人微小病毒B19 VP2蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的：利用原核系统表达人微小病毒B19的重组蛋白抗原,为建立ELISA方法诊断B19病毒感染提供特异性抗原。方法：采用PCR方法扩增B19 VP2基因,将之插入到T载体中进行测序,验证序列正确后再重组入原核表达载体pET-30a( ),并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达。用SDS-PAGE分析表达产物。表达产物经亲合层析柱纯化得到VP2重组蛋白抗原。用B19 VP2 IgG对该蛋白进行了Western-Blot分析。结果：筛选出2株B19 VP2蛋白抗原高表达菌株,经IPTG诱导后,表达VP2重组蛋白量占菌体总蛋白量的24．6％。结论：VP2重组蛋白具有良好的抗原活性。     

人微小病毒B19VP1基因原核表达克隆的构建

目的：构建人微小病毒B19 VP1基因的原核高效表达系统。方法：通过PCR扩增B19病毒主要抗原决定簇VP1区段基因，将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上，IPTG诱导表达融合蛋白，产物经亲和层析初步纯化，以Western-Blot进行鉴定，并包被ELISA板，对临床血清进行检测。结果：pGEX-4T-2-VP1可在大肠杆菌中高效表达，表达产物经纯化后可得单一目的蛋白条带。ELISA结果表明，其灵敏度、特异度等指标与德国Virion试剂盒有较好的符合率。结论：该重组蛋白具有良好的抗原性，为研制和开发具有我国独立知识产权的B19病毒基因工程抗原ELISA诊断试剂盒提供了有价值的资料。     

人微小病毒B19 VP1基因原核表达克隆的构建

①目的　构建人微小病毒B19VP1基因的原核高效表达系统。②方法　通过PCR扩增B19病毒主要抗原决定簇VP1区段基因 ,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX 4T 2上 ,IPTG诱导表达融合蛋白 ,产物经亲和层析初步纯化 ,以Western Blot进行鉴定 ,并包被ELISA板 ,对临床血清进行检测。③结果　pGEX 4T 2 VP1可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物经纯化后可得单一目的蛋白条带。ELISA结果表明 ,其灵敏度、特异度等指标与德国Virion试剂盒有较好的符合率。④结论　该重组蛋白具有良好的抗原性 ,为研制和开发具有我国独立知识产权的B19病毒基因工程抗原ELISA诊断试剂盒提供了有价值的资料     

HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的构建乙肝表面抗原(HBsAg)-人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统.方法用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEM-T重组,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pGEX-5X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pGEX-5X-1-HBs中,得到pGEX-5X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定.结果pGEX-5X-1-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19 VP2的双重抗原性.结论成功构建pGEX-5X-1-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础.     

B19 VP2抗原真核表达载体的构建及免疫原性观察

目的：探讨以B19 VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法：用PCR方法以pGEM1-B19为模板扩增出B19 VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3-VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家兔血清中B19 VP2抗体产生情况。结果：成功构建了真核表达载体pcDNA3-VP2;其作为基因疫苗接种家兔后可产生滴度较高,持续时间较长的抗体。结论：B19 VP2基因可作为B19病毒基因疫苗构建的靶基因。     

人细小病毒B19中国株结构蛋白VP1的克隆及表达

目的 :构建人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的重组表达载体 ,探索大量表达VP1蛋白的最佳条件。　方法 :从该科保存的人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的重组克隆载体中获得VP1基因片段 ,将该片段亚克隆入表达载体pQE 30 ,构建VP1 pQE 30原核表达载体 ,并转化至感受态大肠杆菌M1 5中 ,给予不同浓度诱导剂异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)及在不同温度下进行诱导表达。　 结果 :成功构建了融合蛋白VP1 pQE 30的重组表达质粒 ,表达的融合蛋白经 1 5 %SDS PAGE电泳证实其相对分子质量为 2 2 0 0 0。IPTG浓度为 1mmol/L ,诱导表达 5h ,37℃下无表达 ,2 5℃下有表达 ;采用不同的IPTG浓度诱导表达 5h ,0 .0 5mmol/L至 1mmol/L均有表达 ,表达率相近 ,为 (1 6± 1 ) %。　结论 :获得人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的原核表达载体及其产物 ,对进一步研究其纯化及制备单克隆抗体和疫苗有重要意义     

血液病患者人微小病毒B19感染的检测

迄今国外已证实，人微小病毒B19（HumanparvovirusB19，PVB19）的持续感染可见于先天性系统性免疫缺陷症、急性淋巴细胞白血病和爱滋病患者以及器官移植后，是这类患者发生机会感染的重要病原，亦是这类患者发生慢性贫血的直接原因。本研究采用特异性好、敏感度极高的套式PCR以及限制性酶切技术对63例临床血液病患者进行PVB19感染的检测，并比较国外B19病毒参考株，初步分析血液病患者PVB19的感染状况。收集我校南方医院白血病病例32例、贫血症ZI例、淋巴瘤6例、骨髓病4例，所有病例均经骨髓细胞学检查证实。PVB19参考林由英国Tedd…     

肾移植患者微小病毒B19抗体的检测和临床意义

人类微小病毒B19(Human parvovirus，PV-B19)是小DNA病毒属中惟一对人类致病的病毒，可引起传染性红斑、纯红系再障、先天性畸形等多种疾病。在免疫抑制患者中，PV-B19感染可导致多种疾病的发生。本研究应用ELISA方法检测了38例肾移植术后患者PV-B19抗体，并对部分肾移植术后患者进行了不同时相点的检测，现报告如下。     

无偿献血员血清人微小病毒B19感染情况调查

目的 了解当地献血员中人微小病毒Ag(HPV B19)感染情况，为预防HPV B19感染提供初步依据；方法 随机抽查ll0名无偿献血员所供血液；以聚合酶链反应技术检测血清中HPV B19-DNA的表达。结果 测出HPV B19 DNA阳性23名，阳性率达20．9％。结论 初步表明献血员中HPV B19感染率较高。     

应用PCR—SSCP方法初步分析人微小病毒B19基因变异

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法初步了从华南地区收集的３份畸胎组织标本人微小病毒Ｂ１９分离株，其意泳图谱与国外参数株相同，提示两者衣壳蛋白ＶＰ１编码区的基因结构可能无差异。     

骨髓增生异常综合征患儿骨髓人细小病毒B19感染对巨核系祖细胞增殖的影响祆

目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患儿人细小病毒B19（HPVB19）骨髓感染及对巨核系祖细胞增殖的影响。方法对61例MDS患儿骨髓进行HPVB19DNA检测，体外培养巨核细胞集落形成单位祖细胞（CFU-MK）。结果MDS患儿HPVB19骨髓感染组CFU-MK形成较非感染组及对照组明显下降（均P〈0．05）。血小板计数MDSHPVB19骨髓感染组低于非感染组，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论HPVB19感染骨髓导致CFU—MK形成减少可能是MDS患儿外周血小板减少的原因之一。     

人细小病毒B19实验诊断技术研究

目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。     

145例患儿血清中人类微小病毒B19-VP2-IgM的检测

目的 :探讨人类微小病毒B19(HumanParvovirusB19)在患儿中的感染情况。 方法 :用ELISA法对14 5例患儿 (大部分来自血液组 )和 4 8例健康儿童 (来自儿保体检门诊 ,对照组 )的血清标本进行了B19 VP2 IgM检测。 结果 :B19 VP2 IgM阳性检出率ITP和AA最高 ,分别为 4 4 .4 % (12 / 2 7)和 4 0 % (10 / 2 5 ) ,与对照相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,其它病组与对照组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 结论 :儿童对B19有较高的感染率 ,尤其ITP和AA患儿与B19感染关系更为密切。     

新诊断儿童免疫性血小板减少症与人细小病毒B19感染的相关性研究

目的 明确人细小病毒B19(human parvovirus B19,B19)感染对儿童新诊断免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia, ITP)的影响。 方法 选取2011年1月~2013年12月间416例首次住院并确诊为新诊断ITP患儿为疾病组;随机选取无血小板减少及其他血液系统疾病的普通呼吸道感染住院患儿130例作为对照组。ITP患儿及对照组儿童按年龄段分为<1岁组(n=187)、1~3岁组(n=127)、3~7岁组(n=71)、7~14岁组(n=31)。观察各年龄段患儿B19感染率,疾病组中B19感染阳性及阴性ITP患儿经过相同治疗后的预后情况。 结果 疾病组中B19感染率较对照组各年龄段B19感染率为高,差异均无统计学意义(P均>0.05)。ITP患儿均未接受针对B19的相关抗病毒治疗,而针对血小板减少经丙种球蛋白和(或)激素治疗后,疾病组与对照组患儿PLT缓解率差异无统计学意义,与各年龄段B19阴性的ITP患儿治疗后缓解率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。 结论 B19感染可能不是新诊断ITP患儿发病的一个主要致病因素;是否治疗B19并不影响儿童急性ITP的治疗效果,因此B19感染的新诊断ITP患儿无需同时接受B19抗病毒的相关治疗。     

人细小病毒B19感染与早期自然流产关系的探讨

目的探讨人细小病毒B19（HPVB19）感染与早期自然流产的关系。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测52例早期自然流产患者（研究组）和45例无异常人工流产孕妇（对照组）血清中HPVB19-IgM和IgG。结果研究组血中B19V-IgM阳性率为23.08%,而对照组阳性率为6.67%,2组间具有显著性差异（P〈0.05）;研究组近期HPVB19感染的概率是对照组的4.20倍（95%CI 1.10～15.99）。研究组B19V-IgG阳性率为32.69%,对照组为28.89%,2组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 HPVB19感染可能是导致早期自然流产的原因之一。     

用PCR方法检测献血员的B_(19)病毒感染情况

目的：研究人微小病毒Ｂ１９在献血员中的感染情况。方法：采用ＰＣＲ技术对５００份献血员血清标本进行检测。结果：发现一例Ｂ１９病毒ＤＮＡ阳性，并用Ｋｏｃｈ设计的引物扩增标本和用ＨａｅⅢ，ＰｓｔⅠ和ＳｔｙⅠ酶切分析都证实为人微小病毒Ｂ１９。结论：国内献血者中有Ｂ１９病毒携带者。血液和血液制品有可能污染有Ｂ１９病毒。这个情况值得进一步研究。     

类风湿关节炎患者B19病毒感染及细胞因子变化

目的：了解国内类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA)，幼年类风湿关节炎（juvenile rheumatoid arthritis,JRA)患人细小病毒B19（B19）的感染情况及其细胞因子（CK）IL－6，IL－8，sIL-2R和TNF－α水平的变化。方法：采用巢式PCR技术和丧心ELISA法对23例RA及30例JRA患血清（BS），4例JRA，6例骨性关节炎（OA）和9例半月板损伤（MT）关节液（SF）进行B19－DNA和IL－6，IL－8，sIL-2R,TNF-α等CK水平的检测。结果：（1）23例RA，30例JRA患BS B19－DNA均12例阳性，阳性率分别为52．1％和40．0％，与对照组比较差异显（P＜0．05）；（2＿4例JRA患SF中，3例B19－DNA阳性，6例OA和9例MT患均阴性；（3）23例RA，30例JRA患BS中，IL－6,SIL-2R水平与对照组相差非常显（P＜0．05）；（4）23例RA，30例JRA患B19－DNA阳性组与阴性组4种CK比较均无显差异（P＞0．05）；（5）SF标本中，4例JRA患的sIL-2R与其他两组有显差异（P＜0．01）。结果：（1）国内RA，JRA患有较高B19感染率，提示B19感染与RA，JRA密切相关；（2）IL－6 ,sIL-2R与RA，JRA活动性有关，是类风湿活动性的主要指标；（3）sIL-2R可能是参与JRA关节局部病理损伤最主要的CK之一；（4）BS中CK水平的变化与是否感染B19无关，即B19并非是导致RA，JRA的唯一因素。