一测多评法在中药质量控制中的应用研究进展

由于中药成分复杂,因此提出了中药多指标成分的质量控制模式,但中药化学对照品的分离难度高或单体不稳定及供应价格高等因素,严重阻碍了这一模式的发展。一测多评法通过测定一个易得对照品成分的含量来实现多成分定量,能够在缺少对照品的情况下实现多成分质量控制。本文对一测多评法近年来在中药及中药制剂多指标质量控制中的应用进展进行综述,以期为中药的多指标成分质量评价模式提供参考。     

一测多评法的应用及研究概况

事物的发展都是由浅入深、由点到线、由线到面的渐进过程,一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)的发展亦然。自2006年王智民等[1]首次提出一测多评法至今不到十年的时间里,其研究应用已从中药材、中药饮片发展到中药提取物、中药制剂,从药品领域发展到保健食品领域,从含量测定拓展到优化提取工艺。到2014年6月,一测多评法相关文献已有130余篇,其中采用一测多评法对黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的含量测定已载入中国药典2010年版一部。由此可见,该方法已然成为未来评价中药质量的必然趋势。     

“一测多评法”在中药质量控制中应用研究进展

对近年"一测多评法"在有机酸类、苯丙素类、黄酮类、生物碱类、三萜皂苷类及含醌类等中药中的应用研究进行综述。     

基于一测多评的中药多成分定量研究进展

中药成分的复杂多样决定了中药质量控制模式必须采用多成分定量和多指标质量控制,但中药化学对照品性质不稳定、货源严重紧缺和检测成本昂贵等,严重阻碍了这一模式的发展,成为中药现代化的瓶颈问题之一。“一测多评”分析方法通过测定一个对照品易得的成分实现中药多成分定量,是适合中药特点的多指标质量控制和评价模式。系统阐述了“一测多评”法的基本原理及其在中药多成分定量中的研究进展,总结了“一测多评”法在中药材、中药饮片及中药复方制剂中的应用,探讨其优势及其在实际应用中存在的关键问题。提出“一测多评”法的研究思路在20多种中药材、中药饮片及中药复方制剂中得到了验证,有望成为中药质量控制的未来发展趋势。     

RP-HPLC法同时测定大黄及其他样品中的五种游离蒽醌含量

目的：测定大黄及其他样品中的五种游离蒽醌（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚）的含量。方法：采用反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）法以甲醇、水、氯仿和冰醋酸混合液（５００∶８０∶２５∶２,ｖ／ｖ）为流动相,色谱柱采用ＹＷＧ－Ｃ１８不锈钢柱,紫外２５４ｎｍ波长检测。样品经乙醚处理挥干后流动相溶解进样测定,１２ｍｉｎ可完成一次测定过程。结果与结论：结果准确、灵敏,回收率高,是适用于药品质量监测、优化有效成分的提取方法。     

一测多评法在中药学领域的研究应用进展

一测多评法是通过采用一种对照品内参物对多种目标组分监控的方法,由于其内在的科学性、合理性、优越性,且符合中药质量控制的发展要求,得到了广泛的研究、推广和应用.本文从“一测多评”法原理和其特点、中药材组分、中成药或制剂应用研究、色谱技术、机理探索等方面方面,对近几年的研究情况进行概述性的归纳、分析、总结、展望,以了解和把握目前一测多评法的研究动态,为今后QAMS法进一步的发展奠定基础.     

一测多评法同时测定雷公藤提取物中0种成分含量

目的建立一测多评法（QAMS）同时测定自制雷公藤提取物6种有效成分的含量。方法采用QAMS法,以雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素和雷公藤内酯甲6种成分为研究对象,对外标法和校正因子法的实测值及计算值的差异进行分析。结果 6种指标成分在一定范围内线性关系良好,以雷公藤甲素为内参物,雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素和雷公藤内酯甲的fk/s分别为0.654、1.221、0.347、1.238、0.079,且在不同条件下重复性良好;3批样品中各成分含量分别为雷公藤甲素0.037～0.038mg/g、雷公藤内酯酮0.245～0.253 mg/g、雷酚内酯6.165～6.325 mg/g、雷公藤次碱14.439～15.065 mg/g、雷公藤红素1.699～1.856 mg/g、雷公藤内酯甲20.946～21.819 mg/g,且计算所得量与实测量测得结果无显著差异。结论QAMS法适用于雷公藤提取物的含量测定,可为雷公藤的质量控制提供参考。     

基于一测多评法的肝舒胶囊中7种成分含量测定

目的：基于一测多评法（QAMS）建立肝舒胶囊中虎杖苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 7种成分含量测定方法。方法：采用HPLC法,Phenomenex NX-C18柱（250 mm×4.6 mm×5μm）,乙腈—0.2%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.00 mL/min,检测波长328 nm,以虎杖苷为内参物,建立该成分与其他6个成分的相对校正因子,计算各成分含量,并与外标法测定所得含量进行比较,验证所建立方法的可行性。结果：新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的相对校正因子（RCF）分别为1.192 2、1.183 9、1.278 9、1.051 0、0.994 7、0.994 5,相对保留时间（RRT）分别为0.304 2、0.503 6、0.551 3、1.153 1、1.193 1、1.277 1。5批样品QAMS计算所得结果与外标法检测结果一致（相对误差在-5%～5%）。结论：建立的QAMS操作简便,稳定性、精密度与重复性均良好,可用于肝舒胶囊的质量控制。     

冠脉通片质量控制研究

目的 建立冠脉通片的质量控制方法。方法 采用TLC法,分别以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（15∶2∶1）、乙酸丁酯-甲酸-水（1.3∶1∶1）10 ℃下放置的上层溶液为展开剂对何首乌及淫羊藿进行薄层色谱鉴别;采用气相色谱法,以水杨酸甲酯为内标物,安捷伦DB-WAX毛细管柱（30 m×0.53 mm,1 μm）,FID检测器,载气为氮气,柱温为140 ℃,测定冠脉通片中的冰片;采用高效液相色谱法,Dikma-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,甲醇-0.5%乙酸（88∶12）为流动相,体积流量1.0 mL/min,检测波长281 nm,柱温25 ℃,测定冠脉通片中的丹参素。结果 薄层鉴别中样品色谱斑点清晰,分离较好;气相色谱中,冰片中龙脑及内标物水杨酸甲酯均得到良好的分离,冰片的平均回收率为96.72%（RSD为0.67%）;HPLC测定丹参素在0.100 8～0.604 8 μg与峰面积值线性关系良好（r＝0.999 8）,平均回收率为100.22%（RSD为1.15%）。结论 本实验建立的方法简便、准确、可靠,可用于冠脉通片的质量控制。     

一测多评法测定博落回果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱的含量

目的建立一测多评法测定博落回中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱的含量。方法以博落回果实为研究对象,建立别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱对原阿片碱的相对校正因子,利用该相对校正因子计算别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,实现一测多评;同时采用外标法测定药材中4种生物碱的含量,比较两种方法的差异,验证一测多评法的准确性和可行性。结果 9批博落回果实中4个生物碱的含量可以用一测多评法进行测定,其计算值与实测值间无显著差异。结论建立的一测多评法同步测定博落回果实中的原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱是可行的、准确的。     

小承气汤的质量控制研究

目的 采用RP-HPLC法研究小乘气汤质量控制方法,同时测定橙皮苷、肉桂酸、大黄酸、芦荟大黄素、川陈皮素、和厚朴酚、大黄素、厚朴酚、大黄酚和大黄素甲醚的量。方法 采用Apollo C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 um）,1.1%醋酸水溶液-乙腈梯度洗脱,洗脱程序：0 min（83∶17）、30 min（70∶30）、50 min（45∶55）、70 min（13∶87）、75 min（83∶17）,体积流量1.0 mL/min,检测波长254 nm。结果 得线性回归方程：橙皮苷Y＝2.469 5 X＋0.019 9（r＝0.999 9）、肉桂酸Y＝2.954 3 X＋0.005 8（r＝0.999 9）、大黄酸Y＝1.176 4 X＋0.036 4（r＝0.999 2）、芦荟大黄素Y＝1.241 4 X－0.002 2（r＝0.999 9）、川陈皮素Y＝0.722 1 X＋0.007 1（r＝0.999 9）、和厚朴酚Y＝1.821 5 X＋0.021 4（r＝0.999 0）、大黄素Y＝1.815 2 X＋0.002 2（r＝0.999 5）、厚朴酚Y＝1.710 4 X－0.010 5（r＝0.999 4）、大黄酚Y＝4.574 8 X－0.007 5（r＝0.999 3）和大黄素甲醚Y＝0.427 2 X－0.002 3（r＝0.999 7）,线性范围分别为20.0～80.0、6.7～30.0、57.6～153.6、18.6～37.1、1.7～139.2、3.1～65.4、8.8～35.2、2.9～73.0、2.0～10.0、10.8～43.2 μg/mL;回收率分别为98.5%、98.9%、99.3%、99.1%、97.8%、98.6%、99.1%、98.7%、99.6%、98.9%,日内和日间精密度分别小于2.0%和2.1%。结论 此方法简单快速灵敏,对于小乘气汤的质量控制有一定的参考价值。     

基于代谢组学技术的大黄治疗慢性肾功能衰竭的作用机制研究

目的 利用代谢组学技术探讨大黄治疗慢性肾功能衰竭（CRF）的作用机制。方法 采用腺嘌呤制备大鼠CRF模型,以高分离度快速液相色谱-质谱（RRLC-MS）为核心分析技术,以主成分分析法为数据解析手段,筛选出CRF特征性内源代谢产物,探讨大黄治疗CRF的作用机制。结果 大黄能减弱或取消外界刺激因素（如腺嘌呤）诱发CRF,且对其代谢轨迹的扰动具明显的回调作用,其作用机制可能与潜在生物标志物有关。结论 大黄通过减少CRF大鼠血液中儿茶酚胺类物质生成、磷酸酯类物质分解、炎症介质产生,使体内D-谷氨酰胺、D-谷氨酸代谢和蛋氨酸循环恢复正常而发挥治疗CRF的作用。     

通脉养心丸质量控制研究

摘要：目的 建立通脉养心丸质量控制方法。方法 采用TLC法鉴别制何首乌、甘草;采用HPLC法测定通脉养心丸中甘草酸的量。结果 制何首乌和甘草的TLC鉴别效果良好、专属性强、分离度高,且阴性对照无干扰;甘草酸进样量在0.133 6～3.006 9 μg与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝1.000 0）;平均回收率为97.7%,RSD为0.78%（n＝6）。结论 所建立的质量分析方法稳定可靠,可用于通脉养心丸的质量控制。     

基于谱效-构效关系筛选大黄中酪氨酸酶活性抑制成分的方法研究

目的 建立一种基于谱效-构效结合的高效天然化合物活性筛选体系,并采用该体系筛选大黄中酪氨酸酶抑制剂。方法 根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理,以大黄为例依次经过不同极性溶剂提取,分别检测各极性提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用;针对活性组分通过UPLC-Q/TOF鉴定活性成分,采用计算机辅助药物设计评价构效关系,进一步筛选抑制剂分子,并结合酶学检测验证药效成分。结果 通过建立的谱效-构效结合筛选体系获得大黄中大黄素、藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷等9种具有间二羟基苯酚、邻三羟基苯酚结构的化合物可能具有酪氨酸酶活性抑制作用。结论 大黄中大黄素和藜芦酚衍生物对酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用;谱效-构效相结合的筛选模式为天然化合物活性筛选提供了便捷方法。     

基于高效凝胶渗透色谱法的银耳多糖质量控制研究

目的 建立银耳多糖质量控制方法。方法 采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法测定银耳多糖相对分子质量及其分布和多糖的量。色谱条件：Shodex Sugar KS-804（300 mm×8 mm,7 μm）和KS-805（300 mm×8 mm,17 μm）凝胶排斥色谱柱串联做为分离柱,流动相为水,体积流量0.8 mL/min,柱温40 ℃,进样量40 μL,检测条件为示差检测器。结果 银耳多糖峰出现在14.40～15.30 min,对应相对分子质量为1.26×10⁶～1.39×10⁶。在0.01～2.0 mg/mL呈良好的线性关系（r＝0.999）。银耳多糖质量浓度范围分别为：1.1～1.5 mg/mL（以透析银耳多糖为对照）和0.8～1.1 mg/mL（以蓝色葡聚糖为对照）。多糖检测限和定量限分别为0.8 μg和2 μg。结论 所建立的方法简单、快速、准确、重现性好、灵敏度较高,可作为银耳多糖质量控制的方法。     

无叶假木贼地上部分化学成分的研究

目的 研究无叶假木贼Anabasis aphylla的化学成分。方法 采用硅胶、薄层制备、葡聚糖凝胶以及制备型HPLC色谱进行分离纯化,利用MS、IR和NMR等波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 分离得到15个化合物,分别鉴定为顺式咖啡酰二十烷醇酯（1）、反式咖啡酰二十烷醇酯（2）、反式咖啡酰十三烷醇酯（3）、反式咖啡酰十六烷醇酯（4）、反式咖啡酰十八烷醇酯（5）、反式咖啡酰二十二烷醇酯（6）、反式咖啡酰二十四烷醇酯（7）、反式阿魏酰二十烷醇酯（8）、反式阿魏酰二十二烷醇酯（9）、反式阿魏酰二十四烷醇酯（10）、4-羟基苯乙酮（11）、正十三碳酸（12）、正十四碳酸（13）、胡萝卜苷（14）、β-谷甾醇（15）。结论 化合物1为新化合物,2～13为首次从假木贼属植物中分离得到。     

新疆产西红花的质量评价

目的 对产自新疆的西红花Crocus sativus L. 质量进行评价。方法 采用《中国药典》2010年版中西红花浸出物、吸光度、总苷量、重金属、农药残留的检测方法,对新疆产的西红花中的各指标进行检测。色谱柱C¹⁸柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇-水（45∶55）;体积流量1.0 mL/min;检测波长440 nm;进样量10 μL;柱温为室温。结果 浸出物质量分数为67.8%,吸光度（A）值为0.78,含西红花苷-I为8.02%,含西红花苷-II为5.59%,砷、铅、汞、镉、六氯环己烷、双对氯苯基三氯乙烷（DDT）分别为0.480、0.762、0.028、0.163、0.013、0.027 mg/kg。结论 新疆产的西红花各项指标均符合《中国药典》中西红花的质量标准和药用植物及制剂进出口绿色行业标准的规定,西红花在新疆的无公害种植获得成功。     

苏木的化学成分研究

目的 研究苏木Caesalpinia sappan的化学成分。方法 采用硅胶、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相色谱等方法分离纯化,通过理化性质、波谱数据及与对照品共薄层色谱鉴定化合物结构。结果 从苏木心材95%乙醇提取物的石油醚萃取部位分离并鉴定了11个化合物,分别为1-羟基-7-甲氧基呫吨酮（1）、2-羟基呫吨酮（2）、1, 5-二羟基呫吨酮（3）、1, 7-二羟基呫吨酮（4）、大黄酚（5）、木栓酮（6）、熊果酸（7）、β-谷甾醇棕榈酸酯（8）、麦角甾烷-4, 6, 8(14), 22 (23)-四烯-3-酮（9）、豆甾醇（10）、β-谷甾醇（11）。结论 除化合物10、11外,其余均为首次从该植物中分离得到,其中化合物1～5为首次从云实属植物中分离得到,同时也是该属植物中首次分得的呫吨酮和蒽醌类化合物。