游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA表达的影响

目的 观察游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA基因表达的影响,进一步了解影响3T3-L1细胞分化成熟及insig2表达的因素,探讨insig2基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用.方法 将3T3-L1细胞分为高脂组与对照组,分别置于低糖高脂与低糖环境中分化培养12 d,油红O染色计算染色阳性细胞面积,RT-PCR法测定insig2、ap2 mRNA的表达.结果 分化培养12 d后,油红O染色显示两组细胞均得到明显分化,但高脂组油红O染色阳性细胞面积较对照组明显升高(P<0.05).分化后,两组细胞ap2、insig2表达水平均较分化前明显升高(P>0.05),且高脂组较对照组上调明显(P<0.05). 结论 游离脂肪酸可促进3T3-L1细胞分化成熟与insig2表达;insig2在细胞内的表达水平可能与脂肪细胞成熟及分化程度相关.     

维甲酸诱导大肠癌CCL-187细胞成熟分化的研究

以全反式维生素甲酸处理大肠癌细胞系ＣＣＬ－１８７,观察ＲＡ对ＣＣＬ－１８７细胞生长状态,细胞表面形态,超微结构,分化标志酶碱性磷酶活性以及内质网标志酶葡萄糖、６－磷酸酶活性的影响。结果发现５μＭＲＡ可明显抑制ＣＣＬ－１８７细胞的生长,扫描电镜显示ＲＡ处理后的细胞表面较处理前规则,丝状伪足消失,出现钝形突起,超薄切片经透射电镜观察显示线粒体、内质网等细胞器增多,酶活性     

丙烯酰胺对大鼠胚胎神经细胞分化的影响

用细胞微团培养法研究丙烯酰胺对大鼠胚胎神经细胞分化的影响。结果表明，当细胞培养物中丙烯酰胺浓度大于６０μｇ／ｍｌ时，可明显抑制细胞分化，表现为细胞集落数目减少，细胞表面突起和集落间神经纤维束减少，细胞形态改变。其半数分化抑制浓度（ＩＣｄ５０）为７５μｇ／ｍｌ，半数存活抑制浓度（ＩＣｖ５０）为９０μｇ／ｍｌ，两者较为接近。认为丙烯酰胺对细胞分化的抑制作用可能被其细胞毒作用所掩盖，其致畸作用不可忽视。     

饮用醋酸铅对大鼠神经元棘密度及酶活性的影响

目的：探索铅对幼鼠中枢神经的影响。方法：在大鼠仔鼠饮用醋酸铅（Ｐｂ２＋３０ｍｇ·Ｌ－１）水溶液３个月后，应用Ｇｏｌｇｉ镀银法观察大脑皮质区锥体细胞树突小棘并作酶组织化学图象分析。结果：染毒组基树突与侧树突的棘密度均明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），染毒组ＡＴＰ酶积分吸光度（ＩＯＤ）明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），磷酯酶的ＩＯＤ明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：实验表明醋酸铅对仔鼠大脑神经元树突、细胞膜及能量代谢有明显的毒作用     

酒精对大鼠胚胎发育及脑nNOS表达的影响

采用整体动物模型观察器官形成期酒精暴露对宫内胚胎发育影响,结合酶组织化学和免疫组织化学技术,探讨酒精对脑组织中海马区NOS(nirtic oxide synthase活性和nNOS(neuronal nitricoxide synthase)表达影响.结果显示10g/kg/d组即可出现FAS形态特征;酒精能导致脑海马区NOS活性和nNOS表达增强,提示NO产量增高.结果说明酒精具有发育毒性,酒精引起胚胎脑发育异常可能与酒精引起的脑海马区NO增加有关.     

Orally Administrated Ascorbic Acid Suppresses Neuronal Damage and Modifies Expression of SVCT2 and GLUT1 in the Brain of Diabetic Rats with Cerebral Ischemia-Reperfusion

Diabetes mellitus is known to exacerbate cerebral ischemic injury. In the present study, we investigated antiapoptotic and anti-inflammatory effects of oral supplementation of ascorbic acid (AA) on cerebral injury caused by middle cerebral artery occlusion and reperfusion (MCAO/Re) in rats with streptozotocin-induced diabetes. We also evaluated the effects of AA on expression of sodium-dependent vitamin C transporter 2 (SVCT2) and glucose transporter 1 (GLUT1) after MCAO/Re in the brain. The diabetic state markedly aggravated MCAO/Re-induced cerebral damage, as assessed by infarct volume and edema. Pretreatment with AA (100 mg/kg, p.o.) for two weeks significantly suppressed the exacerbation of damage in the brain of diabetic rats. AA also suppressed the production of superoxide radical, activation of caspase-3, and expression of proinflammatory cytokines (tumor necrosis factor-α and interleukin-1β) in the ischemic penumbra. Immunohistochemical staining revealed that expression of SVCT2 was upregulated primarily in neurons and capillary endothelial cells after MCAO/Re in the nondiabetic cortex, accompanied by an increase in total AA (AA + dehydroascorbic acid) in the tissue, and that these responses were suppressed in the diabetic rats. AA supplementation to the diabetic rats restored these responses to the levels of the nondiabetic rats. Furthermore, AA markedly upregulated the basal expression of GLUT1 in endothelial cells of nondiabetic and diabetic cortex, which did not affect total AA levels in the cortex. These results suggest that daily intake of AA attenuates the exacerbation of cerebral ischemic injury in a diabetic state, which may be attributed to anti-apoptotic and anti-inflammatory effects via the improvement of augmented oxidative stress in the brain. AA supplementation may protect endothelial function against the exacerbated ischemic oxidative injury in the diabetic state and improve AA transport through SVCT2 in the cortex.     

利用Lotka-Volterra方程建立大脑发育中基因的调控网络

目的构建脑发育过程中,基因表达的调控网络。方法根据GO数据库选择与发育有关的基因,应用种群动力学的观念,将Lotka-Volterra方程用于基因之间的调控关系的描述。结果得到每个基因表达的内禀增长率和所选基因之间的调控矩阵,并用图像可视化。结论Lotka-Volterra方程可作为描述调控网络的一种方法。     

视黄酸对淋巴细胞膜IL—2Rα、TfR表达及淋巴细胞功能活性影响的研究

用流式细胞仪观测一定剂量视黄酸（ＲＡ）对淋巴细胞膜白介素２受体α链（ＩＬ—２Ｒα）及铁传递蛋白受体（ＴｆＲ）表达及淋巴细胞细胞周期相细胞分布特征的影响，同时测定淋巴细胞增殖功能和（４５）Ｃα内流。结果显示：１＞ＲＡ在２．５×１０（－５）～２．５×１０（－７）ｍｏｌ／Ｌ剂量范围内能促进入外周血淋巴细胞膜ＩＬ—２Ｒａ、ＴｆＲ表达，２．５×１０（－６）ｍｏｌ／Ｌ作用最明显，２．５×１０（－４）ｍｏｌ／Ｌ则对ＩＬ—２Ｒα、ＴｆＲ表达有一定抑制作用；２＞２．５×１０（－６）～２．５×１０（－７）ｍｏｌ／ＬＲＡ能促进ＰＨＡ诱导的淋巴细胞增殖，Ｇ２＋Ｍ期和Ｓ期细胞较溶剂对照明显增多，而２．５×１０（－４）ｍｏｌ／ＬＲＡ作用后，细胞多停留在Ｇ０／Ｇ１期；３＞高浓度ＲＡ（２．５×１０（－４）ｍｏｌ／Ｌ）能抑制淋巴细胞（４５）Ｃａ内流，而一定浓度（２．５×１０（－６）ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ则能促进（４５）Ｃａ内流。     

Long-Term Effect of Docosahexaenoic Acid Feeding on Lipid Composition and Brain Fatty Acid-Binding Protein Expression in Rats

Arachidonic (AA) and docosahexaenoic acid (DHA) brain accretion is essential for brain development. The impact of DHA-rich maternal diets on offspring brain fatty acid composition has previously been studied up to the weanling stage; however, there has been no follow-up at later stages. Here, we examine the impact of DHA-rich maternal and weaning diets on brain fatty acid composition at weaning and three weeks post-weaning. We report that DHA supplementation during lactation maintains high DHA levels in the brains of pups even when they are fed a DHA-deficient diet for three weeks after weaning. We show that boosting dietary DHA levels for three weeks after weaning compensates for a maternal DHA-deficient diet during lactation. Finally, our data indicate that brain fatty acid binding protein (FABP7), a marker of neural stem cells, is down-regulated in the brains of six-week pups with a high DHA:AA ratio. We propose that elevated levels of DHA in developing brain accelerate brain maturation relative to DHA-deficient brains.     

生长发育期氯化镧暴露对大鼠海马神经元和神经突触超微结构的影响

目的研究生长发育期氯化镧(LaCl3)暴露对大鼠海马神经元和神经突触超微结构的影响。方法 40只Wistar雌性成年大鼠随机分成对照和低、中、高浓度染镧组,低、中、高浓度染镧组雌鼠产仔后分别饮用0.25%,0.5%,1.0%LaCl3溶液,对照雌鼠产仔后饮用蒸馏水。各染镧组仔鼠断乳前吸吮母乳染镧,断乳后自行饮用0.25%,0.5%和1.0%LaCl3溶液1个月。采用穿梭箱测定仔鼠学习记忆能力,采用电感耦合等离子体-质谱法(ICP-MS)测定仔鼠海马组织中镧含量,采用透射电镜技术观察仔鼠海马神经元和神经突触的超微结构。结果穿梭箱测试时,低、中浓度染镧组仔鼠的主动逃避潜伏时间以及中浓度染镧组仔鼠的电击次数和电击时间均显著多于对照组,高浓度染镧组仔鼠的电击次数、电击时间和主动逃避潜伏时间显著多于对照和低浓度染镧组。低、中、高浓度染镧组仔鼠海马组织中镧含量显著高于对照组,分别达到对照组的10.5倍、16.5倍和26.0倍。随着镧染毒水平的增加,海马神经元超微结构的损伤程度明显加重。此外,与对照组比较,染镧组仔鼠海马神经突触活性带较短、突触后致密物较薄,且中、高浓度染镧组仔鼠海马神经突触的界面曲率减小。结论 LaCl3损害大鼠的学习记忆能力,这可能与镧在海马内蓄积而损害海马神经元和神经突触的超微结构有关。     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。     

全反式维甲酸对高糖诱导HK-2细胞FN、LN表达的影响

目的观察全反式维甲酸（ATRA）对高糖诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）表达的影响,探讨ATRA延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养的HK-2细胞随机分为正常对照组（NG组,含5.5mmol/LD-glucose）;高糖组（HG组,含30mmol/LD-glucose）;渗透压对照组（MG组,含5.5mmol/LD-glucose＋24.5mmol/Lmannitol）;全反式维甲酸低浓度组（ATRA1组,HG＋10^-7mol/LATRA）;全反式维甲酸中浓度组（ATRA2组,HG＋10^-6mol/LATRA）;全反式维甲酸高浓度组（ATRA3组,HG＋10^-5mol/LATRA）;药物溶剂无水乙醇组（HG＋10^-2mol/L无水乙醇）;卡托普利组（HG＋10^-5mol/Lcaptopril）。各组细胞分别培养24h、48h和72h后收集细胞上清液。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清液FN、LN的浓度。结果高糖可增加HK-2细胞培养上清的FN、LN的水平（P〈0.01）,ATRA可以部分抑制高糖的作用（P〈0.01）。结论高糖可以促进体外培养的HK-2细胞FN、LN的表达,ATRA可以抑制高糖的作用,这可能是ATRA延缓糖尿病肾病肾间质纤维化进展的机制之一。     

类毒素-A对小鼠脑内即早基因表达的影响

目的 探讨即早基因在类毒素-A(ANTX-A)引起小鼠中枢神经毒性反应中的作用.方法 选取体重13～15g清洁级昆明种小鼠80只,在标准SPF级动物房内进行饲养.按体重将小鼠随机分为4组(高、中、低剂量组和对照组),每组20只,雌雄各半.高、中、低剂量组分别按200、50、12.5μg/kg剂量进行腹腔ANTX-A染毒;对照组腹腔注射生理盐水0.01ml/g.每天染毒1次,连续染毒1个月.采用RT-PCR法测定小鼠脑组织中c-fos、NGFI-A基因mRNA表达,采用免疫组织化学法测定小鼠脑组织中C-FOS、环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)的表达.结果 雌性小鼠高、中剂量组和雄性小鼠高剂量组c-fos/β-actin条带面积比值高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).仅高剂量组雌、雄性小鼠脑组织C-FOS、CREB-1的表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 c-fos和CREB基因在ANTX-A的中枢神经毒性中可能起调控作用.     

银杏叶提取物对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后Survivin表达的影响

目的观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后缺血侧脑组织Survivin表达的影响,探讨其神经保护机制。方法健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、对照组(n=24)及EGB治疗组(n=24)。采用经典的Rice法制成HIBD模型,应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,并采用免疫组织化学二步法检测Survivin表达的变化。结果与假手术组相比,对照组伤后1、3、7、14d的细胞凋亡数及Survivin表达水平均明显升高(P<0.01);与对照组相比,EGB治疗组伤后7、14d的细胞凋亡数明显降低(P<0.01),且在伤后1、3d的Survivin表达明显升高(P<0.05)。结论EGB可促进抗凋亡因子Survivin的表达而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

铁补充对大鼠肝脏铁与叶酸代谢的影响

目的研究缺铁性贫血时机体内叶酸含量的变化及其与铁补充的关系。方法ＳＤ纯品系雄性断乳大鼠３２只，随机分为铁正常、铁缺乏两组。喂纯合成饲料，铁含量分别为８００μｇ与小于２０μｇ，每日两次定时喂饲。两组模型建立后再各取一半大鼠每日补充铁剂８０００μｇ，同前方式每日两次喂饲；另一半大鼠继续原方案不变，共建立铁正常补铁组、铁缺乏补铁组与铁正常、铁缺乏对照４个组；４个实验组每日饲料叶酸含量均小于１０μｇ。结果铁缺乏影响大鼠的一般生长，体重与血红蛋白含量；肝脏重量与肝内铁含量明显低于正常水平，而叶酸含量明显高于铁正常大鼠。补铁后，铁缺乏大鼠的生长、体重、血红蛋白以及肝脏重量明显改善，肝脏的铁含量迅速增加并超出正常水平。在肝脏铁增加的同时，肝脏组织的叶酸含量明显下降，直至显著低于正常。结论提示铁与叶酸同时缺乏的大鼠在补充大剂量铁剂后导致机体内叶酸含量进一步减少，而铁正常大鼠上述变化不明显。     

甲基叔丁基醚对妊娠期母鼠及胎鼠脑组织的作用

目的探讨甲基叔丁基醚（MTBE）对妊娠期母鼠和胎鼠中枢神经系统的影响。方法32只健康成年昆明种小鼠于妊娠第0 d开始至妊娠结束期间,用不同浓度的MTBE[0、100、400、800 mg/（kg.bw）]进行灌胃染毒,每天一次,直到胎鼠出生。取母鼠和胎鼠脑组织在光镜和透射电镜下观察其形态结构变化。结果电镜下可见母鼠和胎鼠脑组织的神经细胞和神经胶质细胞肿胀、变性,胞浆内线粒体大多呈空泡变,嵴丢失,内质网扩张,部分细胞膜破损等改变,随剂量的增高损伤作用更为明显。结论妊娠期母鼠接触低浓度MTBE可致母鼠及胎鼠神经细胞的亚细胞结构损伤。     

N-乙酰半胱氨酸对缺氧缺血新生大鼠脑细胞间黏附分子-1及细胞凋亡的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠脑细胞间黏附分子-1及细胞凋亡的影响。方法7d龄SD大鼠，90只，随机分成3组，(1)假手术组(Sham)(n=30)；(2)HIBD模型组(Control)(n=30)：HIBD模型后即刻腹腔注射等量生理盐水；(3)HIBD药物组(NAC)(n=30)：HIBD模型后即刻腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(NAC)，200mg/kg。各组大鼠于处置后6h、12h、24h、48h、7d分别采用免疫组化法和Tunel法检测脑组织中细胞间黏附分子-1(ICAM—1)和细胞凋亡数目。结果HIBD模型组脑组织中ICAM—1的表达和细胞凋亡数与假手术组和HIBD药物组相比均升高，有显著性差异。结论NAC可抑制HIBD脑细胞ICAM-1的表达及脑细胞的细胞凋亡程度，NAC对缺氧缺血新生大鼠脑损伤有保护作用。     

TERE1基因在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达

[目的]观察移行上皮反应基因（TERE1）在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达,探讨TERE1在短肢发生中的作用。[方法]ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验、对照两组,各64只。于孕第10天（GD10）,经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸（atRA）、对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD11～GD18取两组胎鼠的双前肢。于GD12取下小鼠胚胎双前肢,以atRA诱导,培养72 h后收获肢。利用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测TERE1在各样本中的表达情况。[结果]在整体动物试验中,atRA可诱致小鼠胚胎明显的短肢畸形;在体外试验中,atRA可诱致小鼠胚胎前肢多种骨骼发育异常。TERE1在正常、异常肢及培养肢芽中均有表达。在正常和异常肢中,TERE1的表达模式一致;除GD15外,实验肢中TERE1的表达均低于相同时点正常肢的表达水平。在体外培养肢,各组的表达量随培养时间的延长而增加。实验组在培养24 h,atRA各剂量组的表达量均低于对照组（P〈0.05）;培养48 h和72 h,在2.5×10-6 mol/L～1.0×10-5 mol/L剂量范围有随剂量增加表达量增加的趋势,但在高剂量组（2.0×10-5 mol/L）表达又下降。[结论]TERE1与小鼠胚胎前肢的发育过程有关,atRA在诱致小鼠前肢异常发生中可引起TERE1 mRNA的表达改变。     

VEGF对缺血脑组织表达Fas/Fasl的影响

目的探讨VEGF治疗脑梗死的机制.方法用线拴法制成Wistar大鼠大脑中动脉永久性闭塞模型,将VEGF165真核表达质粒pUCCAGGS/hVEGF165经颅骨注入到缺血区.术后7d断头取脑,用逆转录PCR(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达强度,用免疫组织化学方法检测Fas、Fasl和VEGF的表达水平.结果与对照组相比,治疗组VEGFmRNA的表达增强,VEGF表达增高(P＜0.01),Fas、Fasl表达减弱(P＜0.01).结论VEGF165基因可以转化到缺血脑组织中并表达VEGF mRNA和VEGF,后者可能通过抑制Fas和Fasl的表达而保护神经细胞.