小剂量白细胞介素-18对胶原诱导性关节炎作用的研究

目的 研究小剂量白细胞介素(IL)-18对早晚期Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)的作用.方法 重组小鼠IL-18(0.2 μg/小鼠)每日1次腹腔注射发病前或发病晚期的CIA小鼠,连用5 d,用关节炎评分评估关节炎病情的进展,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CIA小鼠髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子表达水平;用组织学染色评价膝关节的软骨和骨破坏.结果 小剂量IL-18早期免疫干预CIA小鼠,不能降低CIA小鼠关节炎发病率,无法延缓CIA小鼠膝关节病理学进展;滑膜和软骨附近的Th1型细胞因子和Th2型细胞因子与对照组相比差异无统计学意义.小剂量IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,加剧了病理学进展,免疫第43天,治疗组关节炎评分(0.33±0.11)显著高于对照组(0.25±0.09)(P<0.05);髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子IL-10与IL-18结合蛋白(IL-18BP)与对照组相比显著降低(P<0.05).结论 IL-18对早期Ⅱ型胶原诱导的关节炎没有疗效.IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,恶化了关节炎病情,其机制可能为IL-18抑制了IL-10和IL-18BP的表达.     

白细胞介素-33促进胶原诱导性关节炎的实验研究

目的 探讨新型细胞因子自细胞介素(IL)-33在胶原诱导性关节炎(CIA)发病中的作用.方法 建它DBA/1小鼠的CIA模型.以牛Ⅱ型胶原(CⅡ)/完全福氏佐剂(CFA)免疫,从免疫后第21天开始每天注射IL-33或磷酸盐缓冲液(PBS)共5 d.免疫后第28天取小鼠淋巴结细胞体外培养,培养上清的细胞因子浓度以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测或Luminex检测.同时检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体和血清中的细胞因子浓度.鼠爪脱钙后行病理检查.采用两样本均数的t检验、χ~2检验进行统计学处理.结果 IL-33可使小鼠实验性的关节炎发病加重,致炎性细胞因子和抗Ⅱ型胶原抗体产生增多(P<0.05).PBS组与IL-33组的IgG2a型Ⅱ型胶原抗体为[(1.24±0.33)mg/L和(1.96±0.16)mg/L,P<0.05],而IgG1型抗Ⅱ型胶原抗体为[(1.1±0.4)ms/L和(1.7±0.4)mg/L,P<0.05).结论 IL-33是炎性关节病中的重要致炎因子.这一IL-1家族新成员是潜在的类风湿关节炎(RA)治疗靶点.     

Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17在粉尘螨致敏哮喘小鼠中的变化

目的探讨Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在粉尘螨致敏哮喘小鼠中的变化及其意义。方法 20只BALB/c小鼠随机均分为哮喘组和健康对照组。哮喘组小鼠于第0、7和14天每鼠腹腔注射200μl致敏液[含粉尘螨粗浸液提取物50μg,Al(OH)32 mg]致敏。末次免疫后1周采用粉尘螨粗浸液提取物连续进行滴鼻激发,每天1次,每次50μg,激发7次,健康对照组给予等体积的PBS[含Al(OH)32 mg]处理。末次激发后24 h内处死小鼠,取血清和肺泡灌洗液,无菌取脾脏。ELISA检测血清中Ig G1、Ig E和肺泡灌洗液中IL-17的含量;流式细胞仪检测脾脏中Th17细胞百分率。结果哮喘组小鼠血清中Ig G1和Ig E水平分别为(0.10±0.01)pg/ml和(1.15±0.10)pg/ml,高于健康对照组的(0.06±0.01)pg/ml和(0.04±0.01)pg/ml(P0.05);哮喘组小鼠肺泡灌洗液IL-17水平(85.13±2.36)pg/ml高于健康对照组(48.27±4.14)pg/ml(P0.01);哮喘组小鼠脾脏Th17细胞百分率(5.19±0.68)%高于健康对照组(0.95±0.19)%(P0.01),且脾脏Th17细胞百分率与肺泡灌洗液中IL-17水平呈正相关(r=0.851,P0.01)。结论粉尘螨致敏哮喘小鼠较健康小鼠肺泡灌洗液IL-17水平和脾脏Th17细胞数量均升高。     

白细胞介素-18对分泌性中耳炎大鼠耳腔灌洗液中干扰素-γ和白细胞介素-4表达的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-18对分泌性中耳炎(OME)大鼠耳腔灌洗液中干扰素(IFN)-γ和IL-4表达的影响。方法选取30只成年雄性SD大鼠,按随机数字表法分为对照组、OME模型组(模型组)和IL-18处理组(观察组),各10只。参照Hardy的方法对模型、观察组大鼠腹腔注射卵清蛋白(OVA)致敏后耳内激发制成OME模型,对照组大鼠于相同时间点分别腹腔注射氢氧化铝溶液及磷酸盐缓冲液(PBS)。同时观察组于第1、2、7、8、15、16天腹腔注射IL-18溶液(1μg溶于0.2 ml生理盐水),对照、模型组同期腹腔注射0.2 ml生理盐水。第18天于耳镜下观察鼓膜像表现,光镜下观察中耳组织的病理学改变,ELISA法测定大鼠耳腔灌洗液中IFN-γ和IL-4的水平。结果 (1)模型、观察组中耳内呈现炎症反应,观察组炎症较模型组有所减轻;(2)三组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及肥大细胞计数比较,模型组三种细胞数均多于对照组,观察组嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数多于对照组,中性粒细胞和肥大细胞数多于模型组(P0.05),其他两两比较无差异(P0.05);(3)模型、观察组大鼠的IFN-γ与IL-4水平均显著高于对照组,且观察组的IFN-γ水平高于模型组(P0.05),而模型、观察组IL-4水平无差异(P0.05),模型组的Th1/Th2比值显著低于对照、观察组(P0.05),对照、观察组无差异(P0.05)。结论 IFN-γ和IL-4共同参与OME的发生发展过程,IL-18可通过上调IFN-γ和IL-4的表达,调控Th1/Th2的平衡状态而抑制OME的进展。     

慢性心力衰竭患者血清白细胞介素-12及白细胞介素-18水平及意义

目的:检测慢性心力衰竭患者(CHF)外周血白细胞介素(IL)-12和IL-18的水平并探讨其意义.方法:CHF患者72例,按照NYHA心功能分级,分为HF1(NYHAⅡ～Ⅲ级),HF2组(NYHA Ⅳ级).按照病因分类,分为缺血性心脏病(IHD)组(43例)和非缺血性心脏病(NIHD)组(29例).选取29例健康志愿者作为正常对照组(C组).采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-12和IL-18的水平,用彩色多普勒超声诊断仪测定左室舒张末期内径(LVEDd)和左室射血分数(LVEF).结果:HFI、HF2、IHD和NIHD组IL-12的水平显著升高,分别为(34.56±19.10),(35.12±15.18),(31.18±7.80),(32.73±11.54)ng/L,与C组(28.73±13.43)ng/L比较,均差异有统计学意义(P＜0.05),IL-18的水平分别为(39.50±5.66),(46.76±12.66),(40.58±13.10),(42.53±6.16)ng/L,明显高于C组(31.82±5.79)ng/L,均差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),HF2组血清IL-18水平显著高于HF1组(P＜0.05).与C组比较,HF1、HF2、IHD和NIHD组的LVEDd明显增大.LVEF显著降低.IL-12水平与LVEDd呈低度正相关(P＜0.01),IL-18水平与LVEDd呈中度正相关(P＜0.01),与LVEF呈中度负相关.结论:IL-12和IL-18在CHF患者血清中表达升高;IL-12的水平与患者基础病因和心功能均无明显相关性;IL-18的水平与CHF的基础病因无明显相关性,但与患者的CHF程度呈正相关.     

免疫性血小板减少症患者外周血白细胞介素-18及其受体α链的表达

目的 通过检测新诊断的免疫性血小板减少症(ITP)患者用药前外周血IL-18和CD_3~+细胞表面IL-18受体α链(IL-18Rα)的表达,探讨IL-18和IL-18Rα在ITP发病中的作用机制.方法 以我院门诊及住院治疗的18例新诊断的ITP为研究对象,应用ELISA检测血浆中IL-18的含量,采用流式细胞术分析CD_3~+细胞和总淋巴细胞表面IL-18Rα的表达,应用RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-18 mRNA、转录因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达.选择15例与试验组匹配的健康志愿者作为正常对照组.结果 新诊断的ITP患者血浆中IL-18的含量为(468.57±141.62)pg/ml,显著高于对照组(P<0.05);CD_3~+细胞表面及淋巴细胞表面IL-18Rα的表达分别为(8.50±3.16)%和(9.16±2.98)%,两者均显著高于对照组(P<0.05);ITP患者PBMCs中IL-18 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达分别为0.12±0.02、0.07±0.02和0.0039±0.0014,IL-18mRNA和T-bet mRNA显著高于对照组(P<0.05),而GATA-3 mRNA显著低于对照组(P<0.05),T-bet/GATA-3比例显著增高.结论 IL-18与ITP的发生发展有关,本研究从蛋白和基因水平说明IL-18和IL-18Rα可能上调ITP患者Th1类细胞的表达,通过调整T-bet/GATA-3的比例,恢复Th1/Th2的平衡,有望为ITP的治疗提供一个新的治疗策略.     

白细胞介素-8对人肺癌A549细胞放疗敏感性的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-8对人肺癌A549细胞放疗敏感性的影响。方法将A549细胞又分为对照组、照射组及IL-8组,IL-8组细胞分为三个亚组(分别用0.1、0.2、0.5μg/ml IL-8处理)。MTT法检测各组细胞的增殖抑制率(IR),流式细胞仪检测细胞周期,Western印迹检测Caspase-3、bcl-2及bax表达水平。结果 IL-8组细胞的G0/G1及S期细胞比例及bcl-2表达显著高于照射组(P<0.05),Caspase-3及bax表达水平显著低于照射组(P<0.05);0.5μg/ml IL-8处理细胞的IR、细胞周期、Caspase-3、bax及bcl-2表达水平与0.1、0.2μg/ml IL-8组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-8能够降低A549细胞的放疗敏感性。     

白细胞介素-23/-17轴在小鼠急性实验性结肠炎中的表达及作用

目的 研究白细胞介素(IL)-23/IL-17轴在小鼠实验性结肠炎结肠组织中的表达和作用.方法 将64只小鼠分为对照组24只、模型组24只、抗体组8只、正常血清组8只.除对照组外,其余各组建立小鼠急性实验性结肠炎模型.对照组和模型组小鼠分别于造模后24 h、48 h、7 d处死.抗体组和正常血清组小鼠分别于造模前2 h腹腔内注射多克隆大鼠抗小鼠IL-17中和抗体和正常大鼠血清,于造模48 h后处死.检测各组小鼠组织学损伤评分、肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性;酶联免疫吸附试验检测结肠组织IL-23p19、IL-17含量;免疫组化染色检测核因子(NF)-κB p65在结肠组织中的表达;实时荧光定量(RT)PCR检测IL-23p19、IL-17、IL-12p35的mRNA表达水平.结果 模型组24 h、48 h、7 d时IL-23p19蛋白表达水平和mRNA表达水平[分别为(15.53±3.32)、(31.16±4.98)、(14.03±3.56)ng/mg蛋白和4.09±0.34、3.39±0.46、6.54±1.82]、IL-17的蛋白表达水平和mRNA表达水平[分别为(0.35±0.06)、(0.38±0.08)、(0.26±0.05)ng/mg蛋白和4.21±2.61、2.65±0.91、5.63±1.43]均显著高于正常对照组(P值均＜0.05),48 h时达高峰.IL-23与IL-17蛋白表达水平和mRNA表达水平呈正相关(r值分别为0.745和0.793,P＜0.05).抗体组IL-23p19和IL-12p35高水平表达,但NF-κB p65阳性细胞率、组织学评分及MPO活性[分别为1.86%±0.36%、0.63±0.52、(0.40±0.03)U/g]明显低于48 h模型组[分别为4.35%±0.37%、5.13±0.64、(2.29±0.40)U/g],说明中和IL-17后能明显减轻结肠炎症,抑制NF-κB活性.结论 IL-23/IL-17轴在急性实验性结肠炎早期阶段起关键作用.IL-17有望成为炎症性肠病治疗的新靶标.     

亚砷酸对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素-1012表达的影响

目的 探讨亚砷酸(ATO)对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素(IL)-10、IL-12表达的影响.方法 MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组、环磷酰胺(CTX)组和生理盐水(NS)组,给药2个月.用四色流式细胞术测脾脏CD3~+(T)细胞和CD3~+CD4~+(Th)细胞的百分率以及CD3~+CD4~+(Th)细胞内IL-10和IL-12的水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测血清中抗双链DNA(dsDNA)抗体、IL-10和IL-12的浓度.分别采用单因素方差分析、LSD检验,配对t检验进行统计学处理.结果 ①给药后ATO组小鼠血清的抗dsDNA抗体水平吸光度值(A)0.92±0.06,较给药前1.14±0.58明显下降(P<0.01);②ATO组CD3~+细胞和CD3~+CD4~+百分率[分别为(44±4)%和(20±4)%]均显著均低于NS组水平[分别为(59±5)%和(30±3)%](P<0.01);③ATO组的血清IL-12浓度(84±12)pg/ml较NS组水平(103±13)pg/ml显著降低(P=0.018);④ATO组Th细胞内IL-10和IL-12的表达水平(1.5±0.4)%和(2.43±0.42)%显著低于NS组(2.5±0.5)%和(3.24±0.40)%(P<0.01).结论 亚砷酸能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗dsDNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IL-12的血清水平和Th细胞的诱生水平,及能降低IL-10的Th细胞的诱生水平.     

HBeAg对树突细胞分泌白细胞介素6和12的影响

目的 研究HBeAg对脂多糖(LPS)诱导树突细胞(DCs)分泌炎症因子白细胞介素(IL)-12和IL-6的影响. 方法 密度梯度离心法分离浓缩白细胞获得单个核细胞,经贴壁法纯化的单核细胞由刺激因子诱导得到未成熟DCs,形态学观察及免疫表型鉴定DCs;加入不同浓度(1、2、5 μ g/ml)HBeAg,LPS刺激摄取抗原的DCs,酶联免疫法测定培养上清液中IL-12和IL-6水平.细胞表型比较用Mann-WhitneyU检验,不同浓度组间数据的多重比较用LSD-t检验(方差齐)或Dunnett'sT3检验(方差不齐).结果 HBeAg 1、2、5 μg/ml组及对照组上清液的IL-6分泌水平分别为(1177.64±167.38)pg/m1、(1092.88±60.90) pg/ml、(793.65±96.29) pg/ml和(1612.38±244.59)pg/ml,HBeAg 1、2、5μg/ml组的IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.35、4.00和6.32,P＜0.05或P＜0.01),HBeAg 1 μg/ml组IL-6分泌水平明显高于5 μg/ml组(t=2.96,P＜ 0.05);HBeAg 1、2、5μg/ml组及对照组上清液的IL-12分泌水平分别为(1037.64±58.46)pg/ml、(885.31±13.00) pg/ml、(804.34±15.25) pg/ml和(1101.46±30.76) pg/ml,HBeAg1 μg/ml组与对照组的IL-12分泌水平差异无统计学意义(t=1.67,P＞0.05),2μg/ml和5μg/ml组IL-12分泌水平较对照组明显下调(t值分别为11.21和14.99,P值均＜0.01),5 ug/ml组IL-12分泌水平明显低于2 μg/ml组(t=7.00,P＜0.05).结论 HBeAg能下调DCs分泌炎症因子IL-12和IL-6,这可能是HBV持续感染的免疫逃逸机制之一.     

IL-18BP和IL-4共表达腺病毒基因对关节炎小鼠滑膜组织COX-2和iNOS表达的作用

目的 本研究构建了共表达小鼠白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)和IL-4的重组腺病毒载体(Ad mIL-18BP/mIL-4),将其用于胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠局部关节基因治疗,以探讨对小鼠滑膜组织环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其诱导产物前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)表达水平的影响.方法 采用雄性的DBA-1/BOM小鼠,建立CIA的小鼠模型,经共表达小鼠IL-18BP和IL-4的重组腺病毒载体局部关节基因治疗后,分别采用半定量反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法和Westem印迹法检测滑膜组织COX-2、iNOS mRNA的表达水平和蛋白表达水平,用竞争ELISA和硝酸酶还原法检测关节滑膜液PGE2和NO的含量,并设AdLacZ组和磷酸盐缓冲液(PBS)组分别为病毒对照组和组织对照组.结果 AdmIL-18BP/mIL-4治疗组滑膜组织COX-2、iNOS mRNA表达水平明显低于AdLacZ对照组(0.15 vs 0.42,P<0.01;0.05 vs 0.77,P<0.01)和PBS对照组(0.15 vs 0.65,P<0.01;0.05 vs 0.64,P<0.01);AdmIL-18BP/mIL-4治疗组滑膜组织COX-2、iNOS的蛋白表达水平明显低于AdLacZ对照组(0.08 VS 0.92,P<0.01;0.11 vs 1.00,P<0.01)及PBS对照组(0.08 vs 0.77,P<0.01;0.11 vs 0.84,P<0.01);AdmIL-18BP/mIL-4治疗组关节滑膜液中PGE2及NO水平明显低于AdLacZ对照组[(0.68±0.06)vs(2.58±0.21)ng/ml,P<0.01;(23.4±2.5)vs(60.0±11.3) μmol/L,P<0.01]和PBS对照组[(0.68±0.06)vs(2.57±0.20)ng/mL,P<0.01;(23.4±2.5)vs(60.3±13.4)μmol/L,P<0.01].结论 共表达小鼠IL-18BP和IL-4的重组腺病毒基因治疗能明显下调COX-2和iNOS的表达水平,减少其诱导产物PGE2、NO的合成,这将为RA的基因治疗提供新的治疗策略.     

白细胞介素-18在骨关节炎滑膜细胞中的表达及意义

目的 了解白细胞介素(IL)-18在骨关节炎(OA)患者和非OA患者滑膜细胞中表达的差异.方法 取OA患者(22例)与非OA患者(8例)关节滑膜组织,分别原代培养滑膜细胞,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测2组滑膜细胞培养上清液中IL-18蛋白的表达水平,采用免疫细胞化学方法 定性观察IL-18在2组滑膜细胞问表达的差异,统计学处理采用t检验.结果 ELISA检测OA患者细胞培养上清液中IL-18的含量为(63.9±21.4)pg/ml, 非OA患者细胞培养上清液中IL-18的含量为(17.7±1.5)pg/ml,2组比较差异有统计学意义(t=10.044,P<0.01);免疫细胞化学方法 显示在OA患者滑膜细胞中IL-18蛋白的表达呈阳性.胞质为棕黄色深染,而在非OA患者滑膜细胞中胞质淡染.结论 IL-18在OA关节滑膜细胞中表达上调, 提示IL-18可能直接参与了OA的发病过程.     

植物乳杆菌对白细胞介素-10基因敲除小鼠结肠炎的治疗作用

目的 评估植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,Lp）对白细胞介素-10基因敲除(interleukin-10 knockout,IL-10-/-)小鼠结肠炎的治疗作用,并探讨其可能的作用机制。方法 8周龄雌性IL-10-/-小鼠和WT小鼠各20只,各自平均分成2组,即WT组、WT+Lp组、IL-10-/-组和IL-10-/- +Lp组。WT和1L-10-/-组予0.5 ml PBS灌胃,WT+ Lp和IL-10-/-+ Lp组予0.02g Lp(0.5 ml)灌胃,每天摄入Lp1×109菌落形成单位(CFU),持续灌胃4周后实验结束。实验开始前（0周）及开始后每隔1周收集小鼠新鲜粪便1次,直至实验结束。实验结束后将小鼠处死,记录各组小鼠体重变化,并测量其结肠长度和湿重,切取新鲜结肠组织标本做病理切片及结肠黏膜促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素-γ(IFN-γ)检测。并对小鼠新鲜粪便作选择性细菌培养,观察Lp在正常小鼠和炎症小鼠体内的定植情况及其对肠道菌群的调节作用。结果 与WT小鼠相比,IL-10-/-小鼠腹泻较重,体重亦明显下降(P＜0.05),存在严重营养不良,而经Lp治疗后IL-10-/-小鼠腹泻得到缓解,体重亦明显增加(P＜0.05)。病理学检查显示,所有IL-10-/-小鼠皆发生肠道炎症,经Lp治疗后肠道炎症得到明显改善,黏膜溃疡、上皮增生及黏膜固有层淋巴细胞和中性粒细胞浸润明显减轻,病理学评分明显降低(P＜0.01)。IL-10-/-小鼠经Lp治疗后结肠湿重及湿重与长度比出现明显变化(P＜0.01),结肠水肿和增厚现象得到明显改善。IL-10-/-组小鼠结肠TNF-a和IFN-γ含量分别为(377.4±84.4) μg/g和（602.6±108.1）μg/g,均较WT组明显增加[（139.2±32.7）μg/g和（173.0±52.4）μg/g,P＜0.05）]。Lp干预4周后,IL-10-/- +Lp组小鼠结肠TNF-α和IFN-γ的含量分别为(207.2±65.7) μg/g和(442.1±138.4) μg/g,均较IL-10-/-组显著降低(P＜0.05)。IL-10-/-小鼠体内肠道菌群出现紊乱。结论 Lp能有效减轻IL-10-/-小鼠肠道炎症,对结肠炎起到一定的治疗作用,且这种治疗作用与Lp调节肠道菌群及抑制促炎细胞因子的表达有关。     

IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响

目的观察白细胞介素12 (IL-12) 对伯氏疟原虫(P.b)红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响,探讨IL-12介导Th1/Th2免疫偏移在抗P.b红内期感染中的免疫调节作用.方法 BALB/c小鼠接种5×105个感染P.b的红细胞,同时分别给予0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理,用ELISA方法检测P.b感染小鼠血清或脾淋巴细胞体外培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平的动态变化.结果 0.03 μg/d IL-12处理组小鼠接种感染后第7天取脾淋巴细胞体外经PHA或可溶性抗原sAg刺激培养产生的IFN-γ水平较感染对照组显著升高,IL-4水平显著下降,而0.15 μg/d IL-12处理组脾淋巴细胞产生的IFN-γ及IL-4水平均较感染对照组显著下降.在感染后第3天,0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理组小鼠血清中IFN-γ均已出现,第5天达高峰,但感染后第7天 0.15 μg/d IL-12处理组血清中IFN-γ迅速下降,甚至低于感染对照组及0.03 μg/d IL-12处理组,感染对照组直到感染后第7天血清中方可检测到IFN-γ水平.结论适当低剂量IL-12诱导CD4 Th1免疫应答,产生细胞因子IFN-γ,以诱导抗P.b红内期感染的免疫保护作用;而较大剂量IL-12抑制机体抗感染免疫,甚至可致免疫病理损害.     

CD4+白细胞介素-17+辅助性T细胞对香烟暴露小鼠肺部炎症及肺气肿的作用

目的 观察香烟烟雾暴露小鼠肺实质中CD4+白细胞介素(IL)-17+辅助性T细胞(Th17)数量及活性的表达,探讨其在香烟暴露小鼠肺部CD4+ γ-干扰素+(Th1)炎症及肺气肿中的作用及相关机制.方法 将40只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组:对照12周(C12)组、对照24周(C24)组、烟雾暴露12周(S12)组、烟雾暴露24周(S24)组,每组10只.香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型.HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔和肺泡破坏指数(DI);流式细胞术检测小鼠肺实质中CD4+IL-17+T(Th17)细胞、CD4+γ-干扰素+T(Th1)细胞、CD4+IL-17+γ-干扰素+T(Th17/Th1)细胞、CD8+γ-干扰素+T(Tc1)细胞、CD8+IL-21R+细胞及CD4+IL-17+IL-21+细胞比例;荧光定量PCR法检测小鼠肺实质中维甲酸相关孤独受体(RORγt)和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系.结果 S12组和S24组的平均内衬间隔[(39±4)μm和(47±7)μm]和DI(39.1±1.6和45.2±3.1)明显高于C12组[(32±4)μm和28.2±1.6]和C24组[(33±3)μm和28.9±2.1],且以S24组的增高更为明显,差异均有统计学意义(t值为4.378～15.188,均P＜0.05);S12组和S24组Th17细胞比例[(3.3±1.1)%和(7.2±2.2)%]均明显高于C12组和C24组[(1.8±0.8)%和(2.0±0.6)%];S12组和S24组RORγtmRNA表达量[(25±4)和(35±3)]及IL-17的mRNA表达量[(26±3)和(36±3)]亦明显高于C12组[(10±5)和(13±5)]和C24组[(11±7)和(8±6)],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组Th1细胞比例[(10.0±3.7)%和(26.2 ±6.0)%]、Th17/Th1细胞比例[(0.61±0.30)%和(1.82±0.52)%]及Tc1细胞比例[(17.0±4.5)%和(26.8±8.5)%]均明显高于C12组[(3.8±1.7)%、(0.27±0.17)%和(4.8±1.9)%]和C24组[(4.2±1.3)%、(0.28±0.11)%和(5.2±1.0)%],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组小鼠Th17细胞与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔、DI值均呈显著正相关(r值为0.519～0.797,均P＜0.01);Th17/Th1细胞比例与平均内衬间隔、DI值呈显著正相关(r值分别为0.742和0.802,均P＜0.01);S12组和S24组CD4+IL-17+IL-21+细胞比例[(0.19±0.04)和(0.55±0.24)]明显高于C12组和C24组[(0.07±0.03)和(0.08±0.03)],S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).S12组和S24组的CD8+IL-21R+细胞比例[(2.94±1.26)和(4.12±2.26)]高于C12组和C24组[(1.22±0.31)和(1.34±0.18)](P＞0.05);S12组及S24组小鼠CD4+IL-17+IL-21+细胞比例与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔和DI值均呈显著正相关(r值为0.694～0.754,均P＜0.05);S12及S24组小鼠CD8+IL-21R+细胞比例与平均内衬间隔和DI呈显著正相关(r值分别为0.516和0.725均P＜0.05).结论 香烟暴露导致肺气肿小鼠肺内Th17细胞数量及活性上调,并随烟雾暴露时间延长而增强;Th17细胞通过IL-21及IL-21R在肺部Th1/Tc1炎症中起重要促进作用;这对探讨COPD肺部炎症和肺气肿发生机制以及新的治疗靶点具有重要意义.

Abstract：

Objective To evaluate the expression and the role of Th 17 in cigarette smoke-induced lung inflammation and emphysema in mice.Methods Forty male BALB/c mice were randomly divided into 4 groups, including a control group C12, a control group C24, a smoke-exposure 12 week group (S12) and a smoke-exposure 24 week group S24 (n = 10 each).Morphological changes were evaluated by mean linear intercepts and destructive index (DI).The proportion of CD4+ IL-17 + Th17, CD4+ IFN-γ+ Th1, CD4+ IL-17 +IFN-γ+ T( Th17/ Th1 ), CD8+ IFN-γ+ Tc1, CD8+ IL-21R + and CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells in lungs of mice was determined by flow cytometry.The mRNA expressions of RORγt and IL-17 were evaluated by real-time PCR.Results Mean linear intercepts and DI were significantly higher in S12 and S24 groups [(39 ± 4)μm, (47 ±7) μm], (39.1 ± 1.6, 45.2 ±3.1 ) as compared to C12[(32 ±4) μm,28.2 ± 1.6] and C24groups [(33 ± 3 ) μm ,28.9 ± 2.1], all P ＜ O.05.The percentage of Th17 of S12 and S24 groups [(3.3 ±1.1 )%, (7.2 ±2.2)%] was significantly increased as compared with that of C12 and C24 groups [( 1.8± 0.8) %, (2.0 ± 0.6) %], all P ＜ 0.05.The mRNA levels of RORγt [( 25 ± 4), ( 35 ± 3 )] and IL-17 [(26 ± 3), (36 ± 3 )] in S12 and S24 groups were higher than in C12 [(10 ± 5 ), (13 ± 5 )] and C24 groups [( 11 ± 7 ), (8 ± 6)], all P ＜ 0.05.The percentage of Th 1, Th17/Th1 and Tc1 cells of S12 and S24 groups [(10.0 ±3.7)%, (26.2 ±6.0)%], [(0.61 ±0.30)%, (1.82 ±0.52)%], [(17.0±4.5 ) %, ( 26.8 ± 8.5 ) %] was significantly increased as compared with that of C12 [( 3.8 ± 1.7 ) %,(0.27±0.17)%, (4.8 ±1.9)%] and C24 groups [(4.2±1.3)%, (0.28±0.11)%, (5.2±1.0)%], all P＜0.05.Moreover, the frequency of Th17 cells had a positive correlation with Th1, Tc1 cells and emphysematous lesions ( r =0.519 - 0.797, all P ＜ 0.01 ).In addition, a positive correlation between Th17/Th1 cells and emphysematous lesions was also found (r =0.742, 0.802, all P ＜0.01 ).The percentage of CD4+ IL-17+ IL-21 +T cells was significantly increased in S12 and S24 groups [(0.19 ±0.04) %, (0.55 ± 0.24) %] compared to controls [(0.07 ± 0.03 ) %, (0.08 ± 0.03 ) %], all P ＜ 0.05.Meanwhile, as compared with that of the controls [( 1.22 ± 0.31 ), ( 1.34 ± 0.18 )], the percentage of CD8+ IL-21 R + T cells was also increased in SI 2 and S24 groups [( 2.94 ± 1.26 ), (4.12 ± 2.26 )], but there were no differences among smoke-exposure groups ( P ＞0.05 ).The frequency of CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells had a positive correlation with Th 1, Tc1 cells and emphysematous lesions (r = 0.694 -0.754, all P ＜0.05).And the frequency of CD8+ IL-21R+ T cells also had a positive correlation with emphysematous lesions ( r = 0.516, 0.725, all P ＜ 0.05).Conclusions Cigarette smoke increased the expression and the activity of Th17 in mice.Th17 may play a potential (active) role in the development of lung inflammation through IL-21/IL-21R pathway.     

类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1RORγt和白细胞介素-17表达水平的检测及临床意义

目的 检测类风湿关节炎(RA)患者外周血高迁移率族蛋白1(HMGB1)及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平,同时分析其与C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)和类风湿因子(RF)的关系,初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及其与Th17的关系.方法 收集80例RA患者外周血标本,其中静止期32例、活动期48例,健康志愿者50名.采用实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)中HMGB1、RORγt和白细胞介素(IL)-17的mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆HMGB1、IL-17、IL-23的蛋白浓度,采用单因素方差分析和Spearman相关分析进行统计学处理.结果 RA患者PBMC中HMGB1、RORyt和IL-17 mRNA的表达水平均高于健康对照组(P<0.05).且活动期[HMGB1(0.424±0.262)pg/ml,RORγt(0.34±0.25)pg/ml,IL-17(1.42±0.38)pg/ml]明显高于静止期(P<0.01).o血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白水平也显示类似的结果,RA组明显高于健康对照组(P<0.05),且与CRP、ESR、RF呈正相关(P<0.05).结论 检测RA患者外周血HMGB1和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子水平,有助于探讨HMGB1和IL-17在RA发病过程中的病理生理作用,也为寻找RA的治疗靶点提供了新的思路.     

支气管哮喘患者血清白细胞介素18和33水平的变化及其临床意义

目的 检测支气管哮喘(简称哮喘)急性发作期患者糖皮质激素治疗前后血清IL-18和IL-33水平的变化,探讨IL-18和IL-33在哮喘发病机制中的作用.方法 选择2009年6月至2010年10月大连医科大学附属第二医院呼吸内科收治的中～重度哮喘急性发作患者30例作为哮喘组,体检中心的23例健康体检者作为对照组,两组受试者均无吸烟史.哮喘组患者均静脉滴注甲泼尼龙(40 ～80 mg/d)治疗3～5d,同时配合雾化吸入布地奈德治疗1～2周.分别检测哮喘组治疗前后及对照组血清IL-18和IL-33的水平,同时检测免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸粒细胞(EOS)数量及肺功能[包括FEV1占预计值％(FEV1％)]等,比较哮喘组治疗前后IL-18和IL-33水平的变化及其与对照组之间的差异,分析其与IgE、EOS和FEV1％等指标的相关性.结果 哮喘组治疗前血清IL-18和IL-33水平[分别为(300±181)ng/L和(208 ±95) ng/L]均高于对照组[分别为(158±45) ng/L和(143±32) ng/L],差异有统计学意义(t值分别为3.67和3.51,均P＜0.05),与IgE和EOS变化一致(t值分别为5.76和5.24,均P＜0.05).哮喘组治疗后血清IL-18和IL-33水平[分别为(183±83)ng/L和(148±77) ng/L]均低于治疗前,差异有统计学意义(t值分别为5.42和12.09,均P＜0.05),与IgE和EOS变化一致(t值分别为11.87和4.56,均P＜0.05),但哮喘组治疗后FEV1％水平为(81±16)％,高于治疗前的(54±14)％,差异有统计学意义(t=-7.81,P＜0.05).Pearson相关分析显示,IL-18和IL-33分别与IgE和EOS呈正相关(均P＜0.05);而与FEV1％呈负相关(均P＜0.05).结论 IL-18和IL-33在哮喘急性发作过程中具有促进炎症反应的作用.     

胶原诱导关节炎模型中髓系来源抑制细胞通过白细胞介素-1β促进Th17细胞分化的作用

目的通过胶原诱导关节炎模型探讨MDSCs对Th17细胞分化的作用及可能的机制,为阐明自身免疫性关节炎发病机制和寻找新的治疗靶点提供研究依据。方法 SPF级雄性DBA1/J小鼠20只随机分为胶原诱导关节炎(CIA)组和正常对照组,每组10只。采用CIA法制备自身免疫性关节炎小鼠模型。收集各组小鼠脾脏中骨髓来源抑制细胞(MDSCs)和Th17细胞的频率,分别采用流式细胞术和ELISA法测定小鼠血浆中炎性因子白细胞介素(IL)-β、IL-17及抑炎因子IL-10水平,采用实时荧光定量PCR技术测定细胞中Th17分化相关因子STAT3 mRNA、视黄酸相关孤儿受体(ROR)αmRNA、RORγt mRNA相对表达量。采用在Th17细胞分化培养条件下[添加IL-6+转化生长因子β(TGF-β)] MDSCs与小鼠幼稚CD4+T细胞共培养评估CIA小鼠中MDSCs对Th17细胞分化的影响,在培养过程中采用IL-1β中和抗体(IL-1βm Ab)和拮抗剂(IL-1ra)阻断IL-1β信号的方法以观察MDSCs对Th17细胞分化影响。结果与正常对照组小鼠比较,CIA组小鼠MDSCs比例明显升高[(20. 1±2. 6)%vs.(2. 6±1. 7)%],血浆炎症因子IL-17水平明显升高[(1. 3±0. 2)%vs.(0. 3±0. 1)%], CIA组血浆IL-β水平明显升高,抑炎因子IL-10水平明显降低,RORγtmRNA相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P 0. 01)。CIA组小鼠MDSCs比例及Th17细胞比例变化呈明显正相关。CIA小鼠中MDSCs抑制CD4+T细胞增生并减少细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ),但体外MDSCs和CD4+T细胞共培养结果显示MDSCs促进T17细胞分化,且使细胞上清液中IL-17A质量浓度升高,STAT3和RORγtmRNA相对表达量上调,培养液中IL-1β质量浓度升高。阻断IL-1β信号可以减少MDSCs对Th17细胞分化的作用。结论自身免疫性关节炎小鼠MDSCs具有促炎症反应的作用,MDSCs依靠IL-1β上调RORγt的作用而促进Th17细胞分化,这可能是自身免疫性关节炎发病过程中的一个关键因素。