系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞与调节性T细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的变化.方法 选取32例SLE活动期患者作为SLE活动组、30例SLE稳定期患者作为SLE稳定组及25名健康者作为对照组,采用流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 SLE活动组外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质(1.01±0.22)％及mRNA(2.04±0.63)表达水平显著高于SLE稳定组(0.48±0.16)％、(1.12±0.34)及健康对照组(0.41±0.12)％、1(P＜0.01),但SLE稳定组与健康者对照组差异无统计学意义(P＞0.05).SLE活动组外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质(2.36±0.54)％及mRNA(0.42±0.16)表达水平显著低于SLE稳定组(4.34±0.95)％、(0.87±0.28)及健康对照组(5.09±1.17)％、 1(P＜0.01),SLE稳定组又低于健康对照组(P＜0.05).结论 SLE患者外周血中可能存在Th17/调节性T细胞的失衡,且失衡程度可能与病情活动性相关.     

调节性T细胞与系统性红斑狼疮

胸腺来源的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在外周免疫耐受机制中发挥着重要作用。研究者普遍认为,高表达的CD25分子是调节性T细胞的可靠标记,而Foxp3则是CD4^＋调节性T细胞的最特异胞内分子标记。寻找合适的表面分子标记物将是对调节性T细胞进行深入研究的关键步骤。近期的一些研究表明,活动期系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞的数量降低和,或功能缺失。调节性T细胞的这种变化可能为系统性红斑狼疮的治疗提供新思路。     

系统性红斑狼疮患者骨髓间质干细胞对B淋巴细胞免疫抑制作用的初步研究

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓间质干细胞（MSCs）体外对B淋巴细胞的免疫调节作用是否存在异常。方法：采用直接贴壁法分离培养正常人及SLE患者MSCs。免疫磁珠法分选正常人外周血B淋巴细胞,与MSCs共培养,流式细胞术检测B细胞凋亡及表面标志表达,3H掺入法检测B细胞增殖,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中免疫球蛋白IgG、IgM和IgA水平。结果：①B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞增殖（4307±308）cpm较单纯B细胞培养组（7059±346）cpm降低（P〈0.05）;②B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞凋亡率（14±7）%低于单纯B细胞培养组（25±8）%（P〈0.05）;③B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞表面CD86表达率（53±5）%较单纯B细胞培养组（66±10）%低（P〈0.05）;④与MSCs共培养后,B细胞分泌免疫球蛋白IgG、IgM和IgA较单纯B细胞培养显著减少（P〈0.05）;⑤B细胞＋狼疮MSCs共培养组与B细胞＋正常MSCs共培养组比较,B细胞增殖、凋亡、CD86表达和Ig分泌两组间差异无统计学意义。结论：MSCs在体外对B细胞有抑制作用,SLE患者骨髓MSCs与正常MSCs相比,对B细胞的表面刺激分子表达、增殖、Ig分泌有相似的抑制作用。     

系统性红斑狼疮骨髓T细胞活化及其与病情活动的相关性分析

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓T淋巴细胞的活化状态及多种活化的T细胞亚群与疾病活动指标之间的相关性。方法 SLE患者11例（其中活动期6例，非活动期5例）和健康对照8名。应用流式细胞术比较活动期和非活动期SLE患者骨髓T细胞CD25、人类白细胞抗原（HLA）-DR的表达。用直线相关分析活化T细胞亚群与SLE疾病活动性评分（SLEDAI）、尿蛋白定量（24h）、血清补体C3、C4的相关性。结果 活动期SLE、非活动期SLE与正常对照相比骨髓T细胞CD25、HLA—DR的表达，差异均无统计学意义（P〉0．05）。活动期SLE骨髓T细胞HIJA—DR^＋、CD4^＋HLA—DR^＋、CD8^＋HLA—DR^＋的表达均明显高于正常对照外周血（P〈0．05）。11例SLE患者骨髓CD3^＋HLA—DR^＋、CD4^＋HLA—DR^＋细胞与C3之间均呈显著负相关（r=-0．682，r=-0．675，P均〈0．05）；CD3^＋HLA—DR^＋、CD8^＋-HLA—DR^＋细胞与尿蛋白定量（24h）之间均呈显著正相关（r=-0．712，r=-0．688，P均〈0．05）。活动期SLE骨髓CD3^＋HLA—DR^＋、CD8^＋HLA—DR^＋细胞与C3之间均呈显著负相关（r=-0．943，r=-0．829，P均〈0．05）。结论 活动期SLE患者骨髓T细胞活化明显高于正常对照外周血，且骨髓中活化的T细胞与疾病活动指标相关。     

调节性T细胞与系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种典型的伴有多器官损害的自身免疫性疾病。虽然SLE病因复杂，但是免疫调节功能紊乱在狼疮的发病中起着重要的作用。由于机体的免疫调节功能受损，正常的自身免疫耐受不能维持，因此很多自身抗原成为靶抗原，自身反应性的T、B细胞增加，产生过多的自身抗体，导致器官和组织的损伤。     

脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮患者Th17细胞的调节

目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)体内外对系统性红斑狼疮(SLE)患者CD3+CD8-IL17A+T淋巴细胞及相关细胞因子的调节作用.方法 UC-MSCs移植治疗14例SLE患者,观察移植前后的临床表现及实验窜指标的变化.采用流式细胞术检测各时间点患者外周血CD3+D8-IL17A+T细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆白细胞介素(IL)-6、转化生长因子(TGF)-β、IL-17A、IL-22表达水平.10例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)分别与UC-MSCs按不同比例体外共培养72 h,流式细胞术检测PBMC中CD3+CD8-IL17A+T细胞百分率.采用配对t检验和独立样本t检验.结果 UC-MSCs移植后患者疾病活动指数评分(SLEDAI)在3个月(7.8±1.2,t=2.19)及6个月(6.9±0.9,t=4.2)均显著低于移植前(10.4±0.9,P<0.05);尿蛋白定量(24 h)移植后6个月显著下降[(1489±260)与(2454±322)mg,t=2.6,P<0.05];血清白蛋白水平在移植后1、3、6个月均显著高于移植前(P<0.05),补体C3移植后持续升高.UC-MSCs移植后1个月及6个月,患者外周血CD3+CD8-IL17A+T淋巴细胞百分率显著下降(P<0.05).UC-MSCs与SLE患者PBMC共培养可显著下调CD3+CD8-IL17A+T淋巴细胞百分率(P<0.05),但无剂量依赖性.UC-MSCs移植后患者血浆IL-6、TGF-β、IL-17A、IL-22水平与移植前比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 UC-MSCs移植治疗SLE有效,移植后SLE患者PBMC中CD3+CD8-IL17A+T淋巴细胞水平显著下降.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory effects of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (UC -MSCs) on Th17 cells and related cytokines in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Human UC-MSCs were isolated and expanded and infused into fourteen SLE patients. Clinical changes were evaluated before and after transplantation by SLE disease activity index (SLEDAI), 24-hour urine protein, serum albumin and complement C3. The percentages of CD3 +CD8-IL17A + T cells in peripheral blood were detected by flow cytometry. Concentrations of plasma IL-6, TGF-β, IL-17A, IL-22were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). UC-MSCs and peripheral blood mononindependent samples t-test. Results SLEDAI scores decreased significantly at 3 month (7.8±1.2, t=2.19) and 6 month (6.9±0.9, t=4.2) after UC-MSCs transplantation than pre-transplantation level (10.4±0.9, P< 0.05). Twenty-four-hour proteinuria decreased significantly 6 months after MSCs infusion [(1489±260) mg vs (2454±322) mg, t=2.6, P<0.05]. Meanwhile, serum albumin and complement C3 levels had increased significantly since 1 month after transplantation (P<0.05). The percentages of peripheral blood CD3+CD8-IL17A+T cells decreased obviously in 1 week, 1 month and 6 months after UC-MSCs transplantation (all P<0.05). The coculture of UC-MSCs with PBMC from SLE patients resulted in a statistically significant reduction of CD3+CD8-IL17A+T cells percentage in PBMC (P<0.05), but was not in a dose dependent manner. No change of plasma IL+6, TGF-β, IL-17A and IL-22 levels was observed after UC-MSCs transplantation (P>0.05).Conclusion UC-MSCs transplantation down-regulates the percentages of CD3+CD8-IL17A+T cells in SLE patients, which may be one of the mechanisms for its therapeutic effect in refractory SLE.     

Th17细胞和调节性T细胞在系统性红斑狼疮患者中的研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及联系两者的细胞因子白细胞介素(IL)-6的变化及其与病情活动的相关性,探讨Th17细胞、调节性T细胞在SLE发病机制中的作用.方法 收集103例SLE患者及28名健康者,SLE活动性的判断采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法,其中非活动组(SLEDAI≤9分)患者37例,活动组(SLEDAI＞9分)患者66例.用四色分选流式细胞仪检测外周血Th17细胞、调节性T细胞百分数,用流式细胞仪微球捕获芯片技术(CBA)检测血清IL-6浓度,并分析其与病情活动的相关性.统计学处理采用t检验、秩和检验和Spearman相关分析.结果 ①SLE患者组Th17细胞[(1.2±1.1)%]、IL-6[(35±92)pg/ml]显著高于健康对照组[(0.6±0.4)%、(6±3)pg/ml],而调节性T细胞[(1.6±1.2)%]显著低于健康对照组[(2.6±1.8)%].②SLE活动组Th17细胞[(1.6±1.7)%]显著高于SLE非活动组[(1.0±0.7)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组调节性T细胞[(1.5±1.3)%]显著低于SLE非活动组[(2.1±2.0)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组Th17/调节性T细胞(0.68±0.34)显著高于SLE非活动组(0.24±0.20)与健康对照组(0.13±0.09,P均＜0.05),SLE活动组IL-6[(41±22) pg/ml]显著高于SLE非活动组[(32±28) pg/ml]与健康对照组(P均＜0.05);SLE非活动组与健康对照组之间Th17细胞、调节性T细胞、Th17/调节性T细胞、IL-6差异均无统计学意义(P＞0.05).③Th17细胞百分数与SLEDAI呈正相关,调节性T细胞百分数与SLEDAI呈负相关,Th17/调节性T细胞与SLEDAI呈正相关,IL-6浓度与SLEDAI评分之间呈正相关,Th17细胞与调节性T细胞呈负相关.结论 SLE患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及IL-6浓度较健康对照组显著增高,并与疾病活动性密切相关,说明Th17细胞、调节性T细胞可能在SLE的发生、发展中起重要作用.

Abstract：

Objective To study the changes of Th17 cell, regulatory T cell (Treg) and interleukin (IL)-6 in the peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and their relationship with disease activity. Methods Percentage of Th17 and Treg in the peripheral blood of 103 patients with SLE and 28 healthy volunteers were detected by flow cytometry. The concentration of IL-6 in SLE patients and healthy volunteers was detected by cytometric bead array (CBA). The disease activity of SLE was measured by SLEDAI. SLE patients were divided into two groups: stable SLE (SLEDAI≤ 9, n=37) and active SLE (SLEDAI＞9, n= 66). The change of Th17, Treg, IL -6 and their relationship with disease activity were analyzed. Nonparamentric tests, t -test and spearman correlation were used for statistical analysis. Results The percentage of Th17 cells and the concentration of IL-6 in the peripheral blood in patients with SLE was higher than that in normal controls [respectively for (1.2±1.1)%, (35±92) pg/ml and (0.6±0.4)%, (6±3) pg/ml, P＜0.05]. However, the percentage of Treg in patients with SLE was lower than that in normal controls [respectively for (1.6±1.2)%,(2.6±1.8)%, P＜0.05]. The percentage of Th17, Th17/Treg IL-6 level in active SLE patients was higher than those in inactive SLE and those in normal controls (P＜0.05). However, the percentage of Treg in active SLE was lower than that in stable SLE patients and that in normal controls (P＜ 0.05). The percentage of Th17, Th17/Treg and concentration of IL-6 was positively correlated to disease activity(P＜0.05). But the percentage of Treg had negative correlation with the percentage of Th17 and disease activity (P＜0.05). Conclusion Th17, Treg and serum IL-6 in SLE patients are abnormal and they maybe contribute to the pathogenesis of SLE.     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

骨髓间质干细胞对系统性红斑狼疮患者血管内皮细胞损伤模型修复作用的观察

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)对系统性红斑狼疮(SLE)患者血清刺激后血管内皮细胞中血管假性血友病因子(vWF)和可溶性血栓调理蛋白(sTM)表达的影响,探讨MSCs对SLE血管内皮损伤后修复的可能作用.方法 人脐静脉内皮细胞株ECV-304和活动期SLE患者血清体外共培养12 h,诱导血管内皮细胞损伤,加入MSCs继续共培养3 d.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中vWF和sTM的表达.结果 SLE血清刺激ECV-304细胞后,上清液中vWF和sTM的表达显著高于未刺激组(P＜0.05)[(30.1±6.1)ng/ml vs(10.2±3.1)ng/ml;(2.41±0.16)vs(1.19±0.14)];加入MSCs后,能显著降低vWF的表达(P＜0.05)[(2.41±0.16)vs(2.19±0.14)],但是对sTM值无明显影响(P＞0.05)[(30.1±6.1)ng/ml vs(26.2±6.0)ng/ml].结论 活动期SLE患者血清可损伤血管内皮细胞,MSCs能降低血管内皮细胞中vWF表达,提示可能对SLE血管内皮损伤有一定的修复作用.     

初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4+调节性T细胞CD73表达

目的 研究CD73在初发活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+调节性T细胞的表达情况,探讨其在SLE发病中的作用.方法 采用流式细胞术检测29例初发未经治疗的活动期SLE患者(SLE组)和22例健康人(健康对照组)外周血CD4+CD25+CD73+T细胞百分率及CD4+CD73+、CD4+CDhi25、CD4+CD25+T细胞中叉头状转录因子3(FOXP3)蛋白表达,同时对CD73表达水平与SLE活动指标进行相关性分析.结果 SLE组患者外周血CD4+ CD25+ CD73+T细胞百分率低于健康对照组[(1.25±1. 32)%vs(2.35±1.09)%,P＜0.01].SLE组和健康正常对照组,CD73在C4+ CDhi25T细胞的表达水平[(29.05±12.53)%、(43.35±10.09)%]高于CD4+ CD25+T细胞[(17.48±6.92)%、(29.98±10.39)%,P＜0.001];FOXP3蛋白在CD4+ CD73+ T细胞[(65.36±14.40)%、(63.80±14.05)%]、CD4+ CDhi25 T细胞的表达水平[(67.30±13.04)%、(56.30±9.21)%]明显高于CD4+ CD25+ T细胞[(45.70±12.74)%、(43.98±5.17)%,P＜0.001],在CD4+ CD73-T细胞几乎不表达,而在CD4+ CD73+ T细胞、CD4+ CDhi25 T细胞中的表达差异无统计学意义(P值均大于0.05).CD73在CD4+ CD25+ T细胞的表达水平与SLE疾病活动指数、ESR、C反应蛋白、抗补体C1q、抗核小体抗体均无相关性(P＞0.05).结论 CD73可作为调节性T细胞新的表面标记,其在调节性T细胞中的异常表达可能参与SLE的发病机制.     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞凋亡相关研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡变化及凋亡相关因子的表达.方法 密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养SLE患者及健康人骨髓MSCs,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面Fas、Bcl-2表达水平及Caspase 8活性;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术榆测Fas、Bcl-2、Bax、Bcl-w、Caspase 8及凋亡细胞蛋白酶激活因子(Apaf)-1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色检测胞质细胞色素C表达水平;统计学采用Mann-Whitnev秩和检验.结果 SLE患者BMSCs凋亡明显高于健康对照组[(64±10)%和(14±9)%,U=0,P<0.05];SLE患者BMSCs抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达显著低于健康对照组[(11±9)%和(56±18)%,U=0,P<0.05],其mRNA表达水平同样显著低于健康对照(0.2±0.2和2.4±0.7,U=24.P<0.05);SLE患者BMSCs胞质中细胞色素C表达显著增多[(56±21)%和(16±16)%,U=1,P<0.05].SLE患者BMSCs细胞内Caspase 8活性增强[(49±14)%和(16±12)%,U=0,P<0.05],但基因表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(U=28,P>0.05);SLE患者与健康对照组BMSCs均高表达Fas,差异无统计学意义(U=19,P>0.05).结论 SLE患者BMSCs凋亡增多,可能与Bcl-2表达减少、胞质中细胞色素C表达增多和Caspase 8活性增强,从而激活内源性及外源性凋亡途径相关.

Abstract：

Objective To investigate the apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs)from systemic lupus erythematosus(SLE)patients and the expression of apoptotic molecules.Methods BMSCs were isolated from bone marrow of SLE patients and normal controls by density eentrifugation and adhesive culture in vitro.The apoptosis of BMSCs were evaluated by TUNEL assay.The expressions of Fas.Bcl-2 and the activity of Caspase 8 were detected by flow cytometry.Real-time PCR technique was used to determine the gene expressions of Fas,Bcl-2,Bax,Bcl-w,Caspase 8 and Apaf-1.Meanwhile,cytochrome C was detected by immunocytochemistry.Statistical analysis was conducted with t-test and Mann-Whitney rank test.Results The percentage of apoptotic BMSCs increased in SLE patients compared with healthy donors[(64±10)%vs [14±9)%,U=0,P<0.05 ].The expression of Bcl-2 in BMSCs of SLE patients was lower than the normal controls at protein leve[(11±9)%vs(56±18)%,U=0,P<0.05 ],and mRNA level(0.2±0.2vs 2.4±0.7,U=24,P<0.05).More cytochrome C positive pellets in the cytosolic fraction could be detected in BMSCs from SLE patients compared with healthy controls [(56±21)%vs (16±16)%,U=1,P<0.05].The activity of Caspase 8 was enhanced[(49±14)%vs(16±12)%,U=0.P<0.05 ],although with no significant difierence at mRNA Ievel.Both groups expressed Fas but with no significant difference (U=19,P>0.05).Conclusion BMSCs from SLE patients undergo more apoptosis,the mechanisms may be associated with the down regulation of Bcl-2,up-regulation of Cytoehrome C in cytoplasm and the activation of Caspase 8,which directs the intrinsic and extrinsic apoptosis pathways.     

异基因骨髓间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮11例临床分析

目的 探讨异基因骨髓问充质干细胞(MSC)移植治疗难治性系统性红斑狼疮(SLE)的疗效及安全性.方法 血缘相关供者骨髓中分离培养MSC移植治疗11例SLE患者,移植前予环磷酰胺(CTX)0.8～1.8 g,分2～3次静脉输注,输注后隔日予MSC移植,移植细胞数(1×106/kg体质量).评价患者移植前后的临床表现和实验室检查指标的改变.结果 异基因MSC移植后,11例SLE患者随访1～13个月,所有患者均无移植相关并发症.移植后1个月SLE疾病活动评分(SLEDAI)由12±5降低为6±3(11例,P＜0.01).尿蛋白定量(24 h)移植后1个月由(1989±842)mg(518～3690 mg)降低为(1118±700)mg(10例,P＜0.05);移植后2个月[(2478±797)mg vs (924±659)mg,5例,P＜0.05];移植后6个月[(2478±797)mg vs(522±151)mg,5例,P＜0.01].2例肾功能不全患者血肌酐轻度下降.5例低蛋白血症患者移植后1个月血清白蛋白上升[(28±6)g/L vs(32±7)g/L,5例,P＜0.05].移植后1个月血清补体C3升高[(0.50±0.12)g/L vs(0.75±0.10)g/L,9例,P＜0.01],抗核抗体(ANA)滴度降低.结论 异基因MSC移植治疗难治性SLE有效安全.MSC取材方便,扩增迅速,输注安全经济.异基因MSC移植治疗SLE的长期疗效评估需进一步随访观察.     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞多向分化能力异常

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)多向分化能力是否存在异常. 方法 密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养MSCs,定向诱导骨髓MSCs向脂肪和成骨细胞分化,脂肪细胞经油红O染色鉴定并定量,成骨细胞经茜素红S染色鉴定.将骨髓MSCs与羟基磷灰石共孵育,将共孵育物植于裸鼠皮下,8周后常规苏木素-伊红(HE)染色.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(PPARγ-2)、脂蛋白酶(LPL)、Runx2/CBFA1、降钙素(osteocalcin) mRNA的表达水平.结果 SLE骨髓MSCs分化成脂肪细胞比例低于健康埘照组,油红O染色定量低于健康对照组[(35±7)%与(80±5)%],(0.14±0.04与0.27±0.04),LPL mRNA表达低于健康对照组(0.369±0.020与0.481±0.038),两组PPARγ-2 mRNA表达差异无统计学意义(0.421±0.052与0.441±0.012).SLE骨髓MSCs分化成骨细胞后形成钙结节低于健康对照组[(35±4)%与(45±4)%],Runx2/CBFA1、osteocalcin mRNA表达低于健康对照组(0.371±0.000与0.563±0.069),(0.819±0.023与0.962±0.049);羟基磷灰石与SLE患者骨髓MSCs共孵育后移植裸鼠皮下8周后,成骨细胞形成明显少于健康埘照组. 结论 SLE骨髓MSCs成脂和成骨分化能力存在异常,提示SLE患者骨髓MSCs存在缺陷.     

NZBWF1/J鼠骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞亚群平衡的免疫调节

目的探讨狼疮鼠(NZBWF1/J)及正常鼠(BALB/c)骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外对T淋巴细胞免疫调节作用的异同。方法采用直接贴壁法分离培养扩增MSCs,流式细胞术检测细胞表面标记物进行MSCs鉴定。经尼龙毛柱分选BALB/c鼠CD3~ T淋巴细胞,经佛波酯(PMA)刺激,与正常及狼疮鼠MSCs共培养24 h后,流式细胞术检测共培养前后T细胞的凋亡及CD3~ T细胞内细胞因子[干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-12、IL-6]的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定转录因子T-bet和GATA-3。结果NZBWF1/J MSCs生长增殖速度较正常鼠快,而传代时间更短；对T细胞内细胞因子的影响,与NZBWF1/J MSCs共培养后,TH2型细胞因子IL-4,IL-6较共培养前增加(P＜0．05),TH1型细胞因子IFN-γ,IL-12无明显变化,而与BALB/c MSCs共培养后,IL-4降低,IFN-γ,IL-12增加(P＜0．05)；与正常及狼疮鼠MSCs共孵育后T细胞凋亡数目均降低(P＜0．05)。结论MSCs可能通过诱导T细胞亚群的改变来影响狼疮病情进展,正常鼠MSCs对SLE病情可能有改善作用,狼疮鼠MSCs与正常鼠相比,免疫调节功能存在缺陷。     

系统性红斑狼疮患者骨髓间质干细胞超微结构及细胞骨架的特征

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间质干细胞(MSCs)的超微结构及细胞骨架的形态学特征.方法 体外培养SLE患者的MSCs后,透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦显微镜(LCM)观察超微结构及肌动蛋白、纽蛋白的表达.结果 SLE MSCs透射电子显微镜下多数细胞内呈衰老征象,可见大量自噬体;细胞边缘应力纤维增多,排列紊乱,组成粗大的强荧光团,核周围应力纤维减少;纽蛋白在细胞边缘排列紊乱,细胞核周围增多.结论 SLE MSCs超微结构及细胞骨架的改变是细胞扩增不良的原因之一.     

系统性红斑狼疮患者CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞中Foxp3的表达及免疫抑制功能研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)外周血中调节性T细胞不同标志以及调节性T细胞在SLE发病中的作用;探讨CD127与Foxp3的相关性,明确CD127定义调节性T细胞的特异性;鉴定CD4~+CD25~+CD127~(low/-)T淋巴细胞免疫抑制功能.方法 ①采用四色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测40例SLE患者(19例初发和21例缓解)及15名健康对照外周血CD4~+CD25~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~+CD127~(low-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞以及CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率,并且将7种调节性T细胞比率与外周血抗双链DNA(dsDNA)等抗体及SLE疾病活动指数(SLEDA1)评分等进行相关性分析.②以流式细胞分选术结合细胞培养技术,检测和分析3例SLE患者和4名健康人外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞对CD4~+CD25~-效应性T细胞增殖的抑制作用.采用两样本均数的t检验,重复测量的方差分析,Pearson相关与Spearman相关分析进行统计学处理.结果 ①SLE患者组7种调节性T细胞比率分别为(6.1±1.7)%,(3.1±1.3)%,(2.1±1.0)%,(1.6±0.3)%,(0.97±0.28)%,(0.69±0.23)%和(0.71±0.35)%.与健康对照组比较:SLE患者组前6种调节性T细胞比率均低于健康对照组(P<0.05).②SLE患者组:CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞比率与IgA呈正相关;CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞比率与抗SSB抗体呈正相关.③SLE患者初发组和缓解组比较:SLE患者初发组7种调节性T细胞中除CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞比率外,其余均低于缓解组(P<0.05).④SLE患者初发组治疗前后比较:激素治疗前6种调节性T细胞比率均低于激素治疗后(P<0.05).⑤SLE患者初发组、缓解组和对照组中,CD4~+CD25~+T淋巴细胞及CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞中Foxp3的表达与CD127低表达均呈正相关.⑥SLE患者、健康人CD4+CD25-效应性T细胞的体外增殖都可以被自身CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞所抑制,但SLE患者的抑制率明显低于健康对照.结论 SLE的免疫异常可能与调节性T细胞的数量和功能缺陷有关;CD127可能代替Foxp3作为调节性T细胞特异性的表面标记物.