神经母细胞瘤自然退化和诱导分化的研究进展

近对年来,神经母细胞瘤发病的分子机制的研究取得很大进展,治疗方法亦有许多改进,但临床疗效并无多大提高。然而,神经母细胞瘤的自然退化（spontaneousregression）这一奇特现象却总在吸引着人们关注。神经母细胞瘤被认为是最有希望用以揭示肿瘤逆转自然过程的肿瘤,有助于最终采取措施抑制其恶性进程。1．神经母细胞瘤的自然退化肿瘤的自然退化是指在极少甚至无系统治疗的情况下肿瘤自行缩小乃至消失的现象。在人类肿瘤中,神经母细胞瘤的自然退化最多。死于其他原因的成熟胎儿或新生儿的尸检中,在显微镜下发现某些个体神经母细胞结节…     

神经母细胞瘤的分化诱导剂研究现状

神经母细胞瘤 (ＮＢ)是儿童期最常见的起源于交感神经系统的颅外恶性实体肿瘤。虽然在应用大剂量化疗和全身照射后可达到骨髓缓解 ,延长了患儿的长期生存率 ,但ＮＢ的预后仍很差。只有少部分ＮＢ可自发地或由药物诱导消退或分化成良性的神经节细胞瘤。ＮＢ可根据其播散和分化的程度进行分类 :长期生存患儿中 90 .0 %肿瘤有较高分化 ,属于Ⅰ和Ⅱ期 ,只有 10 .0 %肿瘤分化较差 ,属于Ⅲ和Ⅳ期[1] 。由于ＮＢ具有自行消退逆转的独特生物学特性 ,所以为ＮＢ分化诱导疗法提供了理论依据。分化诱导是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂作用下 ,重新…     

Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的本研究旨在研究神经母细胞瘤Wnt-5a基因的表达,并探讨其与肿瘤的临床分期、病理分型及对化疗的反应等的关系。方法选择2003年至2008年住院治疗的77例神经母细胞瘤病例进行研究,其中恶性神经母细胞瘤病例（43例）和节细胞性神经母细胞瘤病例（19例）为实验组,良性神经节细胞瘤病例（15例）为对照组。采用蛋白质免疫印迹杂交（Western blotting）方法检测肿瘤组织中Wnt-5a基因的表达。结果与对照组[光密度值（4．79±0．75）×10^5]相比,Wnt～5a基因在实验组中的表达[1、2、3、4和4s期的光密度值分别为（2．87±0．43）×10^5、（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5、（1．73±0．11）×10^5]明显下调（P〈0．01）。在实验组中,Wnt-5a基因在3、4和4S期的表达[光密度值分别为（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5、（1．73±0．11）×10^5]显著低于1、2期[光密度值为（2．87±0．43）×10^5,P〈0．01）];4期病例中,Wnt－5a基因在神经母细胞瘤中的表达低于节细胞性神经母细胞瘤（P〈0．05）。术前化疗的3、4期病例Wnt－5a基因的表达[光密度值分别为（2．13±0．35）×10^5、（2．07±0．44）×10^5]显著低于良性对照组[光密度值为（4．79±0．75）×10^5,P〈0．01）],也低于未予化疗的1、2期病例[光密度值为（2．87±0．44）×10^5,P〈0．01）]。结论Wnt-5a基因的表达与肿瘤的临床分期和恶性侵袭程度呈负相关。     

TrkA基因在神经母细胞瘤增殖及形态分化中的作用

目的 观察酪氨酸激酶受体A(TrkA)基因抑制神经母细胞瘤生长、诱导其分化的可行性。方法 利用脂质体转染法将TrkA cDNA重组质粒转染入人神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞系中,应用RT-PCR技术鉴定转染后基因的表达,比较转染前后SH-SY5Y细胞的增殖率及细胞的分化程度。结果 成功转染TrkA基因并在SH-SY5Y细胞中稳定表达,转染后SH-SY5Y细胞的增殖率较亲代细胞明显下降(P<0.01),细胞的分化程度增加(P<0.01)。结论 TrkA基因的高表达能有效抑制神经母细胞瘤的生长,并能促其向良性分化,为神经母细胞瘤的基因治疗提供理论依据。     

DKK-1在神经母细胞瘤中的表达及其意义

目的 研究Dickkopf-1 (DKK-1)在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及其意义.方法 运用免疫组织化学方法检测DKK-1在42例NB,19例神经节细胞瘤及15例正常肾上腺组织中的表达水平.运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting检测DKK-1在分化程度依次增高的3株NB细胞株IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫组织化学研究发现DKK-1在正常肾上腺组织中呈强阳性表达(免疫组织化学评分为1.912±0.047),在神经节细胞瘤组织中呈弱阳性表达(免疫组织化学评分为1.214±0.095),在NB组织中呈阴性表达(免疫组织化学评分为0.371±0.293).神经节细胞瘤和NB中DKK-1的表达量分别与正常对照组相比较,差异均有统计学意义(all P＜0.001).在3种组织中,不同组间DKK-1表达量的差异有统计学意义(F=211.375,P＜0.001).qRT-PCR研究发现DKK-1在IMR-3、SK-N-SH和SH-SY5Y中平均相对表达量分别为(25.323±8.651)％、(58.852±10.223)％和(75.385±9.381)％,均呈低表达水平,不同组间DKK-1表达差异有统计学意义(F=57.628,P＜0.001).Western blotting研究发现在IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中DKK-1蛋白表达相对灰度值依次增高,分别为0.093±0.016、0.397±0.051和0.411±0.062,不同组间蛋白表达差异有统计学意义(F=156.783,P＜0.001).结论 DKK-1在NB组织及细胞株中均呈低表达水平,且DKK-1在NB中的表达可能与该肿瘤的分化密切相关,提示其或许可以作为一个特殊的分子标记物用于NB的早期诊断及预后监测.     

神经母细胞瘤细胞的分化逆转与癌基因表达调控

神经母细胞瘤是小儿常见的实体肿瘤，恶性度极高，自行消退与体外诱导后分化成熟是其特点之一。分化疗法是临床治疗的一个新方向。     

神经母细胞瘤细胞凋亡的调控因素

细胞凋亡与肿瘤发生、发展的关系日益受到重视。相关研究方兴未艾。本文就细胞凋亡的概念、与肿瘤的关系和细胞凋亡相关基因Ｐ５３、Ｂｃｌ－２、Ｃ－ｍｙｃ，基因ｔ－ＴＧ、ＩＧＦ等以及其他因素，对小儿神经母细胞瘤细胞凋亡的调控作用进行了归纳综合。     

胚胎肾上腺分化过程视黄酸受体表达及神经母细胞瘤发生的关系探讨

目的 探讨视黄酸受体在胚胎肾上腺分化过程中的表达及其对神经母细胞瘤发生的可能作用机制。方法 以原位杂交方法测定20例胎儿肾上腺和5例神经母细胞瘤的视黄酸受体RARα，β，γ和RXRα，β，γ，并以阳性细胞光密度值作统计分析。结果 视黄酸受体阳性集中显示于神经母细胞结节，随胎龄增加表达增强，胚胎19周后表达减弱；在分化不良型神经母细胞瘤中的视黄酸受体表达强度明显高于分化良好型。结论 视黄酸受体参与了肾上腺神经母细胞的分化过程，与神经母细胞瘤的分化程度密切相关。     

ATRA诱导神经母细胞瘤SMS-KCNR分化与N-myc癌基因表达

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导神经母细胞瘤（ＮＢ）细胞分化时Ｎ－ｍｙｃ癌基因的变化以及与时间的关系。方法 用不同浓度的ＡＴＲＡ处理ＮＢ细胞系ＳＭＳ－ＫＣＮＲ,用相差显微镜观察细胞形态学改变。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测ＮＢ细胞分化前后Ｎ－ｍｙｃ癌基因的ｍＲＮＡ表达水平。结果 用１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的ＡＴＲＡ处理２４～１２０ｈ,ＮＢ细胞的胞体减小,神经突起延长。在加ＡＴＲＡ２４ｈ后,     

神经母细胞瘤细胞凋亡的调控因素

细胞凋亡与肿瘤发生、发展的关系日益受到重视，相关研究方兴未艾。本文就细胞凋亡的概念、与肿瘤的关系和细胞凋亡相关基因Ｐ５３、Ｂｃｌ－２、Ｃ－ｍｙｃ基固ｔ－ＴＧ、ＩＧＦ等以及其他因素，对小儿神经母细胞瘤细胞凋亡的调控作用进行了归纳综合。     

miR-21抑制表达稳定转染SK-N-SH1381中差异表达mRNA筛选及验证

目的 筛查miR-21抑制表达的人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1381) mRNA表达谱,寻找miR-21潜在下游靶基因,以进一步深入探讨miR-21及其参与的通路在肿瘤发生发展中的作用.方法 采用Agilent Human Gene Expression Chip技术筛选了慢病毒转染稳定抑制miR-21表达的入神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1381)和其配对的慢病毒转染无义序列的入神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1v3-nc),运用生物信息技术,预测miR-21靶基因、基因功能富集,结合相关文献检索,筛选出候选基因,并在细胞水平通过荧光定量PCR验证芯片结果.结果 基因表达谱芯片共筛选出4 985个差异在2倍以上的mRNA(P＜0.05),其中上调表达的基因2 734个,下调表达的基因2 251个.基于microRNA的作用,我们仅选择其中上调的2 734个基因为miR-21可能靶基因,与生物信息学软件分析预测出的398个潜在靶基因进行Venn分析,共获取64个候选潜在靶基因.进一步通过生物信息学分析与文献检索,挑选出6个可能靶基因,分别为EVA1A、TOM1 L2、RGMA、LINC-PINT、NACC2及RPAP3.细胞水平荧光定量PCR结果均与芯片结果一致,EVA1A、TOM1 L2是其中差异表达倍数变化最大的2个候选基因.结论 结合芯片技术和生物信息学分析,在miR-21抑制表达的神经母细胞瘤细胞株中,筛选出6个miR-21可能的下游靶基因,分别为EVA1A、TOM1L2、RGMA、NACC2、RPAP3及LINC-PINT.其中EVA1A、TOM1L2是其中差异表达倍数变化最大的2个候选基因,进一步后续研究,探讨其在神经母细胞瘤发生发展中的作用.     

13-顺维甲酸体外诱导神经母细胞瘤干细胞分化的体外实验

目的 体外观察并鉴定13-顺维甲酸诱导神经母细胞瘤（NB）干细胞的分化作用,为临床用维甲酸治疗NB微小残留病灶提供实验依据。方法 取14例伴骨髓转移的Ⅳ期NB患儿的骨髓液标本,分离出NB细胞,将原代肿瘤细胞接种于无血清干细胞培养基中悬浮培养;在含5 μmol·L-1 13-顺维甲酸的分化培养基中培养神经球细胞,观察细胞的形态变化;RT-PCR法检测神经球细胞诱导前、诱导3和9 d Oct-4表达水平的改变;利用细胞免疫荧光技术比较诱导前及诱导9 d神经球细胞nestin表达的差异。结果 14例骨髓标本中,4例分离到原代NB细胞。无血清培养基中培养4~6 d后,可见原代悬浮神经球形成,传代后成球细胞能再次分裂增殖为神经球。神经球细胞在血清培养基中呈贴壁生长,呈三角形或星形,添加5 μmol·L-1 13-顺维甲酸后,细胞生长速度降低,形态发生明显改变。RT-PCR法检测结果显示,13-顺维甲酸诱导9 d后,神经球细胞Oct-4表达水平逐渐降低;细胞免疫荧光显示诱导9 d后神经球细胞nestin表达减弱。结论 13-顺维甲酸能有效诱导NB干细胞分化。     

雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株生长抑制及诱导凋亡的研究

目的 研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,并设立对照组,以CCK-8检测细胞生长活性,流式细胞法(FCM)检测细胞周期,DNA梯度条带(DNA Ladder)和罗丹明123-碘化丙啶(Rhodamine 123/PI)染色法分析细胞凋亡.结果 雷帕霉素处理后,神经母细胞瘤细胞呈浓度依赖性生长抑制.20μM雷帕霉素处理12 h后,细胞周期出现G2/M期、S期阻滞,G2/M期(24.22±2.89)%、S期(22.05±0.96)%的细胞百分比明显高于对照组.罗丹明123-碘化丙啶检测细胞凋亡率(54.35±5.39)%也明显高于对照组,并有明显的凋亡条带出现.结论 雷帕霉素具有抑制神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长、诱导其凋亡的作用.     

自杀基因治疗神经母细胞瘤的实验研究

目的 探讨自杀基因疗法对神经母细胞瘤的作用,为临床应用打下基础。方法 利用含胸苷激酶基因（ｔｋ）与潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｙ）的融合基因的真核表达载体及仅含ｈｙ的空载体,以脂质体为介导,将这两种质粒分别转染神经母细胞瘤细胞系ＳＨ－ＳＹ５Ｙ。利用潮霉素药物敏感实验筛选ＳＨ－ＳＹ５Ｙ,而不同浓度的丙氧鸟苷（ＧＣＶ）分别作用于ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ－ｈｙｔｋ及ＳＨ－ＳＹ５Ｙ－ｈｙ。结果 利用潮霉     

儿童神经母细胞瘤中ALK基因突变的研究

目的：探讨中国儿童神经母细胞瘤（NB）中间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因的突变情况。方法：从22例石蜡包埋的NB肿瘤组织中提取基因组DNA,通过PCR-DNA直接测序技术分析儿童NB肿瘤组织中ALK突变热点区域第20~26号外显子的突变情况。结果：22 例儿童NB中,有10例（46%）在ALK第21号外显子上存在已知同义突变C3375A（Gly1125Gly）,等位基因频率为27%;1例（5%）在ALK第23号外显子上发现一个新的同义突变C3586T（Leu1196Leu）。ALK突变C3375A的发生频率在NB患儿的年龄、性别、肿瘤分化程度和是否转移方面差异无统计学意义（P＞0.05）。在其他5个ALK外显子中未发现突变。结论：采用PCR-DNA测序技术发现了ALK一个新的同义突变C3586T,并证实了儿童ALK存在已知突变C3375A,其发生率不受NB患儿临床特征的影响。     

WAF1基因表达水平与神经母细胞瘤发生发展的相关性研究

目的 探讨ＷＡＦ１表达水平对神经母细胞瘤发生发展的影响。方法 应用免疫组化技术对２０例ＮＢ标本进行了检测。结果 １８例可见ＷＡＦ１表达阳性细胞,表达指数０－．４５．６％,神经节神经母细胞瘤表达指数显著高于ＮＢ,预后好型表达指数显著高于预后差型。有丝分裂核碎裂指数,瘤体直径与之呈负相关,术后存活时间与之呈正相关。