人结肠癌细胞中组蛋白乙酰化对细胞周期调节基因表达的影响

目的 研究组蛋白乙酰化对Colo-320和SW1116人结肠癌细胞系p21^WAF1和p16^INKRA基因表达的影响。方法 培养人结肠癌细胞系SW1116和Colo-320,分别以去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)和／或组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素(TSA)及丁酸钠(NaBu)干预细胞。运用流式细胞术检测细胞周期变化;以定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法研究控制细胞周期的基因p21^WAF1和p16^INKRA的表达;染色质免疫沉淀技术分析基因相关染色质乙酰化组蛋白的水平。结果 TSA或NaBu使人结肠癌细胞阻滞于G1期,而5-aza-dC并不能改变细胞周期。正常情况下,SW1116和Colo-320细胞中均有较弱的p16^INKRA表达;两种结肠癌细胞系p21^WAF1表达缺如。5-aza-dC干预后,p16^INKRA表达增强,相反p21^WAF1仍无明显表达。当该两个细胞系经TSA或NaBu处理后,p21^WAF1转录水平明显上调,并诱导p21^WAF1基因相关染色质乙酰化组蛋白H3和H4的积聚。结论 两种人结肠癌细胞系中,HDAC抑制剂通过选择性增加p21^WAF1基因相关染色质乙酰化水平,上调p21^WAF1基因的转录,并相应地导致结肠癌细胞生长停滞;而p16^INKRA基因表达主要受甲基化调节。     

转录因子NF-κB生物特性及应用前景

核因子κB(NF-κB)是能调节多种炎症和免疫基因表达的一种重要的转录调节因子,能与多种细胞基因启动子或增强子序列特定位点发生特异性结合而促进转录和表达,与免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的病理生理过程密切相关。它与抑制性蛋白IκB结合而为非活性状态。针对NF-κB活性的激活与抑制,从不同环节去寻找药物用于治疗与预防与NF-κB有关的疾病,现已成为新的研究方向。     

NF-κB与急性胰腺炎

核因子κB（NF-κB）是一种核蛋白，能与体内多种细胞基因启动子部位相结合，在机体的免疫功能、炎性反应和凋亡调控等方面发挥多向性调节作用，其在多种疾病中的作用已日益受到人们的重视。近年来的研究证实，NF-κB与急性胰腺炎关系密切，成为一个新的研究热点。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275提高宫颈癌SiHa细胞放射敏感性实验研究

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响及其可能的机制。【方法】应用MS-275体外作用于人宫颈癌SiHa细胞,定量PCR方法检测NF-kB基因和PUMA基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞乙酰化组蛋白H4的表达,应用6MV直线加速器,分别以0、2、4、6、8 Gy不同剂量的X线照射细胞,流式细胞仪检测SiHa细胞凋亡率,克隆形成实验检测SiHa细胞的放射敏感性。【结果】人宫颈癌SiHa细胞经MS-275体外作用后,乙酰化组蛋白H4表达增加,并随MS-275剂量的增加而增加,同时细胞PUMA基因mRNA表达随MS-275剂量升高而增加,NF-κB基因mRNA表达随MS-275剂量增加而降低。与对照组相比,MS-275各组细胞凋亡率增高,并随MS-275剂量的增加而升高,SF2值降低。【结论】MS-275体外能提高人宫颈癌SiHa细胞对放射线损伤的敏感性;增加乙酰化组蛋白H4表达,下调NF-κB基因表达和上调PUMA基因表达是其可能的作用机制。     

乙酰化修饰对髓源性抑制细胞调控的研究进展

［摘要］髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）是肿瘤环境中主要的免疫抑制细胞群之一,在肿瘤组织及外周淋巴器官发挥免疫抑制作用,影响肿瘤进程,亦是肿瘤治疗失败的重要原因。MDSCs中存在多种组蛋白乙酰化酶（histone acetyltransferases, HATs）及组蛋白去乙酰化酶（histone deacetyltransferases, HDACs）的表达,这些HATs和HDACs对MDSCs的分化及免疫抑制功能发挥重要调控作用。本文对MDSCs内乙酰化修饰进行综述,并且探讨各类HATs、HDACs抑制剂对MDSCs的调控作用及其在肿瘤免疫治疗中的应用前景。     

神经系统中组蛋白修饰调控的研究进展

神经系统表达了占整个基因组80%的基因,但这些基因都受严格调控,参与了神经系统的正常功能执行、适应性调节及神经退行性疾病的发生。组蛋白存在多种化学修饰,除乙酰化和甲基化外,其他还有磷酸化、SUMO化、泛素化、ADP-核糖基化等修饰形式。组蛋白修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化等,由不同的组蛋白修饰酶催化,在基因组表观遗     

组蛋白去乙酰化酶SIRT1调控氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的表达

目的 观察组蛋白H3赖氨酸残基9乙酰化(H3K9Ac)在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的巨噬细胞凋亡模型中的表达,探讨组蛋白去乙酰化酶——炎症因子沉默信息调节蛋白1(SIRT1)对组蛋白乙酰化的影响,及其通过基因表观遗传学作用,经氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)通路调控巨噬细胞凋亡的机制。方法 培养BALB/c小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),并加入oxLDL构建巨噬细胞模型。将细胞分为对照组(加入双蒸水)和实验组(加入50μg/mL oxLDL),分别检测两组细胞凋亡及白细胞介素(IL-6)、SIRT1、H3K9Ac和PPARγ的蛋白表达水平。另外,将实验组细胞分别给予SIRT1兴奋剂(白藜芦醇,终浓度50 nmoL/L)和SIRT1抑制剂(尼克酰胺,终浓度50 nmoL/L),观察SIRT1过表达或抑制对oxLDL诱导巨噬细胞模型中细胞凋亡及SIRT1、H3K9Ac、PPARγ和磷酸化过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Ser112位点)[pPPARγ(S112)]的蛋白表达水平的影响。采用Hoechst荧光凋亡染色法检测各组细胞凋亡;采用Western blotting...     

NF-κB在临床急病中的作用

核转录因子NF-κB活性增加可能是临床急病进程恶化的中心环节，最终引起多器官功能衰竭综合征。NF-κB在临床急病的炎症因子调控方面具有极其重要的作用，进一步了解其调控机制，对于寻找临床急病的最佳治疗途径有重要意义。     

核转录因子NF-κB研究

研究表明,作为能够影响细胞生存、变异和增殖的重要核转录因子,NF-κB在近30年的探索中取得了丰硕成果。尤其是在癌症、骨骼系统及呼吸系统的发病机制研究中取得很大进展。NF-κB作为转录因子在各种生理过程中获得多重生物学意义。中药单方、复方等皆可调控NF-κB通路相关基因和蛋白,药效良好,为今后治疗提供了新的思路。     

缺氧对星形胶质细胞 DNA甲基化及组蛋白乙酰化相关酶的表达影响

目的研究缺氧对原代培养星形胶质细胞DNA甲基化相关酶及组蛋白乙酰化相关酶水平的影响。方法原代培养的星形胶质细胞经氧糖剥夺处理后,Westernblot方法检测细胞DNA甲基转移酶,DNA去甲基转移酶,组蛋白乙酰化酶及组蛋白去乙酰化酶的表达。结果原代培养的星形胶质细胞缺氧处理48h后,DNA甲基转移酶的表达升高,DNMT3A和DNMTl与对照组相比分别升高了49％和83％,DNA去甲基转移酶的表达降低了36％;组蛋白去乙酰化酶的表达升高到对照组的2．1倍,而组蛋白乙酰化酶的表达则升高得更为明显,为对照组的20倍。结论缺氧可以改变星形胶质细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化相关酶的表达,从而影响基因的表达。     

缺氧对星形胶质细胞DNA甲基化及组蛋白乙酰化相关酶的表达影响

目的研究缺氧对原代培养星形胶质细胞DNA甲基化相关酶及组蛋白乙酰化相关酶水平的影响。方法原代培养的星形胶质细胞经氧糖剥夺处理后,Western blot方法检测细胞DNA甲基转移酶,DNA去甲基转移酶,组蛋白乙酰化酶及组蛋白去乙酰化酶的表达。结果原代培养的星形胶质细胞缺氧处理48 h后,DNA甲基转移酶的表达升高,DNMT3A和DNMT1与对照组相比分别升高了49%和83%,DNA去甲基转移酶的表达降低了36%;组蛋白去乙酰化酶的表达升高到对照组的2.1倍,而组蛋白乙酰化酶的表达则升高得更为明显,为对照组的20倍。结论缺氧可以改变星形胶质细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化相关酶的表达,从而影响基因的表达。     

蛛网膜下腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎大鼠脊髓SIRT1表达和NF-κB去乙酰化调节的影响

目的探讨蛛网膜下腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎（CCI）大鼠脊髓沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达和活性的影响,以及对NF-κBp65去乙酰化的调节作用。方法将120只雄性SD大鼠采用随机数表法分成5组,每组24只,即假手术组（S）组、坐骨神经结扎组（CCI组）、二甲亚砜（DMSO）组、坐骨神经结扎+低剂量SRT1720治疗组（CCI+LD组）和坐骨神经结扎+高剂量SRT1720治疗组（CCI+HD组）。其中CCI、DMSO、CCI+LD和CCI+HD组大鼠提前8d蛛网膜下腔预置给药导管后建立CCI模型。DMSO组从手术日起,每天通过蛛网膜下腔预置细管给予10滋lDMSO,而CCI+LD组和CCI+HD组每天分别给予SRT172010滋g和20滋g（溶于10滋lDMSO）。在CCI前1d、CCI后1、3和7d各组分别处死大鼠6只,取L4~5段手术侧脊髓组织,采用荧光法测定沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）活性,Westernblot法测定SIRT1、NF-κB、乙酰化-NF-κBp65（Lys310）水平,并计算各组NF-κB的乙酰化水平（乙酰化-NF-κBp65/NF-κB）。结果与S组比较,CCI和DMSO组在CCI后各时点SIRT1水平和酶活性均显著下降（均P＜0.01）,相反,NF-κB、乙酰化-NF-κBp65水平和NF-κB乙酰化水平均显著升高（均P＜0.01）;而与CCI组比较,CCI+LD和CCI+HD组在CCI后3d、7dSIRT1水平和酶活性均较高（均P＜0.01）,NF-κB、乙酰化-NF-κBp65（Lys310）水平则较低。其中SRT1720高剂量组在CCI后7d,SIRT1水平和酶活性显著高于低剂量组（P＜0.01）,而NF-κB的乙酰化水平则更低（P＜0.01）。结论SRT1720蛛网膜下腔给药可改善CCI导致的脊髓SIRT1水平和酶活性的降低,抑制NF-κBp65的过高表达和乙酰化。     

PHI对前列腺癌PC3细胞组蛋白甲基化及乙酰化的调控

目的 探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的分子机制.方法 采用MTT方法观察PHI对PC3细胞的生长抑制情况;TUNEL方法检测PHI对PC3细胞凋亡的影响;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、Mcl-1、Cyt-C、XIAP及组蛋白乙酰化H3、H4,组蛋白甲基化H3K9、H3K4水平的变化.结果 ①PHI能抑制PC3细胞增殖,IC50为20 μmol/L;②PHI通过下调PC3细胞Bcl-2,Caspase-9、Caspase-3、Mcl-1、Cyt-C、XIAP表达,诱导PC3细胞凋亡;③PHI使PC3细胞组蛋白乙酰化H3、H4表达增加,组蛋白甲基化H3K4水平增高,H3K9水平降低.结论 PHI可使组蛋白H3、H4高乙酰化,并调控组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平,从而抑制PC3细胞的增殖,诱导其凋亡.PHI是一种潜在抗前列腺癌的新药.     

糖基化终产物对内皮细胞核转录因子NF-κB表达的影响

目的：探讨糖基化终产物（AGEs)的细胞损伤机理。方法：用葡萄糖与牛血清白蛋白在体外共同孵育制备AGEs-BSA，并以荧光光谱法检测其纯度，以体外培养的内皮细胞系ECV－304为研究对象，观察不同浓度糖基化终末产物对内皮细胞核转录因子NF－κBmRNA表达的影响。结果：制备的糖基化终产物具有360nm激发峰和450nm发射峰的特性，ECV－304核转录因子NF－κB的表达水平与糖基化终产物之间存在剂量依赖关系，AGEs可使核转录因子NF－κB的mRNA表达上调，结论：分子荧光分析法是检测AGEs的有效手段，AGEs可诱导内皮细胞NF－κB的表达上调。     

哮喘大鼠肺T细胞中组蛋白去乙酰基酶1的表达及对组蛋白修饰的影响

目的明确哮喘大鼠肺T淋巴细胞中的组蛋白去乙酰基酶1(HDAC1)蛋白表达水平及组蛋白整体乙酰化和甲基化水平,探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法 16只Wistar大鼠随机分为对照组和哮喘组(每组8只),用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘大鼠模型。通过哮喘临床表现、气道高反应性测定、肺组织HE染色、血清和BALF中细胞因子IL-4、γ干扰素(IFN-γ)及IgEELISA测定,判断哮喘大鼠模型是否成功。分离肺T细胞并进行纯度鉴定。Western blot检测肺T细胞HDAC1蛋白表达水平,组蛋白H3、H4整体乙酰化,以及H3k9整体二甲基化水平。结果与对照组比较,哮喘组HDAC1蛋白表达水平低于对照组(P0.05),组蛋白H3、H4整体乙酰化水平和H3k9整体二甲基化水平差异均无统计学意义。结论肺T细胞HDAC1可能参与了支气管哮喘的发病环节,组蛋白整体乙酰化和甲基化水平与哮喘发病无明显相关性,HDAC1对组蛋白修饰作用可能是一个基因转录特异性事件。     

组蛋白去乙酰化酶SIRT1经Toll样受体4途径对巨噬细胞凋亡的调控

目的 观察组蛋白去乙酰化酶——人沉默调节蛋白(SIRT1)经组蛋白表观遗传学调控细胞凋亡的具体机制和途径,为动脉粥样硬化防治提出新思路。 方法 选用假手术组大鼠作为对照,观察颈动脉损伤组大鼠颈动脉组织凋亡、SIRT1、组蛋白3(H3)、H3赖氨酸9位点乙酰化(H3K9Ac)及炎症因子蛋白表达;选用不同条件干预的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)暴露巨噬细胞为研究对象,采用细胞功能获得或缺失方法,观察巨噬细胞凋亡、SIRT1、H3、H3K9Ac及炎症因子蛋白表达。 结果 与假手术组大鼠和对照组巨噬细胞比较,颈动脉损伤组大鼠颈动脉组织和oxLDL暴露巨噬细胞SIRT1蛋白表达减少,H3K9Ac/H3比值增加,Toll样受体4(TLR4)、白介素1β(IL-1β)蛋白表达增加且伴有凋亡增加(P<0.01);与给予SP600125(JNK 通路拮抗剂)、IAXO-102(TLR4通路拮抗剂)、LY294002(PI3K 通路拮抗剂)干预的巨噬细胞比较,IAXO-102干预后,SIRT1减少现象被逆转(P<0.01);给予SIRT1兴奋剂后,巨噬细胞凋亡减轻伴有H3K9Ac/H3比值减少,TLR4、IL-1β蛋白表达减少(P<0.01);给予SIRT1抑制剂后,巨噬细胞凋亡加重伴有H3K9Ac/H3比值增加,TLR4、IL-1β蛋白表达增加(P<0.01)。 结论 组蛋白乙酰化表观遗传学参与细胞凋亡的调控,进而与动脉粥样硬化发生发展密切相关。组蛋白去乙酰化酶SIRT1减少,H3乙酰化增加,恶化细胞凋亡,促发动脉粥样硬化发生发展,这个过程必经TLR4途径实现。     

核小体重塑及组蛋白去乙酰化酶复合物的负染电镜结构分析

目的·利用负染电镜技术分析人源核小体重塑及组蛋白去乙酰化酶复合物（nucleosome remodeling and deacetylase complex,NuRD复合物）结构,获得人源NuRD复合物的轮廓信息。方法·将C端带有3×Flag标签的MBD3 (methyl-CpG binding domain protein 3)和N端带有10×His标签的GATAD2A (GATA zinc finger domain containing 2A)克隆至pMLink表达载体中,采用聚乙烯亚胺瞬时转染过表达的方式在人源Expi293F悬浮细胞里表达NuRD复合物中的蛋白质组分;依次通过Ni-NTA亲和层析、Flag (DYKDDDDK)标签亲和层析和Superose 6 Increase 5/150凝胶过滤层析分离纯化NuRD复合物;利用蛋白质印迹法（Western blotting）和液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）对复合物进行组分鉴定;利用负染电镜技术结合单颗粒重构技术研究NuRD...     

核转录因子NF-κB与类风湿性关节炎关系的研究进展

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是人类最常见的自身免疫性疾病之一，是一种严重危及人类健康的致残性关节炎，其原因尚未完全明确。其病理改变主要为滑膜组织的增生，炎细胞浸润，血管翳形成，以及骨和软骨进行性不可逆性破坏，其中血管翳的形成为一重要的中间环节。已有研究表明，NF-κB可能对血管形成具有核心的调节作用。