Toll样受体4与2型糖尿病及其并发症

介导先天免疫和炎性反应的Toll样受体(TLR)4参与了炎性反应性疾病的发病.炎性反应在2型糖尿病(T2DM)及其并发症的发生、发展中具有重要作用.TLR4信号通路的激活与胰岛素抵抗(IR)有关,而IR是T2DM及其大血管病变的重要病理生理基础,TLR4信号通路激活后炎性反应因子释放增加,与糖尿病微血管病变及神经病变密切相关.抑制TLR4信号通路的激活可能会防治T2DM及其并发症的发生、发展.     

Toll样受体4与糖尿病肾病的关系研究进展

糖尿病肾病（DN）已成为欧美国家终末期肾脏疾病（ESRD）的首位病因。近年来,我国DN的患病率不断上升。DN确切的发病机制并不十分清楚,目前认为主要与遗传易感因素、肾血流动力学因素、糖代谢紊乱、细胞因子、炎性反应及氧化应激等因素相关¨0。控制血糖、血压及抑制肾素一血管紧张素～醛固酮系统的药物已用于延缓DN的进展,但效果有限,仍有许多患者发展为ESRD。探寻DN的发病机制（尤其是肾内炎症机制）及新的治疗靶点一直是研究的热点怛J。近来Toll样受体4（TLR4）在DN主要发病机制中的重要作用受到关注。     

外周血单核细胞Toll样受体4、肿瘤坏死因子-α表达与糖尿病心肌病心功能的相关性

目的探讨外周血单核细胞Toll样受体4（TLR4）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达与糖尿病心肌病（DCM）心功能的关系。方法选取2008年6月至2011年7月在广东医学院附属医院心血管内科住院的单纯2型糖尿病（T2DM）患者36例,DCM患者48例,另选同期体检的40名健康人作为对照组。按纽约心脏病协会（NYHA）心功能分级进行临床评价。检测并比较各组间外周血TLR4、TNF—α、N端B型脑钠肽（NT—BNP）表达及左心室射血分数、左室舒张末径的差异,以多元逐步回归分析法分析外周血TLR4、TNF-α与心功能的相关性。结果（1）DCM组患者的外周血单核细胞TLR4mRNA和TNF-α均高于健康对照组和T2DM组,且NT—BNP、左室舒张末径水平增加,而左心室射血分数降低（均P〈0．05）。（2）DCM组患者外周血单核细胞TLR4 mRNA在NYHA分级中呈梯次增高（Ⅰ-Ⅳ级分别为2．1±0．4、3．1±0．4、4．1±0．6、5．1±0．5,均P〈0．05）;TNF-α表达水平在NYHA分级中呈梯次增高[Ⅰ-Ⅳ级分别为（302-4-92）、（414±102）、（658±116）、（1035±108）mmol／L];NT—BNP、左室舒张末径在Ⅳ级组均显著高于Ⅰ-Ⅲ级组（均P〈0．05）,两者在Ⅰ-Ⅲ级组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室射血分数水平呈梯次减少（P〈0．05）,但两者在Ⅲ、Ⅳ级组问比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）TLR4、TNF—α与NYHA心功能分级存在线性相关（r=0．61、0．26,均P〈0．05）,其中以TLR4相关性最好,但与NT—BNP、左室舒张末径、左心室射血分数无相关关系（均P〉0．05）。（4）经多元线性回归分析显示,仅TLR4是DCM患者NYHA心功能分级的独立相关因素（回归系数=0．371,P=0．000）。结论TLR4／TNF—α信号通路与DCM心功能的严重程度正相关,可能促进DCM患者心力衰竭的发生、发展。     

TNF-α对肥大细胞Toll样受体4表达的调节

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对肥大细胞Toll样受体4（TLR4）表达的调节。方法不同浓度TNF-α与鼠肥大细胞P815作用后,用流式细胞技术、实时定量逆转录聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）,在蛋白水平、mRNA水平检测肥大细胞的TLR4表达。结果 TNF-α上调肥大细胞P815的TLR4表达,TNF-α抗体的应用可阻断此上调作用。结论 TNF-α能够上调肥大细胞P815表面TLR4的表达,为进一步探讨肥大细胞TLR4参与过敏反应提供了实验依据。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体4的变化

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞TLR4的变化及意义。方法用流式细胞仪检测30例健康人、40例乙型肝炎肝硬化和30例慢性HBV携带者外周血单个核细胞表面TLR4的表达,采用ELISA法检测血清IL-6水平。结果乙型肝炎肝硬化患者TLR4及IL-6水平分别为13.5±4.6 MFI和80.5±36.5ng/L,均高于正常人（P〈0.01）;慢性HBV携带者TLR4水平为3.8±1.8MFI,与正常人无显著性差异（P〉0.05）,IL-6水平为45.6±36.8ng/L,明显升高（P〈0.01）;乙型肝炎肝硬化患者TLR4表达与IL-6水平呈正相关（γ=0.768,P〈0.01）,而HBV携带者TLR4表达与IL-6水平无显著性相关（γ=-0.775,P〉0.05）;乙型肝炎肝硬化患者TLR4表达及IL-6水平随着Child分级升高而依次升高。结论 TLR4可能与乙型肝炎肝硬化的发病及进展相关。     

肝硬化外周血单个核细胞Toll样受体2表达及其基因多态性研究

肝细胞、库普弗细胞等表达多种Toll样受体（Toll—like receptor，TLR），其信号传导通路及基因多态性在多种炎性损伤中起重要作用。本研究探讨中国汉族乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）TLR2表达及其基因多态性与肝硬化内毒素血症损伤的关系。     

急性心肌梗死患者溶栓前后外周血单个核细胞Toll样受体4的变化

目的:比较急性心肌梗死(AMI)患者溶栓前、后再通组与未通组外周血单个核细胞(PBMCs)上Toll样受体4(TLR4)的表达变化,探讨其在心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)炎症反应中的作用.方法:72例AMI患者溶栓治疗后分为溶栓再通组(43例)与未通组(29例),所有患者均于溶栓前,溶栓后2、6、12、24 h分别采肘静脉血8 ml,肝素抗凝.健康体检者40例作为正常对照组.流式细胞术测定外周血TLR4蛋白的表达,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测外周血PBMCs上TLR4 mRNA、髓样分化蛋白88(Myd88)mRNA的表达和血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度.结果:溶栓前以上各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),但均高于正常对照组各指标水平(P<0.01).溶栓后,其表达水平均有所上调,达峰值后,又有所下降.与未通组比较,再通组上述各指标达峰时间均提前,且峰值水平较低,同时下降迅速.无论溶栓再通与否,TLR4 mRNA与Myd88 mRNA均呈正相关,其中相关系数分别为0.886,0.694(P<0.01).结论:AMI患者持续的缺血或成功的再灌注后外周血PBMCs上TLR4表达上调,TLR4可能通过Myd88依赖性的信号转导通路促进TNF-α分泌,介导MI/RI的炎症反应.     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2和4的变化

目的探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2 （TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的变化情况及其意义。方法用流式细胞仪检测正常对照、慢性乙型肝炎患者和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清TNFα的水平。Student-t检验比较3组间TLR2、TLR4和TNFα表达的差异;3组病例TLR2、TLR4的表达水平间及它们与血清TNFα水平间的相关性分析采用线性相关分析。结果正常对照组（30例）、慢性乙型肝炎组（31例）和慢性重型乙型肝炎组（30例）外周血单核细胞TLR2和TLR4的平均免疫荧光强度（MFI）分别为21．5±2．7、39．0±4．1．47．7±21．4和2．3±1．1、3．7±2．3、6．9±4．1;外周血清TNFα（ng／L）水平分别为53．8±38．1、164．3±89．9、359．8±1 40．0,自正常对照组到慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR2、TLR4表达强度和外周血清TNFα水平均依次显著升高;经线性相关分析研究发现,外周血单核细胞TLR2、TLR4表达水平和血清TNFα表达水平间均呈现显著的正相关性。结论TLR2和TLR4可能与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

外周血Toll样受体4及TNF-α与冠状动脉支架置入术后再狭窄的关系

目的:支架术后再狭窄(in-stent restenosis,ISR)是影响冠状动脉介入疗效的主要问题,本研究探讨外周血Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)及TNF-α与冠状动脉支架置入术后再狭窄的相关性。方法:入选135例稳定型心绞痛患者,冠状动脉造影示单支血管病变,并成功置入支架,术后6~12个月复查冠状动脉造影,将患者分为支架术后再狭窄组和无再狭窄组,采用流式细胞技术测定支架置入术前及术后5~7d外周血单核细胞TLR4的表达量,同时用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中TNF-α的浓度。结果:复查冠状动脉造影发现14例患者发生支架内再狭窄,占10.4%,无再狭窄组121例,占89.6%。组间比较:术前TLR4及TNF-α的表达水平在两组间差异无统计学意义。分别为:TLR4[(144.20±52.99)vs.(117.40±61.9),P0.05],TNF-α[(34.32±11.97)vs.(27.47±14.47)ng/L;P0.05];术后5~7d两组患者TLR4与TNF-α表达均升高,且再狭窄组升高更明显:TLR4[(182.20±61.59)vs.(125.10±61.9),P0.01],TNF-α(52.62±19.04)vs.(32.63±13.71)ng/L,P0.01)。再狭窄组术后TLR4和TNF-α均升高,与支架置入术前相比差异有统计学意义;术后血清中TNF-α的浓度与外周血单核细胞中TLR4表达的平均荧光强度呈正相关。结论:冠状动脉支架置入术后外周血TLR4及TNF-α的表达均升高,且再狭窄组升高更明显,与无再狭窄组比较,差异有统计学意义。推测TLR4及TNF-α介导的炎症反应与支架术后再狭窄相关。     

益生菌对实验性结肠炎大鼠Toll样受体4表达的影响

目的 观察两种益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌)对溃疡性结肠炎的大鼠结肠黏膜Toll样受体4(TLR4)及TNT-α的变化及影响.方法 采用三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导溃疡性结肠炎大鼠模型.观察和评估其结肠黏膜的大体和组织学变化.以免疫组化方法检测TIR4、TNF-α的表达,以蛋白免疫印迹法检测蛋白表达.结果 造模后结肠组织中可见大量炎性细胞浸润,杯状细胞减少,隐窝脓肿形成.与正常对照组相比,模型组结肠组织TLR4的表达显著增加(P＜0.01).TNF-α表达显著升高(P＜0.01);与益生菌组相比,模型组结肠组织TLR4的表达显著减少(P＜0.01),TNF-α表达显著减少(P＜0.01).其两种菌相比差异不大(P＞0.05).结论 从免疫机制的视角观察到益生菌可能通过抑制Toll样受体4表达从而减少炎性因子TNF-α产生.     

肠易激综合征腹泻型患者结肠黏膜Toll样受体2和4的表达

目的:研究Toll样受体(TLR)2、TLR4在肠易激综合征(IBS)患者和正常人结肠黏膜的表达.方法:研究30例IBS腹泻型患者及12名健康志愿者结肠黏膜TLR2和TLR4的表达,半定量分析TLR2及TLR4平均吸光度值.结果:与健康对照者相比,IBS患者结肠黏膜固有层水肿疏松.有大量的炎性细胞浸润.健康对照组和IBS组肠腔肠上皮细胞(IEC)的TLR2表达差异无统计学意义,(P<0.05).IBS患者的隐窝IEC的TLR2弱表达者较健康对照组少(6.7%比50.0%),而均匀表达增强者多(40.0%比0,P<0.05).86.7%的IBS患者基底侧及肠腔侧IEC均表达TLR4,较健康对照组增高(50.0%,P<0.05).细胞计数表明,IBS患者固有层TLR4阳性细胞数大于健康对照组(70.084±21.887比20.577±4.546,P<0.01),IBS患者的结肠黏膜TLR2及TLR4的吸光度值均增高单位分别为0.3079±0.0283比0.3886±0.0510和0.3044±0.0481比0.3971±0 0996(P<0 01).结论:IBS患者结肠有炎症表现,TLR2、TLR4存IBS发病中可能起一定作用.     

乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4的表达

目的 探讨乙型肝炎(乙肝)肝硬化患者中Toll样受体(TLR)2、4表达与细胞因子的相关性.方法 采用随机数字表法随机收集35例乙肝肝硬化患者与35例健康对照者的静脉抗凝血.ELISA检测血TNF-α含量.分离两组外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞仪检测PBMC表面TLR2、4表达.实时荧光定量PCR检测每份PBMC中TLR2、4 mRNA的表达水平.正态分布均数比较采用t检验和单因素方差分析,非正态分布数据采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验和Spearman相关分析.结果 肝硬化组的血TNF-α水平明显高于对照组(33.52 ng/L比6.07 ng/L,Z=6.584,P<0.01),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.肝硬化组PBMC中TLR2阳性细胞率明显高于对照组(20.65%比12.04%,Z=-4.458,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.448 3,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4阳性率差异无统计学意义.肝硬化组PBMC中TLR2/还原型磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA表达水平明显高于对照组(0.234 2比0.043 1,Z=-6.83,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.411 1,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4 mRNA表达水平差异无统计学意义.结论 肝硬化患者PBMC中TLR2表达水平明显增高,与血TNF-α水平及肝硬化的严重程度呈正比,但TLR4表达水平无明显变化,提示在乙肝肝硬化患者中,是TLR2而非TLR4在肝硬化的进展过程中具有重要作用.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

普罗布考对2型糖尿病合并冠心病患者外周血单核细胞Toll样受体4/核转录因子κB信号通路的影响

目的 研究普罗布考对2型糖尿病患者外周血单核细胞Toll样受体4/核因子kB信号转导通路的影响,以进一步探讨普罗布考抗动脉粥样硬化机制.方法 选择85例2型糖尿病合并冠心病患者,随机分为对照组和治疗组:对照组按常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用普罗布考0.375 g,每天2次,口服,总疗程为24周.运用Real-time PCR、Western blotting方法分别测定治疗前后外周血单核细胞Toll样受体4、核因子kB mRNA和蛋白表达水平;ELISA检测外周血血清中白细胞介素1β的表达水平.结果 普罗布考显著降低2型糖尿病合并冠心痛患者总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和氧化型低密度脂蛋白水平,显著下调外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),明显减少核因子kB蛋白的表达,且显著抑制白细胞介素1β的生成(P<0.05).结论 普罗布考抗动脉粥样硬化除了降脂作用外,抑制外周血单核细胞Toll样受体4/核因子kB信号转导通路的激活,也可能是其抗炎、抗动脉粥样硬化的重要机制之一,提示普罗布考对防治2型糖尿病并发动脉粥样硬化这类患者有一定的作用.     

强直性脊柱炎和类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中Toll样受体4基因的表达及临床意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)mRNA在强直性脊柱炎(AS)、类风湿关节炎(RA)患者以及健康个体外周血单个核细胞(PBMC)中的表达差异及其临床意义。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2006年3月至10月第二军医大学附属长征医院60例AS患者、20例RA患者及30例健康对照PBMC中TLR4 mRNA的表达水平;应用ESR自动化分析仪和特定蛋白电泳仪分别测定红细胞沉降率(ESR)和血浆C-反应蛋白(CRP)。结果AS和RA患者PBMCTLR4 mRNA的表达水平明显高于对照组,但两疾病组之间差异并无显著性意义;人类白细胞抗原(HLA-B27)阳性和阴性AS患者均显著高于健康对照组,且HLA-B27阳性AS患者显著高于RA组,但两组AS患者以及HLA-B27阴性AS与RA患者之间,TLR4 mRNA差异无显著性意义;在HLA-B27阳性AS患者中,TLR4 mRNA的表达与ESR及CRP呈显著相关性,但在HLA-B27阴性AS患者中则无这种相关性。在RA患者中,TLR4 mRNA与CRP呈显著相关性。结论AS和RA患者PBMCTLR4 mRNA的表达均上调,AS患者上调与HLA-B27阳性与否无关,但HLA-B27阳性AS患者比RA上调更明显,且HLA-B27抗原影响AS患者TLR4 mRNA与ESR及CRP的相关性。TLR4的异常表达可能在AS和RA的发生和发展中起作用。     

TNF-α水平与2型糖尿病患者MA的关系

T2DM患者76例,分为正常白蛋白尿组(NU组)35例,微量白蛋白尿组(MU组)41例,正常对照组(NC组)30例;分别测定血清TNF-α.结果 MU组血清TNF-α水平是影响UAER的独立相关因素.结论 TNF-α与T2DM肾病发生密切相关.     

TNF-α水平与2型糖尿病患者MA的关系

T2DM患者76例,分为正常白蛋白尿组（NU组）35例,微量白蛋白尿组（MU组）41例,正常对照组（NC组）30例;分别测定血清TNF-α.结果 MU组血清TNF-α水平是影响UAER的独立相关因素.结论 TNF-α与T2DM肾病发生密切相关.     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾组织Toll样受体4表达的影响

用免疫组化和RT-PCR方法检测糖尿病大鼠肾组织中Toll样受体4(TLR4)的表达.结果显示糖尿病组TLR4表达较正常对照组升高(P＜0.05),而辛伐他汀干预组较糖尿病组低(P＜0.05),提示TLR4可能参与了糖尿病肾病的发生及发展.辛伐他汀可能通过降低TLR4的表达保护肾组织.     

加味芪黄饮对糖尿病肾病患者外周血Toll样受体4、MyD88水平的影响

目的探讨加味芪黄饮对糖尿病肾病(DN)患者外周血Toll样受体(TLR)4、MyD88水平的影响。方法 DN患者76例随机分为观察组和对照组各38例。对照组应用二甲双胍片对血糖进行控制,而观察组在对照组基础上予以加味芪黄饮治疗。对比两组疗效及治疗前后症状变化情况及外周血单核细胞TLR4及MyD88水平变化。结果治疗后,观察组总有效率(84.21%)显著高于对照组(63.16%)(P<0.05);观察组疲倦乏力和口渴喜饮、腰膝酸软、夜尿频多、浮肿、舌红少苔及脉沉无力等症状评分治疗后均显著低于治疗前,且低于对照组(均P<0.05);观察组治疗后外周血单核细胞TLR4、MyD88水平均显著低于治疗前,且低于对照组(均P<0.05)。结论加味芪黄饮治疗DN疗效好,可明显降低DN患者体内TLR4及MyD88水平,改善患者临床症状。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体表达与调节性T细胞相关性分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2、4、9(TLR2,TLR4,TLR9)表达及PBMC中CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)特点和影响因素.方法 采用流式细胞术检测PBC患者(52例)和健康对照者(22例)外周血PBMC中TLR2、4、9阳性细胞及Tregs比例,比较其在PBC患者和健康对照者中的差别并分析TLR与Tregs相关性.结果 PBC患者Tregs比例低于健康对照者[(1.53+1.33)vs(4.42±1.43),P＜0.0001],TLR4阳性细胞比例高于健康对照者[(36.95±3.53)vs(32.84±8.06),P=0.003];PBC患者Tregs比例与TLR9阳性细胞比例呈负相关(R2 =0.115,P=0.016),健康对照者Tregs比例与TLR2,4和TLR2,4,9联合表达阳性细胞比例呈负相关(R2=0.326,P=0.007;R2 =0.226,P=0.034).结论 PBC患者外周血PBMC中Tregs比例降低,TLR4表达升高,可能受肝硬化失代偿期腹腔感染的影响.