水通道蛋白-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊的表达

目的:检测水通道蛋白(AQP)-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法:运用免疫组织化学二步法及免疫荧光染色检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP-1,3的表达。结果:AQP-1主要表达于耳蜗螺旋韧带基底部、Corti器基底膜及鼓阶内侧上皮面及内淋巴囊上皮细胞下的基质组织中;AQP-3主要表达于血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节细胞及内淋巴囊的上皮细胞及其下的基质成分中。结论:AQP-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中存在广泛表达,但其功能仍未明确。     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊上皮钠通道的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)α、β、γ亚基的表达及其意义.方法 用兔抗大鼠ENaC α、β和γ亚基的多克隆抗体,采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α、β、γ-ENaC的表达模式.另用α-ENaC cDNA质粒合成探针,原位杂交法检测豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α-ENaC mRNA的表达.结果 免疫组化显示,在豚鼠耳蜗中,α-ENaC蛋白强烈表达于螺旋缘,而螺旋韧带、Corti器、Reissner膜等处的表达较弱;β-ENaC蛋白在螺旋韧带、螺旋缘和螺旋神经节、Corti器、Reissner膜等处的表达均呈弱阳性;γ-ENaC蛋白则在螺旋韧带的上半部、螺旋缘和螺旋神经节等处的表达呈强阳性,Corti器、Reissner膜等处也有阳性表达.三个亚基在血管纹中均呈阴性表达.在内淋巴囊中,α、β和γ亚基均较明显地表达于上皮细胞和上皮下纤维组织.原位杂交显示,α-ENaC mRNA除了表达于螺旋缘、螺旋韧带下部外,还表达于血管纹,而在内淋巴囊的上皮细胞和上皮下纤维组织也均呈阳性表达.结论 ENaC的各个亚基以不同的模式分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊的各个区域,形成功能性通道参与内淋巴的调节,从而保持内耳内环境的稳定.     

水通道蛋白在内淋巴囊和肾脏的表达及加压素对水通道蛋白表达的影响

OBJECTIVE: To confirm the expression of aquaporin2,3,4 (AQP2,3,4, water channel protein) in rats' endolymphatic sac (ES) and kidney, and to investigate and compare the effects of antidiuretic hormone (AVP) and DDAVP [(deamino-Cys1,D-Arg8)-Vasopressin, V2-receptor agonist] on the expression of AQP2 in rats' ES and kidney. METHODS: Thirty healthy Swards white rats were divided into the negative control, AVP group and dDAVP group, respectively, and were cardiacally perfused. The temporal bones and kidneys were taken out, then processed and sectioned by paraffin-embedded technique. The sections of ES were labeled with fluorescent antibody by immunohistochemical method, and kidney's with avidin-biotin-peroxidase complex method (ABC). The expression of AQP-2,3,4 were confirmed in the ES of rats, and the different effects of the AVP and DDAVP onto the ES and kidney were observed. The slides used were analyzed by image-analyzer and the subsequent data were dealt with statistically. RESULTS: In the cytomembrane and cytoplasm of ES' epithelia, the constant and clear fluorescent reaction could be observed in normal control group with the first antibody of AQP2,3,4. Significant feeble fluorescent reaction of the first antibody of AQP-2 was revealed in AVP group and DDAVP group and showed much lower of gray (P < 0.01), less intensive of fluorescent (P < 0.01) under the fluorescence microscope. In the principal cell of renal collecting duct, it was on the contrary. Compared with the control group, significant stain was revealed in AVP group and DDAVP group and showed lower of gray (P < 0.05), greater density (P < 0.05), higher IOD (P < 0.05) and more stained area (P < 0.05). There is no different between the AVP group and DDAVP group in expression of AQP-2 in two sites. CONCLUSIONS: AQP-2,3,4 were expressed both in rats' epithelia of endolymphatic sac (ES) and principal cell of renal collecting duct. AVP promotes the expression of AQP2 in kidney but inhibits in ES. AVP maybe play important role to control the expression of AQP-2 in ES and kidney probably by the role of AVP-V2R-cAMP-AQP2.     

水通道蛋白—2及加压素的调控——水通道蛋白—2在内淋巴囊的表达和调控

水通道蛋白－2（AQP2）是一种加压素调控的四聚体通道蛋白，是水转运的特异性通道，主要表达于肾脏集合管主细管腔铡（顶端）的细胞膜上和细菌质内。研究发现不论是人类还是大鼠的内耳组织，水通道蛋白－2仅在内淋巴囊表达，其它内耳组织则未见表达；而AQP2是肾脏尿液的重吸收，充血性心衰的水潴留等生理、病理机制的重要环节。这个发现无疑对有关内耳水代谢疾病的研究，如梅尼埃病，开辟了一个新的方向。APQ2在肾脏和肉淋巴囊的特异性表达，进一步揭示了耳肾相关的机制，也提示了要巴囊在耳肾相关中的重要地位。     

水通道蛋白1在小鼠内淋巴囊的超微结构定位

目的研究水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在小鼠内淋巴囊表达的精确定位，进一步探讨AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只，断头分离内耳内淋巴囊，应用冰冻切片免疫荧光染色法研究AQP1在内淋巴囊的组织分布情况，借助免疫电镜观察AQP1在内淋巴囊的超微结构定位。结果AQP1在内淋巴囊上皮下结缔组织层有表达。在纤维细胞胞膜特别是细胞突起的胞膜上可见大量胶体金颗粒标记，而上皮细胞的胞膜未见胶体金颗粒的标记。结论富含AQP1的内淋巴囊上皮下组织可能与内淋巴的吸收及平衡调节密切相关。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的:检测刺激性G蛋白(GS)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法:查阅Gs和Gi的基因序列,自行设计并委托Gibco公司合成引物,应用RT-PCR和原位杂交法检测Gas和Gai mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果:扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp;正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论:正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和Gai mRNA的表达;G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的：检测刺激性G蛋白(Gs)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法：查阅Gs和Gi的基因序列，自行设计并委托Gibco公司合成引物，应用RT—PCR和原位杂交法检测Gas和GαimRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果：扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp；正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论：正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和GaimRNA的表达；G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

水通道蛋白2在内淋巴囊上皮和肾脏中表达的研究

目的 探讨水通道蛋白2(Aquaporins 2,AQP-2)和加压素(anti-diuretic hormone,AVP)在内耳水代谢中的作有机制.方法 15只(30耳)成年大鼠,随机分为三组,每组5只(10耳).A组(对照组):腹腔注射生理盐水;B组(AVP组):腹腔注射AVP(0.2 U/g),C组(DDAVP组):尾静脉注射V2受体促效剂去精氨酸加压素([deamino-Cys1,D-Arg8]-Vasopressin,DDAVP)1 ng/只.采用间接免疫荧光法标记内淋巴囊(endolymphatic sac,ES)中AQP-2的表达,ABC法标记肾脏中AQP-2的表达.结果 AQP-2-抗在内淋巴囊上皮胞膜胞浆显示荧光染色,B组和C组的内淋巴囊上皮胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组降低(P＜0.01);B组和C组AQP-2的表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).B组和C组肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组增强(P＜0.05),B组和C组AQP-2表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).结论 AVP促进肾脏表达AQP-2,提高肾脏重吸收的功能,同时抑制内淋巴囊上皮表达AQP-2,从而降低内淋巴囊上皮对水的重吸收;AVP对肾脏和内淋巴囊AQP-2表达的调节可能是通过AVP-V2R-cAMP-AQP2途径实现.     

水通道蛋白1、2、5在膜迷路积水豚鼠耳蜗中的分布及表达研究

目的观察水通道蛋白(aquaporin,AQ)1、2、5(AQP1、AQP2、AQP5)三种蛋白在膜迷路积水豚鼠耳蜗的表达及分布情况,探讨其在内淋巴积液中可能的发生机制。方法选择健康红目豚鼠60只,随机分为空白组(30只)和模型组(30只),模型组给予醋酸去氨加压素6μg·kg-1·d-1腹腔注射10 d,空白组以1 ml生理盐水腹腔注射10 d;常规饲养7天后取出耳蜗,通过免疫组化、Western-blot方法观察AQP1、AQP2、AQP5蛋白在豚鼠耳蜗的分布及表达。结果免疫组化示空白组、模型组豚鼠耳蜗组织中AQP1表达的光密度值分别为0.134±0.021、0.273±0.053;AQP2表达分别为0.089±0.013、0.261±0.100;AQP5表达分别为0.264±0.065、0.151±0.098;与空白组比较,模型组AQP1、AQP2蛋白表达明显上调(P<0.01),AQP5蛋白表达明显下调(P<0.05)。Western-blot示空白组、模型组豚鼠耳蜗组织中AQP1表达分别为0.214±0.034、0.313±0.032;AQP2表达分别为0.283±0.050、0.544±0.042;AQP5表达分别为0.291±0.041、0.199±0.033;与空白组比较,模型组AQP1、AQP2蛋白表达上调(P<0.01),AQP5蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论AQP1、AQP2、AQP5蛋白均可能参与了豚鼠耳蜗膜迷路积水的发生。     

豚鼠内淋巴囊的缺血病理改变

为了阐明内淋巴囊（ＥｎｄｏｌｙｍｐｈａｔｉｃＳａｃ，ＥＳ）的缺血病变，本文将１６只豚鼠ＥＳ供血动脉阻断，并在不同缺血时相对其病理损伤作光镜观察。结果：缺血早期ＥＳ上皮细胞混浊肿胀，气球样变，部分细胞崩解坏死，上皮下组织水肿出血；缺血中期上皮细胞萎缩变性，中间部皱褶带消失；缺血晚期上皮坏死区出现新生结缔组织及新骨，囊周缺血病变与Ｍｅｎｉｅｒｅ病囊周病理改变相似     

幼年及成年豚鼠的耳蜗组织学观察

采用不同年龄组豚鼠随机分甲、乙两组.甲组按年龄3、6、12个月龄分为甲_1、甲_2、甲_3组(统称自然衰老组);而乙组仅取3个月龄的豚鼠(下称人工促衰老组),于眼球后注射促衰老制剂持续32天.各组行测听(ABR)后处死,测其心、脑中的丙二醛(Malondialdehyed,MDA)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力并于扫描电镜下行内耳组织学观察.结果表明12个月龄豚鼠内耳组织学呈现自然衰老典型改变,且ABR、MDA、SOD各指标均与老年各指标的改变相一致;3个月龄人工促衰老组无论在内耳组织学的改变及ABR、MDA、SOD与12个月龄豚鼠相比亦基本一致.表明采用豚鼠制作模型以研究老年性聋是可行的.     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶的分布

目的 用组织化学法,通过观察NADPH-黄递酶的活性了解一氧化氮合酶在豚鼠耳蜗内分布。方法 经4％多聚甲醛心脏灌注固定后,取出耳蜗,经3％依地酸脱钙后,作厚10μm冰冻切片,用辅酶Ⅱ孵育液在37℃条件下孵育l小时。结果 发现在耳蜗内、外毛细胞底部与耳蜗神经末梢接头处及毛细血管球内皮细胞有明显NADPH-黄递酶活性,此外在内、外柱细胞、支持细胞、血管纹及螺旋神经节细胞也有NADPH-黄递酶活性反应。结论 NO在维持耳蜗正常神经传导及毛细血管张力中起着重要作用。     

谷氨酸-天冬氨酸转运体在豚鼠耳蜗的分布

目的研究谷氨酸-天冬氨酸转运体(glutamate—aspartate transporters，GLAST)在正常豚鼠耳蜗内的分布，为探讨GLAST在防止耳蜗谷氨酸(Glu)神经毒性中的作用提供形态学基础。方法选取健康红目豚鼠6只，采用免疫组织化学方法，以山羊抗GLAST抗体为标记物，观察正常豚鼠耳蜗中GLAST的表达及分布。结果在正常豚鼠耳蜗的内、外毛细胞，内、外毛细胞周围的支持细胞，螺旋神经节细胞，血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮，均有GLAST阳性表达。结论GLAST在正常豚鼠耳蜗内主要分布于内、外毛细胞，内、外毛细胞周围的支持细胞，螺旋神经节细胞、血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮，其功能尚需进一步的研究。     

豚鼠耳蜗Ca2+-ATP酶活性的超微细胞化学定位

目的为观察耳蜗Ca^2 -ATP酶的定位，建立一种检测内淋巴积水的超微细胞化学手段，进一步探讨CCa^2 -ATP酶在调节耳蜗钙浓度方面的作用。方法采用柠檬酸铅超微细胞化学染色方法观察12只豚鼠耳蜗内Ca^2 -ATP酶活性。结果Ca^2 -ATP酶活性反应产物是柠檬酸铅颗粒，主要表达在前庭膜内淋巴侧的细胞膜表面和微绒毛上，内、外毛细胞的静纤毛和皮板上，外毛细胞的基底侧细胞膜和血管纹基底细胞的内皱折膜上也可观察到Ca^2 -ATP酶反应产物。结论柠檬酸铅组织化学一步法能系统测定Ca^2 -ATP酶在耳蜗的定位，为探索此酶在耳蜗的作用建立了一种观察手段。本文结果提示Ca^2 -ATP酶在调节内耳钙浓度方面起着重要的作用。     

头低位模拟失重状态对豚鼠耳蜗听功能与超微结构的影响

目的探讨头低位模拟失重对豚鼠耳蜗听功能与超微结构的影响。方法 22只豚鼠随机分为实验组16只和对照组6只。实验组采用头低位模拟失重法,身体纵轴与水平线呈-30°,于实验前、失重5天后即刻及脱离失重3天后分别测试豚鼠听性脑干反应(ABR),然后取耳蜗行扫描电镜和透射电镜观察。对照组不作任何处理。结果对照组豚鼠ABR反应阈为23.48±6.04dB SPL,实验组实验前为24.22±4.04,模拟失重5天后即刻ABR反应阈为41.61±7.01dB SPL,与实验前和对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.05);脱离失重3天后实验组ABR反应阈为27.50±3.54dB SPL,与实验前相比差异无显著统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察发现失重5天后即刻豚鼠耳蜗内、外毛细胞散在缺失,纤毛融合、倒伏;透射电镜检查见内、外毛细胞细胞局部空泡形成,脱离失重3天后上述病变均有明显恢复,但未完全恢复正常。结论模拟失重5天即可以导致豚鼠耳蜗听觉功能和超微结构的损伤,脱离失重3天后听功能可以恢复正常,但其超微结构还没有完全恢复正常。     

内淋巴囊的外源性抗原特异性免疫应答

目的　研究内淋巴囊对于外源性胸腺依赖性抗原的特异性免疫应答。方法　用SD大鼠 32只 ,以抗原全身免疫后 ,经耳蜗底周向外淋巴腔注入相同抗原 ,分别于此后 1、3、7、14天处死动物取颞骨作组织学处理。然后应用免疫组化等技术 ,观察内淋巴囊的细胞浸润 ,免疫细胞增殖及其对抗原的吞噬清除作用。结果　内耳抗原接种后第 1、3天 ,内淋巴囊出现单核吞噬细胞浸润 ,第 7天出现浆细胞和淋巴细胞浸润 ;内耳抗原接种后第 3、7天 ,内淋巴囊的IgG阳性细胞增多 ,同时抗原被捕捉、递呈和吞噬。结论　内淋巴囊对外源性抗原可产生特异性免疫应答 ,是内耳局部免疫应答的重要场所。     

内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的 用寡聚核苷酸探针检测内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA表达的异同。方法 通过查阅核酸序列数据库,自行设计并合成了透明质酸合成酶寡聚核苷酸探针,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶mRNA在豚鼠内淋巴囊和肾小管上皮细胞的表达。结果 在内淋巴囊近侧端、中间部和肾小管部分上皮细胞胸浆显示透明质酸合成酶mRNA的阳性表达,但近曲小管的阳性细胞百分数稍多。结论 不但扩大了核酸杂交的应用范围,还为内淋巴囊和肾小管上皮细胞对水电解质平衡可能都具有透明质酸／透明质酸酶的双重调节作用提供了理论依据。