鞘内注射氟代柠檬酸对炎性痛敏大鼠的镇痛作用

目的研究鞘内注射氟代柠檬酸(fluorocitrate,Fc)对致炎大鼠痛觉过敏的影响。方法采用大鼠右后爪踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂(complete freunds adjuvant,CFA)50μl致炎模型。测定给予CFA或Fc前后大鼠机械性缩爪阈值(MWT)和热刺激缩爪潜伏期(TWL)。免疫组化分析脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)和小胶质细胞标记物(OX-42)的表达。结果大鼠皮下注射CFA24h后出现明显的炎性痛敏,鞘内注射Fc后4,6,8,10,12h,与CFA组大鼠比较,大鼠MWT明显提高(P<0.01),TWL明显延长(P<0.01)。鞘内注射Fc6h后,降低脊髓背角GFAP和OX-42表达。结论脊髓胶质细胞可能参与炎性痛敏的发生和维持,氟代柠檬酸可能通过抑制其生物活性而发挥镇痛作用。     

BoNT-A对慢性坐骨神经结扎大鼠疼痛行为学及脊髓中Fos蛋白的影响

目的 探讨肉毒毒素A(BoNT-A)对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为学及脊髓背角Fos蛋白表达的影响.方法 建立雄性SD大鼠慢性坐骨神经结扎(CCI)疼痛模型,CCI术后第3天开始,同侧肢体足底皮下注射BoNT-A 30 U/kg和等容积生理盐水,给药前、给药后1、3、5、7、14 d,采用von-Frey纤维细丝机械刺激法和热辐射刺激法评定大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL),观察大鼠疼痛行为学变化,根据变化结果,给药后第5天取相应脊髓节段标本,运用免疫组织化学法观察脊髓背角Fos蛋白表达.结果 CCI神经病理性疼痛模型大鼠建立后,CCI组同侧MWT和TWL均明显降低,且脊髓水平Fos蛋白表达明显增多;同侧足底注射BoNT-A 30 U/kg后,其MWT和TWL,均显著增加,脊髓水平Fos蛋白表达明显减少.结论 足底注射BoNT-A抑制脊髓水平Fos蛋白的表达,能减轻神经病理性疼痛模型大鼠的机械性触诱发痛和热痛觉过敏.     

皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分对大鼠炎性痛作用机制探讨

目的：探讨皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分（CVAF）对大鼠炎性痛作用效应及其可能机制。方法：40只雄性SD大鼠在测定基础痛阈后随机分为4组（n=10）：正常对照组（NC组）、炎性痛模型组（CFA组）、炎性痛模型＋CVAF组（CFA＋CVAF组）和炎性痛模型＋吗啡组（CFA＋Morphine组）。随后将36只SD雄性大鼠随机分成6组（n=6）：正常对照组（NC组）、炎性痛模型组（CFA组）、炎性痛模型＋CVAF组（CFA＋CVAF组）、炎性痛模型＋阿托品＋CVAF组（CFA＋Atr＋CVAF）、炎性痛模型＋纳洛酮＋CVAF组（CFA＋Nal＋CVAF）和炎性痛模型＋L—NAME＋CVAF组（CFA＋L—NAME＋CVAF）。测定各组大鼠的热痛阈潜伏期（TWL）和机械痛阈值（MWT）,制备脊髓匀浆,用于检测其中IL-1和TNF—a的表达。结果：与NC组相比,CFA组大鼠第1天开始TWL和MWT明显降低,出现热痛觉过敏和机械痛觉过敏,持续14d仍存在;CFA组大鼠脊髓匀浆IL-1和TNF—a表达均明显增高（P〈0．01）。与CFA组相比,CFA组大鼠腹腔注射CVAF后其TWL和MWT均升高,表明炎性痛大鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏得到改善;脊髓匀浆中IL-1、TNF—a表达显著减少（P〈0．01）,显示CVAF通过抑制炎性因子的产生而发挥镇痛作用。与CFA＋CVAF组大鼠相比,L—NAME＋CVAF组大鼠明显增强了CVAF对炎性痛大鼠的镇痛作用,表现为TWL和MWT的明显升高（P〈0．01）;而CFA＋Atr＋CVAF组和CFA＋Nal＋CVAF组大鼠TWL和MWT均有不同程度的降低（P〈0．01）。结论：初步阐明CVAF通过减少炎性因子的释放对炎性痛大鼠具有镇痛效应。阿片肽受体系统和胆碱能受体系统均部分参与了其对炎性痛大鼠的镇痛作用。     

新生期芬太尼镇痛下调幼鼠脊髓Fos蛋白表达

目的：通过观察幼鼠腰骶段脊髓背角Fos蛋白表达,探讨新生期芬太尼镇痛抑制幼鼠慢性内脏痛觉高敏感性形成的作用机制。方法：32只SD新生大鼠按2×2析因设计分成4组,每组8只,A1B1组：新生期反复结直肠刺激（colorectal irritation,CI）,建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型,CI前腹腔注射芬太尼;A1B2组：新生期反复CI,CI前腹腔注射生理盐水;A2B1组：新生期未接受CI,腹腔注射芬太尼;A2B2组：新生期未接受CI,腹腔注射生理盐水。常规饲养到幼鼠期（6周龄）,留取L6-S2脊髓,应用免疫组织化学染色及计算机图像分析系统进行脊髓Fos阳性细胞数（FLI细胞数）和积分光密度值半定量分析。结果：新生期CI前腹腔注射芬太尼镇痛,可使幼鼠腰骶段脊髓背角FLI细胞数和FLI细胞积分光密度值显著减低;幼鼠腰骶段脊髓背角Fos蛋白表达受到新生期CI和新生期应用芬太尼两因素的影响,两者存在交互作用,差别具有统计学意义。结论：新生期CI前腹腔注射芬太尼,能够导致幼鼠脊髓神经元Fos蛋白高表达下降,抑制幼鼠慢性内脏痛觉高敏感形成。     

脊髓背角神经元上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的机制

目的观察鞘内注射钠通道抑制剂619C89对脊髓缺血再灌注损伤引起的痛觉过敏大鼠的痛阈、脊髓背角神经元中Nav1.8通道表达的影响。方法 SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、痛觉过敏组(H组,缺血再灌注前3 d鞘内注射30μL生理盐水)、钠通道抑制剂组(I组,缺血再灌注前3 d鞘内注射619C895μg/30μL)。S组仅暴露主动脉弓而不结扎,其他各组开胸后无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再开放,建立SCIRI引起的痛觉过敏模型。各组手术前均于L_(5-6)鞘内置管并连续注射3 d。术后1、3、5、7、14 d分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;取第4~6节腰段脊髓,采用免疫双荧光法观察背角神经元状态及其Nav1.8的表达,Real time-PCR法检测各组大鼠脊髓组织Nav1.8表达。结果与S组相比,术后各观察点(尤以第7天为著)H组大鼠热痛阈和机械性痛阈降低,损伤后7 d脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达增加(P<0.05);I组大鼠热痛阈和机械性痛阈值明显提高(P<0.05),脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达降低(P<0.05)。免疫双荧光染色显示,损伤后7 d,H组大鼠脊髓背角Nav1.8的荧光强度明显增加,且主要表达在NeuN表达阳性的神经元的胞浆中;且与S组相比,H组中NeuN/Nav1.8双阳性的细胞数量明显增多,而I组双阳性的细胞数量减少(P<0.05)。结论脊髓背角神经元通过上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的形成。     

鞘内注射巴氯酚对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及其对脊髓GABA转运体-1的影响

目的研究鞘内注射GABAB受体激动剂巴氯酚(ba-clofen,Bac)对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及其对脊髓GABA转运体-1的影响。方法建立坐骨神经结扎致神经病理性痛大鼠模型。在行为学实验部分,将32只大鼠随机分为NS组、Bac1组、Bac2组、Bac3组(n=8),分别鞘内注射生理盐水、0.1、0.3、1.0μg巴氯酚10μl,并分别于给药前、给药后0.5、1、2、4、8、12、24 h测定大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawl threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawl latency,TWL)以及运动功能。在第2部分,将大鼠分为NS组与Bac组,鞘内分别给予0.3μg巴氯酚或生理盐水,分别于给药前、给药后1、4、8 h取大鼠脊髓腰段,免疫组织化学检测脊髓节段GAT-1免疫阳性神经元(n=6);分别于给药前、给药后30 min、1、2、4、8、12和24 h取大鼠脊髓腰段,用Western blot方法测定脊髓节段GAT-1蛋白含量(n=4)。结果鞘内注射巴氯酚后0.5～2 h,Bac1组、Bac2组与Bac3组大鼠MWT和TWL均较NS组明显升高(P<0.01,P<0.05),鞘内给药后4 h,Bac2与Bac3组大鼠MWT和TWL仍较NS组明显升高(P<0.01,P<0.05),给药后8 h,Bac3组MWT与TWL仍高于NS组(P<0.05)。与NS组和给药前比较,鞘内注射0.3μg巴氯酚后0.5～4h,大鼠脊髓节段的GAT-1蛋白含量均明显降低(P<0.01,P<0.05),大鼠脊髓背角浅层GAT-1免疫阳性染色灰度值亦明显降低(P<0.01,P<0.05),至给药后8 h,GAT-1的表达逐渐增多,与NS组和给药前相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鞘内注射GABAB受体激动剂巴氯酚可减轻坐骨神经结扎致神经病理性痛大鼠的痛觉过敏,其镇痛作用可能与抑制脊髓水平GAT-1的表达有关。     

帕罗西汀对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响及其作用机制

目的 探讨帕罗西汀对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响及其可能的作用机制。方法 将健康成年♂SD大鼠随机分为3组,每组8只,包括正常对照组、糖尿病组、糖尿病+帕罗西汀治疗组。采用链脲佐菌素（75 mg·kg^-1）一次性腹腔注射建立糖尿病模型,并分别于注射前、注射后7,14,28 d检测机械性缩足反应痛阈（PWMT）。于注射佐脲酶菌素28 d后处理大鼠;取L₄~L₆段脊髓,运用尼氏体染色法检测脊髓组织的形态变化,TUNEL染色检测背角脊髓神经元的凋亡情况,免疫印迹技术检测脊髓神经元血红素加氧酶-1（HO-1）的表达。结果 与正常对照组比较,糖尿病组和糖尿病+帕罗西汀治疗组机械性痛阈明显降低（P<0.05）;与糖尿病组比较,糖尿病+帕罗西汀治疗组大鼠在注射佐脲酶菌素后28 d机械性痛阈显著升高（P<0.05）。糖尿病组大鼠脊髓背角萎缩,神经元变性坏死,细胞数降低,并且尼氏体减少,甚至消失;而糖尿病+帕罗西汀治疗组相对于糖尿病组大鼠脊髓背角萎缩降低,神经元数量升高,可见尼氏体。正常对照组大鼠脊髓背角神经元有较多HO-1表达,而糖尿病组HO-1表达量较低;相对于糖尿病组,糖尿病+帕罗西汀治疗组大鼠脊髓背角神经元有大量HO-1表达。结论 帕罗西汀可以减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛,对脊髓背角神经元具有保护作用,其作用机制可能与上调脊髓背角神经元HO-1的表达有关。     

鞘内注射促皮质素抑制甲醛痛敏大鼠脊髓NOS阳性神经元增多

目的:研究鞘内注射促皮质素(Cor)对甲醛痛敏大鼠脊髓背角一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元增多的影响。方法:采用痛级均数(PIR)测定、NADPH-d组织化学法、Fos免疫组织化学法染色,观察鞘内注射(ith)Cor对甲醛痛敏大鼠脊髓背角NOS阳性神经元、Fos免疫反应神经元、NOS/Fos双标记神经元及痛敏的影响。结果:ith Cor(0.5-1.5U)均能显著抑制甲醛引起的大鼠脊髓背角NOS、Fos、NOS/Fos阳性神经元的增多和痛敏反应,其作用为ith NOS底物左旋精氨酸(Arg,5-15nmol)部分翻转。结论:Cor通过抑制大鼠脊髓背角NOS阳性神经元的增多抑制痛敏。     

下丘脑室旁核ATP敏感性钾离子通道参与大鼠炎性痛调节的作用研究

目的探讨下丘脑室旁核ATP敏感性钾离子通道(KATP通道)在大鼠炎性痛中的作用。方法♂SD大鼠(250²80 g),采用随机数字法分为5组(每组6只):正常组(Normal组)、完全弗氏佐剂致炎性痛组(CFA组)、生理盐水组(Saline组)、KATP通道特异性激动剂组(Diaoxide组)和激动剂溶媒组(Vehicle组)。以热痛敏刺激仪检测各组大鼠热缩足潜伏期(TWL),观察痛行为学变化;以免疫荧光技术观察室旁核KATP通道和脊髓背角c-Fos阳性细胞数的变化。并观察KATP通道激动剂对大鼠痛行为和脊髓背角c-Fos表达的影响。结果 1与术前和Saline组相比,CFA组大鼠炎症侧后足术后d 1、d 3和d 7的TWL降低(P<0.05),CFA组术后d 3、d 7的KATP阳性细胞数减少(P<0.01),脊髓背角c-Fos阳性细胞数增加(P<0.01);2与Vehicle组相比,激动剂组大鼠热痛觉过敏减轻(P<0.01),脊髓背角c-Fos阳性细胞数减少(P<0.01)。结论下丘脑室旁核KATP通道可能与CFA所致炎性痛的发生机制相关。     

丙戊茶碱预处理削弱大鼠关节炎痛觉过敏的脊髓机制

目的研究预先鞘内注射丙戊茶碱对大鼠佐剂性关节炎热痛觉过敏的影响及其作用是否与抑制脊髓星形胶质细胞活化相关。方法实验采用大鼠右后爪踝关节外侧皮下注射CFA50μl致炎模型。①SD大鼠48只,随机分为6组(n=8),生理盐水(normal saline,NS)组:鞘内注射(intrathecal injection,it)NS10μl加皮下注射NS50μl;模型组:NSi加皮下注射CFA;单用丙戊茶碱组:10μg/10μl丙戊茶碱i加皮下注射NS;丙戊茶碱治疗组,分别为p2.5、p5、p10组:2.5μg/10μl、5μg/10μl及10μg/10μl丙戊茶碱it加皮下注射CFA。热辐射法测定各组大鼠热缩足反射潜伏期。②SD大鼠30只,随机分为6组(n=5),随机取3组鞘内预先注射生理盐水10μl,30min后注射CFA50μl,并分别于注射CFA5h、3d、7d麻醉;余大鼠预先注射丙戊茶碱(10μg/10μl,it),每天1次,30min后注射CFA50μl制成炎症模型,分别于注射CFA后5h、3d、7d麻醉;灌注,取材,免疫组化分析在炎症的不同阶段,大鼠炎症侧脊髓背角星形胶质细胞标志物GFAP表达。结果①模型组大鼠注射侧d2热缩足反射潜伏期与生理盐水组比较明显缩短(P<0.01),鞘内注射丙戊茶碱(5和10μg/10μl组)5h后大鼠热缩足反射潜伏期明显延长(P<0.01),有效作用时间为d1~d7;2.5μg/10μl组药物有效作用时间为d1~d2;注射对侧肢体大鼠行为学在实验观察期间没有明显变化;②模型组大鼠注射侧脊髓背角星形胶质细胞活化明显,积分光密度值增加(P<0.01)。鞘内注射丙戊茶碱(10μg/10μl组)5h后免疫组织化学染色可看到GFAP染色变浅,星形胶质细胞分支缩短,积分光密度值下降(P<0.01)。结论预先鞘内注射丙戊茶碱可提高大鼠热反射缩足潜伏期,可能通过抑制脊髓部位星形胶质细胞活化发挥抗伤害性作用。     

糖尿病神经痛大鼠脊髓背角NMDA受体表达的变化

目的探讨糖尿病神经病理性痛(DNP)大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的变化。方法 SD雄性大鼠24只,4周龄,体重130～150g,随机分为2组,DNP组(D组,n=15)腹腔注射链尿佐菌素(STZ)50mg/kg制备成DNP模型,正常对照组(C组,n=9)给予等容量0.9%氯化钠溶液。给予STZ或0.9%氯化钠溶液后3、5、7周时分别取D组(5只)和C组(3只)大鼠,测量体重,采集静脉血样,测定空腹血糖浓度,然后测定机械缩足阈值,取脊髓组织,采用免疫组织化学法分别测定脊髓背角NR1和NR2B亚单位表达水平。结果与C组比较,在各时间点,D组体重下降,血糖升高,机械缩足阈值明显降低(P<0.05),脊髓背角NR1和NR2B亚单位免疫阳性细胞数表达明显增加(P<0.05)。结论脊髓背角NMDA受体在脊髓水平参与了大鼠糖尿病神经病理性痛的形成。     

鞘内注射可乐定对切口痛大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的影响

目的:观察鞘内注射(intrathecal injection IT)可乐定对切口痛大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的影响.方法:选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠80只,随机分为5组,每组16只,分别为假手术组,对照组,可乐定5μg组,可乐定10μg组和可乐定20μg组.按Yaksh法鞘内置管,按Brennan法制作大鼠...     

Activation of ERK／CREB pathway in spinal cord contributes to chronic constrictive injury-induced neuropathic pain in rats

Aim: To investigate whether activation and translocation of extracellular signalregulated kinase (ERK) is involved in the induction and maintenance of neuropathic pain, and effects of activation and translocation of ERK on expression of pCREB and Fos in the chronic neuropathic pain. Methods: Lumbar intrathecal catheters were chronically implanted in male Sprague-Dawley rats. The left sciatic nerve was loosely ligated proximal to the sciatica‘s trifurcation at approximately 1.0 mm intervals with 4-0 silk sutures. The mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) inhibitor U0126 or phosphorothioate-modified antisense oligonucleotides (ODN) were intrathecally administered every 12 h, 1 d pre-chronic constriction injury (CCI) and 3 d post-CCI. Thermal and mechanical nociceptive thresholds were assessed with the paw withdrawal latency (PWL) to radiant heat and von Frey filaments. The expression of pERK, pCREB, and Fos were assessed by both Western blotting and immunohistochemical analysis. Results: Intrathecal injection of U0126 or ERK antisense ODN significantly attenuated CCI-induced mechanical allodynia and thermal hyperalgesia. CCI significantly increased the expression of p-ERK-IR neurons in the ipsilateral spinal dorsal horn to injury, not in the contralateral spinal dorsal horn. The time courses of pERK expression showed that the levels of both cytosol and nuclear pERK, but not total ERK, were increased at all points after CCI and reached a peak level on postoperative d 5. CCI also significantly increased the expression of pCREB and Fos. Phospho-CREB-positive neurons were distributed in all laminae of the bilateral spinal cord and Fos was expressed in laminae I and II of the ipsilateral spinal dorsal horn. Intrathecal injection of U0126 or ERK antisense ODN markedly suppressed the increase of CCI-induced pERK, pCREB and c-Fos expression in the spinal cord. Conclusion:The activation of ERK pathways contributes to neuropathic pain in CCI rats, and the function of pERK may partly be accomplished via the cAMP response element binding protein (CREB)-dependent gene expression.     

鞘内注射Cav3.3反义寡聚核苷酸对CCD大鼠痛阈的影响

目的观察鞘内注射Cav3.3反义寡聚核苷酸对慢性背根节压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠痛阈的影响,探讨脊髓Cav3.3T型钙通道在神经病理痛中的作用。方法鞘内置管的雄性SD大鼠32只,随机分为4组(行为学n=8,):CCD+NS组、CCD+Cav3.3反义核苷酸组(CCD+Cav3.3-AS)、CCD+Cav3.3错义核苷酸组(CCD+Cav3.3-MM)、假手术(sham)+NS组。各组大鼠在CCD或sham后第1天开始连续4d每天两次鞘内分别注射Cav3.3-AS、Cav3.3-MM12.5μg/10μl或NS10μl,行为学部分分别观察术后1、3、5、7、10、14d大鼠机械缩足阈值(mechanica lwithdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。结果鞘内注射Cav3.3反义寡聚核苷酸能显著延缓CCD大鼠痛敏的形成,在CCD术后10d才形成与CCD+NS组类似的痛敏,而鞘内注射Cav3.3错义核苷酸则与NS组无统计学差异。结论脊髓Cav3.3参与神经病理痛的形成,抑制脊髓Cav3.3基因的表达具有疼痛治疗作用。     

骨癌痛大鼠鞘内注射U0126的抗痛觉过敏作用

目的研究鞘内注射(it)U0126对骨癌痛大鼠机械痛敏的影响和对脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响,探讨ERK-CREB信号转导通路在骨癌痛中的作用。方法①40只成年♀SD大鼠分为5组,假模型组Ⅰ和骨癌痛模型组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。建模后d 10每只大鼠分别it 10μg U0126、5%二甲亚砜10μl和U0126 0.1、1、10μg(U0126溶于10μl 5%二甲亚砜中),测机械性缩爪阈值(MWT)和双下肢负重差(WBD);②25只成年♀SD大鼠分为5组,T1、T2和T3组在制作骨癌痛模型后d 10,itU0126 10μg后1、6、24 h处死大鼠,M组为模型对照组,it5%二甲亚砜10μl后6 h处死大鼠,S组为空白对照组。免疫组化方法测定L4-6术侧脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量。结果鞘内注射U0126 1μg和10μg明显逆转了骨癌痛引起的机械痛敏;鞘内注射10μg U0126明显减少脊髓背角pCREB表达,且效果至少可持续6 h。结论 ERK-CREB通路可能参与骨癌痛。