浙江尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶纯化及促凝活性

采用柱色谱等纯化方法从浙江尖吻蝮蛇凝血酶中提取获得一种类凝血酶（TQ-1）,采用RP-HPLC、MALDI-TOF、SDS-PAGE、等电聚焦电泳、Edman降解法对其进行了结构确证,并对其体内、外凝血活性进行测定。纯化所得TQ-1纯度98.5%,相对分子质量为30 522.95,SDS-PAGE分析其为一种单链蛋白,等电点为4.5,N末端氨基酸序列为VIGGNECDTNEHRFL。体外凝血活性为900U/mg,小鼠体内凝血试验结果表明：TQ-1凝血活性与阳性对照药巴曲亭相似。TQ-1为一种未见报道的尖吻蝮蛇类凝血酶,具有较高的开发价值。     

尖吻蝮蛇类凝血酶的研究现状

尖吻蝮蛇类凝血酶是我国正在研究的一种新止血药,其结构与以往的类凝血酶完全不同。目前的研究表明,该凝血酶具有良好的止血效果及广阔的临床应用前景。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

抗尖吻蝮蛇蛇毒金属酶类共同基序IgY抗体的制备与研究

[目的]制备针对尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶类共同基序的IgY抗体,并对其中和蛇毒活性的作用进行研究.[方法]通过分析尖吻蝮蛇蛇毒各类金属蛋白酶类共有序列,设计合成与其酶活性密切相关且高度保守的抗原肽PT1和PT2;偶联复合物KLH-PT1、KLH-PT2免疫母鸡获得IgY抗体.采用ELISA和Western blot等方法对IgY效价及与尖吻蝮蛇蛇毒和短尾蝮蛇蛇毒的交叉反应特性进行初步研究;最后通过抗小鼠皮下出血实验对IgY中和活性进行评价.[结果]ELISA、Western blot结果表明,抗KLH-PT1、抗尖吻蝮蛇蛇毒IgY均可与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒发生交叉反应且后者显著强于前者;抗KLH-PT2 IgY在体外与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒无明显交叉反应,在体内抗出血实验中却表现出很强的中和毒性作用,并且显著优于前两者.[结论]通过设计金属蛋白酶共有序列抗原肽,制备了能与多种血循型蛇毒交叉反应的IgY抗体,这为制备特异、高效、低毒性且广谱的抗出血型蛇毒抗体奠定了基础.     

一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶对血液活性的研究

目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各实验组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对活化部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5～2.0U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%)。结论Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白和不激活凝血因子Ⅱ和,当有伤口时,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成不溶性纤维蛋白和血栓的形成。所有实验结果显示,Agacutin是一个有效的潜在止血剂。     

中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用的实验研究

目的：研究中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用及其作用机制。方法：用断尾法测小鼠出血时间,观察止血剂量对家兔全血凝固时间及纤维蛋白原含量的影响。结果：蛇毒类凝酶在0．0001－0．0100kU/kg可使小鼠出血时间明显缩短,而当剂量增大到3．0000kU/kg时,则显著延长小鼠出血时间。其0．0004－0．0036kU/kg剂量能使家兔全血凝固时间明显缩短,降低纤维蛋白原的含量。结论：中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶在小剂量时可作为止血药,它可能通过适度降低纤维蛋白原的含量,缩短出凝血时间而发挥其止血作用。     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin的亚基的拆分和氨基酸残基测序

目的 测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序.方法 通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单亚基样品,后者通过Edman降解法,测定了亚基N端15个氨基酸残基序列.结果 大亚基(16 kDa)的序列为:DCSSGWSSYEEHQYY,小亚基(15kDa)序列为DSSGWSSYEGHEYYV.结论 测序结果经NCBI数据库检索发现,Agacutin为新的蛇毒类凝血酶.     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒内纤溶组分的圆二色性及振动光谱研究

本文通过ＣＤ、ＩＲ和Ｒａｍａｎ光谱法系统地研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分（ＦＰ）的结构。结果表明ＦＰ中含１７．６５％的α－螺旋、３４．０８％β－折叠及４８．２７％的无规卷曲结构；同时对ＦＰ振动光谱的吸收峰进行了初步的指认。     

注射用尖吻蝮蛇血凝酶不良反应1例

注射用尖吻蝮蛇血凝酶（HCA）是从尖吻蝮蛇中提取的蛇毒凝血酶,主要作用于纤维蛋白原促进凝血,常规用于外科手术浅表创面止血、消化道出血及胃肠息肉切除术后止血,具有止血效果好、不良反应轻、耐受好等特点.2013年12月11日收治HCA注射后过敏反应患者1例,患者经积极抢救无生命危险,现报告如下.     

大剂量腹蛇抗栓酶与扩血管药合用治疗突发性聋

目的：观察蝮蛇抗栓酶与扩血管药合用治疗突发性聋的临床疗效．方法：８９例患者用大剂量蝮蛇抗栓酶与扩血管药合用为治疗组．对照组１１３例仅用扩血管药治疗．结果：治疗组的痊愈率为３６．６％,有效率为７６．２％;对照组痊愈率为２９．３％,有效率为６９．９％．两组比较无显著差异（Ｐ＞０．０５）,但治疗组治疗前病程（平均４１．６ｄ）较对照组（平均１０．６ｄ）长．结论：大剂量蝮蛇抗栓酶与扩血管药联合治疗突聋疗效肯定,尤其对病程较长突聋患者的治疗提供一可供选择的有效疗法．     

尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶的长期毒性及连续给药后药理效应的研究

本文报道尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶对犬及家兔的亚急性毒性及生化药理效应。用药量(μg/kg·d)犬分别为200、65,家兔分别为540、180,连续静脉注射28天。用药后14天及28天,WBC,DC,Hb 含量、肝、臂功能均无明显异差。血浆纤维蛋白原含量明显降低,凝血酶样酶时间及凝血酶时间明显延长,血小板聚集功能明显抑制,高剂量组个别犬血浆尿素氮显著上升(停药2天后降低),实验结束时体重均增加。用药后10天起,个别犬于每天注药后出现短时反应,至3周后消失。病理解剖检查眼肉及镜检未见重要脏器发生病变。本资料提示凝血酶样酶是一低毒高效应制剂,用药2周后对血小板聚集的抑制作用有耐受现象,因此连续用药时间不宜过长。     

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒主要功能性蛋白质之一,它直接作用于局部组织的毛细血管,影响毛细血管内皮细胞与基底膜之间的相互作用;蛇毒去整合素与蛇毒金属蛋白酶来自共同的前金属蛋白酶原,这些酶原都含有4个共同的结构域:信号肽、前导肽、蛋白酶结构域、间隔区.去整合素因能特异性识别整合素而得名,蛇毒去整合素为低分子量蛋白质,含有多个Cys残基,它能阻断整合素与其配体的结合,抑制整合素介导的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附反应,在血小板聚集、感染、炎症反应、肿瘤转移等病理过程中发挥重要作用.     

中国蝮蛇蛇毒中小肽SV-PP-3的分离及其抗血小板聚集作用

目的 研究中国蝮蛇蛇毒中具有抑制血小板聚集作用的小肽。方法 采用低温离心、SephadexG-75凝胶层析、高效液相C-18反相层析从蛇毒中分离纯化小肽,并用血小板聚集仪测定分离的小肽在体外对磷酸腺苷(ADP)诱导的兔血小板聚集作用。结果 SV-PP-3是从中国蝮蛇蛇毒中分离出一种相对分子质量为1234.557的新的小肽。SV-PP-3在体外能显著抑制ADP诱导的兔血小板聚集,具有剂量依赖性。结论 SV-PP-3对ADP诱导的兔血小板聚集具有显著的抑制作用。     

尖吻蝮蛇毒小分子多肽对人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用

目的探讨尖吻蝮蛇毒小肽对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞株的增殖抑制作用及作用机制。方法用MTT法观察尖吻蝮蛇毒小肽对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响；采用光镜、电镜观察细胞形态及超微结构变化；荧光染色法测定和观察尖吻蝮蛇毒小肽对SGC-7901细胞凋亡影响；采用结晶紫染色法测定尖吻蝮蛇毒小肽对SGC-7901与FN黏附作用的影响。结果MTT显示尖吻蝮蛇毒小肽呈剂量与时间依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞株的增殖，电镜观察给药组细胞出现明显凋亡，荧光显微镜下可见细胞形态发生改变，尖吻蝮蛇毒小肽对SGC-7901细胞在FN基质上的黏附有一定的抑制作用，并呈浓度依赖关系。结论尖吻蝮蛇毒小肽对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞株有较显著的抑制作用，该作用与诱导细胞凋亡和抑制细胞和细胞外基质黏附的能力有关。     

扩张型心肌病核心基因及其免疫浸润生物信息学分析

目的利用生物信息学分析筛选扩张型心肌病(DCM)发生的相关核心基因并分析其免疫细胞浸润情况。方法从GEO数据库中下载基因芯片数据集,利用多种算法分析差异表达基因,进行功能富集,构建加权共表达网络及蛋白互作网络,鉴定核心基因,挖掘免疫细胞的浸润情况,并利用外部数据集验证核心基因的诊断效能。结果共筛选出35个差异基因和包含114个基因的核心模块。其中,F13A1、VSIG4、CD163、RNASE2及LYVE1被鉴定为核心基因。DCM组织与健康心肌中的记忆B细胞、浆细胞、Tregs细胞、活化NK细胞、M2型巨噬细胞及中性粒细胞的含量具有统计学意义。结论筛选出的5个核心基因和6种免疫细胞可能参与了DCM的发生发展。     

胶质母细胞瘤中MMPs和TIMPs的表达及其与瘤周水肿的相关性分析

目的:探讨胶质母细胞瘤中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制物(TIMPs)的表达,并分析其与瘤周水肿的相关性。方法:用免疫组化方法检测胶质母细胞瘤中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的表达,并用原位分子杂交方法检测了MMP-9mRNA分布。结果:17例胶质母细胞瘤,MMP1全部阳性,MMP-9阳性10例,主要定位于大核细胞胞核和部分胞浆;MMP-2阳性14例,MMP-3阳性6例,均位于小核细胞和细胞外基质;MMP-7阳性11例,灶性分布于出血、坏死区的小核细胞;均无TIMP-1和TIMP-2表达。8例影像学表现有瘤周水肿组MMP-9蛋白和mRNA阳性率均高于无瘤周水肿组,P<0.05,但其表达量与瘤周水肿程度之间无明确的线性关系。结论:在胶质母细胞瘤中,存在不同的MMPs的表达和TIMPs的缺乏,其中MMP-9可能与瘤周水肿的产生相关。