鼻咽癌患者自体树突状细胞疫苗治疗对机体免疫功能的影响

目的比较鼻咽癌患者自体树突状细胞（DCs）疫苗治疗前后对患者机体免疫机能的影响,探讨热休克的鼻咽癌细胞抗原负载的鼻咽癌自体DCs疫苗激发机体免疫应答的能力与趋势。方法 20例鼻咽癌患者随机分为对照组及治疗组,对照组实施常规放疗,治疗组在常规放疗后给予1个疗程的DCs免疫治疗（4次皮内注射）。治疗过程中动态检测T细胞亚群、自然杀伤（NK）细胞、Th1类细胞因子（IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ）水平,进行分析比较。结果 DCs治疗前与治疗后外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞比率无明显变化（P〉0.05）;治疗后治疗组细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的水平较治疗前明显升高（P〈0.05）。结论鼻咽癌自体DCs疫苗免疫治疗可明显提升鼻咽癌患者Th1类细胞因子水平,激发Th1型免疫应答,增强机体抗瘤能力。     

Effect of ginseng polysaccharides and dendritic cells on the balance of Th1/Th2 T helper cells in patients with non-small cell lung cancer

ObjectiveTo investigate the effect of thorascopic administration of ginseng polysaccharides (GPS) plus dendritic cells (DC) on T helper cell type 1/T helper cell type 2 (Th1/Th2) balance in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC).MethodsA total of 96 NSCLC patients were divided evenly into two groups. The control group was treated with DCs alone and the treatment group was treated with DCs plus GPS. After DCs and GPS were administered thoracoscopically, once a week, 4 times for 30 days, the patients' quality of life was measured with the Functional Assessment of Cancer Treatment-Lung (FACT-L) questionnaire before and after treatment. Serum interferon-γ (INF-γ), interleukin-4 (IL-4), IL-2 and IL-5 were examined before and after treatments.ResultsThe level of Th1 cytokines (INF-γ, IL-2) and the ratio of Th1/Th2 cytokines (INF-γ/IL-4, IL-2/IL-5) increased in both treatment groups, while Th2 cytokines (IL-4, IL-5) and FACT-L scores decreased (P<0.01). Furthermore, after treatment Th1 cytokines (INF-γ, IL-2) and the ratio of Th1/Th2 cytokines (INF-γ/IL-4, IL-2/IL-5) were higher in the DCs + GPS group than in the control group (P<0.05). Conversely, FACT-L scores and Th2 cytokines (IL-4, IL-5) were higher in the control group than in the DCs + GPS group (P<0.05).ConclusionThe treatment regime of DCs plus GPS had a greater effect on NSCLC patients' immune function as compared with DCs alone. This was evident by increased expression of Th1 cytokines (INF-γ, IL-2) and the ratio of Th1/Th2 (INF-γ/IL-4, IL-2/IL-5), as well as by decreased FACT-L scores and the expression of Th2 cytokines (IL-4, IL-5).     

抗结核DC疫苗的初步研究

目的:研制抗结核的新型疫苗(DC疫苗)。方法:无菌分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,以rGM-CSF及rIL-4诱导分化获得树突状细胞(DC),以pEGHsp65融合质粒转染DC,共聚焦激光扫描显微镜检测转染率,继以电镜鉴定细胞形态、流式细胞术分析组合性表面分子表达、混合淋巴细胞反应(MLR)检测体外刺激T细胞增殖的功能。将制备的DC疫苗静脉接种正常同系小鼠,分别取各脏器冰冻切片后荧光显微镜观察;取小鼠静脉血用ELISA法检测IL-12及IFN-γ的表达量。结果:24 h DC转染率约20%,电镜可见细胞呈典型毛刺状突起,流式细胞分析表明转染后的DC表面MHCⅡ、33D1的表达量均呈显著增高。MLR显示,pEGHsp65转染DC组与pEG-FP-C1转染DC组及空白DC组比较呈统计学增高。脏器冰冻切片显示,接种pEGHsp65转染DC小鼠组及pEG-FP-C1转染DC小鼠组与未转染DC组比较,在各脏器分布中,以脾脏分布显著增高。其余脏器分布无显著差别。pEGHsp65转染DC小鼠组IL-12及IFN-γ表达量显著高于pEGFP-C1转染DC小鼠组及未转染DC小鼠组,P<0.05,未转染DC组与阴性对照组相比,IL-12及IFN-γ表达量也有统计学增高,P<0.05。结论:pEGHsp65制备的DC疫苗具有成熟表型及功能,能够刺激小鼠IFN-γ及IL-12分泌增高。     

人慢性髓性白血病细胞系来源的树突状细胞免疫功能的体外研究

目的：探讨人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞的免疫功能。方法：用细胞因子粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL4在体外诱导培养K-562细胞，获得树突状细胞(DC)检测其细胞表型，并观察其诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外抗肿瘤效应。用ELISA法测定DC培养及DC与外周血单个核细胞共培养上清液中IL-12及IFN-γ的量。结果：联合GM-CSF及IL-4可诱导K-562细胞分化为树突状细胞，K-562DC体外激活的CTL对K-562细胞具有特异性细胞毒活性；诱导DC培养上清及DC与外周血单个核细胞共培养上清测出一定量IL-12及IFN-β。结论：人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞表达抗原提呈细胞表型，具有诱导CTL反应和分泌IL—12以及促进T细胞分泌IFN-γ的作用。     

杜克雷嗜血杆菌与人类树突状细胞和巨噬细胞体外的相互作用

为探讨抗原呈递细胞 (APCs)在软下疳发病机制中的作用 ,将树突状细胞 (DCs)和巨噬细胞 (MQs)与流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌及其纯化抗原脂寡糖 (LOS)、细胞致死性肿胀毒素 (HdCDT)共育 ,测定它们的吞噬活性及6、2 4h时前炎症细胞因子TNF α、IL 1 β、IL 6、IL 8的分泌情况 ;将抗原作用后的细胞与自体CD4 + T淋巴细胞共育 ,测定T淋巴细胞增生及 48h细胞上清液中的细胞因子IFN γ、IL 4、IL 1 3的水平。结果 :约 6%～ 2 7%的DCs和 1 4%～ 2 6%的MQs吞噬杜克雷嗜血杆菌的不同菌株及无荚膜流感嗜血杆菌、大肠杆菌。杜克雷菌的不同菌株诱导DCs、MQs分泌大量的TNF α、IL 6、IL 8(P <0 .0 5 ) ;LOS诱导的前炎症细胞因子水平比细菌低 5 0 %～ 67% ;HdCDT不诱导任何前炎症细胞因子的产生。 2种细菌作用后的DCs、MQs能激活T淋巴细胞产生高水平IFN γ ,并诱导产生相似的T淋巴细胞增生 ,HdCDT无此作用。提示 :杜克雷菌能影响APCs活化T细胞的能力 ,并有助于Th1型反应。     

MicroRNA let-7i对脂多糖诱导的树突状细胞及亚群功能的影响

目的探讨miRNA let-7i对脂多糖诱导的树突状细胞及亚群功能的影响。方法在LPS诱导DC成熟过程中,用miRNA let-7i抑制剂进行干预,然后用RT-PCR检测miRNA let-7i的表达水平;流式细胞仪分析DC的表型;用免疫磁珠将let-7i抑制剂处理的DCs分成两组:CD86+DC和CD86-DC,分别与T细胞共培养,观察CD86+DC和CD86-DC对T细胞增殖的影响;通过ELISA检测CD86+DC和CD86-DC分泌的细胞因子IL-10,IL-12和TNF-α的水平。结果转染miRNA let-7i抑制剂明显降低了LPS刺激的DC表面CD80和CD86的表达。LPS刺激的DCs伴随let-7i下调可分为两个亚群:CD86+DC和CD86-DC,且CD86-DC能更有效地诱导调节性T细胞的增多和抗炎症细胞因子的增多,并使促炎症细胞因子减少。结论抑制miRNA let-7i可以诱导DCs中CD86-DCs的表达,进而导致免疫耐受。     

IL-13对肾小球系膜细胞的IL-12表达的影响

目的探讨白细胞介素13（IL-13）对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的调节作用。方法用酶联免疫吸附（ELISA）法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测系膜细胞的IL-12蛋白水平和IL-12p40 mRNA的表达。结果未受刺激的系膜细胞无IL-12mRNA的表达及其蛋白分泌。LPS诱导系膜细胞的IL-12p40mRNA的表达及其蛋白分泌。IL-13在1～100ng／ml的浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞的IL-12分泌及其mRNA的表达。结论LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，而IL-13则抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12的表达；IL-13可能通过抑制IL-12的产生，调整了体内Th1／Th2细胞因子的平衡，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定的作用。     

辅助性T细胞17(Th17)的特征及其在自身免疫性疾病中的作用

 辅助性T细胞分为调节性T细胞、Th1、Th2和Th17亚型。Th17细胞是新近发现的一个细胞亚群,其分泌的IL-17A和IL-17F是重要的致炎因子。本文综述了Th17分化和维持所需的微环境、Th17与其他主要免疫细胞的相互作用及Th17对自身免疫性疾病的影响,重点阐述了Th17相关的IL-23与Th1相关的IL-12之间的关系、树突状细胞对Th17分化的影响及Th17细胞对各种常见自身免疫性疾病的影响,通过对Th17细胞的深入研究将有助于认识自身免疫性疾病及进一步寻找新的治疗靶点。     

探讨沉默信号转导与转录激活因子-4及细胞因子信号负调控因子-3对辅助性T细胞分化的影响

目的 探讨沉默信号转导与转录激活因子4(STAT4)及细胞因子信号负调控因子-3(SOCS3)后对白细胞介素(IL)-12及IL-4诱导的辅助性T(Tn)淋巴细胞分化中的影响以及对于Th1及Th2细胞亚群分泌细胞因子的影响.方法 以IL-12和IL-4分别诱导初始Th细胞(Th0细胞)分化为Th1或Th2细胞;通过RNA干扰技术分别沉默ThO,Th1和Th2细胞中的STAT4和SOCS3的表达,然后继续给予相应的IL-12或IL-4刺激培养细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附分析(ELISA)分别检测Th1/Th2特异性细胞因子的mRNA及蛋白质的变化,通过比较沉默前后Th1/Th2细胞特异性细胞因子量的变化以评价沉默STAT4或SOCS3对于Th0细胞分化方向的影响以及对Th1/Th2细胞分泌细胞因子的影响.结果 沉默STAT4使Th0和Th1细胞的Th1型细胞因子明显减少,而Th0和Th2细胞的Th2型细胞因子增多;沉默SOCS3后,Th0,Th1和Th2细胞的Th1及Th2型细胞因子均无明显改变.结论 STAT4介导IL-12诱导的Thl分化、维持Th1细胞分泌细胞因子,并推测其可能具有直接抑制Th2分化的作用;而SOCS3在IL-12及IL-4诱导的Th0细胞分化中不具有关键性作用.     

凉血活血汤调节寻常型银屑病外周血树突状细胞相关免疫功能的试验研究

目的探讨凉血活血汤在体外对进行期寻常型银屑病患者外周血树突状细胞(DC)的干预作用。方法采用体外培养患者DC,经复方中药作用后,流式细胞仪分析检测细胞表型的变化,MTT法观察DC诱导淋巴细胞增殖的变化,ELISA法观察DC分泌细胞因子的改变。结果患者的DC经凉血活血汤作用后,CD83的表达均明显上调,CD86的表达及刺激混合淋巴细胞增殖的能力均有一定的抑制;使Th1型细胞因子产生显著性降低,而Th2型细胞因子产生增加。结论凉血活血汤对寻常型银屑病患者的DC的抗原递呈能力起到一定的调节作用,对Th1型细胞因子的分泌起强烈抑制作用,对Th2型细胞因子的分泌起促进作用。     

Th17细胞与呼吸道变应性疾病的研究进展

Th17细胞是新近认定的不同于Th1和Th2的特有T细胞系,与其他免疫细胞协调介导各种免疫反应,在一些原来认为由Th1、Th2介导的变应性疾病中起重要作用.本文对Th17细胞及其产生的细胞因子:IL-17、IL-6、INF-α及相关细胞因子IL-23在变应性疾病中的作用及研究进展进行综述.     

双功能分子白介素-2-粒细胞-巨噬细胞集落生长因子促进树突状细胞在肿瘤免疫抑制环境中的活化效应

目的将本室构建与制备的双功能分子白介素-2-粒细胞-巨噬细胞集落生长因子（IL2-GMCSF）蛋白作用于肿瘤条件培养
基（TCM）环境中的树突状细胞系（DC）,检测其对DC细胞的活化,探讨其用于活化DC、进行抗肿瘤免疫治疗的可能性。方法
制备小鼠黑色素瘤B16F10 细胞系的TCM,用以培养DC2.4 细胞,同时分别添加IL2-GMCSF、GM-CSF、IL-2、或IL-2 与
GM-CSF组合使用。24 h后,检测DC2.4细胞的吞噬与增殖活性、细胞成熟表型、细胞因子分泌与信号通路活化。结果DC2.4
细胞具有未成熟DC的特征,在TCM培养条件下吞噬能力增强、但增殖活性显著受抑,TCM对DC成熟表型表面标志的表达有
一定促进作用,并促进单核与DC来源的趋化因子（MDC）,但抑制DC的IL-12 分泌。与之相反,IL2-GMCSF 主要借助其
GM-CSF 活性,促进DC2.4 细胞的吞噬与增殖活性,并促进DC 进一步成熟,且高表达IL-12 与MDC。与GM-CSF 相比,
IL2-GMCSF可诱导更高的炎性NF-κB通路活化水平,而抑制调节性STAT3 通路的活化。结论与GM-CSF单独作用相比,
IL2-GMCSF可更好地促进肿瘤免疫抑制环境中的DC活化,有望成为有效的临床抗肿瘤治疗手段。
     

喉癌患者外周血树突状细胞的体外培养

目的探讨从喉癌患者外周血大量诱导树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的有效方法。方法直接从喉癌患者外周血分离DCs;用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)刺激喉癌患者外周血贴壁单核细胞(PBMCs);检测培养前后DCs表面HLA-DR、B7-2表达水平及DCs诱导T细胞增殖能力。结果联合应用GM-CSF及IL-4可以从PBMCs中诱导大量高免疫活性的DCs,并通过增加其表面HLA-DR、B7-2表达而增强DCs免疫功能。结论用GM-CSF及IL-4可以从喉癌患者外周血中诱导出大量高免疫活力DCs。     

甘珀酸钠苦参素包合物对免疫性肝损伤小鼠的影响

目的研究甘珀酸钠苦参素包合物（OCSC）对卡介苗联合脂多糖所致免疫性肝损伤小鼠的影响。方法在实验始末给小鼠尾静脉分别注射卡介苗（BCG）和脂多糖（LPS）制备免疫性肝损伤模型,其间用OCSC[100、50、25mg/（kg.d）]连续灌胃给药12d,取血清,用酶联免疫法（ELISA）法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平,并观察肝脏病理学变化。结果 OCSC100mg/（kg.d）能显著降低免疫性肝损伤小鼠血清中1型辅助T细胞（Th1）TNF-α和IL-1β水平（P〈0.01）,升高2型辅助T细胞（Th2）IL-4、IL-10水平（P〈0.01）;OCSC可明显减轻肝损伤。结论 OCSC对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,可能是通过调节Th1/TH2细胞的功能状态,使之分泌的细胞因子水平达到平衡而发生作用。     

哮喘病人树突状细胞产生IL-12的变化及对Th1/Th2平衡的影响

目的 :探讨过敏性哮喘病人和正常人外周血单个核细胞 (PBMC)来源树突状细胞 (dendriticcell ,DC)产生IL 12的差异 ,及其对Th1/Th2平衡的影响。方法 :分别取缓解期哮喘患者 (哮喘组 )和正常人 (对照组 )外周血经Ficoll和不连续密度梯度离心法获取贴壁细胞 ,经GM CSF和IL 4体外培养为不成熟DC(iDC) ,加入LPS刺激使其发育为成熟DC(mDC)。另取脐血同上方法获得非贴壁细胞 ,分别加CD4单抗和CD4 5RA单抗及磁珠分离得到初始T淋巴细胞 (Th0 )。两组mDC分别和Th0共培养 ,通过ELISA法检测mDC分泌的IL 12和T淋巴细胞(TC)分泌的IFN γ和IL 4的含量。结果 :①哮喘组PBMC来源DC产生IL 12P70及其亚单位P4 0均较对照组显著减少 (P均 <0 .0 1)。②DC及其IL 12致Th0分化 ,哮喘组TC释放IL 4较对照组显著增多 (P <0 .0 1) ;相反 ,IFN γ较对照组减少 (P <0 .0 5 )。③哮喘组和对照组IL 12P70和IFN γ之间均呈正相关关系 (分别P <0 .0 1,P<0 .0 5 ) ;两组IL 12P70和IL 4均呈负相关关系 (P均 <0 .0 1)。结论 :由于哮喘病人DC功能缺陷 ,产生IL 12减少导致Th2优势分化 ,从而使Th1/Th2平衡向Th2倾斜 ,合成IL 4增多和IFN γ减少 ,后者是哮喘发生的重要机制之一。     

Oxymatrine improves TNBS-induced colitis in rats by inhibiting the expression of NF-κB p65

Inflammatory bowel disease is thought to be regulated by the balance between Th1 and Th2 cytokines secreted by T cells, and NF-κB p65 also plays a predominant role in the intestinal inflammation. We evaluated the potency of oxymatrine, one of active components of Sophora Root, in inhibiting the immune responses and inflammation in 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid （TNBS）-induced colitis. The inflammation was markedly ameliorated in the oxymatrine-treated rats. The level of IL-2 was increased and that of IL-10 was decreased in colon tissue in the rat model, which was reversed by the treatment of oxymatrine. Moreover, the elevated expression of NF-κB p65 in colon tissue in the model was also improved by oxymatrine treatment. Our results suggest that oxymatrine might be beneficial for the abnormal immune responses and inflammation by regulating the unbalance of Th1 and Th2 cytokines secretion and inhibiting the expression of NF-κB p65 in colon tissue.     

树突状细胞与白念珠菌感染的研究进展

白念珠菌是一种机会性致病菌,宿主对白念珠菌的识别和免疫应答是其免疫系统与白念珠菌相互作用的结果。树突状细胞在抗白念珠菌感染免疫中起重要作用,可以通过产生不同的细胞因子诱导CD4+T细胞向不同类型的Th细胞分化,从而产生不同的免疫应答,最终影响白念珠菌感染的结局。本文对白色念珠菌的易感性、免疫应答机制及树突状细胞与白念珠菌的联系进行了综述,为进一步研究白念珠菌等感染性疾病的发病机制和治疗提供了新思路。     

多西环素对树突状细胞功能的影响

目的探讨多西环素对树突状细胞的免疫表型和功能的影响。方法采集健康人的外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用rhIL-4和rhGM—CSF诱导分化为树突状细胞,通过LPS诱导树突状细胞成熟。树突状细胞诱导成熟过程中向培养基中分别加入0μg／mL、100μg／mL和300μg／mL的多西环素,通过流式细胞术检测树突状细胞表面HLA—DR、CD83和CD80的表达,用ELISA检测树突状细胞分泌TNF—α、IL-6、IL-12和IL-10,与T细胞共培养检测刺激同种异型T细胞的增值能力。结果与对照组相比,100ng／mL和300ng／mL多西环素处理组诱导树突状细胞表达HLA—DR表达下调。多西环素可下调树突状细胞分泌IL-1B、IL-12、TNF-α和IL-6,也可抑制树突状细胞刺激同种异型T细胞增殖,并呈剂量依赖性。结论多西环素作用于树突状细胞成熟过程,导致树突状细胞下调HLA-DR的表达,抑制树突状细胞分泌IL-1B、IL-6、IL-12和TNF—α,下调其刺激同种异型T细胞的增值能力。     

Dexamethasone impairs the differentiation and maturation of murine dendritic cells by Toll-like receptor 4-nuclear factor-κB pathway

Background Recent studies have demonstrated that dexamethasone （DEX） interferes with immune responses by targeting key functions of dendritic cells （DCs） at the earliest stage. However, the cellular and molecular mechanisms are still incompletely understood. This study aimed to explore the possible mechanisms by investigating the roles of DEX on differentiation, maturation ＆ function of murine DCs and the effects of DEX on DCs via Toll-like receptor 4 （TLR4）-nuclear factor （NF）-KB mediated signal pathway. Methods Immature DCs （imDCs） were cultured from murine bone marrow （BM） cells. We added DEX into culture medium at different time. The expression of CD11c, CD86 and I-Ab （mouse MHC class II molecule） was determined by flow cytometry. We determined the expression of NF-κB and its inhibitory protein I-κBα by electrophoretic mobility shift assay （EMSA） and Western blotting, respectively. The productions of interleukin （IL）-12p70 and IL-10 in cell culture supernatants were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results DEX impaired differentiation of DCs from murine bone marrow progenitors, and inhibited lipopolysaccharide （LPS） induced maturation of DCs. DEX significantly inhibited NF-κB expression of normal DCs, the higher the DEX concentration or the longer the DEX treatment time, the more obvious the effect. However, DEX had little effect on LPS-induced NF-KB activation, and partially impaired LPS-induced I-κBα degradation. DEX significantly decreased LPS induced IL-12p70 production by DCs. Interestingly, our results showed a synergistic effect between DEX and LPS on the production of IL-10 by DCs. Conclusions DEX inhibits the differentiation and maturation of murine DCs involved in TLR4-I-κB-NF-κB pathway, and also indirectly impairs Thl development and interferes with the Thl-Th2 balance through IL-12 and/or IL-10 secretion by DCs.     

Th17细胞及其细胞因子在炎症性肠病免疫调节中的研究进展

Th17细胞是近几年发现的一类CD4+ T细胞亚群,与Th1、Th2细胞有着完全不同的分化机制和功能特性。其主要作用在于分泌IL-17等促炎细胞因子,在炎症性肠病免疫调节中诱发炎症反应。通过控制Th17细胞相关的细胞因子能够明显缓解炎症性肠病症状。本文就Th17细胞及其细胞因子在炎症性肠病免疫调节中的研究进展做一综述。