TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞HSP70表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(tansforming gowth fetor-beta 1,TGF-β1)对长波紫外线(ultraviolet A,UVA)照射皮肤成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达的影响.方法:通过酶联免疫法(ELISA)测定不同剂量UVA即对照组(UVA 0J/cm2)、UVA 5J/cm2、UVA 10 J/cm2、UVA 20J/cm2照射成纤维细胞上清液中HSP70的含量;选择UVA照射剂量为15J/cm2,不同剂量TGF-β1即小剂量组(UVA TGF-β1 0.1ng/m1)、中剂量组(UVA TGF-β1 1ng/m1)、大剂量组(UVA TGF-β1 10ng/m1)处理后成纤维细胞HSP70上清液中HSP70的含量.结果:UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致HSP70表达下降,UVA 20J/cm2照射组与对照组比较,HSPT0含量明显降低,有非常显著性差异(P＜0.01),OVA 10J/cm2照射组差异有统计学意义(P＜0.05);不同剂量TGF-β1处理后,大剂量TGF-β1,组,皮肤成纤维细胞上清液中HSP70含量明显升高,与照射组比较有非常显著性差异(P＜0.01),中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:UVA照射抑制体外培养成纤维细胞HSPT0表达,TGF-β1可提高UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞HSP70表达水平,对皮肤成纤维细胞起保护作用.     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型，Ⅲ型胶原合成和表达的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（tansforming gowth factor—beta 1,TGF—β1）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成和表达的影响。方法：通过MTT法检测TGF-β1干预后成纤维细胞增殖活性,选择UVA照射剂量为15J／cm^2,联免疫法（ELISA）测定不同剂量即TGF—β1小剂量组（UVA＋TGF—β1 0．1ng／ml）、中剂量组（UVA＋TGF—β1 1ng／ml）、大剂量组（UVA＋TGF—β1 10ng／ml）处理后成纤维细胞清夜中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,半定量RT—PCR检测成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞,导致成纤维细胞增殖活性下降,给予不同剂量TGF-β1干预后,成纤维细胞增殖活性与UVA照射组比较,明显提高;成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量增加,成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达增强。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性;增加UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,增强成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,对皮肤成纤维细胞起保护作用。     

强脉冲光对成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的 研究强脉冲光(IPL)对皮肤成纤维细胞TGF-β1表达的影响,探索IPL影响皮肤胶原合成的调控机制.方法 将体外分离培养的人包皮原代成纤维细胞,分成照射组和对照组,照射组以波长590～1200 nm、能量密度为29 J/cm2、脉宽15 ms、延时5 ms的IPL对成纤维细胞进行照射.两组细胞均采用无血清DMEM分别培养1、12、24、48 h,然后荧光定量PCR法分别测定4个时间点细胞TGF-β1的表达情况.结果 培养12、24、48 h后,TGF-β1的表达在照射组成纤维细胞中明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 IPL能促进成纤维细胞合成TGF-β1的活性.     

UVA1照射对人工皮肤分泌MMP-1影响的初步研究

目的：探讨不同UVA1剂量照射对人工皮肤分泌MMP-1的影响,明确光致人工皮肤损伤的UVA1剂量。方法：通过ELISA法检测不同剂量的UVA1（0～90J/cm^2）对人工皮肤表达MMP-1分泌的变化。结果：与0J/cm^2相比,UVA1剂量为10J/cm^2时MMP-1的分泌量无明显变化（P〉0.05）,当UVA1剂量大于20J/cm^2时人工皮肤分泌MMP-1的量逐渐增高（P〈0.05,P〈0.0001）,UVA1剂量在小于50J/cm^2以前呈剂量依赖性增高,至70J/cm^2以后分泌量较前有所降低。结论：引起人工皮肤光损伤的初始UVA1照射剂量为20J/cm^2。     

MMP-1在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：在基因和蛋白水平检测体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）金属基质蛋白酶-1（MMP-1）的表达情况。方法：①收集4～6代体外培养的人PDL细胞,使用PCR方法检测细胞内MMP-1的基因表达;②取细胞外液用Westernblot方法检测MMP-1蛋白表达。结果：PCR结果显示MMP-1在PDL中基因水平上有表达,而Westernblot结果在蛋白水平上也证明了MMP-1在PDL中有表达,结论：体外培养的PDL具有MMP-1的功能。     

P物质上调正常人真皮成纤维细胞TGF-β1的mRNA表达

目的 探讨神经肽P物质（SubstanceP,SP）与瘢痕形成间的调控关系。方法 体外分离培养正常人真皮成纤维细胞，分别加入SP及其受体特异性拮抗剂L－703，606乙酸盐，MTT法测定细胞生长增殖量；采用细胞爬片法培养细胞，加入SP对细胞作用后，应用TGF－β1mRNA特异性探针行细胞原位杂交，计算细胞的TGF－β1mRNA阳性表达率，并经图像分析测定阳怀细胞TGF－β1mRNA的表达强度，分析SP与真皮纤维细胞TGF－β1mRNA表达间的关系。结果 SP可促进体外培养的正常人真皮成纤维细胞的生长，其作用与SP浓度呈现依赖关系，当浓度达到25ng/ml时，刺激细胞生长的速度达最大值，可使细胞较对照组提前4d融合；正常人真皮纤维细胞受25ng/ml时时，刺激细胞生长的速率达最大值，可命名细胞较对照组提前4d后即可见细胞表达TGF－β1mRNA的阳性率及强度均显著增加；SP对正常人真皮纤维细胞的上述效应，均可被其受体拮抗剂L－703，606乙酸盐所抑制。结论 SP可促进正常人真皮纤维细胞的生长增殖，同时上调细胞的TGF－β1mRNA表达；提示SP可能为皮肤损伤后痕形成过程中启动成纤维细胞表型转化的重要调节因子。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

角质形成细胞源TGF-β1对成纤维细胞的作用

目的研究正常角质形成细胞分泌的TGF-β1对正常成纤维细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌TGF-β1，以不同浓度TGF-β1抗体阻断角质形成细胞条件培养液中的TGF-β1，观察阻断前后角质形成细胞条件培养液对正常成纤维细胞增殖，胶原分泌的影响。结果细胞玻片可见大量染色阳性角质形成细胞，经TGF-β1抗体阻断后的角质形成细胞条件培养液，对成纤维细胞的促增殖作用明显减弱，胶原分泌减少。结论正常角质形成细胞分泌大量TGF-β1，可促进成纤维细胞增殖，促进胶原分泌。     

TGF-β1对人肾间质成纤维细胞PAI-1表达的影响

近年研究结果显示肾间质病变与慢性肾功能衰竭进展密切相关[1].肾间质纤维化以间质成纤维细胞的大量增殖和细胞外基质的过度沉积为特征.多种细胞因子具有致纤维化的作用,但转化生长因子-β(transforming growth factor β,TGF-β)可能是最主要的,它可参与肾间质纤维化的各个环节.细胞外基质的合成与降解受多种因素的影响,基质降解酶及其抑制物的平衡是降解过程中主要调节因素.我们以往的研究已显示TGF-β1可促进肾间质成纤维细胞增殖及胶原的合成和分泌[2],我们进一步观察其对基质降解酶的抑制物-纤溶酶原激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor type 1,PAI-1)表达的影响.     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达的影响

研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3、7mRNA表达的影响。方法：用RT-PCR法分别检测TGF-β1不同浓度(0，5，50，500pmol／1：Smad3 mRNA 24h，smad7 mRNA 90min)和TGF-β1(500pmol／1)作用不同时间(Smad3 mRNA：1，2，4，24，48h；Smad7 mRNA：0．5，1，1，5，2，4，24h)对Smad3、7mRNA表达的影响。结果：Smad3 mRNA水平随TGF-β1浓度的增加而呈浓度依赖性下降；5pmol／lTGF-β1就能使Smad7 mRNA水平明显地升高，并随TGF-β1浓度加大而略有改变；随作用时间延长，Smad3mRNA水平逐渐下降，在作用48h后下降到最低，呈时间依赖性。而Smad7 mRNA水平在细胞受到TGF-β1刺激后l20min即达到最高值。结论：TGF-β1能使KFB细胞Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调，而使Smad7 mRNA表达迅速增加。     

6-O-羧甲基壳聚糖对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β_1表达的影响

目的：观察不同浓度6-O-羧甲基壳聚糖（6-O-CMC）对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibrob lasts,HSFBs）转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）蛋白及mRNA表达的影响,在分子水平上探讨其抑制增生性瘢痕生长的作用机制。方法：体外培养人HSFBs,选取第3～5代细胞进行下一步实验。实验分组采用含不同浓度6-O-CMC（0,100,200,400μg/ml）的DMEM培养液分别进行培养。培养24h后,显微镜下观察各组HSFBs形态及生长情况。收集细胞培养上清,运用双抗体夹心ELISA法检测各组TGF-β1蛋白表达水平。运用荧光定量RT-PCR技术检测各组TGF-β1 mRNA表达水平。结果：与空白组相比,三个药物剂量组HSFBs TGF-β1蛋白及mRNA的表达均减少（P〈0.05）,药物浓度越高表达量越低（P〈0.05）,且TGF-β1蛋白及mRNA表达的变化具有一致性。结论：6-O-CMC有抑制体外培养的人HSFBs TGF-β1表达的作用,初步探讨了6-O-CMC发挥抑制增生性瘢痕生长的作用机制,为羧甲基壳聚糖类药物的开发利用提供理论依据。     

角质形成细胞源TGF-β_1对成纤维细胞的作用

目的研究正常角质形成细胞分泌的TGF-β1对正常成纤维细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌TGF-β1,以不同浓度TGF-β1抗体阻断角质形成细胞条件培养液中的TGF-β1,观察阻断前后角质形成细胞条件培养液对正常成纤维细胞增殖,胶原分泌的影响。结果细胞玻片可见大量染色阳性角质形成细胞,经TGF-β1抗体阻断后的角质形成细胞条件培养液,对成纤维细胞的促增殖作用明显减弱,胶原分泌减少。结论正常角质形成细胞分泌大量TGF-β1,可促进成纤维细胞增殖,促进胶原分泌。     

过表达TRAP-1-Like Protein基因对人皮肤成纤维细胞的影响

目的 通过在人皮肤成纤维细胞(HSFs)中过表达TRAP-1-Like Protein(TLP),观察其对细胞生物学性状的影响.方法 通过慢病毒途径在人正常皮肤成纤维细胞中获得稳定过表达TLP基因后,检测细胞增殖、收缩活性以及TLP、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化.结果 慢病毒介导外源性TLP基因在细胞中稳定表达.TLP可协同转化生长因子-β1(TGF-β1)促进细胞活力升高60％(48 h)(P ＜0.05);纤维凝胶体积变化差异有统计学意义(P＜0.05);实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot结果都显示Ⅰ/Ⅲ型胶原的合成与TLP的表达量呈正相关(P＜0.05),细胞因子TGF-β1刺激下此反应更明显.结论 TLP可促进人成纤维细胞增殖和收缩,并促进其合成Ⅰ/Ⅲ型胶原.     

川芎嗪对成纤维细胞增殖及TGF-β1和bFGF表达的影响

目的:研究川芎嗪对体外培养大鼠成纤维细胞增殖及碱性成纤维细胞因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)表达的影响,从而探讨川芎嗪抑制瘢痕形成的作用机制.方法:体外分离培养大鼠皮肤成纤维细胞,采...     

TGF-β1和bFGF-1对单层共培养BMSCs和韧带成纤维细胞韧带特异性的影响

目的 探讨单层共培养BMSCs和韧带成纤维细胞(ligament fi broblasts,LFs)经TGF-β1和bFGF-1诱导后,细胞活性、增殖能力和韧带特异性基因及蛋白表达和合成情况。方法 取3月龄SD大鼠,通过密度梯度离心法结合贴壁法分离培养BMSCs,胶原酶消化法获得LFs。取第3代BMSCs和LFs,实验分为6组,分别为未诱导单纯BMSCs组(A组)、未诱导单纯LFs组(B组)、未诱导单层共培养组(C组)和诱导后单纯BMSCs组(D组)、诱导后单纯LFs组(E组)、诱导后单层共培养组(F组)。倒置相差显微镜及MTT法观测各组细胞生长情况;ELISA法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度;实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、细胞黏合素C、基质金属蛋白酶2)基因表达。结果 倒置相差显微镜观察,共培养细胞可形成一单细胞层生长,F组最快融合至90%以上。MTT检测示,培养9 d时F组吸光度(A)值最高,D组次之,B组最低,与其余组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测示细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度中,F组浓度显著高于其余各组(P<0.05),D、E组Ⅰ型胶原蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05),E组Ⅲ型胶原蛋白浓度高于D组(P<0.05)。A~F组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度比值分别为1.17、1.19、1.10、1.25、1.17、1.18,D组明显高于其余组。实时荧光定量PCR检测示,Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白基因表达量F组最高,细胞黏合素C D组最高,基质金属蛋白酶2 E组最高,与其余各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论单层共培养BMSCs和LFs经TGF-β1和bFGF-1诱导后,细胞活性、增殖能力、韧带特异性基因及蛋白均增高,可作为韧带组织工程种子细胞来源之一。     

17β雌二醇对人皮肤成纤维细胞胶原和弹性蛋白合成的影响

目的探讨不同浓度17β雌二醇（17β-estrogen,17β-E2）在不同时间点对体外培养的人皮肤成纤维细胞（Human skin fibroblast,h SFB）合成胶原及弹性蛋白的影响。方法体外培养hSFB,分别加入不同浓度的17β-E2(10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11mol/L),继续培养24 h、48 h、72 h,在不同时间点分别提取相应的RNA,RT-PCR检测经17β-E2处理后的hSFB的Ⅰ、Ⅲ型前胶原及原弹性蛋白mRNA的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,17β-E2处理组较空白对照组前胶原及原弹性蛋白表达水平在24 h没有变化,48 h时明显上调,72 h时呈现下降;在48 h时,17β-E2对前胶原与原弹性蛋白的影响,10^-10 mol/L组上调作用较其他浓度组明显;在48 h时,同一浓度17β-E2对前胶原蛋白的促进作用较原弹性蛋白明显,尤其是对Ⅲ型的促进作用更强。结论 17β-E2对胶原及弹性蛋白的合成有一定的促进作用,不同时间、不同浓度对其影响不同,在10^-10 mol/l、48 h时作用最强。     

5-FU抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖与cyclinD1、CDK4和TGF-β1表达的关系

目的 研究5-FU抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖与细胞因子cyclinD1、CDK4、TGF-β1表达的关系及其作用机制.方法 组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞.用不同浓度的5-FU,作用于体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后cyclindl、CDK4、TGF-β1 mRNA表达的变化.结果 5-FU在体外能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其抑制率随5-FU浓度的增加而增高;并且5-FU能明显抑制cyclinD1、CDK4、TGF-β1 mRNA的表达.结论 5-FU能抑制增生性瘢痕中成纤维细胞的增殖,其机制与5-FU能明显降低cyclinD1,CDK4和TGF-β1的表达有关.     

PPAR γ激动剂对TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞细胞外基质表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人正常皮肤成纤维细胞细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达效应作用的影响,探讨其抗瘢痕的潜在作用。方法:体外培养人正常皮肤成纤维细胞,羟脯氨酸比色法观察PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的胶原表达的影响,免疫细胞化学法及图像分析技术观察、分析PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响,MTT法观察不同浓度的PPARγ激动剂对成纤维细胞增殖活性的影响。结果:TGF-β1能显著增加人正常皮肤成纤维细胞胶原和FN表达,并呈剂量依赖效应;与TGF-β1刺激组相比,10μM15d-PGJ2、曲格列酮预处理组胶原和FN表达减少,有显著性差异(P<0.01);PPARγ激动剂对成纤维细胞的增殖活性影响分析,各实验组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的人正常皮肤成纤维细胞ECM合成增多的效应,具有体外抗瘢痕纤维化的作用。     

松果菊苷对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究

目的 基于TGF-β1/Smads信号通路探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)的作用机制.方法 自2019年3月至2020年2月新疆医科大学第一附属医院整形外科体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞;通过CCK-8法分析ECH作用24 h和48 h细胞的抑制活性.采用划痕试验检...