兔富血小板血浆液制备及CaCl2诱导的比较

目的 通过比较不同方法制备兔富血小板血浆,用CaCl2做诱导剂测量血小板计数、白细胞计数、血小板衍化生长因子（PDGF）及转化生长因子-β1 （TGF-β1）,探讨手工富血小板血浆制备方法及在CaCl2激活后的影响.方法 采用一次离心法,二次离心法（Landesberg法和Aghaloo法）制备大耳白兔富血小板血浆进行比较.检测3组富血小板血浆中血小板计数、白细胞计数.用CaCl2做诱导剂,比较激活前后PDGF及TGF-β1的变化.结果 3种方法制备的富血小板血浆中血小板计数差异有统计学意义（P＜0.01）,Landesberg法和Aghaloo法均可制备有效浓度的富血小板血浆.一次离心法由于干扰较小,比较稳定,但血小板数不高;二次离心法富血小板血浆中血小板数相对高,手工制备容易受很多因素影响,且不稳定.3组富血小板血浆用CaCl2诱导前后,一次离心法、Aghaloo法PDGF与正常血浆组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.Landesberg法制备的血小板血浆中PDGF、TGF-β1水平明显高于激活前（P＜0.01）.一次离心法、Landesberg法和Aghaloo法富血小板血浆中血小板计数与白细胞计数呈正相关.结论 手工制备兔富血小板血浆、Landesberg法和Aghaloo法都可以获得有效浓度,而Aghaloo法获得浓度最高.运用CaCl2做诱导剂,使富血小板血浆激活,可释放生长因子,起到治疗作用.     

不同方法调整血小板数量对血小板聚集功能检测的影响

目的寻求更好的方法调整富血小板血浆（PRP）中的血小板数量,以满足光透射血小板聚集检测（LTA）对样本的质量要求。方法收集18~50岁健康人血样36例。分别以乏血小板血浆（PPP）和生理盐水（PS）调整PRP中血小板数量,调整（稀释）倍数为1.5倍、2倍、2.5倍和3倍,以终浓度5 μmol/L二磷酸腺苷（ADP）、0.5 mmol/L花生四烯酸（ARA）、2 μg/mL胶原（COL）、5 μmol/L肾上腺素（EPI）以及1.2 mg/mL瑞斯托霉素（RIS）为诱导剂,测定调整前后PRP的血小板最大聚集率（MA）的差异。用PRP离心制备的PPP（离心PRP-获取-PPP）,比较其与传统方法（离心全血-获取-PPP）对RIS诱导血小板聚集的影响。结果当ADP、ARA或EPI为激活剂时,PS各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异无统计学意义（P>0.05）;而PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值均下降,在调整倍数为2~3倍时,差异有统计学意义（P<0.05）。当激活剂为RIS时,PS各调整倍数的PRP 与原PRP相比,其MA值均下降,且差异有统计学意义（P<0.05）;而PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异无统计学意义（P>0.05）。当激活剂为COL时,PS和PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异均无统计学意义（P>0.05）。全血或PRP离心制备的PPP,均不影响RIS诱导血小板聚集的MA值（P>0.05）。结论以ADP、ARA、COL或EPI为诱导剂检测MA时,推荐使用PS调整血小板数量;而以RIS为诱导剂时,应使用自身PPP调整血小板数量;2 100×g,5 min条件下用传统离心全血制备的PPP方便可行。     

血袋法和试管法制备富血小板血浆的效果比较

目的 比较一体性塑料血袋法与试管法制备富血小板血浆(PRP)效果的不同,选择合适的PRP制备方法.方法 将30位自愿者随机分为两组,一组用一体性塑料血袋采集静脉血液40ml,另一组用无菌注射器抽取等量的静脉血,然后转人无菌离心管,对两组血液进行离心,制备PRP.用血细胞分析仪检测静脉血及PRP中的血小板(PLT)和白细胞(WBC)含量,用ELISA法定量分析PRP来源的转化生长因子β1的浓度(TGF-β1),用全自动细菌培养仪对PRP进行细菌培养.结果 一体性塑料血袋采集制备的PRP,其PLT和WBC获得率及TGF-β1浓度均高于试管法.两种方法制备的PRP细菌培养结果均为阴性.结论 用一体性塑料血袋制备PRP的效果优于试管法.     

二次离心法制备富血小板血浆离心条件的比较

 目的 探讨二次离心法制备富血小板血浆（PRP）的最佳离心条件和方法。方法 从新西兰大白兔耳背中央动脉取血2.7 mL,按照不同离心条件（转速：1 000~2000 r/min,时间：5~20 min）离心2次,比较不同条件下PRP中血小板浓度和血小板回收率。结果 多种离心条件均能成功制备PRP。初次离心：在形成白膜前的临界条件下（转速1 400 r/min,10 min）取得上层血浆的操作简单,且血小板回收率最高（＞85%）。再次离心：转速1 400 r/min,＞10min时,即可制得符合要求的PRP（浓缩率＞5倍）。结论 初次离心条件和上清液的获取方法对PRP的回收率和浓缩率影响较大,在产生白膜前的临界条件下提取上清液操作简单,无需特殊设备,血小板浓度和回收率高,避免了离心速度过高或离心时间过长导致的血小板活化、聚集。该方法是制备PRP简便、有效的方法。     

围手术期自体血回收分离机制备富血小板血浆和自体凝血酶的研究

目的验证围手术期使用自体血回收分离机制备富血小板血浆(PRP)的可行性及有效性,探索制备自体凝血酶并用以制备富血小板凝胶(PRG)的方法。方法选取2018年10月至2019年1月在北京积水潭医院行单侧全髋关节置换术的30例患者,按照随机数字法分为观察组和对照组,每组15例。所有患者均在手术前30 min使用自体血回收分离机制备PRP,采血前后检测患者血红蛋白、血小板(PLT)及白细胞(WBC),并检测PRP中的PLT及WBC水平及富集程度。其中,观察组取PRP 1. 5 m L加入10%葡萄糖酸钙,经水浴、离心制备自体凝血酶,使用自体凝血酶激活PRP制备PRG;对照组使用10%葡萄糖酸钙激活PRP,30 min内观察并记录两组PRP被激活形成凝胶的时间。结果 30例患者PRP制备均完成,血流动力学无明显波动。两组患者的PRP生成量、PLT基础值、PRP中PLT含量及富集度,WBC基础值、PRP中WBC含量及富集度比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。激活物与PRP混合后,观察组12例2 min时凝集成凝胶,3例3 min时凝集;对照组15例30 min时均未凝集。结论围手术期可利用自体血回收分离机制备自体PRP,其所得产物PLT及WBC可达到治疗水平,且使用PRP水浴离心制备自体凝血酶,作为激活剂制备PRG方法可行。     

不同离心参数对小剂量全血白膜法采血袋制备富血小板血浆回收率的影响

目的 比较小剂量全血白膜法采血袋制备富血小板血浆(PRP)的回收率。方法 相同来源的全血50、100 mL在不同离心参数下离心,手工分离白膜,比较白膜层血小板回收率;将白膜10、20 mL在不同离心参数下离心,分离PRP,比较PRP血小板回收率;对PRP进行血小板低渗休克反应(HSR),验证血小板功能。结果 第1次离心,50、100 mL全血分别在470、940 g离心11 min白膜层血小板回收率即达到较高水平[(73.50±13.20)%、(71.30±11.12)%]。第2次离心,10、20 mL白膜分别在70、100 g离心13 min PRP血小板回收率达到最高水平[(95.07±4.90)%、(85.15±2.28)%]。10 mL白膜在70 g离心13 min、100 g离心9 min PRP HSR比率达到最高水平[(53.26±3.61)%、(55.50±3.94)%];20 mL白膜在70 g离心17 min、100 g离心13 min PRP HSR比率达到最高水平[(59.53±6.60)%、(59.39±4.10)%]。结论 小剂量全血白膜法制备PRP可获得理...     

自体富血小板血浆纳米球凝胶缓释系统对兔膝关节软骨损伤的修复效果研究

目的:建立负载自体富血小板血浆纳米球凝胶缓释系统,观察对兔膝关节软骨损伤的修复效果.方法:建立兔双膝关节股骨内侧髁软骨面缺损模型,随机分成空白组、凝胶组和纳米球凝胶组各9只.兔心脏采血采用二次离心法制备自体富血小板血浆(PRP),将PRP加入透明质酸水凝胶中制成PRP凝胶.将PRP先负载到乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA...     

不同方法制备兔自体富血小板血浆凝胶支架促进脂肪干细胞增殖比较

目的探讨不同浓度及离心方法制备自体富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）凝胶支架对脂肪干细胞（adipose derived stem cells,ADSCsl增殖及生长因子释放的影响。方法取新西兰大白兔动脉血分别采用二次及三次离心法制备自体富血小板血浆支架,检测其中的血小板浓度,同时通过添加DMEM培养基将PRP中血小板绝对浓度调整为相同的1000×109／L,之后继续向其中加入培养基将PRP按体积分数调整为30％、40％、50％、60％的不同浓度,并设置仅含培养基的空白对照组。之后向各组PRP中植入经荧光染色的脂肪干细胞（ADSCs）。7d内每日观察计数细胞数目绘制细胞生长曲线,在第2、3、4、6天用MrITr比色法分析各组脂肪干细胞的存活和增殖能力,通过ELISA定量检测培养7d后PRP脂肪干细胞复合体中生长因子TGF—B1及细胞的Ⅱ胶原含量。结果二次离心法及三次离心法所制备的PRP中血小板浓度分别为（1320．5±227．31×109／L及（1724．5±316．31×10。／L,为全血中血小板浓度的5．4及7．1倍,三次离心法所制备的PRP中血小板浓度明显高于二次离心法（P〈0．05）。采用两种离心方法所制作的PRP细胞复合体中的脂肪干细胞数目均在其PRP其中血小板浓度为500×109／L时达到最高值,分别为（1．02±0．13）×104及（1．00±O．14）×10。（P〉0．05）。各组不同浓度的PRP浓度的PRP细胞复合体中当其中血小板浓度达500×109／L时其中脂肪干细胞数目、活性均为最高,且其中的TGF—B1及细胞的Ⅱ胶原含量也高于其他各组俨〉0．05）。结论三次离心法制备PRP,血小板收集率较二次离心法高,但在促进脂肪干细胞增殖上无明显差异。PRP中血小板浓度达500×109几左右时,其中的脂肪干细胞增殖及活性达到最高,可能是制备PRP脂肪干细胞复合体的最适浓度。     

富血小板血浆的抑菌作用及其与抗菌肽含量的关系

目的:探讨贫血小板血浆(PPP)、富血小板血浆(PRP)及血小板凝胶上清液(PGS)对大肠埃希菌的体外抑菌作用及其与抗菌肽血小板因子4(PF4)含量的关系。方法:从本市中心血站获取健康献血者的单采血小板作为PRP来源,采用平板培养细菌法观察PPP、PRP及PGS与大肠埃希菌共培养不同时间细菌生长情况,ELISA检测PPP、PRP及PGS中PF4的含量。结果:(1) PPP、PRP及PGS均可以抑制大肠埃希菌的生长。PPP、PRP在18 h内具有很强的抑菌作用,随后抑菌作用逐渐减弱,24 h后逐渐失去抑菌作用;PGS在9 h内具有抑菌作用,3 h时抑菌作用最佳,随后抑菌作用逐渐减弱,12 h时无抑菌作用。(2)凝胶缓释液也具有抑菌作用,抑菌时效同PGS。(3) PPP、PRP和PGS中PF4质量浓度分别为(300.65±75.46)、(23 206.74±9 753.90)、(5 659.23±2 847.99) ng·ml^-1,差异有统计学意义。(4) PRP 24 h抑菌作用强弱与PF4含量无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PPP、PRP及PG...     

梯度离心法分离人富含血小板血浆条件的优化

目的:优化梯度离心法提取人血小板过程中富含血小板血浆(Platelet rich plasma,PRP)的分离条件,以提高血小板的获得率及质量.方法:梯度离心分离人血小板,其中仞次离心采用正交实验设计,以离心力和离心时间为实验因素,均设置五水平,获得富含血小板血浆,利用血细胞分析仪分刖计数离心前全血及离心后PRP中m小板数量,计算血小板获得宰,并且涂片计数PRP中的杂质细胞.结果:离心力和离心时间对提取PRP中血小板效率和纯度有显著影响,并且两者存在交互作用.结论:采用离心力为100 g,离心时间为15 min分离提取的PRP中血小板数量较多,纯度较高.     

血浆制备法对βTG,PF4测定的影响

减少采血和制备血浆过程中血小板活化程度是准确测定体内βTG和PF4血浆水平的二个关键环节。与传统的双注射器法采血,以4℃3000r/min离心30分钟制备血浆的方法作比较,本研究证明以负压抗凝管取血,4℃1500r/min、15分钟或3000r/min、30分钟作两次分级离心所制备的血浆其残留的血小板数明显减少,βTG和PF4值也显著减低。另外,抽血时阻断静脉时间宜短,取血后及时使血液与抗凝剂混和并尽快使全血冷却、离心制备血浆,都是应被重视的环节。     

富含血小板血浆冰冻保存及保存效果的研究

目的：研究不同因素对冰冻保存富含血小板血浆（Cryo-PRP)在血库批量制备的整个过程中的质量和特性的影响,优化建立Cryo-PRP的批量制备技术。方法：对冰冻PRP制备的整个过程中的产品包括献血者外周血,ACD抗凝全血,新鲜富含血小板血浆（FPRP）,5％,MDSO富含血小板血浆（MPV）（DMSO－PRP）及－85℃冰冻保存2d后37℃水浴解冻后的Cryo-PRP检测其血小板计数（PLT）,血小板平均体积（MPV）,血小板分布宽度（PDW）,pH,乳酸脱氢酶（LDH）和乳酸的变化,并进行细菌污染监测。结果：（1）制备PRP可以获得全血中70％的血小板;（2）与ACD全血相比FPRP血小板群体发生了改变;（3）冰冻／复温过程中部分血小板膜的完整性受到损害不可避免。（4）在新鲜冰冻血小板制作,保存到临床应用整个过程中血小板代谢不活跃,基本处于休眠状态,有利于其长期保存。（5）冰冻血小板内未见细菌污染和繁殖。结论：冰冻保存PRP能够长期,大量,有效,安全地保存大量宝贵血小板资源,解决目前血小板供不应求的局面。     

红花黄色素B抗凝作用研究

目的：观察红花黄色素B（SYB）对ADP诱导的大鼠体外血小板聚集的抑制作用及抗凝作用。方法：大鼠腹主动脉取血,制备富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP）,在PRP中加入SYB溶液及ADP,记录血小板聚集曲线,计算血小板聚集抑制率;在PPP中加入SYB和PT试剂,记录大鼠血浆凝血酶原时间（PT）;在PPP中加入SYB、删试剂和CaCl2,记录部分活化凝血活酶时间（APTT）;在PPP中加入SYB、TT试剂,记录凝血酶时间（TT）。结果：SYB可抑制ADP诱导的体外大鼠最大血小板聚集率,可延长大鼠离体血浆PT、APTT和TT。且呈明显的量效关系。结论：SYB可阻断多种途径诱发的血栓形成反应,为红花活血化瘀的主要有效成分之一．     

4联袋三次离心法在手工制备血小板（PRP法）中的应用

目的寻求一种既不影响血小板的收集量,又满足红细胞悬液比容达到质量标准,且能充分收集新鲜血浆的手工浓缩血小板制备方法。方法分别用一次性3联袋、一次性4联袋采集血液96袋（各48袋）,分别用传统的3联袋二次离心PRP分离法和改进的4联袋三次离心PRP分离法制备红细胞悬液、浓缩血小板、新鲜血浆等三种血液成分制品,并测定其红细胞比容、血小板计数、血浆收集量并进行比较。结果应用传统法3联袋二次离心法制备的红细胞比容低于标准值,血浆收集量少于改进的4联袋三次离心PRP分离法。而两种方法收集的浓缩血小板数均符合国家标准值。结论 4联袋三次离心PRP分离法在不影响血小板的收集量的同时,又弥补了传统法分离系统红细胞悬液比容达不到质量标准及血浆收集量较少的缺点。增加经济效率的同时,又充分利用了宝贵的血液资源。是一种可行的手工血小板收集方法。     

血小板对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡、侵袭和炎症细胞因子水平的影响

目的 探讨血小板对喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭和炎症细胞因子水平的影响。方法 采集本课题组健康成年人全血20 mL,离心得到富血小板血浆(PRP);将PRP离心后收集上清液，即为乏血小板血浆(PPP),下层余下少许血浆为高血小板含量的PRP(简称为PRP2),血小板浓度为7.96×10¹¹ L^-1;将2 mL PRP2用PPP倍比稀释为低血小板含量的PRP(简称为PRP1),血小板浓度为4.25×10¹¹ L^-1。将喉癌Hep-2细胞分为PPP组、PRP1组、PRP2组，分别培养于含体积分数10%PPP、PRP1、PRP2的培养基中。采用细胞计数试剂盒-8实验检测细胞增殖能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡能力，实时荧光定量聚合酶链式反应法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达。结果 接种0 h时，3组细胞的增殖能力两两比较差异无统计学意义(P>0.05);接种24、48、72 h时，PRP1组、PRP2...     

富血小板血浆在修复牙周组织缺损中的应用研究

目的建立富血小板血浆（PRP）提取的方法,以探讨作为自身复合生长因子来源的可行性,并研究其在修复牙周组织缺损中的作用。方法利用二次离心（1000 r/min×15 min;3000 r/min×8 min）分离全血,获得PRP。将PRP设3个浓度组（5%,10%,30%）,比较各浓度PRP＋植骨术与单纯植骨术治疗牙周骨内袋缺损的效果,以评价PRP在牙周组织再生治疗中的作用。结果所获得的血小板浓度均超过全血的4倍,实验组各浓度的PRP＋植骨术均可促进牙周组织的再生,实验组与对照组相比差异具有显著性（P〈0.01）。当PRP浓度在5%-30%时促再生作用呈剂量依赖性。结论二次离心法是一种简单易行的提取PRP的方法。PRP可促进牙周组织的再生。     

自体富血小板血浆用于肛瘘术后创面修复的实验研究

目的 探索自体富血小板血浆(PRP)修复肛瘘术后创面的作用。方法 10只实验用猪采用挂线法进行肛瘘造模。38 d后瘘管造影及病理检查评估瘘管形成造模成功。瘘管切除术后左、右侧肛周创面随机数字表法分为PRP组与乏血小板血浆(PPP)组,PRP组创面予以PRP注射,PPP组创面予以PPP注射。术后第12天取创面中央组织样本,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测组织样本中表皮细胞生长因子(EGF)和促血管生成素-2(Ang-2)含量,免疫组化检测CD34表达水平,免疫荧光检测波形蛋白(Vimentin)表达情况。ELISA法检测炎症细胞因子白介素-6(IL-6)及白介素-12(IL-12)含量。观察创面愈合时间,超声评估创面愈合效果。结果 PRP中血小板浓度为(668.90±188.30)×10⁹/L,显著高于外周静脉血(194.10±44.44)×10⁹/L及PPP(80.90±28.58)×10⁹/L(F=76.320,P<0.01)。ELISA检测结果显示,PRP注射组创面组织中EGF及Ang-2含量均显著高于PPP...     

富血小板血浆通过调节SDF-1/CXCR4信号通路影响糖尿病皮瓣新生血管化机制的研究

目的 观察富血小板血浆(PRP)对糖尿病大鼠背部皮瓣新生血管的影响,并分析血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF-1)及趋化生长因子受体(CXCR4)的变化。 方法 将100只SD大鼠随机分为5组,各组20只;储备组制备PRP与贫血小板血浆(PPP),对照组正常饲养,其他组制备糖尿病病理模型;模型制备成功后,构建背部皮瓣,PRP组和PPP组分别以PRP和PPP进行局部干预。1周后观察新生血管,以ELISA试剂盒测定静脉血和局部组织VEGF水平,以免疫组化实验测定局部组织SDF-1与CXCR4表达。 结果 与对照组相比,模型组和PPP组的皮瓣存活率降低,新生血管数和VEGF含量减少,SDF-1和CXCR4表达水平降低;PRP组的VEGF含量减少,SDF-1和CXCR4表达水平升高;各项差异均有统计学意义(P＜0.05)。与模型组和PPP组相比,PRP组的皮瓣存活率升高,新生血管数和VEGF含量增多,SDF-1和CXCR4表达水平升高;各项差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 PRP可提高糖尿病大鼠局部和全身VEGF水平,上调SDF-1与CXCR4表达,促进血管生成,可能为其促进糖尿病皮瓣愈合的重要机制之一。      

补肾活血方与PRP对Ⅰ型胶原活性和表达的影响

目的:观察补肾活血方与富血小板血浆(PRP)对共培养体系中Ⅰ型胶原活性和表达的影响。方法:取腰椎间盘退变行髓核摘除手术患者的皮下脂肪组织及退变髓核组织,运用多次酶消化法原代分离、培养,建立ADSCs/NPCs共培养体系。纳入腰椎间盘退变患者,连续服用补肾活血方2周,分别于初次服药前和末次服药后1 h抽取静脉血各50 mL,采用二次离心法制备富血小板血浆,以不同血浆干预培养。实验共分为5组:富血小板血浆组(PRP)、贫血小板血浆组(PPP)、含药富血小板血浆组(M-PRP)和含药贫血小板血浆组(M-PPP)、胎牛血清组(FBS)。倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化;采用细胞免疫荧光法检测Ⅰ型胶原活性变化;干预培养2周后采用RT-PCR法检测细胞COL1A1基因表达水平。结果:本研究发现经过补肾活血方和PRP分组干预后的结果显示,与其余组别相比,M-PRP组及PRP组细胞轮廓更为清晰、折光度更好,两组之间无明显差异。细胞免疫荧光染色结果显示,PRP组和M-PRP组细胞数量较多,但单个细胞的染色强度明显低于FBS组。RT-PCR结果显示,PPP组、PRP组、M-PRP组和M-PPP组COL1A1 mRNA表达均显著下调(P<0.05)。结论:补肾活血方联合富血小板血浆组可在一定程度上降低Ⅰ型胶原活性,抑制其表达功能。     

富血小板血浆对人牙周膜成纤维细胞在脱矿病变牙根表面增殖及分化的影响

目的研究不同浓度的富血小板血浆（Platelet-Rich Plasma,PRP）对人牙周膜成纤维细胞（Humanperidontal fibroblasts,hPDLFs）在脱矿的病变牙根表面的附着及增殖情况,以探讨富血小板血浆在促牙周组织再生中的作用。方法选用组织块培养法培养人牙周膜成纤维细胞,选第五代细胞用于实验,制备病变的牙根片并进行脱矿处理。采用二次离心法分离全血,获取PRP,并配制为不同浓度的PRP待用。将制备的牙根片分组植入96孔板,分为包被PRP组和不包被组,对照组不加PRP,实验组加入不同浓度的PRP,用MTT法观察细胞附着及增殖的情况。结果实验组与对照组相比差异具有显著性,实验组10%~20%浓度组间相比差异具有显著性,20%~30%组间相比差异无显著性。结论适量PRP能促进人PDLFs在脱矿的病变牙根表面的附着及增殖,当PRP浓度为20%浓度达到最佳,包被PRP疗效更好。