蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的 探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果 经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论 PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8

目的 探讨蛋白酶激活受体（PAR）-2激动剂对人上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内。并分别用不同浓度的PAR-2激动剂，反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果 经过16h的培养。PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加，tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明。PAR-2激动剂的作用从2h开始，16h达高峰。结论 PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

胰蛋白酶诱导肺上皮细胞分泌白细胞介素-8的作用

目的:探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激.刺激时间为2 h、8 h和16 h.用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平.结果:经过16 h的培养,胰蛋白酶可引起浓度相关性IL-8释放,胰蛋白酶在浓度1μg/L时就可引起IL-8的释放量增加,3 μg/L时诱导IL-8的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍,但随着胰蛋白酶浓度的增加,IL-8的释放量反而下降.胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL-8释放的作用.时间相关曲线表明,胰蛋白酶从2 h起即可引起IL-8释放,16 h达高峰.结论:胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.     

人肺上皮细胞表达蛋白酶激活受体

目的: 蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs) 广泛分布在多种组织细胞上,但4种PARs在肺上皮细胞的表达情况尚不清楚. 我们用A549细胞研究PARs在肺上皮细胞的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪和免疫荧光细胞染色分析技术分析肺上皮细胞系A549细胞PARs的表达情况. 结果:4种PARs在肺上皮细胞上均有不同程度的表达. 结论:肺上皮细胞同时表达PAR 1～4 4种受体,这为进一步研究PARs在肺上皮细胞的功能奠定了基础.     

蛋白酶激活受体-2介导的呼吸道上皮细胞活化在哮喘中的作用

蛋白酶激活受体(PAR)是近年来新发现的一个受体家族，其中PAR-2对呼吸道上皮细胞功能的影响及其在哮喘中的作用正受到越来越多的关注。作者就PAR-2的结构、激活剂及生物学功能，尤其是PAR-2介导的呼吸道上皮细胞活化及其在哮喘中的可能作用作一综述。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的:探讨蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激.刺激时间为2,8和16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果:经过16 h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性MCP-1释放增加,tc-LIGRLO引起的最大MCP-1释放量达基础分泌量的13倍.反PAR-2激动剂对MCP-1释放的影响较小.时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2 h开始,16 h达高峰.结论:PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP-1的促分泌剂.其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用.     

纳米氧化锌对人呼吸道上皮细胞白细胞介素-8表达的影响

目的:探讨纳米氧化锌对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及肺泡上皮细胞(A549)内炎症相关因子白细胞介素-8(IL-8)表达的影响.方法:以BEAS-2B及A549细胞作为靶细胞,应用荧光定量PCR技术及ELISA法检测分析不同剂量纳米氧化锌(0、1、2和4μg/cm2)对细胞内IL-8 mRNA和蛋白表达的影响.结果:纳米氧化锌作用2、4 h,BEAS-2B细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为31.985、54.648,P均＜0.001;蛋白:F分别为128.686、65.486,P均＜0.001);A549细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达亦随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为37.652、9.173,P均＜0.01;蛋白:F分别为l27.299、76.354,P均＜0.001).结论:纳米氧化锌可提高人支气管和肺泡上皮细胞内IL-8 mRNA及蛋白的表达水平.     

凝血酶诱导人单核细胞分泌白细胞介素-6的分析

目的 凝血酶通过蛋白酶激活受体(PARs)调节细胞的功能而在炎症和免疫反应中起重要作用,对于其诱导单核细胞产生细胞因子的报道则结果不一致.方法 用凝血酶及PARs的激动肽分别激发高度纯化后的单核细胞16 h后,用ELISA检测单核细胞培养上清液中的IL-6.结果 凝血酶呈浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6,当凝血酶酶活性被抑制后,诱导单核细胞产生IL-6的能力被抑制.PAR-1 激动肽SFLLR-NH2和PAR-4 激动肽GYPGQV-NH2呈浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6,PAR-1、PAR-4不能诱导单细胞产生IL-6,而PAR-3激动肽TFRGAP-NH2和反激动肽PAGRFT-NH2对于单核细胞产生IL-6无明显作用.结论 凝血酶可以诱导高度纯化的成人外周血单核细胞产生IL-6,它们的作用依赖于酶的活性,说明它可能是通过PARs激活单核细胞.     

蛋白酶激活受体-2激活剂对人脐静脉内皮细胞释放IL-1α的影响

目的 研究蛋白酶激活受体-2(protease-activated receptor-2,PAR2)激活剂对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)释放白细胞介素(IL)-1α的影响.方法 分离、培养原代HUVECs.胰蛋白酶和PAR2激活肽刺激HU...     

蛋白酶激活受体1和2在结肠癌细胞的表达及其作用初探

目的:探讨蛋白酶激活受体1和2(PAR1和PAR2)在结肠癌细胞株SW620和SW480细胞的表达及其作用.方法:采用免疫细胞化学染色及RT-PCR法检测SW620和SW480细胞有无PAR1和PAR2蛋白及其mRNA的表达;利用各自不同的激动剂、拮抗剂及相关抗体,观察对细胞迁移和增殖能力的影响以及对细胞分泌白细胞介素8(IL-8)的影响.结果:结肠癌细胞株SW620和SW480均有PAR1和PAR2 mRNA的表达,但仅见SW620细胞表面具有PAR2蛋白的高表达,PAR1蛋白表达不明显;SW480细胞表面既无PAR1也无PAR2蛋白的表达.SW620细胞的迁移能力明显高于SW480细胞,PAR1和PAR2的激动剂以及因子Ⅶa均可促进SW620细胞的增殖、迁移和IL-8的分泌;PAR2拮抗剂对细胞迁移起抑制作用,抗PAR2抗体对细胞的增殖和迁移均有干预作用.结论:蛋白酶激活受体2在结肠癌细胞表面大量表达,可增强细胞的增殖和迁移能力及IL-8的分泌,表明与肿瘤的转移能力及恶性程度密切相关.     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体外诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的状况.方法:逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IL-8在Hp诱导的胃上皮细胞的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8表达产物的量.结果:经Hp标准菌株CCUG17874刺激后,在胃上皮细胞株MKN 45、MKN 28、SGC 7901均检测到IL-8 mRNA;共同培养60 min 开始明显表达(P<0.05),120～180 min时表达最强(P<0.01).刺激24 h后, MKN 45分泌IL-8蛋白最高,为(1 480±360) pg/ml,SGC7901为(1 120±290) pg/ml, MKN 28最低,为(710±220) pg/ml,而未刺激对照组为(63±21 )、(52±16)和(30±18)pg/ml, 刺激组与各自未刺激对照组间有显著差异(P＜0.01),其相差倍数分别为23.5、 21.5、23.7倍,不同细胞株间的无统计学意义.结论:Hp能体外诱导胃上皮细胞株表达分泌IL-8,该作用可能与Hp感染后胃黏膜的炎症损伤机制有关.     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

Effect of puerarin on the release of interleukin-8 in co-culture of human bronchial epithelial cells and neutrophils

Objective:To investigate the effect of puerarin on interleukin(IL)-8 mRNA expression and the protein release in the co-culture of human bronchial epithelial(BEAS-2B) cells and human neutrophils.Methods:BEAS2B cells and neutrophills were cultured separately and co-cultured with puerarin(50,100,and 200μg/mL) for a predetermined time.Cytokines in culture supematant were evaluated by protein array and IL-8 quantified by enzymelinked immunosorbent assay(ELISA).IL-8 mRNA expression was evaluated by real-time quantitative polymerase chain reaction(real-time qPCR).Results:The co-culture of BEAS-2B cells and neutrophils exhibited synergistic effects on IL-8 mRNA expression in BEAS-2B cells,but not in neutrophils after 12 h incubation(P<0.01),as compared with that in BEAS-2B cells or neutrophils alone.IL-8 protein release in the culture supematant was obviously elevated when BEAS-2B cells were co-cultured with human neutrophils as compared with that in the supematant of BEAS-2B cells or neutrophils alone after incubated for 2,6,12,and 18 h(P<0.01).Treatment with puerarin could significantly down-regulate the expression of IL-8 mRNA in BEAS-2B cells and IL-8 release in the supernatant of the co-culture of BEAS-2B cells and neutrophils(P<0.01).Conclusion:Puerarin could exhibit anti-inflammatory activity by suppressing IL-8 production from the co-culture of human bronchial epithelial cells and neutrophils.     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响。方法 通过脂质体转染的方法，将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞)，经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆，不同浓度的香烟提取物(CSE)活化，测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度。结果 与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较，经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8 mRNA表达和蛋白释放显著增加。结论 腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达，提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用。