CaMKⅡ在前列腺癌发生发展中的作用研究进展

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（calcium/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其活性被钙/钙调蛋白复合物（Ca²⁺/CaM）所调节,研究表明CaMKⅡ活化包括离子通道、激酶、转录因子在内的约40种蛋白质从而在多种肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移中发挥重要作用。CaMKⅡ是一个由α、β、γ、δ4种基因编码不同亚型的多聚酶,各亚型在不同肿瘤中的表达各异,笔者就CaMKⅡ的结构、功能及其各亚型在不同肿瘤中的表现及在前列腺癌发生、发展中的作用进行综述。     

骨骼肌胞浆Ca2+稳态与肌疾病

骨骼肌胞浆内Ca~(2+)稳态是Ca~(2+)转运系统对Ca~(2+)释放和Ca~(2+)摄取保持动态平衡的结果。本文将从细胞和分子水平 讨论肌浆网(SR)钙转运系统的分子基础以及某些肌疾病的发病机制。1 胞浆Ca~(2+)的来源 骨骼肌兴奋-收缩偶联过程中有两个因素,即肌膜的去极化和胞浆内大量的Ca~(2+)快速聚集。前者通过二氢吡啶受     

RyR2磷酸化在心力衰竭中的作用

 心力衰竭在细胞水平主要表现为心肌以兴奋 收缩耦联(excitement contraction coupling,ECC)为基础的收缩功能障碍,而Ca2+信号转导在此过程中起着非常重要的作用。肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)兰尼碱受体(ryanodine receptor type 2,RyR2)是心肌最重要的钙释放通道,RyR2磷酸化是肌浆网钙释放的基础,而RyR2磷酸化主要受蛋白激酶A (protein kinase A ,PKA)和钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (calcium/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)的调控。目前对RyR2磷酸化的研究已经非常广泛,但对其涉及心力衰竭的具体发病机制仍有争议,本综述主要针此问题进行阐述。     

钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的制备与活性测定

目的：从牛心肌中提取纯化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ),并测定其活性。方法：采用DEAE-cellulose柱层析和Sepharose 4B亲和层析分离纯化蛋白,用γ－^32P掺入法测定CaMKⅡ及自磷酸化的CaMKⅡ活性。结果：从牛心肌中提取到钙调蛋白结合的蛋白组分,纯化后得到的CaMKⅡ比较稳定,产量也较高,此过程比较简单,适合大量制备,经SDS-PAGE检测,发现酶提取物均质,酶亚基的目的蛋白带相对分子质量为56000。在syntide-2为底物的反应中,纯化的CaMKⅡ的特异性酶活性为7．84pmol.min^-1.mg^-1。CaMKⅡ可自磷酸化,经过自磷酸化的酶在Ca2 和钙调蛋白不存在时也保持活性。结论：通过凝胶层析与亲和层析可提纯CaMKⅡ。     

愈痫灵对致痫大鼠海马神经元CaM和CaMKⅡα表达的影响

目的研究愈痫灵颗粒对致痫大鼠海马组织钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响。方法采用腹腔注射戊四氮(PTZ)造成慢性癫痫大鼠模型,以半定量RT-PCR技术检测不同药物干预后大鼠海马组织CaM和CaMKⅡα的mRNA表达水平;图像自动分析系统进行其吸光度扫描。结果愈痫灵颗粒可降低海马神经元CaMmRNA的表达,升高CaMKⅡαmRNA的表达。结论通过调控Ca2 信号转导途径中的某些靶位点,影响Ca2 -CaM-CaMKⅡα信息链是愈痫灵颗粒抗癫痫的重要途径之一。     

双羟基黄酮醇抑制心衰后CaMKⅡ磷酸化降低室性心律失常易感性

目的:研究双羟基黄酮醇(DiOHF)通过抑制心衰(HF)后钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的磷酸化水平来降低心衰后室性心律失常的易感性。方法:采用主动脉缩窄术(TAC)构建压力负荷性心衰小鼠模型,用小动物超声机确认模型构建成功。假手术组小鼠分为Control组和Control+DiOHF组,心衰小鼠分为HF组和HF+DiOHF组。采用心内程序性电刺激(PES)分别检测4组小鼠的心室起搏阈值和心室不应期,诱导室性心律失常并进行心律失常评分。采用Western Blot分析各组心脏蛋白中的CaMKⅡ及其磷酸化水平。结果:与Control组相比,HF组小鼠的心室起搏阈值减小,不应期缩短,室性心律失常评分显著增高。而HF+DiOHF组相比HF组起搏阈值增大,心室不应期增长,室性心律失常评分显著降低。同时Western Blot显示HF组相比Control组,CaMKⅡ磷酸化水平显著升高,而HF+DiOHF组CaMKⅡ磷酸化水平相比HF组明显下降。结论:CaMKⅡ的过度激活引起心衰后的室性心律失常,而DiOHF可通过抑制心衰后CaMKⅡ的磷酸化水平来减少室性心律失常。     

钙调节蛋白

生物作用广泛的细胞信使主要是Ca~(2+)和cAMP。Ca~(2+)在生物体内通过其受体蛋白,即钙调节蛋白发挥功能。钙调节蛋白可分为两类:一类主要在胞外起作用,如与凝血有关的钙蛋白;另一类在胞内起作用,如多功能的钙媒介蛋白。后者具有特殊的、但非专一的钙结合区,正常生理条件下能与Ca~(2+)可逆性结合。形成的钙媒介蛋白·Ca~(2+)络合物可直接激活靶蛋白或酶,也可通过靶蛋白间接调节磷酸化和去磷酸化,从而发挥多种生物功能。     

缺血及再灌注损伤中心肌组织钙调蛋白及环磷酸腺苷的变化

心肌细胞内大量Ca~(2+)聚集是心肌缺血及再灌注损伤的共同途径,是造成细胞不可逆性损伤的主要原因。钙调蛋白(CaM)和环磷酸腺苷(cAMP)均可通过增强肌浆网(SR)的Ca~(2+)摄取及加强肌膜的Ca~(2+)内流等方式调节     

慢性心房颤动对人心房肌钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的探讨慢性心房颤动对人心房肌细胞内游离Ca2 浓度、心房肌组织钙调蛋白(calmodulin,CaM)及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法用激光共聚焦显微镜技术,对急性分离的慢性风湿性心脏病伴慢性房颤或窦性心律患者的心房肌细胞内游离Ca2 浓度进行测定,同时用West-ern blot法检测心房肌组织CaM及CaMKⅡ表达的变化。结果慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌细胞内游离Ca2 浓度显著高于窦性心律患者[(276.38±38.12)nmol/Lvs(122.28±45.63)nmol/L,(P<0.05)]。慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌CaM及CaMKⅡ的表达明显强于窦性心律患者。结论慢性房颤患者心房肌细胞内存在钙超载,Ca2 /CaMKⅡ通路可能是慢性房颤心房肌的信号转导途径之一。     

羟嘌呤醇对衰竭心肌蛋白氧化和心肌收缩力的长期效果

目的 研究黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂--羟嘌呤醇(Oxy)增强缺血后心力衰竭心肌收缩力的长期效果,并初步探讨其作用机制.方法 将120只SV120小鼠随机分为心肌梗死(MI)对照组、假手术组和Oxy治疗组.通过结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立小鼠缺血后心力衰竭模型.Oxy治疗组口服1 mmol/L Oxy.9-11个月后,对三组小鼠进行心脏超声检查;取右心室束状肌分析其心肌兴奋-收缩耦联的变化.应用激光光栅衍射测定肌节长度;应用离子渗透微注射法向样本心肌细胞内注入Fura-2荧光染料,测量心肌细胞质内游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i);通过应用ryanodine和增加刺激频率的方法使心肌达到强直收缩,即心肌纤维与Ca~(2+)的相互作用处于稳定状态,分析在稳定状态下心肌收缩力-细胞内钙关系;应用Western blotting测定肌丝蛋白的氧化情况.结果 长期口服Oxy能明显改善心力衰竭小鼠的心脏收缩功能,减小室壁厚度;明显改善心肌细胞的兴奋-收缩耦联过程,有效地增强心肌收缩力,显著提高稳态时心肌细胞钙激活的最大收缩力(F_(max)).Western blotting检测显示,与MI对照组心肌肌丝蛋白相比,Oxy治疗组中的肌动蛋白氧化修饰受到明显抑制.结论 长期服用Oxy能够有效改善衰竭心肌的工作状态,改善/促进兴奋-收缩耦联过程,增强心肌收缩力.这种长期作用的机制是抑制心肌肌丝中肌动蛋白的氧化修饰,从而增强肌丝对钙的敏感性,增加收缩力.Oxy由于对[Ca~(2+)]_i的增加较小,能够减轻细胞内Ca~(2+)负担及其所带来的负作用,具有更好的临床应用前景.     

RCAN1在外周血管疾病中作用的研究进展

<正>钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CN)又称蛋白磷酸酶2B(PP2B),是一种钙调素(Calmodulin,CaM)依赖重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白酶,其在细胞信号传递过程中直接受细胞内Ca~(2+)浓度的调节。活化的CN通过对下游NFAT、tau、CREB、BAD等底物去磷酸化作用~[1],参与心肌肥大、细胞凋亡、突触的可塑性以及记忆功能等多种信号活动的调节。钙调神经磷     

ISO通过CaMKⅡ和PKA激活RyR2诱发心肌细胞凋亡

目的：探讨异丙肾上腺素（ISO）持续激活Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和蛋白激酶A (PKA)后对心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：将H9C2心肌细胞分为Control组、ISO组、ISO+KN93 (CaMKⅡ抑制剂)组、ISO+H-89 (PKA抑制剂)组，经不同药物干预后，通过CCK-8法检测心肌细胞活力，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒和流式细胞术检测心肌细胞凋亡，Western blot法检测CaMKⅡ、PKA、兰尼碱受体2 (RyR2)及凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bax、Bcl-2的表达情况，荧光显微镜观察细胞形态变化和钙荧光强度。结果：与Control组比较，ISO组细胞活性降低，CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平增加，凋亡蛋白Cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2表达增加，胞内钙含量增多，细胞凋亡率增多，差异均有统计学意义（P<0.01）；与ISO组比较，ISO+KN93和ISO+H-89组细胞活性增高，CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平降低，凋亡蛋白Cleaved-Caspase...     

钙拮抗剂在心血管疾病中的临床应用

钙拮抗剂（CA）是能选择性地阻滞Ca~(2+)，经细胞膜上的慢通道进入细胞，减少钙内流的药物。CA阻滞心肌细胞钙内流，并抑制钙贮库释放Ca~(2+)，干扰氧化磷酸化，使兴奋──收缩脱偶联，引起负性肌力，负性频率和负性传导作用，从而保护缺血的心肌。CA抑制平滑肌细胞的钙内流导致血管舒张血压下降。CA还有抗血小板聚集和释放、对抗去甲肾上腺素、加压素、血管紧张素Ⅱ的缩血管作用，改善内脏循环、利尿等作用。本文重点讨论CA在心血管疾病中的应用。1、高血压病，高血压患者血管平滑肌细胞Ca‘”内流增加，胞浆中Ca‘“含量升高，血管…     

低浓度铅对大鼠脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达的影响及驱铅丸的干预作用

目的探讨低浓度铅对大鼠脑组织钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响及中药驱铅丸的干预作用。方法 40只大鼠随机分为5组:对照组、模型组、中药高、低剂量组、依地酸钠钙(EDTA)组。除对照组外,其他4组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高、低剂量组分别按每日3.5g/kg和2.0g/kg的剂量灌服驱铅丸,EDTA组以每日EDTA加普鲁卡因按50.0mg/kg肌肉注射。60d后,检测全血、脑组织铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法检测脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血铅、脑铅含量显著增高(P0.01),脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,驱铅丸高剂量组脑铅、血铅含量显著降低(P0.05),脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达显著增高(P0.05)。结论驱铅丸可降低铅中毒大鼠血铅、脑组织铅含量,其机制与增加脑组织CaMKⅡmRNA及其蛋白表达等有关。     

血小板活化时胞浆内Ca~(2+)的变化及抗钙药的影响

众所周知,血小板在血栓形成中起重要作用,而钙离子(calciumion,Ca~(2+))在发挥血小板功能中起了主导作用。对血小板功能和Ca~(2+)的关系的研究虽然很多,但由于血小板不同于其它分泌细胞,接触异物时容易形成血栓,给研究工作带来一定困难。本文介绍Ca~(2+)在血小板活化中所起作用及抗钙药的影响。     

CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响

目的：探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法：用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发...     

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制

[摘要]　目的　探讨抑制钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）介导压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大及凋亡的作用及机制。方法　取6～8周雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为4组：假手术组、假手术+KN-93组、主动脉缩窄术（TAC）组、TAC+KN-93组,每组6只。称各组小鼠体质量和心脏质量,计算心脏质量指数（HWI）;通过超声心动图评价小鼠心脏结构和功能;WGA、Masson及TUNEL染色分别检测小鼠心肌细胞横截面积、纤维化程度和凋亡水平;qRT-PCR检测ANP mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测心房利尿钠肽(ANP)、脑利尿钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase 3)、活化的半胱胺酸蛋白酶9(Cleaved-caspase 9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)、磷酸化钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)和沉默调节蛋白(Sirt3)蛋白蛋白表达。结果　与假手术组相比,TAC组小鼠HWI、左心室舒张末期直径（LVEDD）、左心室收缩末期直径（LVESD）均增加（P均<0.05）,左心室射血分值（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）均降低（P均<0.05）;心肌细胞横截面积增大（P<0.05）,心肌组织ANP mRNA和蛋白及BNP、β-MHC蛋白表达均增加（P均＜0.05）,心肌纤维化和心肌细胞凋亡均增加（P均<0.05）,心肌组织凋亡蛋白活化的Caspase3、活化的aspase9和Bax相对表达量均增加（P均＜0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量降低（P<0.05）,p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比率下降（P<0.05）,Sirt3相对表达量增加（P<0.05）。而给予CaMKⅡ抑制剂KN-93后,TAC+ KN-93组小鼠上述指标均被逆转,与TAC组相比差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论　抑制CaMKⅡ能够减轻压力负荷心力衰竭小鼠的心功能不全,抑制心肌细胞肥大及凋亡,且其作用机制与Sirt3有关。     

CaMKⅡ对心肌细胞影响的研究进展

随着心脏疾病的增加,对其发病机理以及干预防治成为当今学术界重点深入研究的方向。大量研究证明[1],钙调蛋白（CaM）是Ca2＋信号变化的重要感受器,也是Ca2＋调节蛋白及转录反应的重要效应器。钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）能调节     

蛋白激酶在阿片受体脱敏中的作用

阿片类镇痛药耐受性在受体水平的变化包括受体下调、内吞和G蛋白脱偶联.在阿片受体的信号转导过程中,蛋白激酶(PKA,PKC,CaMKⅡ,GRK和MAPK)对阿片类镇痛药的耐受性、依赖性及阿片受体与谷氨酸受体之间的相互作用等方面起作用.本文综述了蛋白激酶在阿片受体脱敏中的作用.     

钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响

目的 研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ(Ca2+/Calmodulin dependent kinase Ⅱ δ,CaMK Ⅱ δ)RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用.方法 应用慢病毒构建CaMK Ⅱ δ RNA干扰载体,并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)值及转染效率.小鼠RAW264.7细胞分为对照组、空白载体组和干扰组.转染5d后收获细胞,确定干扰效率;并检测RNA干扰对活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、非受体酪氨酸激酶(c-Src)基因表达及破骨细胞分化的影响.结果 成功构建了CaMK Ⅱ δ RNA干扰载体,最佳转染MOI值为30,转染效率可达78％ (P ＜0.05).重组病毒对CaMK Ⅱ δ的干扰效率在mRNA水平超过78％,在蛋白水平超过70％ (P＜0.01).CaMKⅡ δ RNA干扰显著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,与对照组、空白载体组比较,其mRNA水平下降分别超过了47.8％、43.3％和48.5％ (P ＜0.05,P＜0.01),蛋白相对水平分别超过了61.1％、48.2％和39.6％％(P＜0.01);免疫荧光细胞化学检测也得到相似结果.CaMK Ⅱ δ RNA干扰也显著降低了破骨细胞生成及骨吸收功能;与其他两组比较,干扰组破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积下降分别超过了49.8％、47.6％和61.3％ (P ＜0.01).结论 CaMKⅡδ RNA干扰可显著下调其下游NFATc1、TRAP、c-Src基因表达并抑制破骨细胞分化;CaMK Ⅱ δ在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用.