检测为阴性,EV71特异性引物的PCR产物测序结果证实为EV71病毒,同时用电镜观察形态病毒感染的RD细胞,为圆形无包膜病毒颗粒,证实所分离病毒为EV71.测序获得的3株EV71病毒基因组全长分别为7 409、7 406 nt和7 404 nt,其VP1氨基酸序列同源性达99%以上.Blast分析表明重庆毒株Chongqing-2-09-China(GQ994990.1)、Chongqing-3-09-China (GQ994991.1)均与安徽阜阳2008年分离的3株EV71毒株同源性较高,重庆毒株Chongqing1-09-China (GQ994989.1)与2005年台湾分离984 polyprotein、1235 polyprotein序列毒株同源性最高,进化分析表明属于C4基因亚型.结论 新分离的重庆EV71毒株基因组序列符合肠道病毒特征,与国内2008年安徽阜阳及台湾2005年分离的EV71病毒可能具有相同来源.     

绵阳市2009-2011年手足口病监测结果分析

目的了解绵阳市手足口病的流行病学特征和病原学型别及变化规律,为科学制订预防和控制策略提供依据。方法对2009-2011年中国疾病监测信息报告管理系统统计的绵阳市手足口病病例进行流行病学分析、对送检的咽拭子标本采用实时荧光PCR(RT-PCR)法进行EV71、CoxA16及其他肠道病毒的核酸检测。结果病原学检测结果:2009年检测标本159例,阳性标本90例,阳性率56.60%,病原优势株为EV71型,占95.56%;2010年检测标本198例,阳性标本110例,阳性率55.56%,病原优势株为CoxA16型,占87.27%;2011年检测标本241例,阳性标本138例,阳性率57.26%,病原优势株为EV71型,占92.75%。流行病学监测结果:2009年报告手足口病病例1422例,发病率26.82/10万;2010年报告手足口病病例2 348例,发病率44.19/10万;2011年共报告手足口病病例2963例,发病率62.20/10万。发病时间高峰在4～6月;发病年龄集中在1～3岁组,占75.69%;男性高于女性,男女比例为1.86∶1;发病的场所分布以散居儿童为主。结论绵阳市手足口发病发病率呈逐年上升趋势,病原的流行株以EV71和CoxA16为主,呈交替流行态势。因此,继续加强手足口健康知识教育、宣传和病例及病原学监测工作对于手足口病的科学防控具有重要意义。