异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

RhoA/ROCK通路在缺氧复氧诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用机制

目的 探讨Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路在缺氧复氧(H/R)诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的AC16细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R＋NC-siRNA组(转染NC-siRNA后构建H/R模型)和H/R＋RhoA-siRNA组(转染RhoA-siRNA后构建H/R模型),采用MTT法检测AC16细胞存活率,流式细胞术检测AC16细胞凋亡率,比色法检测AC16细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性和Caspase-3活性,ELISA检测AC16细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,试剂盒检测AC16细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量PCR检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、核因子κB(NF-κB)p65及IkB激酶(IKK)的mRNA表达水平,Western blot检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65及IKK的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,H/R组细胞存活率、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);H/R＋NC-siRNA组和H/R组之间上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与H/R＋NC-siRNA组比较,H/R＋RhoA-siRNA组细胞存活率、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)。结论 靶向抑制RhoA/ROCK通路可通过降低炎症反应、氧化应激和细胞凋亡减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。     

替米沙坦通过激活PPARγ而下调NF-κB通路抑制脂多糖诱导的单核细胞THP-1炎症反应

目的探讨替米沙坦（Telm）对脂多糖（LPS）诱导的人THP-1巨噬细胞炎症因子释放的影响及机制。方法体外培养人THP-1单核细胞随机分为对照组、脂多糖组和替米沙坦组（LPS+Telm）。替米沙坦组细胞予替米沙坦（10μmol/L）预孵育2h后与脂多糖组均加入脂多糖刺激24h。应用Westernblot检测各组细胞过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）、磷酸化过氧化体增殖物激活型受体γ（p-PPARγ）、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化核因子κB（p-NF-κB）的蛋白表达,ELISA法检测各组细胞培养上清中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的表达水平,应用实时定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平。结果Westernblot检测发现,与对照组相比,脂多糖组p-PPARγ、p-NF-κB和p-IκBα蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,IκBα表达明显下降（P<0.05）,PPARγ和NF-κB表达水平无显著差异（P>0.05）;RT-PCR和ELISA检测发现,与对照组相比,脂多糖组MCP-1、TNF-α和IL-6蛋白水平和mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）。与脂多糖组相比,替米沙坦组p-NF-κB和p-IκBα蛋白水平表达明显下降,MCP-1、TNF-α及IL-6分泌水平和mRNA水平也均明显降低,p-PPARγ和IκBα蛋白表达水平明显增加（P<0.05）,但是NF-κB和PPARγ表达水平依然无显著差异（P>0.05）。结论替米沙坦预处理可通过激活PPARγ而下调NF-κB活化从而抑制脂多糖诱导单核细胞THP-1产生炎症反应。     

藏红花素减轻皮质神经元缺氧复氧损伤与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关

[目的]探讨藏红花素对皮质神经元缺氧复氧损伤的影响及其分子机制。[方法]分离并培养SD大鼠皮质神经元,设对照组、模型组、藏红花素(50 mg/L)组、藏红花素(50 mg/L)+脂多糖(TLR4激活剂,100μg/L)组。对照组常规培养,模型组建立缺氧4 h复氧24 h模型,藏红花素组和藏红花素+脂多糖组分别给药干预24 h后造模。通过CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测神经元活力和凋亡率,ELISA法检测培养液中炎症因子水平,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、cleaved Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。[结果]与对照组比较,模型组大鼠皮质神经元活力明显降低(P<0.05),凋亡率、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平、神经元TLR4、HMGB1、cleved Caspase-3表达量及p-NF-κB p65/NF-κ...     

核因子κB通路参与缺氧诱导心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α

目的:探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α),核因子κB(NF-κB)通路是否参与其中,并发挥调节作用。方法:1%O2物理缺氧刺激原代SD大鼠乳鼠心肌细胞,在不同时间点Real-time PCR检测TNF-αmRNA水平;ELISA检测培养上清中TNF-α蛋白水平;Western blot检测胞质NF-κB相关通路蛋白IKKα,IKKβ,IKKBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及胞核NF-κB p65蛋白表达;电泳迁移率实验检测NF-κB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)刺激心肌细胞,检测细胞核p65蛋白表达,TNF-αmRNA及蛋白水平。结果:缺氧诱导原代心肌细胞表达TNF-α,TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高,12h及24h达峰值;其蛋白分泌从缺氧6h开始升高,12h和24h达峰值。缺氧激活NF-κB通路:缺氧5min胞质pIKKα/IKKβ表达开始上调,30min达峰值,持续6h;IKKBα表达缺氧5min开始降低,而pIKKBα缺氧30min开始增加;胞核p65蛋白水平缺氧5min上调,1h达峰值,持续6h;NF-κB DNA结合能力缺氧5min后开始增强。PDTC抑制NF-κB活性,有效抑制TNF-αmRNA及其蛋白表达。结论:缺氧通过激活NF-κB通路,诱导心肌细胞自分泌TNF-α,NF-κB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。     

血脂康胶囊对LPS诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响

目的探讨血脂康胶囊对脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响。方法将分离的Kupffer细胞按1×105个/ml接种于24孔板内培养48 h后,对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;血脂康胶囊组:血脂康胶囊用生理盐水溶解,90 mg·kg-1·d-1,其余处理同LPS组。ELISA法检测上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平。Western blotting检测胞浆IκBα、p-IκBα及胞核NF-κB p65蛋白表达水平。结果 LPS组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6表达高于对照组(P0.05)。血脂康胶囊组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6低于LPS组(P0.05),但高于对照组(P0.05)。对照组胞浆蛋白IκBα表达显著高于LPS组和血脂康胶囊组(P0.05),但LPS组明显低于血脂康胶囊组(P0.05)。LPS组胞核NF-κB p65和p-IκBα表达高于对照组和血脂康胶囊组(P0.05),但血脂康胶囊组表达低于LPS组(P0.05)。结论血脂康胶囊对LPS诱导的Kupffer细胞炎症因子分泌有一定的抑制作用。     

甘草酸抑制PI3K/AKT/NF-κB减轻胶原诱导型类风湿关节炎大鼠炎症反应

目的探讨甘草酸对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核转录因子(NF)-κB轴的影响,阐明甘草酸的抗炎调节机制。方法随机选取雄性SD大鼠分为空白组、模型组、甘草酸低剂量组(60 mg/kg)、中剂量组(80 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)、美洛昔康组(2 mg/kg),每组10只。CIA建模后连续给药6 w,检测动物足跖容积变化;免疫组化法检测脾脏内IKK-α、IκB-α、NF-κBp65蛋白表达;Western印迹法检测关节滑膜PI3K、磷酸化(p)-AKT、p-NF-κBp65蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL)-1β、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果与模型组比较,空白组、美洛昔康组、甘草酸各剂量组足跖部肿胀程度均明显下降;免疫组化法显示空白组、美洛昔康组、甘草酸各剂量组脾脏内IKK-α、IκB-α、NF-κBp65蛋白平均光密度值表达均较模型组明显下调;Western印迹显示与模型组比较,美洛昔康组、甘草酸各剂量组关节滑膜内PI3K、p-AKT、p-NF-κBp65蛋白表达受到不同程度抑制;ELISA结果显示空白组与各给药组血浆IL-1β、CRP、TNF-α表达均明显下调。结论甘草酸可能通过抑制血液中IL-1β、CRP、TNF-α过表达进而抑制PI3K/AKT/NF-κB通路减轻CIA发展。     

Klotho对脂多糖所致心肌损伤的作用及机制

目的探讨Klotho对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的影响及相关作用机制。方法以大鼠胚胎H9c2心肌细胞系为研究对象,经不同浓度Klotho预处理后,加1 g/L LPS处理6 h,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量及细胞存活率来反映心肌细胞损伤。检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素β(IL-β)和白细胞介素6(IL-6)的含量来反映心肌细胞的炎症反应。检测细胞中丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性来反映细胞氧化应激水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测核因子κB(NF-κB)p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果 Klotho预处理可显著抑制LPS所致的心肌细胞存活率下降,抑制LDH、TNF-α、IL-β、IL-6释放,下调MDA的含量,升高SOD、GSH-Px的活性,抑制细胞凋亡,抑制p-NF-κB p65的蛋白表达(P0.05)。结论 Klotho可抑制LPS所致的心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化,进而发挥抗炎、抗氧化应激,同时抑制细胞凋亡有关。     

SIRT6-shRNA预处理对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及其机制

目的 探讨通过RNA干扰技术抑制H9C2心肌细胞内的SIRT6基因表达对缺氧/复氧(A/R)诱导的细胞损伤的影响和机制。方法 将H9C2心肌细胞随机分为正常对照组(Con组)、A/R组、阴性对照SIRT6-shRNA质粒处理组(NC组)和SIRT6-shRNA质粒处理组(shRNA组)。检测4组H9C2心肌细胞的存活率、凋亡率、Caspase-3活性及SIRT6、核因子(NF)-κBp65、I-κBα表达水平及细胞培养液中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平并进行比较。结果 与Con组相比,A/R组H9C2心肌细胞存活率和细胞浆中I-κBα蛋白表达水平明显降低,凋亡率、细胞SIRT6-mRNA和蛋白、细胞核中NF-κBp65蛋白表达水平、细胞培养液中IL-6和TNF-α水平及Caspase-3活性明显升高（P<0.05）。与A/R组比较,shRNA组H9C2心肌细胞存活率、细胞SIRT6-mRNA和蛋白及细胞浆中I-κBα蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡率、细胞核中NF-κBp65蛋白、细胞培养液中IL-6和TNF-α水平及Caspase-3活性明显升高(P<0.05)。结论 抑制H9C2心肌细胞内SIRT6基因表达能促进炎症因子的分泌,激活NF-κB信号通路,诱导细胞凋亡,加重A/R诱导的心肌细胞损伤。     

苗药飞龙掌血抗大鼠急性痛风性关节炎的作用

目的考察苗药飞龙掌血用于治疗鼠急性痛风性关节炎的可能机制。方法将急性痛风性关节炎大鼠分为5组:模型组、秋水仙碱组(300 mg/kg)、飞龙掌血低、中、高剂量组(1、2、4 g/kg),设置正常大鼠为对照组。所有大鼠连续给药10 d,检测步态评分、足趾肿胀体积、痛阈、外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎症因子及mRNA和核因子(NF)-κBp65。结果与对照组比较,模型组1～10 d的步态评分、足趾肿胀体积明显增高(P0.05),痛阈明显降低(P0.05),外周血IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子,关节滑膜组织中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及NF-κBp65均明显增高(P0.05),与模型组比较,飞龙掌血各组外周血炎症因子、My D88、TLR4和TRAF6 mRNA及NF-κBp65均不同程度降低(P0.05),均呈剂量依赖性关系。结论苗药飞龙掌血具有治疗急性痛风性关节炎的作用,与降低外周血IL-1β、IL-6和TNF-α及关节滑膜组织中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及NF-κBp65有关,这些药理机制与飞龙掌血的化学成分有关。     

双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

Ghrelin inhibits IKKβ/NF-κB activation and reduces pro-inflammatory cytokine production in pancreatic acinar AR42J cells treated with cerulein

Background: Previous studies have provided conflicting results regarding whether the serum ghrelin concentration can reflect the severity of acute pancreatitis(AP). The present study examined the correlation between the serum ghrelin concentration and AP severity in animal models and investigated whether altered ghrelin expression in pancreatic acinar cells influences IKK β/NF-κ B signaling and pro-inflammatory cytokine production. Methods: Mild or severe AP was induced in rats by intraperitoneal injection of cerulein or retrograde cholangiopancreatic duct injection of sodium taurocholate, respectively. After successful model induction, serum ghrelin, tumor necrosis factor-α(TNF-α), and interleukin-6(IL-6) concentrations were determined by enzyme-linked immunosorbent assay, and IKK β/NF-κ B activation was assessed by immunohistochemistry. Subsequently, stable overexpression or knockdown of ghrelin in AR42 J cells was achieved by lentiviral transfection. After transfected cells and control cells were treated with cerulein for 24 h, the TNF-αand IL-1 β levels in the supernatants were determined by enzyme-linked immunosorbent assay, and the expression levels of p-p65, IKK β, and p-IKK β were detected by Western blotting. Results: In rat AP models, AP severity was correlated with increased IKK β/NF-κ B activation, proinflammatory cytokine production, and ghrelin secretion. The levels of pro-inflammatory cytokines TNF-αand IL-1 β as well as IKK β/NF-κ B signaling activity were increased upon knockdown of ghrelin in the AP acinar cell model and decreased with ghrelin overexpression. Conclusions: Serum ghrelin is related to the severity of AP. Ghrelin may play a protective role in the pathogenesis of AP by inhibiting the pro-inflammatory cytokines and the activation of the IKK β/NF-κ B signaling pathway.     

1,25-二羟维生素D3调节NF-κB通路对减轻海水吸入型急性肺损伤的作用

目的 探讨海水吸入型肺损伤大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）通路的变化以及1,25-二羟维生素D3对其干预作用.方法 32只大鼠完全随机分为空白对照组、海水处理组、VitD3预处理组和地塞米松处理组,每组8只.采用气管内滴注海水（3 ml/kg）的方法制作海水吸入型急性肺损伤大鼠模型,观察肺部病理变化,用ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的含量,Western blot检测磷酸化NF-κB的表达变化,免疫荧光观察A549细胞NF-κB核转移情况.结果 海水吸入4h后,大鼠肺部损伤明显,TNF-α和IL-1β的含量增高,NF-κB磷酸化以及核转移增多;1,25-二羟维生素D3预处理显著减轻了海水吸入导致的急性肺损伤,减少了炎症因子的释放,并且抑制了NF-κB磷酸化以及核转移.结论 NF-κB通路参与了海水吸入型肺损伤的发生发展,1,25-二.羟维生素D3能够通过抑制NF-κB信号通路减轻肺损伤.     

miR-21对早期糖尿病肾病db/db小鼠蛋白尿的影响

目的 了解miR-21对早期糖尿病肾病db/db小鼠24 h尿白蛋白、肾小球形态学及其分子机制的影响.方法 24只5周龄雄性小鼠分为4组:6只db/m小鼠作为对照组,18只5周龄高血糖且无蛋白尿的db/db小鼠分别随机分为pGenesil-miR-21质粒处理组、对照空质粒处理组及未处理组,每天尾静脉液压法注射质粒30 mg·kg-1·d-1,直至未处理组db/db小鼠尿白蛋白排泄(UAE)显著高于db/m小鼠组.在光学显微镜下观察肾小球形态大小,计算机计算肾小球面积,实时RT-PCR检测肾脏组织miR-21的表达水平,Western印迹、免疫组化PTEN、p-Akt(Ser473)和PI3K p85α肾脏组织的蛋白质表达水平.结果 5周龄db/db小鼠连续注射质粒4周后,未处理组db/db小鼠出现高血糖伴UAE显著增高,提示9周龄db/db小鼠进入早期糖尿病肾病阶段.实时RT-PCR结果显示,在注射pGenesil-miR-21重组质粒的db/db小鼠肾脏组织中,miR-21的表达显著增高(P<0.01).光镜观察和肾小球面积测量实验发现,pGenesil-miR-21重组质粒组肾小球显著减小.Western印迹和免疫细胞化学结果显示,miR-21处理组的db/db小鼠肾脏组织中PTEN蛋白较注射对照空质粒和未注射质粒的db/db小鼠组显著降低,而PI3K p85α和磷酸化Akt (Ser473)蛋白显著增高(均P<0.01).结论 miR-21通过特异性靶向调控PTEN/PI3K信号传导途径,以抑制肾小球肥大,可能是一个新的糖尿病肾病的保护因子.     

狼疮性肾炎患者尿蛋白对HK-2细胞NF-κB、TNF-α、IL-6表达的影响及意义

目的探讨狼疮性肾炎（LN）患者尿蛋白刺激致肾间质纤维化的机制。方法将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为空白对照组和尿蛋白组,前者不行特殊处理;后者加入LN患者24h尿液提纯的尿蛋白（1mg／ml）。分别于培养0、1、3、6、12、24、48h采用RT-PCR法检测NF-κB mRNA、IL-6 mRNA、TNF-α mRNA表达,并进行相关性分析。结果培养3h后尿蛋白组NF-κB mRNA、IL-6 mRNA、TNF-α mRNA表达均显著高于空白对照组,且呈时间依赖性;NF-κB mRNA表达与IL-6 mRNA、TNF-α mRNA表达呈显著正相关。结论LN患者尿蛋白可刺激HK-2细胞上调NF-κB mRNA、IL-6 mRNA及TNF-α mRNA表达,此可能在LN肾纤维化发生、发展中具有一定作用。     

Normalizing glycated albumin reduces increased urinary collagen IV and prevents renal insufficiency in diabetic db/db mice

Increased excretion of type IV collagen accompanies the accumulation of mesangial matrix, which leads to compromise in the glomerular filtration surface area, during the development of diabetic nephropathy. We postulated that the response of urinary collagen IV would be useful in evaluating possible treatment strategies to arrest the nephropathic process while still at a reversible stage. To test this hypothesis, we examined the effect of a small molecule (22CPPA) that inhibits the formation of glycated albumin, which is causally linked to the pathogenesis of diabetic nephropathy, on collagen IV excretion, albuminuria, and renal function in db/db mice. Compared to nondiabetic db/m mice, db/db animals showed markedly increased urinary collagen IV and albumin, significantly elevated serum glycated albumin and creatinine concentrations, and a significantly reduced creatinine clearance. Treatment of db/db mice with test compound, which normalized glycated albumin concentrations, significantly lowered collagen IV and albumin excretion and ameliorated the fall in creatinine clearance and the rise in serum creatinine despite persistent hyperglycemia. The findings indicate that reduction of elevated collagen IV excretion in diabetes reflects a salutary influence on developing glomerulosclerosis, and that glycated albumin has an important nephropathogenic role that can be therapeutically addressed independent of glycemic status.     

TNF-α、NF-κB诱导糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及雷帕霉素干预影响（英文）

目的：探讨糖尿病大鼠肾组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）对肾组织细胞凋亡的诱导以及雷帕霉素干预的作用。方法：选择2型糖尿病大鼠（GK大鼠）20只,均分为糖尿病模型组（DM组）,雷帕霉素治疗组（DMR组,建立糖尿病模型后给予雷帕霉素治疗）;另选择10只Wistar雄性大鼠作为正常对照组。分别在4周、8周后检测各组肾组织细胞凋亡情况,NF-κB,TNF-α的表达水平以及血脂、血糖水平。结果：模型制作后4周、8周,与正常对照组和DMR组比较,DM组大鼠肾组织细胞凋亡数[RCA,4周（0.217±0.031）、（0.272±0.031）比（0.545±0.031）、8周（0.358±0.031）、（0.350±0.031）比（0.811±0.031）]均明显增多,NF-κBp65[OD：4周（0.160±0.027）、（0.131±0.027）比（0.411±0.027）、8周（0.232±0.027）、（0.275±0.027）比（0.634±0.027）]、TNF-α[OD：4周（0.242±0.027）、（0.275±0.027）比（0.617±0.027）、8周（0.385±0.027）、（0.342±0.027）比（0.912±0.027）]表达均明显升高（P均〈0.01）。相关分析显示,肾组织NF-κBp65与TNF-α,RCA与TNF-α,NF-κBp65均呈正相关关系（r=0.956,0.953,0.886,P均〈0.01）。结论：糖尿病病大鼠的肾细胞凋亡显著增加,雷帕霉素干预组肾细胞凋亡显著减少,NF-κB、TNF-α表达显著增加,其保护作用可能是NF-κB、TNF-α阻滞细胞的凋亡。