反相离子对高效液相色谱法测定血浆吗啡及其代谢物M3G的含量

目的:建立反相离子对高效液相色谱法测定血浆吗啡及其代谢物3-葡萄糖醛酸吗啡(M3G)的浓度。方法:血浆样品以乙酸乙酯提取,以纳洛酮为内标。应用HPLC-UV方法测定吗啡浓度,分析柱DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm),流动相为0.01mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(含0.5mmol·L-1的十二烷基磺酸钠)-乙腈(71:29),检测波长210nm,流速0.65ml·min1。血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解测定其代谢物含量。结果:吗啡标准曲线线性范围宽(10-4000μg·L-1),线性关系良好;最低检测限10μg·L-1;高、中、低浓度的回收率在85·3%以上。血浆M3G在250-8250μg·L-1浓度范围内与水解增加吗啡浓度呈线性关系。结论:本法简单,快速,血浆中杂质不干扰样品的测定,满足生物样品分析要求。     

高效液相色谱法测定人血浆中那格列奈的含量

目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中那格列奈含量。方法:使用固相C18提取柱,将那格列奈和双氯芬酸钠(内标)从血浆中提取,在ODS 5μm,4.6mm×150mm柱上,以流动相0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-乙腈(16:10;用1 mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH 6.3)进行分离,流速1 mL·min-1,210nm波长检测。结果:血药浓度线性范围0.05-20μg·mL-1(r=0.9996),血浆中最低检测浓度0.05 μg·mL-1,萃取回收率在82.4％-92.2％,相对回收率98.4％-99.7％,日内及日间RSD分别为4.3％-8.2％和4.0％-8.6％。结论:本法简便、准确,精密度高,重现性好,可应用于那格列奈人体药代动力学研究和生物等效性研究。     

HPLC法同时测定健康人血浆中贝那普利及其代谢物贝那普利拉的浓度

目的建立一种灵敏度较高的高效液相色谱法,可同时测定健康人血浆中贝那普利及其代谢物贝那普利拉的浓度。方法流动相用0.02mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(7∶3)(pH2.6),用取梯度洗脱法,血浆样本用C8固相小柱萃取,紫外检测波长为237nm。结果贝那普利:在0.06～2μg·mL-1,线性关系良好;最低检测限为0.03μg·mL-1;日内RSD≤6.3%,日间RSD≤4.0%;提取回收率在73%～78.5%(n=5),相对回收率在93.2%～101.3%。贝那普利拉:在0.06～2μg·mL-1,线性关系良好;最低检测限为0.03μg·mL-1;日内RSD≤8.5%,日间RSD≤6.0%;提取回收率在67.7%～74.1%(n=5),相对回收率在95.6%～103.2%。结论本方法灵敏度高、重现性好,可用于贝那普利人体生物利用度和药代动力学研究。     

HPLC法同时测定血浆地西泮及其代谢物浓度

目的 :建立同时测定血浆中地西泮及其代谢物浓度的方法。方法 :选用ZORBAXRP C18柱 (15 0mm× 4 6mm ,5 μm) ;甲醇 - 2 5mmol·L-1醋酸铵溶液 (6 0∶4 0 ,V/V)作流动相 ;流速 0 8mL·min-1;检测波长 2 30nm。取血浆样品 0 5mL ,在碱性条件下用二氯甲烷 -正己烷提取 ,HPLC检测。结果 :本法对替马西泮、去甲地西泮和地西泮 3种物质的最低检测限均为 2 μg·L-1,线性范围为 10～ 15 0 0 μg·L-1;奥沙西泮的最低检测限为 5 μg·L-1,线性范围为 2 0～ 15 0 0 μg·L-1。回收率均接近 10 0 % ,日内、日间RSD <5 %。结论 :本法能同时测定血浆中地西泮及其代谢物浓度 ,具有重现性好 ,灵敏、可靠 ,可用于地西泮中毒的监测     

HPLC法测定大鼠血、脑组织和脑脊液中尼莫地平的浓度

目的:建立大鼠血、脑组织和脑脊液(CSF)中尼莫地平(NM)浓度测定的HPLC法。方法:血和脑组织样品采用正己烷-乙醚(1:1)萃取后行HPLC法测定,CSF样品直接测定。色谱柱:DiamonsilTM C18(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-0.05 mol·L-1乙酸铵(60:40或65:35,V/V),流速1.0 mL·min-1;检测波长358 nm;柱温25℃。大鼠静注NM溶液2 mg·kg-1,用所建RP-HPLC法测定3种生物样品的浓度。结果:血、脑组织和CSF样品分别在20-1000μg·L-1,25-3500 ng·g-1和10-150μg·L-1浓度范围内线性良好,最低检测浓度分别为15μg·L-1,15 ng·g-1和8μg·L-1,方法回收率为98.71％-103.86％,日内及日间PSD<6％,血和脑组织中NM的萃取回收率均>80％。大鼠静注NM后,血药数据符合二室开放模型,各脑组织药物浓度相近,均于2 min达峰值。CSF中NM浓度很低。结论:该方法适于大鼠体内药动学研究。     

反相高效液相色谱法测定血浆中文拉法辛浓度

目的 :建立高效液相色谱法检测人血浆中文拉法辛浓度。方法 :血浆样品经石油醚 乙醚 (2∶1 )提取后 ,有机相再用50mmol·L- 1盐酸反萃取并浓缩进样。色谱柱为氰基柱 (2 50× 4.6mm ,5μm) ,乙腈 -0 .1mol·L- 1NH4 H2 PO4 (2 5∶75)为流动相 ,UV检测波长 2 2 9nm。结果 :文拉法辛血浆最低检测浓度 1 0 μg·L- 1,线性范围 2 5～ 80 0 μg·L- 1,萃取回收率 75.5%～79.3%,加样回收率 97.4%～ 1 0 1 .2 %,日内RSD 4.87%～ 6 .39%,日间RSD 7.55%～ 1 0 .80 %。结论 :该法准确可靠 ,已用于临床患者文拉法辛血药浓度测定。     

UPLC-MS/MS法测定类风湿关节炎患者血浆中艾瑞昔布及其羟基/羧基代谢物浓度

摘要：目的:建立血浆中艾瑞昔布及其羟基代谢物（M1）、羧基代谢物（M2）超高效液相色谱-串联质谱法测定方法,并用于服用艾瑞昔布片的类风湿关节炎（RA）患者稳态血药谷浓度测定。方法:以Waters ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm, 1.7μm）色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源（ESI）,正离子模式检测,内标为塞来昔布,多反应监测参数设置如下:m/z 370.10→236.10（艾瑞昔布）,m/z 386.10→236.00（M1）,m/z 400.20→236.00（M2）,m/z 382.09→281.31（内标）;使用该方法检测服用艾瑞昔布片的RA患者艾瑞昔布谷浓度及M1、M2血浓度。结果:血浆中艾瑞昔布、M1及M2的线性范围分别为1～100 ng·ml-1（r=0.998 5）,2～200 ng·ml-1（r=0.999 6）,20～2 000 ng·ml-1（r=0.999 3）。3种化合物的回收率为87.07%～106.07%。共测定67例服用艾瑞昔布片患者,艾瑞昔布谷浓度为1.02～98.35 ng·ml-1,M1及M2血浓度分别为2.15～57.27 ng·ml-1,20.65～335.30 ng·ml-1。结论:该方法简便可靠,适用于口服艾瑞昔布片RA患者的监测。     

HPLC法测定复方氨酚烷胺胶囊中2种成分的含量

目的建立高效液相色谱法测定复方氨酚烷胺胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量.方法采用υp-ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(4060),流速1.0 ml·min-1,检测波长280nm,灵敏度0.1 AUFS,以外标法定量.结果对乙酰氨基酚线性范围80～480μg·ml-1,回收率100.5%;咖啡因线性范围4.8～28.8μg·ml-1,回收率101.2%.结论操作简便,方法准确、快捷,可用于质量控制.     

HPLC／MS测定人血浆中盐酸班布特罗及其代谢物特布他林的浓度

目的 :用高效液相 /质谱联用法测定人血浆中盐酸班布特罗及其代谢物特布他林的浓度。方法 :液相 :采用SupelcodiscoveryC18色谱柱 (5 μm ,2 5 0mm× 4 6mm) ;柱温 40℃ ;流动相为甲醇 -醋酸铵溶液 (0 0 0 7mol·L-1) (2 0∶80 ) (并用冰醋酸调 pH =4 8) ,流速 0 6mL·min-1,进样量 6 0 μL ;质谱 :大气压化学电离源 (APCI) ,选择性监测 (SIR)质荷比 (m/z)分别为 2 2 6 (特布他林 ) ,2 6 0 (内标 ) ,36 8(班布特罗 )带正电荷的分子离子峰定量。样品用固相萃取小柱提取处理。结果 :班布特罗线性范围 0 12 5～ 16 μg·L-1,最低检测浓度为 0 0 5 μg·L-1。特布他林线性范围 0 312 5～ 40 μg·L-1,最低检测浓度为 0 0 5 μg·L-1。班布特罗和特布他林的萃取回收率均在 90 %以上 ,日内、日间的RSD皆小于 15 %。结论 :适用于临床上测定血浆中盐酸班布特罗及其代谢物特布他林的浓度及药动学的研究     

RP-HPLC法测定人血浆中扎来普隆浓度

目的:建立测定人血浆中扎来普隆浓度的反相高效液相色谱法。方法:血浆样品中加入内标β-萘酚后用乙酸乙酯提取。固定相为Supelcosil C8色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为0.04 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(6:5,含三乙胺0.3％,磷酸调至pH 5.0),流速为1.0 mL·min-1。荧光检测:荧光激发波长345nm,发射波长460 nm。结果:本方法线性范围为1-128 ng·mL-1(r=0.9995),最低检测浓度为0.2 ng·mL-1,提取回收率为87.4％-91.9％,方法回收率为98.8％-100.8％,日内RSD为2.9％-5.4％,日间RSD为3.8％-13.3％。结论:本法简便、准确,适用于扎来普隆药代动力学的研究。     

HPLC法同时测定曲马氨酚片中盐酸曲马多和对乙酰氨基酚的含量

目的建立同时测定曲马氨酚片中盐酸曲马多和对乙酰氨基酚含量的HPLC测定法。方法色谱柱为DiamasilC18柱 ,流动相为乙腈 0 0 0 5mol·L-1NH4H2 PO4(含 0 0 1mol·L-1三乙胺 ,pH3 2 ,V∶V =1∶4 3 ) ,检测波长为 2 1 5nm ,柱温为 3 5℃ ,流速 :1 0mL·min-1,进样 1 0 μL。结果盐酸曲马多和对乙酰氨基酚分别在质量浓度 9 92～ 49 60mg·L-1和 85 3 4～ 42 6 70mg·L-1内呈良好的线性相关性 ,相关系数r分别为 0 9999和0 9998。方法精密度RSD分别为 0 7%和 0 1 % (n=6) ,平均回收率分别为 1 0 0 1 %和 1 0 0 0 % ,方法RSD分别为 0 1 %和 0 1 % (n=9)。结论可同时测定盐酸曲马多和对乙酰氨基酚的含量 ,可用于多批样品的质量控制。     

人血浆中非洛地平的LC-MS测定法及其在药动学研究中的应用

目的建立人血浆中非洛地平浓度的液相色谱-质谱联用的测定方法。方法以尼莫地平为内标,血浆样品经100μL1.0mol·L-1NaOH溶液碱化,采用乙醚-正己烷(4∶1)萃取后进行LC-MS分析。色谱柱为C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸(84∶16),流速为0.8mL·min-1;离子源为电喷雾离子化源(ESI源),正离子方式检测;扫描方式为选择离子监测(SIM),用于定量分析的离子分别为m/z406(非洛地平)和m/z441(尼莫地平)。结果非洛地平在0.2～20.0μg·L-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9948),定量下限为0.2μg·L-1,低、中、高浓度的提取回收率均大于81.9%,日内、日间精密度(RSD)均小于14.9%。结论该方法准确可靠,灵敏度高,适用于血浆中非洛地平浓度的测定及其药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定健康人体内阿德福韦浓度及其药动学研究(英文)

目的建立人血浆和尿样中阿德福韦浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法。方法10名健康受试者单剂量口服阿德福韦10mg。于服药前(0h)和服药后抽取静脉血及留取尿样。采用BDS-Phenyl column(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.35mol·L-1冰醋酸梯度洗脱,流速为0.3mL.min-1;电喷雾离子化正离子选择性反应检测;检测离子为m/z274.1→162.1(阿德福韦),m/z254.1→135.0(喷昔洛韦,内标)。结果LC-MS/MS测定阿德福韦血浆样品线性范围为0.50～200μg.L-1,尿样线性范围为50～20000μg·L-1,线性关系良好。血浆样品分析的回收率、精密度和准确度均良好,定量限为0.50μg·L-1。主要药动学参数为:ρmax(24±s4)μg·L-1,tmax(1.0±0.6)h,AUC0～t(278±45)h.μg·L-1,AUC0～∞(285±45)h.μg·L-1,t1/2(8.8±1.6)h,CL(F)(36±6)L.h-1,Vd(F)(456±136)L,0～48h的尿累计排泄量为(48±12)%。结论建立的LC-MS/MS测定法专属性强、灵敏度适宜,可以用于阿德福韦的药动学研究。     

RP-HPLC法测定注射用苦参素的含量

目的　建立注射用苦参素含量的测定方法。方法　采用RP -HPLC法 ,使用VP -ODS柱 (2 5 0mm× 4 6mm ;10 0A) ,以 0 0 2mol·L-1磷酸二氢钾溶液 (用 1mol·L-1磷酸溶液调pH至 3 5 ) -乙腈 (89∶11)为流动相 ,流速为 1 0ml·min-1,在 2 2 0nm波长处 ,以外标法测定。结果　苦参素在 72 72～ 16 9 6 8μg·ml-1浓度范围内呈良好线性 (r =0 9999) ,平均回收率为 99 31% ,RSD为 0 82 % (n =9)。结论　该法快速简便 ,分离度好 ,结果准确可靠     

猪胆酸钠对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)作用机理的初步探讨

观察了猪胆酸钠和维甲酸对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)体外诱导分化过程中细胞膜脂肪酸的组成、细胞蛋白激酶C(PKC)活性及c-myc癌基因表达的变化,初步探讨猪胆酸钠对HL-60细胞作用的分子机理,结果表明,经100～400μg·ml~(-1)猪胆酸钠处理3d的HL-60细胞,其PKC活性和c-myc表达与对照组比较均明显下调;1μmol·L~(-1)维甲酸诱导3 d的细胞,PKC活性未见明显变化,而癌基因c-myc表达则降至对照组的17％;无论是猪胆酸钠(400 μg·L~(-1))还是维甲酸(1μmol·L~(-1))诱导3d的HL-60细胞,其细胞膜脂肪酸组成均无明显改变。     

HPLC法测定氨苄西林丙磺舒胶囊有关物质

目的建立氨苄西林丙磺舒胶囊有关物质的HPLC测定方法。方法采用Waters-C18柱(150mm×4.6mm,5μm,W03061M029),流动相A为12%醋酸溶液-0.2mol.L-1磷酸二氢钾溶液-乙腈-水(0.5∶50∶50∶900),流动相B为12%醋酸溶液-0.2mol.L-1磷酸二氢钾溶液-乙腈-水(0.5∶50∶400∶550),流速:1.0mL.min-1;检测波长为230nm。结果在选定条件下,有关物质与氨苄西林、丙磺舒二主药完全分离,氨苄西林在0.1~1.6mg.mL-1、丙磺舒在0.028~0.448mg.mL-1范围内线性关系良好。结论本法简便、准确,重现性好,可用于氨苄西林丙磺舒胶囊有关物质的检测。     

阿奇霉素滴眼液有关物质检查方法的研究

目的建立高效液相色谱法测定阿奇霉素有关物质的方法。方法采用硅胶表面经杂化处理的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Capcell pak MGⅡ(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温30℃,以乙腈-磷酸盐缓冲液(0.05 mol.L-1磷酸氢二钾溶液,用20%磷酸调节pH至8.2)(58∶42)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为210nm。结果阿奇霉素的检测限及定量限分别为300、750 ng.mL-1;阿奇霉素与杂质峰及各杂质峰之间能够有效分离;阿奇霉素在60.2～180.6μg.mL-1范围内线性良好;供试品溶液在8 h内稳定性良好。结论本方法科学、简单、准确,适用于阿奇霉素滴眼液的有关物质检查。     

LC/MS法测定犬血浆中的水飞蓟宾浓度

目的建立犬血浆中水飞蓟宾浓度的LC-MS测定方法。方法取犬血浆400μl,加200μl磷酸氢二钠(0.1mol.L-1)和50μl内标萘酚(10mg·mL-1),3ml乙醚萃取后取上清液挥干,100μl甲醇复溶,离心并取10μl进行LC-MS测定。色谱条件:色谱柱为ODS-C18柱(2.1mm×150mm,5μm,Phenomenex,USA),流动相为甲醇:2%乙酸水=55∶45,流速为0.2ml.min-1;质谱条件:电喷雾离子化(ESI)方式,以选择性负离子方式检测,水飞蓟宾和内标萘酚的选择检测离子质荷比分别为m/z481.00([M-H]-)和m/z142.92([M-H]-)。结果水飞蓟宾的线性范围为25～8000μg.L-1,定量下限(LOQ)为25μg.L-1。准确度、精密度及回收率均符合有关要求。结论本方法专属性强,检测限低,灵敏度高,线性关系良好,方法简便快捷、经济,适用于水飞蓟宾药代及毒代动力学研究。     

HPLC测定大鼠血浆中的莽草酸

目的 采用HPLC法测定大鼠血浆中莽草酸的含量.方法 大鼠血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,采用HPLC法测定血浆中莽草酸的含量.色谱柱为WondaCract ODS-2 (250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(3 mmol·L-1四庚基溴化铵)-5mmol· L-1磷酸(用1 mol· L-1 NaOH调pH5.8)(60∶40),检测波长220 nm,流速0.8 mL· min-1,柱温35℃.结果 血浆中莽草酸的线性范围为0.525 ～ 10.50 μg· mL-(r=0.9998),平均回收率为97.7％ ～ 101.6％,日内、日间RSD均＜15％.结论 所用方法简便、灵敏、结果准确,适用于测定生物样品中莽草酸的浓度.     

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。