抗体F（ab’）2片段制备的新方法-木瓜蛋白酶酶切法

制备抗体的F(ab’)2片段的传统方法是胃蛋白酶消化法,然而不同IgG亚类对胃蛋白酶消化的敏感性不一样,尤其是IgG1最难消化,甚至有抗性,得率很低。本文报道了F(ab’)2片段制备的一种新方法-木瓜蛋白酶法。我们采用该方法将抗人肝癌抗体HAh18、抗人SIgA单抗4E,酶切制备了F(ab’)2片段,所获得的F(ab’)2得率及免疫活性均较     

抗HBe F(ab′)_2 HRP在测定血清HBeAg中的应用

在用双抗体夹心法ELISA检测血清中HBeAg时,类风湿因子(RF)强阳性的标本可能出现假阳性结果。本文从高效价抗HBe人血清中提取IgG,进一步制备F(ab′)2后再与辣根过氧化物酶结合。以此酶标抗体进行ELISA测定,由于消除了RF与Fc段结合的干扰,增强了检测的特异性。18份因RF干扰的HBeAg假阳性标本,在本法检测中11份得到阴性结果。     

氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)-APH(2″)的研究进展

氨基糖苷类抗生素是一类天然或半合成的多价阳离子化合物,临床应用历史已有60年(第1个应用于临床的是链霉素,1944年[1]),主要作用机制是抗生素与核糖体小亚基的16S rRNA结合,使蛋白质翻译的忠实性降低,最终导致菌体死亡。氨基糖苷类抗生素的抗菌活性与羟基基团关系不大,而与氨基基团的数量和位置关系密切[2](顺序为2′,6′-二氨基>6′-氨基>2′-氨基>无氨基)。细菌通过多种机制保护自身免受氨基糖苷类抗生素的侵害,包括:①产生氨基糖苷类修饰酶使抗生素失活;②细胞膜对氨基糖苷类抗生素的通透性降低,使药物难以进入细胞内;③药物的核糖体…     

人偏肺病毒F1、F2亚单位原核表达系统的构建及多克隆抗体制备

目的 构建人偏肺病毒融合蛋白亚单位F1、F2原核表达系统,初步获得抗F1、F2重组蛋白的多克隆抗体,为相关疫苗的研究奠定基础。 方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增F1、F2基因片段,经T-A克隆确保其准确性,双酶切后插入原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),按优化后条件大量诱导表达,纯化后经Western Blot检测特异性。取纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA法检测效价,间接免疫荧光法(IFA)检测多克隆抗体是否能与人偏肺病毒发生特异性反应。 结果 F1、F2基因均正确插入pET32a(+)中,并具有正确的读码框架。0.5 mmol/L IPTG 37 ℃诱导培养5 h可获得大量带His标签的重组蛋白,纯化后浓度分别达到200 g/ml和300 g/ml。Western Blot结果显示,重组蛋白可被抗His标签抗体特异识别;免疫小鼠获得多克隆抗体效价分别为抗pET32a-F1最高1 : 640,抗pET32a-F2最高1 : 40 960。IFA显示抗pET32a-F1、抗pET32a-F2多克隆抗体均可与人偏肺病毒作用产生特异性荧光。 结论 成功构建了F1、F2的原核表达质粒, 并在大肠埃希菌中获得高效表达,该蛋白具有良好的抗原性;免疫小鼠获得特异性多克隆抗体,有利于人偏肺病毒的深入研究。     

凝血酶原片段(F1+2)及凝血酶抗凝血酶(TAT)研究进展

随着血液生理、生化研究进展 ,凝血酶原片段 (Prothrombinfragment 1+2 ,F1+2 )与凝血酶 抗凝血酶 (Thrombin antithrombin ,TAT)已从实验研究走向临床研究。目前常用ELISA方法检测F1+2及TAT含量 ,其敏感性及特异性均较好。二项指标的临床应用相得益彰 ,各有所长 ,对检测血栓前状态及DIC诊断较准确 ,可监测抗凝、溶栓疗效 ,在恶性血液病患者中含量均显著升高。     

应用HEP-2细胞酶免疫法检测抗核抗体

以HEP－2细胞为基质核抗原，用羊抗人HRP－IgG作为第二抗体检测了70例各种风湿性疾病患者血清中的抗核抗体，并与IF法作了对照比较。结果表明该法具有良好的敏感性和特异性，且方法简便易行，适合临床检测及推广应用。     

系统性红斑狼疮患者抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体检测的意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清抗β2糖蛋白I(β2GPI)抗体检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)半定量测定56例SLE患者及40名健康对照者血清抗β2GPI和抗心磷脂抗体(ACA)阳性率。结果SLE患者血清抗β2GPI和ACA阳性率分别为69.6%、80.4%,明显高于正常对照(P<0.01);SLE伴有血栓栓塞症状或病史者抗β2GPI为94.1%,高于无血栓栓塞症状的SLE患者(P<0.01)。结论SLE患者抗β2GPI的高表达与其临床症状,尤其是血栓栓塞症状具有一定的相关性。     

HEP—2细胞间接荧光免疫法检测自身抗体的应用

目的：结缔组织疾病在临床上症状往往并不明显，所以只依靠某一单项的检验，很难确定疾病的类型，用HEP—2细胞(人喉癌上皮细胞)做抗原底片，可出现8种荧光模型，抗核抗体(ANA)5种，抗胞浆抗体(APA)3种。大大提高了对结缔组织疾病的诊断及鉴别诊断。并且从分子生物学角度来研究这些疾病的本质。方法：用间接荧光免疫法检测病人血清中存在的自身抗体。结果：在以HEP—2细胞为抗原底片的细胞浆中可出现3种荧光模型。分别为颗粒型：阳性者细胞浆呈现大小不等明亮绿色荧光颗粒，纤维型：细胞浆内呈现明亮绿色纤维。均质型：细胞浆内呈现均匀明亮绿色荧光；细胞核内可出现5种荧光模型，分别为周边型：细胞核周围呈明亮的绿色，核的中心区发暗。均质型：全细胞核呈现均匀明亮的绿色荧光。斑点型：核内呈现大小不等明亮绿色斑点。核仁型：核内的核仁呈现明亮绿色的荧光。散点型：核内呈现大小均匀散在的明亮绿色斑点。讨论：ANA中的核膜型和均质型，系统性红斑狼疮活动期阳性率高达100％，是重要的诊断指标。斑点型多见于混合性结缔组织病，系统性红斑狼疮和全身硬皮症阳性率也达60％。散点型常见于全身硬皮症和全身硬皮症综合症。核仁型，除系统性红斑狼疮外，全身硬皮症和皮肌炎阳性率达40％。APA中的颗粒型为抗线粒体抗体，慢性肝炎。肝硬化阳性率为30％。原发性胆汁性肝硬化高达90％。纤维型为抗平滑肌抗体，阳性者与急慢性肝脏病和肝癌有关，阳性率为50％。均质型为抗核糖体抗体，阳性者与系统性红斑狼疮。混合性结缔组织病等相关。以往在测定抗线粒体抗体用大白鼠冰冻胃切片做为底物；测平滑肌抗体用大白鼠冰冻肾切片为抗原底物：测抗核糖体抗体用核糖体为底物。前二者系间接免疫荧光法，后者用免疫转印法。本文以HEP—2细胞做为抗原底物代替上述抗原底物，经上述两法三项的阳性和阴性血清，相互对应交叉检测，其阳性和阴性皆达到100％的符合率。结论：用HEP—2细胞做抗原底片一次可检测若干种自身抗体。是一种既准确又快捷又经济的检测，是结缔组织病症一种可靠的筛选试验。     

ThT试验法探究不同Aβ_(42)抗体含量IVIG干预Aβ_(42)聚集的能力

目的探讨检测国产IVIG中β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(42))抗体含量与检测干预Aβ_(42)聚集能力间的关联性,为我国IVIG防治阿尔茨海默症的临床前评价提供研究基础。方法采用ELISA法,选择Aβ_(42)抗体含量成梯度浓度的5种国产IVIG作为检测对象;利用正交试验探索硫磺素T(Th T)试验测定Aβ_(42)聚集的最佳Th T、Aβ_(42)工作浓度并进一步确定IVIG检测浓度;采用上述优化的Th T试验条件检测5种国产IVIG对Aβ_(42)聚集的干预效果,并与其Aβ_(42)抗体含量作对比分析。结果 5种国产IVIG中Aβ_(42)抗体含量(μg/m L)分别为2.08、14.79、25.42、51.41、84.24;确定Th T法测定Aβ_(42)聚集的Th T、Aβ_(42)最佳工作浓度(μmol/L)分别为6.3、12,3种浓度(0.5、5、50)均适宜于检测IVIG;Th T试验:5种IVIG抑制Aβ_(42)聚集的能力在3个浓度水平间均未出现一致的强弱趋势,也未出现随Aβ_(42)抗体含量升高而增强的趋势。结论 ThT试验测得IVIG抑制Aβ_(42)聚集的能力与ELISA法测得的Aβ_(42)抗体含量间没有明显关联性,IVIG制品中Aβ_(42)抗体含量在体外并不能直接反映其抑制Aβ_(42)聚集的能力。     

纤溶酶—α2—抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及其应用

目的制备纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物(plasmin-α2-antiplasmin complex, PAP)的单克隆抗体并建立其酶免疫检测方法.方法从人血浆中提纯的PAP作为免疫原制备特异性单克隆抗体,通过双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)对该单克隆抗体应用价值进行评估.结果获得特异针对PAP新抗原的单抗3C10和针对PAP及纤溶酶原(Plg)的单抗2B9,效价均为1.25×10-6,其对PAP的亲和常数分别为4.69×10-10M和5.62×10-9M.以此建立的双抗体夹心ELISA检测PAP在0～160ng/ml范围内呈良好的线性关系,批内CV＜7%,检测敏感度为5ng/ml,与ADI公司的PAP试剂盒相关性良好(r=0.9629).结论本法可应用于临床评估纤溶系统的激活状态.     

酶联免疫吸附法检测艾滋病抗体室内质控血清的制备和应用

EL ISA法检测抗 - HIV的诊断试剂虽然经过中国药品生物制品检定所批批检的检测 ,但由于很多因素都会影响到 EL ISA法检测结果的准确性 ,所以每次检测都应进行室内质控 [1 ] 。因此我们试制了抗 - HIV室内质控血清 ,考核了其在不同温度存放时的稳定性和精密性 ,并与卫生部临床检测中心所购抗 - HIV室内质控血清进行了对照。结果显示该方法制备的室内质控血清具有较好的稳定性和精密性 ,比较适合在抗 - HIV初筛试验室中推广应用 ,现介绍如下。1　材料和方法1.1　试剂　 EL ISA检测抗 - HIV试剂盒 :上海科华 ,批号为2 0 0 10 915 ,…     

2型糖尿病患者血清促甲状腺激素与抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体的变化

目的 观察2型糖尿病(T2DM)患者血清促甲状腺激素(TSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)变化及其临床意义.方法 选取2019年1月至2020年7月在海西自治州人民医院治疗的T2DM患者110例为观察组,并以同期健康体检者60例为对照组.比较两组血清TSH、TGAb、TPOAb...     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157∶H7抗体的制备与特性研究

目的研究制备特异性抗E.coliO157∶H7鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)及酶标记抗体(IgY-HRP)的工艺条件。方法分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果可获得纯度为79.6%~85.3%的IgY,提取率74%~77%;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP(1mg/ml)最高效价640。结论免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

桥本甲状腺炎患者白介素-2及受体与甲状腺过氧化物酶抗体的关系

目的：探讨桥本甲状腺炎（HT）患者外周血中白介素-2（IL-2）及白介素-2受体（IL-2R）与甲状腺过氧化物酶抗体（TPoAb）的关系。方法：将86例HT患者分为初诊、复诊2组,并另选20名健康体检者作为正常对照组。采用酶联免疫吸附（ELISA）夹心法检测受检者外周血中的IL-2及IL-2R,并采用微粒子酶免化学发光分析法检测TPoAb浓度水平,观察IL-2及IL-2R与TPoAb的关系。结果：IL-2在初诊HT组、复诊HT组与正常对照组中的含量分别为（25.01±3.31）ng/L、（23.17±5.89）ng/L和（24.05±3.92）ng/L,3组间两两比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;IL-2R在初诊HT组、复诊HT组和正常组水平分别为（1125.94±743.87）ng/L、（722.93±640.06）ng/L和（293.48±113.35）ng/L,3组间两两比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。复诊HT组的TPoAb含量为（169.75±44.36）IU/L,高于正常组的（8.30±1.70）IU/L,低于初诊HT组的（460.96±299.05）IU/L,3组间两两比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。HT患者外周血中的IL-2R含量与TPoAb水平呈正相关（r=0.696,P〈0.01）。结论：HT患者外周血IL-2R含量升高,且与TPoAb水平呈正相关,检测IL-2R含量有助于观测患者的免疫功能状态。     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157:H7抗体的制备与特性研究

目的：研究制备特异性抗E.coli O157：H7鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）及酶标记抗体（IgY-HRP）的工艺条件。方法：分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果：可获得纯度为79．6％～85．3％的IgY,提取率74％～77％;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP（1mg／ml）最高效价640。结论：免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

FQ-PCR与血清型特异性抗体法检测HSV-2的临床意义

目的分析荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与血清型特异性抗体法对单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的检测情况及其临床意义。方法对322例拟诊的生殖器疱疹患者分别采用FQ-PCR与HSV-2血清型特异性抗体2种方法进行HSV-2检测,并对其检测结果及临床特征进行统计学分析。结果 322例拟诊生殖器疱疹患者FQ-PCR共检出HSV-2阳性148例,阳性率为45.96%;不同类型临床标本FQ-PCR阳性率有明显差异,其中水疱液的检出率最高,为60.26%,溃疡/糜烂拭子的检出率为51.82%,结痂痂皮的检出率为17.85%。HSV-2血清型特异性抗体法共检出任一抗体阳性153例(占47.51%);HSV-2 IgG单一阳性133例(占36.74%);HSV-2 IgM单一阳性10例(占2.76%);IgG和IgM均阳性10例(占2.76%)。FQ-PCR和HSV-2 IgG两者单一阳性的病例比较后发现,FQ-PCR单一阳性病例其发病至检测时间[(4.36±3.80)d]少于HSV-2 IgG单一阳性病例[(9.27±7.25)d](P0.01)。结论 FQ-PCR与血清型特异性抗体法同时检测有助于HSV-2感染的诊断。     

携带RhD-CE(2-9)-D基因并检出高效价同种抗-D抗体1例报告

RhD-CE(2-9)-D基因型是中国汉族人群Rh血型中部分D(RhD弱表现型的一种,为D抗原的变异体[1])的主要等位基因。因其抗原表达极弱,用血清学方法无法检出,常被鉴定为Rh阴性。本研究从1例Rh阴性不全流产妇女血清中检测出高效价的抗-D抗体,并进一步检测其基因型,证实为RhD-CE(2-9)-D基因型,报告如下。     

ELISA两种方法检测献血者标本HIV(1+2)抗体比较

全血HIV(1+2)抗体检测是保证输血安全的重要检测项目.由于ELISA间接法受原料所限,难以使灵敏度和特异性同时保持在较好的水平,提高灵敏度,则使检测结果假阳性率升高,造成大量血液浪费.而ELISA双抗原夹心法是直接采用重组基因抗原进行标记,达到对标本HIV抗体(IgM、IgG)直接测定的目的.笔者就两种方法检测全血HIV(1+2)抗体进行比较,现将结果报道如下.